环介导等温扩增法检测粪样中日本血吸虫虫卵DNA的效果评估

目的评估环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification,LAMP)法检测粪样中日本血吸虫(Schistosoma japonicum)虫卵DNA的效果,并评价其检测流行区现场牛野外粪样的效果。方法取1 g新鲜的日本血吸虫虫卵阴性牛粪,分别加入5个新鲜日本血吸虫虫卵、50μl日本血吸虫虫卵排泄分泌产物(egg secretion product,ESP)制备人工模拟阳性粪样。用粪DNA提取试剂盒分别提取加入虫卵的未经研磨或研磨2 min后的人工模拟阳性粪样、加入虫卵ESP的粪样和阴性粪样的DNA,以日本血吸虫28S核糖体DNA(r DNA)为检测靶基因,用LAMP法、PCR法检测,评估LAMP法检测粪样中日本血吸虫虫卵DNA的效果。收集2012-2014年湖南、湖北、江西、安徽等4省日本血吸虫病流行区的牛野外粪样221份,研磨后同法提取DNA,用LAMP法检测,并与PCR法、孵化法的检测结果进行比较,评价其检测流行区现场野外粪样的效果。结果LAMP法检测加入虫卵粪样并经研磨后提取的DNA、加入虫卵ESP粪样提取的DNA均为阳性反应,呈绿色;而加入虫卵粪样未经研磨提取的DNA、阴性粪样DNA则为阴性反应,呈棕色;PCR检测的结果与LAMP法检测结果相近。LAMP法、PCR法和孵化法检测血吸虫病流行区牛野外粪样的阳性率分别为5.43%(12/221)、4.52%(10/221)、0.90%(2/221)。LAMP法的阳性率明显高于孵化法(P0.05),LAMP法与PCR法阳性率差异无统计学意义(P0.05)。结论 LAMP法可用于检测流行区现场野外粪样的日本血吸虫虫卵DNA,其现场应用价值有待进一步验证。     

血吸虫病传播阻断地区环介导等温扩增技术检测钉螺血吸虫感染性效果

目的　比较环介导等温扩增技术（LAMP）和镜检法在血吸虫病传播阻断地区检测血吸虫感染性钉螺的效果,为该类地区优化钉螺监测技术提供科学依据。方法　选择云南省鹤庆县达到传播阻断标准的新庄、古乐、邑头、连义4个山丘型血吸虫病流行村作为研究村,其中新庄、古乐为山区村,连义、邑头为坝区村。2018年7月采用系统抽样结合环境抽查法进行钉螺调查,捕获钉螺用解剖镜检法观察血吸虫感染。同时在各有螺环境捡获的钉螺镜检后随机选择10 ~ 20只进行组织提取,按不同环境分别编号,混合后进行LAMP检测。比较不同流行村环境LAMP阳性率差异。结果　4个村共调查83处有螺环境,捕获活螺7 949只,镜检未发现血吸虫感染性钉螺。1 786只钉螺共混合成226管样品进行LAMP检测,在2个坝区村发现LAMP核酸阳性3管,分布在2个村3处有螺环境,其中连义村1处环境,环境阳性率5.89%;邑头村2处环境,环境阳性率14.29%,2个坝区村环境阳性率差异无统计学意义（P = 0.344）,但坝区村环境总阳性率（9.67%,3/31）高于山区村（0）（P = 0.048）。结论　LAMP技术检测血吸虫感染性钉螺较传统解剖镜检法更敏感,可作为山丘型血吸虫病传播阻断流行区高危有螺环境钉螺检测方法的一种补充。     

胶体染料试纸条法(DDIA)诊断湄公血吸虫病的研究

目的评价胶体染料试纸条法诊断湄公血吸虫病的应用价值.方法制备以日本血吸虫虫卵可溶性抗原为抗原的胶体染料试纸条试剂盒(DDIA kit).采用该试剂盒检测来自柬埔寨湄公血吸虫病流行区的34例粪检阳性者和170例粪检阴性者,近年来经吡喹酮治疗后不同年份的人群122例,以及114例来自非血吸虫病流行区的健康人;同时对来自老挝湄公血吸虫病流行区的70例粪检阳性者和60例猫后睾吸虫感染者进行检测.对其中部分样本还采用日本血吸虫SEA-ELISA进行对照检测.结果 DDIA试剂盒检测湄公血吸虫病的敏感性为97.1%(33/34)(柬埔寨)和98.6%(69/70)(老挝),与ELISA的检测结果相一致.对非流行区健康人的特异性为100.0%.结论日本血吸虫DDIA试剂盒具有快速、简便、不需任何仪器设备等优点,同样适用于对湄公血吸虫病的现场大规模筛查.     

加强分子诊断方法的研发应用 助力我国精准血防

钉螺是日本血吸虫的唯一中间宿主,感染性钉螺是血吸虫病传播的主要风险因素之一。因此,感染性钉螺检测在血吸虫病预防控制中占有非常重要的地位。最近,江苏省血吸虫病防治研究所研发出一种重组酶介导的核酸等温扩增荧光法用于检测日本血吸虫感染性钉螺,该方法具有快速、灵敏、操作简便等特点,值得进一步扩大试验。     

检测日本血吸虫抗体的胶体金-葡萄球菌A蛋白试剂盒研制

目的研制胶体金-葡萄球菌A蛋白试剂盒用于检测日本血吸虫抗体。方法通过不同筛目尼龙绢和低频超声等方法,制备、纯化日本血吸虫可溶性虫卵抗原,研制胶体金-葡萄球菌A蛋白试剂盒。用该试剂盒检测人血清中日本血吸虫特异性抗体,并用ELISA方法进行平行比较。结果胶体金-葡萄球菌A蛋白试剂盒检测慢性血吸虫病的敏感性为93%,检测急性血吸虫病的敏感性为100%,检测健康人血清的特异性为96%,检测肺吸虫病的交叉反应为40%,对其他寄生虫和乙肝未见有交叉反应。与ELISA检测结果比较,两种方法具有良好的一致性。结论胶体金-葡萄球菌A蛋白试剂盒具有快速、简便、不需要仪器、敏感性高和特异性强等优点,可广泛用于血吸虫病流行区现场查病。     

重组酶介导的核酸等温扩增荧光法快速检测 日本血吸虫感染性钉螺

目的　建立重组酶介导的核酸等温扩增荧光（Recombinase aided amplification,RAA）法快速检测日本血吸虫感染性钉螺技术,并探索钉螺样品的最佳处理方式。方法　将钉螺样本分成3组,每组均含7个亚组,其中6个亚组分别为50只阴性钉螺中混合1、2、3、4、5、10只日本血吸虫感染性钉螺,1个亚组为100只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺。3组钉螺分别采用压碎去壳核酸试剂盒提取法、压碎去壳核酸粗提法和直接压碎带壳核酸粗提法进行处理,并分别进行荧光RAA与PCR法检测,对检测结果进行比较。结果　建立了荧光RAA检测技术,工作温度为39 ℃,30 min内即可完成日本血吸虫感染性钉螺检测。钉螺群体样本采用压碎去壳核酸试剂盒提取法处理后,荧光RAA法最低可检测到100只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺,PCR法最低可检测到50只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺;采用压碎去壳核酸粗提法处理后, 荧光RAA法最低可检测到100只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺,PCR法最低可检测到50只阴性钉螺中混合3只感染性钉螺;采用直接压碎带壳核酸粗提法处理后,荧光RAA法最低可检出50只阴性钉螺中混合10只感染性钉螺,PCR法仅可检测出50只阴性钉螺中混合10只感染性钉螺。结论　成功建立了钉螺群体样本中日本血吸虫感染性钉螺快速检测的荧光RAA法,该方法具有快速、灵敏、操作简便等特点;压碎去壳核酸粗提法为钉螺样品的最优处理方式。     

环介导同温DNA扩增技术鉴定血吸虫感染性钉螺方法的建立

目的建立一种快速鉴定血吸虫感染性钉螺的环介导同温DNA扩增方法。方法选择一个高拷贝的日本血吸虫基因SjR2的部分DNA序列作为扩增靶位,根据环介导同温DNA扩增原理设计合成引物,建立扩增该片段的环介导同温DNA扩增方法。使用此方法与聚合酶链反应(PCR)方法同时检测血吸虫感染性钉螺与正常钉螺的DNA,观察其应用价值。结果日本血吸虫SjR2基因的839～1 138 bp区段被成功扩增和克隆。利用根据该片段DNA序列设计合成的环介导同温DNA扩增反应的引物,成功地建立了能扩增该片段的环介导同温DNA扩增方法,其敏感性高于PCR法,能检出1 pg的血吸虫DNA。用此法检测30只感染性钉螺,阳性率为93.33%,而PCR的阳性率83.33%,两者差异有统计学意义(P<0.01)。结论环介导同温DNA扩增检测血吸虫感染性钉螺具有较高的敏感性,是一种潜在有效的血吸虫感染性钉螺鉴定方法。     

鄱阳湖区血吸虫病传染源控制策略永修县推广区实施效果

目的 评估鄱阳湖区血吸虫病传染源控制策略在永修县推广区的实施效果。方法 选择永修县吴城镇为推广区观察点,采用现场调查和回顾性调查相结合的方法,评估该区实施血吸虫病传染源控制策略后的防治效果。结果 2010年吴城镇有粪检血吸虫阳性病人17人、推算病人数2 331人,耕牛血吸虫感染率4.5%,感染性钉螺面积10.00 hm2。2011年推广区实施传染源控制策略,2012年起淘汰了全部耕牛和羊,2013年和2014年未再查到粪检阳性病人,2014年未再查见血吸虫感染性钉螺。结论 永修县推广实施血吸虫病传染源控制策略后,有效地控制了血吸虫病的流行传播,取得了显著的防治效果。     

胶体染料试纸条试剂盒检测曼氏血吸虫病的初步研究

目的探索日本血吸虫胶体染料试纸条试剂盒(DDIA)用于检测曼氏血吸虫病的可行性。方法采用日本血吸虫DDIA检测从埃及尼罗河地区曼氏血吸虫病流行区采集的曼氏血吸虫病人血清及当地健康人血清。结果34份曼氏血吸虫病人血清DDIA均呈阳性,14份当地健康者血清均为阴性。与用曼氏血吸虫IHA和ELISA法检测结果相同。结论日本血吸虫DDIA也可用于检测曼氏血吸虫病。     

两种血吸虫抗体金标检测试剂盒在云南高原山区的应用

金标法即滴金免疫测定法(DIGFA)检测日本血吸虫抗体已在许多血吸虫病流行区用于疫情监测[1-3]。为观察DIG-FA在云南血吸虫病不同类型流行区的现场应用价值,我们比较了分别由浙江省医学科学院寄生虫病研究所和深圳康百得生物科技公司生产的血吸虫抗体DIGFA试剂盒的检测结果,现报     

A new surveillance and response tool: Risk map of infected Oncomelania hupensis detected by Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) from pooled samples

Although schistosomiasis remains a serious health problem worldwide, significant achievements in schistosomiasis control has been made in the People's Republic of China. The disease has been eliminated in five out of 12 endemic provinces, and the prevalence in remaining endemic areas is very low and is heading toward elimination. A rapid and sensitive method for monitoring the distribution of infected Oncomelania hupensis is urgently required. We applied a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay targeting 28S rDNA for the rapid and effective detection of Schistosoma japonicum DNA in infected and prepatent infected O. hupensis snails. The detection limit of the LAMP method was 100 fg of S. japonicum genomic DNA. To promote the application of the approach in the field, the LAMP assay was used to detect infection in pooled samples of field-collected snails. In the pooled sample detection, snails were collected from 28 endemic areas, and 50 snails from each area were pooled based on the maximum pool size estimation, crushed together and DNA was extracted from each pooled sample as template for the LAMP assay. Based on the formula for detection from pooled samples, the proportion of positive pooled samples and the positive proportion of O. hupensis detected by LAMP of Xima village reached 66.67% and 1.33%, while those of Heini, Hongjia, Yangjiang and Huangshan villages were 33.33% and 0.67%, and those of Tuanzhou and Suliao villages were 16.67% and 0.33%, respectively. The remaining 21 monitoring field sites gave negative results. A risk map for the transmission of schistosomiasis was constructed using ArcMap, based on the positive proportion of O. hupensis infected with S. japonicum, as detected by the LAMP assay, which will form a guide for surveillance and response strategies in high risk areas.     

Evaluation of Loop-Mediated Isothermal Amplification Suitable for Molecular Monitoring of Schistosome-Infected Snails in Field Laboratories

We previously described loop-mediated isothermal amplification (LAMP) for detection of Schistosoma haematobium and S. mansoni DNA in infected snails. In the present study, we adapted the LAMP assay for application in field laboratories in schistosomiasis-endemic areas. Isolation of DNA was simplified by blotting snail tissue (extracted in NaOH/sodium dodecyl sulfate) onto treated membranes, which enabled preservation at ambient temperatures. A ready-mix of LAMP reagents, suitable for shipment at ambient temperature and storage in minimal refrigeration, was used. Local survey teams without experience in molecular biology acquired operational expertise with this test within a few hours. Fifty-four field-caught snails were tested locally by LAMP and 59 were tested at similar conditions in Jerusalem. The LAMP results were consistent with those of a polymerase chain reaction; only four samples showed false-negative results. Results indicate that LAMP assays are suitable for detection of S. haematobium and S. mansoni in low-technology parasitology laboratories in which schistosomiasis elimination activities are undertaken.     

Detection of Early and Single Infections of Schistosoma japonicum in the Intermediate Host Snail,Oncomelania hupensis,by PCR and Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay

Polymerase chain reaction (PCR) with the specific primer set amplifying 28S ribosomal DNA (rDNA) of Schistosoma japonicum was able to detect genomic DNA of S. japonicum, but not S. mansoni, at 100 fg. This procedure enabled us to detect the DNA from a single miracidium and a snail infected with one miracidium at just 1 day after infection. We compared these results with those from loop-mediated isothermal amplification (LAMP) targeting 28S rDNA and found similar results. The LAMP could amplify the specific DNA from a group of 100 normal snails mixed with one infected snail A PCR screening of infected snails from endemic regions in Anhui Province revealed schistosomal DNA even in snails found negative by microscopy. PCR and LAMP show promise for monitoring the early infection rate in snails, and they may be useful for predicting the risk of infection in the endemic places.     

2015年云南省血吸虫病监测点螺情分析

目的 目的 了解云南省血吸虫病流行区钉螺分布和感染状况, 为制定防控措施提供依据。方法 方法 在全省18个血吸 虫病流行县 （市、 区） 各选择1个疫情较重的行政村作为血吸虫病螺情监测点。采用系统抽样与环境抽样相结合的方法 进行螺情调查, 对捕获的钉螺用压碎镜检法和环介导等温扩增技术 （LAMP） 检测其血吸虫感染情况。建立螺情监测数据 库, 并进行描述性分析。结果 结果 18个监测点共调查总面积1 826.55 hm2 , 查出有螺面积55.03 hm2 , 较2013年和2014年分 别下降了57.70%和40.63%。无新发现有螺环境; 未查见血吸虫感染性钉螺。共设调查框718 532框, 有螺框出现率 0.45%, 活螺平均密度0.013 9只/0.1 m2 。传播控制地区的有螺面积和活螺平均密度均最高, 主要分布在水田、 沟渠、 滩地、 塘堰、 旱地等环境和水稻、 旱地作物、 杂草、 树林等植被中。监测点有螺面积、 有螺框出现率、 捕获总螺数、 捕获活螺数等 指标呈逐年下降趋势, 已连续3年未查出感染性钉螺。结论 结论 云南省监测点钉螺已得到有效控制, 但仍需加强综合灭螺 措施。     

2017-2019年武汉市血吸虫病传播风险监测结果分析

目的分析2017-2019年武汉市90个省级重点血吸虫病传播风险监测村的风险监测结果,并进行风险评估,为开展下一步血吸虫病防控工作提供参考。方法根据《湖北省血吸虫病传播风险监测方案(2017年版)》及《武汉市血吸虫病传播风险监测实施方案》,采用容量比例概率法(PPS法)选择武汉市90个省级重点血吸虫病风险监测村进行风险监测,统计并比较2017-2019年监测村的螺情、野粪污染、哨鼠感染及人畜活动情况。对各年份风险监测结果进行Ⅰ~Ⅲ等级风险评级,对结果进行描述性统计分析。结果2017-2019年累计查螺436398框,解剖钉螺10404只,其中活螺6449只,活螺平均密度为0.0148只/0.11 m2。活螺平均密度由2017年的0.0291只/0.11 m2下降到2019年的0.0065只/0.11 m2。各年份均无阳性钉螺。2017-2019年3年间有螺地带野粪数量有所下降。野粪检测结果显示均为阴性。无阳性哨鼠。各年份监测地带部分区域都有垂钓休闲和旅游人员活动。所有重点村风险评级均为Ⅲ级(最低风险)。结论武汉市重点地区血吸虫病传播风险处于较低水平,但仍存在钉螺分布,流动家畜野粪污染及有螺地带人群活动等血吸虫病传播风险因素,需继续加强风险监测工作,加大查、灭螺力度,完善对流动人群和家畜的监测和管理,以巩固防治成果。     

2006~2012 年安徽当涂县血吸虫病疫情分析

目的 分析安徽省当涂县2006~2012 年血吸虫病疫情变化,为制定防治策略提供依据。方法 收集整理2006~2012 年当涂县血吸虫病病情和螺情年报及疫情监测点资料。结果 2006~2012 年人群血检阳性率、急感病例数、耕牛感染率总体呈现逐年下降趋势,耕牛存栏数有较大幅度的减少,钉螺面积变化不大,活螺密度、感染螺密度及钉螺感染率同样呈现逐年下降趋势。结论 通过实施以传染源控制为主的综合防治措施,当涂县血吸虫病病情得到了较好的控制,但有螺面积徘徊不降,提示今后要加大综合治理灭螺力度,提高灭螺效果。     

"引江济淮"工程途经地区血吸虫病流行现状调查

目的 调查“引江济淮”工程途经地区血吸虫病流行情况，为论证该工程能否引起钉螺扩散和血吸虫病望延提供依据。方法收集“引江济淮”工程长江—巢湖段所属地区血吸虫病流行情况的基本资料，常规方法调查钉螺分布情况；用IHA法检测居民血吸虫病抗体；用孵化法检查耕牛血吸虫感染情况；调查船只钉螺携带情况。结果 工程预期设置的两个引水口地区是血吸虫病重流行区，钉螺分布广，人、畜感染重；工程途经的无为县与和县血吸虫病流行情况严重，居民感染率高，且有病牛存在；“引江济巢”工程实施后，已有钉螺向内河扩散；船只未发现携带钉螺。结论 “引江济淮”工程途经地区血吸虫病流行严重。工程实施后有可能引起钉螺扩散和血吸虫病的蔓延。     

南通市“有螺无病”地区不同条件下血吸虫毛蚴感染钉螺的研究

目的探索南通市有钉螺无血吸虫病流行的原因,验证既往研究结论,为该类地区血吸虫病监测提供科学依据。方法采用控制现场试验方法,现场观察人工输入血吸虫毛蚴感染钉螺情况,同时实验室比较观察"有螺无病"和"有螺有病"区土壤对血吸虫毛蚴感染钉螺的影响。结果除如东县新店镇汤园村(有螺无病)现场光壳螺组外,实验钉螺在"有螺无病"和"有螺有病"现场控制环境均可以被血吸虫毛蚴感染。各组光壳钉螺感染率低于肋壳钉螺,但无统计学意义;各组光壳钉螺死亡率高于肋壳钉螺,差异有统计学意义(χ~2新店=135.118,χ~2双甸=122.836,χ~2白蒲=154.436,χ~2丁堰=138.288,χ~2对照=151.923,P均0.01)。"有螺无病"和"有螺有病"区土壤试验组钉螺感染率差异无统计学意义(χ~2如皋=0.071,χ~2如东=0.216,P均0.05),各组与无土实验对照组差异亦无统计学意义(χ~2=7.148,P0.05)。结论南通地区"有螺无病"区在输入足够数量血吸虫病传染源后有可能形成血吸虫病的传播,有必要开展血吸虫病和钉螺监测工作。     

全国血吸虫病疫情资料回顾性调查 Ⅰ传播阻断县达标前后疫情变化分析

目的分析我国血吸虫病传播阻断地区在达到传播阻断标准（传阻）前后的疫情变化规律,为今后修订传阻标准以及更科学、规范地考核和评价防治工作效果提供依据。方法选择全国9个省17个血吸虫病传阻县,采取回顾性调查方法,收集、记录各县达到传播控制标准（传控）前10年和以后各年（截止2008年或2009年）疫情资料并建立数据库;分析、比较达标前后不同流行类型和地区的各疫情指标的变化规律。结果达传阻后,各类型疫区人群感染率均降至最低水平,少部分湖沼型和山丘型疫区分别在传阻后4年和9年有小幅上升,但均〈1%。湖沼型和水网型疫区活螺密度较高、变化较大,山丘型则较低并在传阻前后4年间降至最低;湖沼型疫区感染性钉螺时有发现,水网型和山丘型疫区则分别在达传阻后6年和10年发现有感染性钉螺复现。17个调查县从传控至传阻所历时间平均为17年。疫情非回升县达传阻前无感染性钉螺的平均持续时间为（2.71±1.10）年,其中湖沼型疫区为（3.80±1.43）年。结论达传阻后人群感染水平能维持在较低水平,而疫情回升主要表现在螺情回升。感染性钉螺可作为反映一个地区包括传染源控制等防治工作成效以及流行与传播危险程度的综合指标,持续而有效地控制感染性钉螺,是血吸虫病疫情达到传阻的基础。在我国目前社会经济发展水平和科学技术能力条件下,可将连续5年以上查不到感染性钉螺作为传阻标准之一。     

2008~2013年安徽和县血吸虫病疫情分析

【摘要】 目的  分析和县血吸虫病疫情变化趋势,为该县制定今后一个阶段血防策略提供科学依据。 方法  收集和县2008~2013年血吸虫病防治工作年报数据、监测点数据及面上防治管理信息资料,纵向分析全县6年间血吸虫病流行态势、疫情分布和流行特点。 结果  全县人群血吸虫平均感染率总体呈下降趋势,2013年人群感染率已降至0.27%,较2008年下降了73.3%,晚血病人数降至27例,较2008年下降了55%,2011年以后全县连续3年未出现当地感染的急性血吸虫病病例;全县耕牛感染率下降明显,2013年下降为0,较2008年下降了100%;全县有螺面积总体呈缓慢上升趋势,2013年底全县钉螺面积为802.68hm2,较2008年上升了9.1%,阳性螺面积逐年下降,2012年以后,全县未查出阳性钉螺;钉螺复现与新发现情况一度出现上升,2011年后呈逐年下降趋势;钉螺和感染性钉螺密度2011年后呈逐年下降趋势,2013年活螺密度降至0.16只/0.11m2,较2008年下降了56.8%;有螺村数、有螺环境数及阳性螺环境数呈逐年下降趋势,尤其是阳性螺环境数下降幅度较大;村级和镇级传播控制达标升类工作有序推进。 结论  和县血吸虫病流行得到了有效遏制,血吸虫病疫情降到了历史最低水平。