老龄大鼠脑缺血再灌注海马神经元线粒体形态计量分析

目的:探讨老龄大鼠脑缺血再灌注后海马神经元超微结构变化,以及线粒体形态改变程度及性质。方法:建立老年大鼠脑缺血动物模型,正常对照组(A组)、缺血30min再灌注6h(B组)、12h(C组)、24h(D组)、48h(E组)和7d组(F组),用透射电镜观察海马神经元的超微结构变化,通过计算机图像分析系统对线粒体形态计量分析。结果:B组海马神经元超微结构与A组相同,E组和F组海马神经元损伤较重;E组和F组线粒体体密度、数密度、比表面和嵴膜密度较A组明显减少(P<0.05),线粒体平均体积和平均截面积较A组明显增大(P<0.05)。结论:老龄大鼠脑缺血后产生延迟性神经元死亡,其线粒体的形态结构也发生明显变化,这些变化直接与脑缺血再灌注时程相关。     

老龄大鼠脑缺血再灌注肺损伤机制研究

目的：从ATP酶活性变化和自由基损伤方面研究老龄大鼠脑缺血再灌注肺脏损伤机制。方法：青年（5月龄）和老龄（20月龄以上）大鼠均分为模型组和对照组,观察大鼠全脑缺血30min再灌60min后肺脏组织形态和丙二醛（MDA）含量及超氧化物岐化酶（SOD）、ATP酶活性的变化。结果：青年和老龄模型组大鼠肺脏组织均出现明显的病理改变,老龄模型组较青年模型组严重。老龄对照组肺组织MDA/SOD比值高于青年对照组。青年模型组肺Ca^2 -ATP酶活性低于青年对照组和老龄模型组。结论：脑缺血再灌注肺损伤老龄大鼠较青年大鼠严重,Ca^2 -ATP酶活性的降低和自由基损伤可能是肺损伤发生的机制之一。     

高压氧对脑缺血再灌注海马CA1区神经元凋亡的作用

目的 研讨高压氧(HBO)对脑缺血再灌注损伤的疗效及其机制，为临床HBO治疗疾病提供理论依据。方法 实验动物用沙土鼠20只，雌雄不限。采用随机数字法将实验动物分为正常对照组、缺血组、0．15MPa HBO治疗组、0．25MPa HBO治疗组、0．25MPa压力空气(hyper-baric air．HBA)对照组5组(n=4)。应用TUNEL检测技术，对沙土鼠前脑缺血20min后再灌注3d模型，用高压氧(hyperbaric oxygen，HBO)治疗连续3d，观察HBO作用下海马CAt区神经元凋亡变化。结果 沙土鼠脑缺血再灌注3d后海马cA1区大量神经元凋亡[(163&;#177;15)／mm^2]，HBO治疗组凋亡细胞数[O．15MPa HBO治疗组为(99&;#177;12)／mm^2，0．25MPa HBO治疗组为(73&;#177;11)／mm^2]明显减少(P&;lt;0．01)，0．25MPa空气对照组凋亡细胞数为(15l&;#177;13)／mm^2，以0．25MPa HBO治疗组为佳。结论 HBO治疗对海马神经元损伤有保护作用，减少神经元凋亡，为高压氧治疗缺血性损伤的疗效机制之一。     

脑缺血再灌注后小鼠海马神经元两种不同的形态学改变

目的：用小鼠脑缺血再灌注的海马标本观察神经元损伤的形态学改变，以期探讨不同亚区神经元损伤的病理生理特点。方法：小鼠33只随机分为模型组24只及对照组9只。用双侧颈总动脉反复夹闭方法制作脑缺血再灌注动物模型，造模后存活模型组18只，对照组9只。于再灌注后24，72h，7d取材，观察海马神经元的超微结构改变。原位DNA末端标记法检测核DNA断裂。结果：再灌注24h锥体细胞内线粒体肿胀，粗面内质网消失．细胞核内异染色质稍浓缩；再灌注72h锥体细胞内异染色质浓缩，变暗，颗粒细胞出现核膜凹陷及局部扩张；再灌注7d锥体细胞表现为核碎裂等，颗粒细胞染色质浓缩呈圆形团块。光镜下可见TUNEL染色阳性的锥体细胞及颗粒细胞。结论：海马不同区对缺血性损伤的易患性不同，CA1区锥体细胞最敏感，显示了以迟发性坏死为主的超微结构改变，颗粒细胞显示了凋亡样改变。     

前脑缺血再灌注海马CA1区神经元死亡与一氧化氮的关系

目的:深入研究一氧化氮在迟发性神经元死亡的发生中的作用。方法:四血管闭塞复制大鼠前脑缺血/再灌注模型,观察不同类型一氧化氮合酶(nitric-oxidesynthase,NOS)抑制剂治疗组及对照组海马CA1区一氧化氮浓度及CA1区锥体细胞密度的变化。结果:缺血/再灌注后6h海马CA1区一氧化氮浓度犤(3.83±0.90)μmol/L犦即开始升高犤缺血前为(0.93±0.08)μmol/L犦,至3d达到高峰犤(8.99±0.90)μmol/L〗;左旋硝基精氨酸甲脂(L-NAME)能降低各时相点的一氧化氮水平,氨基胍能降低再灌注后6～24h的一氧化氮水平;但两种NOS抑制剂均不能防止再灌注后3d发生的迟发性神经元死亡,其中L-NAME加重了神经元的损害,而氨基胍可明显地减轻神经元损害,有神经保护作用。结论:前脑缺血海马CA1区的迟发性神经元死亡与缺血/再灌注后的一氧化氮水平增高有关,特别是选择性诱导性NOS的作用可能更为重要。     

电针对脑缺血再灌注大鼠海马Fos蛋白的影响

目的：探讨脑缺血再灌注后电针对大鼠海马Fos蛋白表达的影响：方法：SD大鼠18只，体质量250～280g，雌雄不限。动物随机分为3组．对照组、模型组和治疗组。采用夹闭大鼠双侧颈总动脉造成的脑缺血再灌注损伤模型，电针百会、风池、大钟及足三里穴，频率2～20Hz，强度2．0A，持续30min，4h后观察海马Fos蛋白的表达。结果：电针能明显加强脑缺血再灌注后海马各区Fos蛋白的表达：治疗组与模型组相比海马各区阳性细胞数显著增加，CA1区（236&;#177;26．126&;#177;19.P&;lt;0.05)；CA3(328&;#177;80，212&;#177;55．P&;lt;0.05)：CA4(594&;#177;104．381&;#177;92、P&;lt;0．01)：DG(621&;#177;111，341&;#177;89．P&;lt;0.01)。结论：缺血再灌注可诱导海马Fos蛋白的显著表达，电针可增强Fos蛋白的表达。     

前脑缺血再灌注海马CA1区神经元死亡与一氧化氮的关系

目的：深入研究一氧化氮在迟发性神经元死亡的发生中的作用。方法：四血管闭塞复制大鼠前脑缺血／再灌注模型，观察不同类型一氧化氮合酶(nitrie-oxide synthase，NOS)抑制剂治疗组及对照组海马CA1区一氧化氮浓度及CA1区锥体细胞密度的变化。结果：缺血／再灌注后6h海马CA1区一氧化氮浓度[(3．83&;#177;0．90)μmol／L]即开始升高[缺血前为（0．93&;#177;0．08)μmol／L]，至3d达到高峰[(8．99&;#177;0．90)μmol／L]；左旋硝基精氨酸甲脂(L-NAME)能降低各时相点的一氧化氮水平，氨基胍能降低再灌注后6—24h的一氧化氮水平；但两种NOS抑制剂均不能防止再灌注后3d发生的迟发性神经元死亡，其中L-NAME加重了神经元的损害，而氨基胍可明显地减轻神经元损害，有神经保护作用。结论：前脑缺血海马CA1区的迟发性神经元死亡与缺血／再灌注后的一氧化氮水平增高有关，特别是选择性诱导性NOS的作用可能更为重要。     

脑缺血再灌注大鼠海马CA1区线粒体功能与氧自由基产生的关系

目的:探讨缺血再灌注过程中线粒体功能变化及其与氧自由基产生的关系。方法:采用颈动脉分流法制备大鼠脑缺血再灌注模型,测定海马CA1区线粒体ATP合成能力、呼吸功能及此区组织丙二醛含量的变化。结果:线粒体ATP合成能力在再灌注12h及12～24h下降最快,与其他组比较差异有显著性意义(t=3.25～4.26,P<0.05),呼吸四态的氧消耗率在再灌注12,24,36,48h后逐渐上升,与假手术组及缺血5min组相比差异有显著性意义(t=5.32～5.74,P<0.05)。再灌注24～36h,36～48h其上升最快,与其他组比较差异有显著性意义(t=5.56,5.74,P<0.05)。此区组织丙二醛在再灌注24h前逐渐上升且在24h犤(398.6±5.3)nmol/g犦达到高峰。再灌注36,48h组织内丙二醛含量逐渐下降,但仍高于假手术组丙二醛含量犤(256.9±9.6)nmol/g犦(t=3.23～4.56,P<0.05)。结论:海马CAl区组织再灌注早期(24h之前)氧自由基产生主要通过组织途径,24h之后则是组织途径与呼吸链途径共同作用的结果。     

脑缺血再灌注大鼠海马CA1区线粒体功能与氧自由基产生的关系

目的：探讨缺血再灌注过程中线粒体功能变化及其与氧自由基产生的关系。方法：采用颈动脉分流法制备大鼠脑缺血再灌注模型，测定海马CA1区线粒体ATP合成能力、呼吸功能及此区组织丙二醛含量的变化。结果：线粒体ATP合成能力在再灌注12h及12～24h下降最快，与其他组比较差异有显著性意义(t=3．25～4．26，P＜0．05)，呼吸四态的氧消耗率在再灌注12，24，36，48h后逐渐上升，与假手术组及缺血5min组相比差异有显著性意义(t=5．32～5．74，P＜0．05)。再灌注24～36h，36～48h其上升最快，与其他组比较差异有显著性意义(t=5．56，5．74，P＜0．05)。此区组织丙二醛在再灌注24h前逐渐上升且在24h[(398．6&#177;5．3)nmol／g]达到高峰。再灌注36，48h组织内丙二醛含量逐渐下降，但仍高于假手术组丙二醛含量[(256．9&#177;9．6)nmol／g](t=3．23～4．56，P＜0．05)。结论：海马CA1区组织再灌注早期(24h之前)氧自由基产生主要通过组织途径。24h之后则是组织途径与呼吸链途径共同作用的结果。     

缺血缺氧及再灌注后海马神经元损伤的时间窗特性

目的：探讨缺血缺氧及再灌注损伤后大鼠海马神经元在伤后不同时间的凋亡及死亡特性，阐明神经元损伤发生的时间窗特征。方法：实验于2004—05／06在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所进行。体外培养胚胎大鼠海马神经元，模拟临床缺血过程致神经元缺氧损伤，采用Annexin V联合PI标记和流式细胞检测技术观察伤后不同时间点的凋亡与死亡情况。结果：海马神经元缺氧损伤后，其细胞损伤的形式为凋亡和坏死同时存在；模拟缺血15，30min，1．0，1．5，2．0，2．5和3．0h，其坏死率分别为(1．37&;#177;0．12)％，(3．71&;#177;0．34)％，(16．47&;#177;1．27)％，(18．73&;#177;2．02)％，(19．77&;#177;2．32)％，(22．13&;#177;2．12)％和(28．78&;#177;2．69)％，相互间差异有显著性意义(P&;lt;0．05)，各时间点的凋亡率分别为(6．23&;#177;1．67)％，(6．56&;#177;2．38)％，(6．73&;#177;2．42)％，(6．95&;#177;1．89)％，(7．16&;#177;2．82)％，(6．93&;#177;2．56)％和(7．23&;#177;2．89)％，凋亡率无明显变化(P&;gt;0．05)。各时间点再恢复糖和氧供应后至24h，海马神经元存活率进一步明显下降，坏死率进一步增多，各时间点神经元坏死率分别为(6．98&;#177;1．23)％，(8．46&;#177;1．37)％，(17．68&;#177;2．97)％，(20．79&;#177;3．16)％，(21．67&;#177;3．05)％，(35．53&;#177;3．33)％和(50．22&;#177;4．19)％，差异亦有显著性意义(P&;lt;0．05)；凋亡率亦逐渐增多，模拟缺血15，30min，1．0，1．5和2．0h时间点的再灌注24h，其神经元凋亡率分别为(11．89&;#177;2．06)％，(14．92&;#177;2．64)％，(28．67&;#177;3．05)％，(44．67&;#177;3．78)％和(61．67&;#177;4．89)％，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)，但模拟缺血2．5h和3．0h时间点再灌注24h的神经元凋亡率为(27．76&;#177;3．15)％和(12．67&;#177;2．27)％，其凋亡率反而显示明显下降。结论：凋亡是延迟性神经元死亡的重要通路，脑缺血缺氧的干预治疗时间窗可以提前至2h内。     

阿司匹林保护大鼠脑缺血再灌注后神经元损伤的作用途径

目的：观察阿司匹林对缺血再灌注损伤时脑水肿以及p53表达的影响，以探讨阿司匹林的神经保护作用。 方法：实验于2004-04／07在同济医学院神经生物学教研室完成。①分组：将健康SD大鼠72只随机分成假手术组12只、缺血再灌注组20只、阿司匹林20mg／kg组20只和40mg／kg组20只。缺血再灌注各组分别在缺血再灌注24h和48h处死动物，每个时间点10只．5只用于脑水含量测定，5只甩于p53表达的测定。假手术组12只于对应时间段分别处死，每个时间点6只，3只用于脑水含量测定，3只用于p53表达的测定。②模型制备：应用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型，假手术组：结扎各血管，不阻塞大脑中动脉。③给药：阿司匹林20mg／kg组和40mg／kg组分别于缺血30min、24h和48h腹腔注射20mg／kg，40mg／kg阿司匹林。缺血再灌注组在相应时间点腹腔注射生理盐水。采用干、湿重法测定脑组织水含量的变化。应用免疫组织化学方法检测大脑皮质p53表达的变化。 结果：72只大鼠均进入结果分析。①缺血30min再灌注24h后，全部大鼠均行神经功能缺损评分．缺血再灌注组、阿司匹林20mg／kg组和40mg／kg组的神经功能重度缺损率分别为85％，60％和30％。（④缺血再灌注时，大脑中动脉闭塞大鼠脑水含量逐渐增加．到48h达到高峰，与假手术组相比，差异有显著性意义[（86．32&;#177;0．61）％，（77．65&;#177;0．30）％．P〈0．051。而阿司匹林20mg／kg组与阿司匹林40mg／kg组与缺血再灌注组相比，脑水含最逐渐降低，差异有显著性意义[（83．27&;#177;0．35）％，（78．57&;#177;0．13）％，（86．32&;#177;0．61）％，P〈0．051。③免疫组织化学结果表明：缺血再灌注48h时，阿司匹林可明显降低大脑皮质p53阳性细胞数，与假手术组相比差异有显著性（P〈0．05）。 结论：阿司匹林可能通过降低缺血再灌注时脑水肿程度和p53的表达而实现其神经元的保护作用。     

七氟醚对脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元ATP酶活性的影响及其机制分析

目的探讨七氟醚对脑缺血再灌注损伤(IRI)大鼠海马神经元三磷酸腺苷(ATP)酶活性的影响,并分析其机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为3组:正常组,模型组(建立局灶性脑IRI大鼠模型)和七氟醚组(脑IRI模型+七氟醚吸入治疗),每组各10只。电镜观察各组大鼠海马组织的超微结构,免疫荧光检测海马神经元含量,免疫组化检测海马环磷酸腺苷(cAMP)和蛋白激酶A(PKA)蛋白表达,试剂盒法检测海马ATP酶活性,荧光定量-聚合酶链锁反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测海马cAMP、PKA、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA和蛋白表达。结果正常组海马神经元细胞膜结构完整,模型组海马神经元胞体萎缩,染色质浓缩并聚集在细胞核边缘,七氟醚组海马神经元形态明显改善。与对照组相比,模型组大鼠海马组织微管相关蛋白-2(MAP-2)阳性细胞占比显著降低(P<0.05),七氟醚组显著高于模型组(P<0.05)。与对照组相比,模型组大鼠海马组织cAMP和PKA阳性表达、Na⁺-K⁺-ATP酶和Ca²⁺-ATP酶活性显著降低(P<0.05),七氟醚组显著高于模型组(P<0.05)。与对照组相比,模型组大鼠海马组织cAMP、PKA、CREB、BDNF mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),七氟醚组显著高于模型组(P<0.05)。结论七氟醚可通过激活cAMP-PKA-CREB-BDNF信号通路来促进脑IRI大鼠海马神经元的ATP酶活性,进一步改善脑IRI。     

全脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡调节蛋白Bel-2和Bax的表达

背景：脑缺血再灌注对中枢神经系统的影响，除了急性期的细胞坏死，还有迟发性的神经元凋亡。目的：观察大鼠全脑缺血不同再灌注阶段海马神经元凋亡率、坏死率及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的表达情况，并探讨其对全脑缺血再灌注损伤的调节作用。设计：随机对照实验。单位：首都医科大学附属北京天坛医院的神经外科和麻醉科。材料：实验于2003-01／20014-01在首都医科大学附属北京神经外科研究所完成。选择清洁级成年雄性健康Wistar大鼠33只，随机分5组，缺血再灌注24h组7只、缺血再灌注48h组7只、缺血再灌注72h组7只、缺血再灌注7d组7只和假手术对照组5只。干预：制备大鼠全脑缺血再灌注模型。分别于再灌注24，48，72h和7d取脑海马组织，用流式细胞仪检测细胞凋亡率，坏死率，Bcl-2和Bax蛋白在大鼠脑海马神经元中的表达情况。主要观察指标：①流式细胞仪检测各组大鼠脑海马组织细胞凋亡率和坏死率。②Bcl-2和Bax蛋白表达百分率。结果：33只大鼠全部进入结果分析。①缺血再灌注7d组海马神经元的凋亡率最高[（24．59&;#177;0．97）％]，坏死率峰值出现在缺血再灌注24h组[（16．67&;#177;1．04）％]，明显高于假手术对照组[（1．28&;#177;0．50）％，（0．90&;#177;0．38）％]（P〈O．01）。②假手术对照组Bcl-2表达极低[（1．07&;#177;0．27）％]，但Bax有高表达[（46．09&;#177;5．37）％]。⑧Bcl-2蛋白峰值出现在缺血再灌注后48h[（14．41&;#177;0．67）％]，而Bax蛋白峰值出现在缺血再灌注之后72h[（77．38&;#177;1．52）％]。结论：全脑缺血再灌注损伤后海马神经元凋亡率逐渐增高，凋亡调控基因Bcl-2和Bax表达异常增高，提示Bcl-2和Bax蛋白参与了全脑缺血再灌注损伤的凋亡调节。     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及其相应基因的调控

目的 观察胰岛素（insulin,RI)对缺血再灌注损伤后细胞凋亡及其相应基因的调控作用。评估RI对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 将健康wistar大鼠56只，随机分为对照组、缺血再灌注盐水组(NS)、缺血再灌注胰岛素组(RI)。采用pulsinelli4血管阻塞模型，观察RI、NS在4．24，48h海马CA1区存活神经元数目，TUNEL阳性细胞数目，Bcl-2蛋白的表达，以观察比较缺血再灌注阶段细胞凋亡的变化。结果 再灌注NS组CA1区神经元数目(36&;#177;6)个／mm^2较再灌注RI组(88&;#177;9)个／mm^2少(t=3．34，P&;lt;0．01)。再灌注后CA1区细胞凋亡数：4h时再灌注NS组(12&;#177;3)个／mm^2高于再灌注RI(8&;#177;1)个／mm^2和假手术组(2&;#177;1)个／mm^2：组间比较，F=127．66，P&;lt;0．001。Bcl-2对海马CA1细胞凋亡评估4h时。再灌注NS组43．0&;#177;9．8,高于再灌注RI组24．0&;#177;5．4和假手术组2．7&;#177;0．8。结论 全脑缺血再灌注时急用RI可减轻脑缺血再灌注神经元凋亡,对脑缺血再灌注损伤引起的神经元延迟性坏死有保护作用。     

高压氧对脑缺血再灌注海马神经元Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的 观察高压氧(HB0)作用下脑缺血再灌注海马CA，区神经元Bcl-2和Bax蛋白表达的变化情况，进一步研讨高压氧治疗脑缺血再灌注损伤、减轻神经元凋亡从而发挥保护作用的机制。方法 沙土鼠20只，采用随机数字法将实验动物分为正常对照组、缺血组、0．15MPaHBO治疗组、0．25MPaHBO治疗组，0．25MPa压力空气(hyperbaric air，HBA)对照组，每组4只动物。采用“双侧颈总动脉阻断法”前脑缺血模型，缺血20min后再灌注3d，并用0．15MPa和0．25MPa压力的高压氧治疗(60min／d，连续3d)后，应用免疫组化LSAB方法，观察高压氧对海马CA1区神经元凋亡相关基因Bcl-2和Bax的蛋白表达的影响。结果 沙土鼠脑缺血再灌注3d组海马CA1区大量神经元表达Bax蛋白，并且神经元发生凋亡，未见神经元表达Bcl-2蛋白；高压氧治疗组则大量神经元表达Bcl-2蛋白。并且0．25MPa高压氧治疗组比0．15MPa高压氧治疗组变化更显，而各组表达Bax蛋白的神经元数目无明显变化。但高压氧治疗组Bax蛋白阳性的神经元形态正常。结论 HBO暴露可诱导大量神经元表达Bcl-2蛋白，对Bax蛋白表达则无明显作用，使Bcl-2和Bax蛋白表达的比值增高，从而起到保护神经元的作用，这可视为HBO治疗脑缺血性损伤减少神经元凋亡的机制之一。     

山莨菪碱在大鼠脑缺血再灌注时对神经元调亡的影响

目的：通过观察脑缺血再灌注后海马CAI区存活神经元数目、原位末端标记（TUNEL）阳性细胞数目、热休克蛋白70（HSP70）阳性细胞数目以及脑组织超微结构的变化,探讨山莨菪碱（Anisodamine,Ani）对脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法：采用Pulsinelli法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。观察Ani在脑缺血再灌注的迟发性损伤阶段对海马CAI区存活神经元数目、TUNEL阳性细胞数目、HSP70阳性细胞数目以及脑组织超微结构的影响。结果：Ani可增加脑缺血再灌注后的HSP70的表达,减少神经元调亡的发生,提高神经元的存活数目。结论：Ani可减少脑缺血再灌注神经元调亡,提高神经元的存活数目,对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

红景天对全脑缺血再灌注大鼠海马区及齿状回的保护作用

背景：脑海马结构是与学习记忆有关的脑区，一般认为与空间认知活动密切相关。在脑缺血后发生的过氧化应激引发海马区和齿状回DNA损伤和DNA修复能力下降，其学习记忆功能也相应下调。目的：探讨红景天对全脑缺血再灌注大鼠学习记忆功能区域海马区及齿状回核酸表达的影响。设计：随机对照实验。单位：武警医学院中心实验室。对象：实验于2002—04／2004-04在武警医学院中心实验室完成，选用Wistar雄性大鼠60只，随机分为5组，每组12只。①红景天1．2g／（kg&;#183;d）剂量组。②红景天0.48g／（kg&;#183;d）剂量组。③川芎嗪80mg/（kg&;#183;d）对照组。④模型组：按给药组相同体积每日蒸馏水灌胃。⑨假手术组：按给药组相同体积每日蒸馏水灌胃。方法：各组大鼠连续灌胃给药7d，用改良的Pulsinelli 4-血管阻断法，复制大鼠急性全脑缺血再灌注损伤模型。其中假手术组不灼烧椎动脉，不夹闭颈总动脉。模型制备后用吖啶橙染色法观察脑海马区和齿状回DNA、RNA的表达变化。主要观察指标：各组大鼠脑海马区及齿状回DNA、RNA的表达。结果：60只大鼠均进入结果分析。假手术组DNA和RNA分布均匀．荧光反射边界清晰，反应强度较强；模型组的DNA和RNA荧光反射边界不清，反应强度明显减弱；红景天1．2g／（kg&;#183;d）剂量组的DNA和RNA分布均匀，荧光反射边界清晰，反应强度明显增强．与假手术组及川芎嗪80mg／（kg&;#183;d）对照组表达分布基本相同。红景天0．48g/（kg&;#183;d）剂量组荧光反应强度及分布与模型组比较无明显改变。结论：手术组DNA和RNA荧光反射不清，可能与脑缺血再灌流损伤中氧化应激引起DNA链断裂有关。给予红景天1．2g／（kg&;#183;d）剂量大鼠脑海马区及齿状回DNA和RNA荧光反射边界清晰，表明红景天能够抑制氧化应激引起的DNA链断裂，对全脑缺血再灌注大鼠学习记忆功能区域海马区及齿状回具有保护作用。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3对缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡的影响

背景：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在正常细胞中以酶原形式存在，受凋亡刺激因素作用后能够被激活从而引起细胞凋亡。 目的：通过检测脑海马组织胞质S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性及海马区神经元凋亡情况，探讨全脑缺血再灌注后脑海马神经元凋亡与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的关系。 设计：随机对照实验。 单位：解放军第三军医大学西南医院急救部。 材料：实验于1999-01／04在解放军第三军医大学西南医院完成。选取雄性Wistar大鼠182只，随机分为3组：假手术组14只，脑缺血再灌注组84只，乙酰天冬氨酰谷氨酰缬氨酰天冬氨酸乙醛（acetyl-asp-glu-valasp．aldehyde，AC-DEVD-CHO）治疗组84只，后两组均设立缺血再灌注8，24。48，72，120，168h 6个时相点，每个时相点14只大鼠。 方法：脑缺血再灌注组、AC-DEVD-CHO治疗组建立大鼠全脑缺血20min再灌注模型，分别于再灌注后8，24，48，72，120，168h处死取海马组织；假手术组施行麻醉及手术，但不夹闭颈总动脉和烧灼椎动脉，术后观察72h后处死取海马组织备检。以单位质量标本于单位时间内裂解产生的氨甲基香豆素量表示标本中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性。各组不同时相点脑组织切片封固后在荧光显微镜下于330～350nm处观察脑海马细胞凋亡情况。 主要观察指标：①各组脑缺血再灌注后不同时相点海马组织S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化。②各组脑缺血再灌注后不同时相点海马细胞凋亡的情况。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性与海马区神经元凋亡的关系。 结果：实验纳入182只大鼠，脱落14只，共168只大鼠进入结果分析。①各组脑缺血再灌注后不同时相点海马组织S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化：假手术组术后观察72时为0。与脑缺血再灌注组比较，AC-DEVD-CHO治疗组于再灌注24，48，72，120，168h均明显降低[（1．71&;#177;0．03），（1．22&;#177;0．03）；（2．77&;#177;0．09），（1．59&;#177;0．7）；（5．54&;#177;0．51），（2．3&;#177;0．19）；（6．28&;#177;1．71），（3.43&;#177;0．46）；（3．11&;#177;1．21），（1．73&;#177;0．14）nkat／kg；P〈0．05或0．01]。②各组脑缺血再灌注后不同时相点海马细胞凋亡的情况：每400倍视野下，假手术组术后观察72h为（1．2&;#177;0．4）个。与脑缺血再灌注组比较，AC-DEVD-CHO治疗组于再灌注24，48，72，120，168h均明显降低[（6．4&;#177;1．7），（2．8&;#177;0．8）；（11．8&;#177;1．3），（5．8&;#177;1．9）；（19．8&;#177;3．1），（10．0&;#177;1．9）；（31．2&;#177;5．9），（16．4&;#177;2．4）；（19．8&;#177;2．3），（9．0&;#177;2．3）个／400倍视野；P〈均0．011。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性与海马区神经元凋亡的关系：脑缺血再稽注组、AC-DEVD-CHO治疗组均行直线相关分析，二者的变化呈显著正相关（r分别为0．9356及0．9800，P均〈0．01）。 结论：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的激活是引起海马神经元调亡的主要因素之一，在缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡中起着重要作用。     

大鼠前脑缺血再灌注后海马神经元细胞凋亡及 Bcl-2表达研究

目的：观察Bcl-2蛋白在前脑缺血再灌注后细胞凋亡中的变化,探讨脑缺血再灌注后细胞凋亡的分子机制。方法：21只雄性SD大鼠随机分为7组,即对照组,脑缺血再灌注后1、3、6、12、24、48h组。大鼠断头处死后,解剖取材,固定、包埋、切片。用原位末端标记法（TUNEL）检测前脑缺血再灌注模型海马的细胞凋亡情况,用免疫组化方法检测相关基因Bcl-2表达的变化。结果：前脑缺血再灌注1、3h海马区未见凋亡细胞出现,6h开始出现,24h 达高峰,之后开始下降。Bcl-2阳性表达在前脑缺血再灌注1h即出现,12h达高峰,之后下降至低水平。结论：Bcl-2蛋白表达在海马神经元凋亡过程中起重要作用。[著者文摘]     

阿司匹林保护大鼠脑缺血再灌注后神经元损伤的作用途径

目的:观察阿司匹林对缺血再灌注损伤时脑水肿以及p53表达的影响,以探讨阿司匹林的神经保护作用。方法:实验于2004-04/07在同济医学院神经生物学教研室完成。①分组:将健康SD大鼠72只随机分成假手术组12只、缺血再灌注组20只、阿司匹林20mg/kg组20只和40mg/kg组20只。缺血再灌注各组分别在缺血再灌注24h和48h处死动物,每个时间点10只,5只用于脑水含量测定,5只用于p53表达的测定。假手术组12只于对应时间段分别处死,每个时间点6只,3只用于脑水含量测定,3只用于p53表达的测定。②模型制备:应用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,假手术组:结扎各血管,不阻塞大脑中动脉。③给药:阿司匹林20mg/kg组和40mg/kg组分别于缺血30min、24h和48h腹腔注射20mg/kg,40mg/kg阿司匹林。缺血再灌注组在相应时间点腹腔注射生理盐水。采用干、湿重法测定脑组织水含量的变化。应用免疫组织化学方法检测大脑皮质p53表达的变化。结果:72只大鼠均进入结果分析。①缺血30min再灌注24h后,全部大鼠均行神经功能缺损评分,缺血再灌注组、阿司匹林20mg/kg组和40mg/kg组的神经功能重度缺损率分别为85%,60%和30%。②缺血再灌注时,大脑中动脉闭塞大鼠脑水含量逐渐增加,到48h达到高峰,与假手术组相比,差异有显著性意义[(86.32±0.61)%,(77.65±0.30)%,P<0.05]。而阿司匹林20mg/kg组与阿司匹林40mg/kg组与缺血再灌注组相比,脑水含量逐渐降低,差异有显著性意义[(83.27±0.35)%,(78.57±0.13)%,(86.32±0.61)%,P<0.05]。③免疫组织化学结果表明:缺血再灌注48h时,阿司匹林可明显降低大脑皮质p53阳性细胞数,与假手术组相比差异有显著性(P<0.05)。结论:阿司匹林可能通过降低缺血再灌注时脑水肿程度和p53的表达而实现其神经元的保护作用。