肿瘤相关基因TXNDC5的研究进展

TXNDC5基因定位于染色体6p24.3上并且具有编码蛋白二硫键异构酶的功能。其所编码的蛋白含有3个硫氧还蛋白结构域并且可以补偿二硫键异构酶在酵母中功能的损失。研究发现TXNDC5基因在一些癌组织中的表达水平明显高于正常组织。本文主要就TXNDC5在肿瘤领域的最新研究进展进行综述。     

内质网蛋白TXNDC5的研究进展

硫氧还蛋白5（thioredoxin domain containing protein 5,TXNDC5）是近年来新发现的位于内质网中的蛋白质,是一种蛋白质二硫键异构酶,是蛋白质二硫键形成、异构及还原的关键限速酶,属于蛋白质二硫键异构酶（protein disulfide isomerase,PDI）。研究发现,在肿瘤领域对其研究较多。近年来研究显示,TXNDC5在代谢性疾病和纤维化相关疾病等中都发挥着重要作用,本文就其与最新相关疾病做一介绍。     

蛋白质二硫键异构酶血栓疾病致病机制研究进展

蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerase, PDI)是蛋白质二硫键异构酶家族的原型成员，由P4HB(prolyl 4-hydroxylase subunit beta)基因编码，是脯氨酸-4-羟化酶P4H蛋白的β亚基，故又称P4HB。主要存在于内质网中，通过酶活性和分子伴侣功能帮助蛋白质正确折叠，在病理生理进程中发挥重要作用。国内外对PDI的相关研究诸如癌症、神经退行性疾病等疾病中的作用机制进行了探讨，除了在内质网中的关键作用外，细胞表面PDI在启动血栓形成过程中的作用尤为突出。PDI可以迅速从血管损伤部位的活化血小板和内皮细胞中分泌出来，促进血小板活化和纤维蛋白形成，同时也能介导凝血因子活化、释放和凝血通路激活。用抗体或小分子抑制剂抑制PDI会阻止血栓形成。鉴于细胞外PDI在血栓调控中的重要作用，因此了解蛋白质二硫键异构酶血栓疾病致病机制势在必行。目前正在努力确定PDI的细胞外底物，这些底物参与了蛋白质二硫键异构酶与血栓形成之间的网络途径。本文重点阐述目前对蛋白质二硫键异构酶介导血栓形成机制的理解，并讨论通过靶向PDI阻断血栓形成的研究进展，以期为进一步探讨该物质防治血栓性疾病的应用提供新的思路。      

微粒体甘油三酯转运蛋白MTP研究进展

MTP 存在于细胞微粒体、内质网腔内,在内质网内含量最高,占总蛋白的0.5%～1.0%。用层析技术获得纯的 MTP在 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳上表现为两种异构体,其分子质量是58000和88000;另外用沉降平衡技术测得的分子质量是150000,说明 MTP 有两种异源二聚体。氨基酸测序和免疫技术分析证明低的是一个亚单位,称为蛋白二硫化合物异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)它的二硫化合物异构酶活性能使新合成蛋白质的一对半胱胺酸残基形成二硫键。另外它     

微粒体甘油三酯转运蛋白MTP研究进展

MTP存在于细胞微粒体、内质网腔内，在内质网内含量最高，占总蛋白的0．5％-1．0％。用层析技术获得纯的MTP在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳上表现为两种异构体，其分子质量是58000和88000；另外用沉降平衡技术测得的分子质量是150000，说明MTP有两种异源二聚体。氨基酸测序和免疫技术分析证明低的是一个亚单位，称为蛋白二硫化合物异构酶(protein disulfide isomerase，PDI)它的二硫化合物异构酶活性能使新合成蛋白质的一对半胱胺酸残基形成二硫键。     

ERp29在肿瘤中的研究进展

内质网在动植物中分布广泛,功能多样,它既是所有生物膜的来源;又是细胞钙离子的存储库,对细胞内钙信号起调节作用。它对分泌蛋白的质量进行严格的控制,新生蛋白只有经过信号肽切除、N糖基化、二硫键的正确连接才能形成正确的空间结构,在此过程中分子伴侣发挥了重要作用[1]。当未折叠或错误折叠蛋白质在内质网中累积,或细胞内钙稳态失衡时,     

内质网蛋白29过表达慢病毒载体的构建及其对胃癌细胞生物学行为的影响

目的：构建内质网蛋白29（ERp29）慢病毒过表达载体,探讨ERp29过表达对胃癌MGC803和SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：构建带有红色荧光蛋白标签的ERp29基因表达质粒的慢病毒（pCDH-ERp29）和对照质粒（pCDH-Vector）,分别感染MGC803和SGC7901细胞;荧光显微镜观察细胞感染情况;CCK-8和平板克隆实验检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的增殖能力;Transwell小室实验分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭能力;应用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞中ERp29 mRNA和蛋白表达水平。结果：酶切鉴定显示成功构建pCDH-ERp29过表达载体,荧光显微镜下观察到成功感染胃癌细胞。CCK-8实验和平板克隆实验检测,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞增殖能力无明显变化（P>0.05）;Transwell小室实验,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。pCDH-ERp29组细胞中ERp29 mRNA和蛋白表达水平明显高于pCDH-Vector组（P<0.05）。结论：成功构建过表达ERp29基因的慢病毒载体,过表达ERp29基因可明显抑制胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭。     

二硫键异构酶在脑缺血-再灌注损伤中的变化及其意义

目的 探讨脑组织二硫键异构酶（PDI）的变化在脑缺血－再灌注损伤（CIRI）中的意义。方法 制作Wistar大鼠动物模型，随机分为假手术对照组，缺血－再灌注组和重组人硫氧还蛋白酶（还原型rhTRX)治疗组，动态观察正常对照，实验对照和rhTRX治疗组血浆及脑组织一氧化氮（NO）水平，超氧化歧化酶（SOD）活性，脑组织二硫键异构酶（PDI）的变化。结果 脑缺血－再灌溉损伤时，血浆和脑组织NO水平，超氧化歧化酶（SOD）活性与缺血前比较明显下降（P＜0．05）。在rhTRX组,NO及SOD的代谢物明显增多（P＜0．01），rhTRX组与对照组相比较，PDI还原硫基（free-thiols)的细胞水平明显增加。结论 再灌注损伤中氧自由基与NO结合，使NO的减少，是脑损害的直接原因。而PDI通过降低氧自由基而达到保护和恢复NO的功能，防止过高的氧势对脑组织的损害。     

家兔各组织细胞蛋白二硫键异构酶（PDI）的活性及含量研究

目的：探讨蛋白二硫键异构酶（PDI）的生物学功能主与内质网的关系。方法：应用改良的Hillson方法及酶联免疫技术，测定家兔不同组织细胞内PDI的活性及其含量；结果：家兔不同组织细胞内均有PDI分布，但酶活性及含量差异显，在分泌功能旺盛的胰腺细胞，肝细胞其含量占细胞总蛋白的2－6％，是肌细胞的100倍，酶比活性为4－24unit/g，约为肌细胞的80－400倍，不同细胞微粒体获得率明显不同，单位重量微粒体蛋白含量基本相同；结论：不同细胞内质网含量不同，而单位重量内质网的蛋白种类和含量具有一定保守性。     

ERp29在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的 研究结直肠癌中内质网蛋白29(ERp29)的表达情况及临床意义.方法 对62例结直肠癌患者病理组织切片,行ERp29免疫组化染色,统计分析癌组织及癌旁组织 ERp29表达情况,并比较不同ERp29表达水平的结直肠癌患者,其临床及病理特征差异有无统计学意义.结果 62例癌组织中ERp29表达阳性24(38. 7％)例,阴性38(61. 3％)例,癌旁组织阳性58(93. 5％)例,阴性4(6. 5％)例,癌组织 ERp29阳性组与阴性组之间,肿瘤的TNM分期以及淋巴结转移情况差异有统计学意义(P＜0. 05).结论 结直肠癌组织中ERp29的表达水平低于癌旁组织,ERp29的表达情况可为评估肿瘤转移倾向及预后提供一定参考价值.     

木犀草素抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路激活对小鼠急性呼吸窘迫综合征的改善作用

探讨木犀草素调控活性氧（ROS）/硫氧还蛋白结合蛋白（TXNIP）/NOD样受体相关蛋白3（NLRP3）信号通路激活对小鼠急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的改善作用。     

秀丽线虫mfn-1 RNAi通过依赖于ATFS-1途径激活线粒体未折叠蛋白反应

目的：研究mfn-1RNAi对线粒体未折叠蛋白反应的激活作用及其机制。方法：分别对线虫SJ4058和SJ4100（指示线粒体未折叠蛋白反应）、TJ375（指示细胞质未折叠蛋白反应）、SJ4005（指示内质网未折叠蛋白反应）进行mfn-1RNAi处理,观察后代中能否激活相应分子伴侣表达;将SJ4058线虫分别与haf-1基因功能缺失线虫RB867及atfs-1基因功能缺失线虫VC3201杂交,然后对获得的纯合子线虫进行mfn-1RNAi,观测后代中是否有荧光激活,即验证分子伴侣的激活是否依赖于HAF-1及ATFS-1。结果：Mfn-1RNAi特异性激活线粒体分子伴侣HSP-6及HSP-60的表达,而没有激活细胞质分子伴侣HSP-16.2及内质网分子伴侣HSP-4;通过杂交获得基因型为hsp-60：gfp/haf-1（ok705）IV和hsp-60：gfp/atfs-1（gk3094）V的线虫并经过PCR验证。进一步对这两种基因型的线虫进行mfn-1RNAi处理发现,线粒体分子伴侣HSP-60的激活依赖于ATFS-1而不依赖于HAF-1。结论：Mfn-1RNAi特异性激活线粒体而非细胞质及内质网未折叠蛋白反应,提示MFN-1蛋白的表达降低对线粒体蛋白稳态有影响,而对细胞质及内质网蛋白质稳态影响不大;Mfn-1RNAi对线粒体未折叠蛋白反应的激活依赖于转录因子ATFS-1而不依赖于线粒体膜蛋白HAF-1。     

MACF1的生物信息学分析及细胞定位

目的：了解微管微丝交联因子1（MACF1）的结构与功能．方法：采用生物信息学软件对MACF1结构、功能及亚细胞定位进行分析,并利用分子模拟软件对MACF1空间结构进行了模拟,同时采用免疫荧光显微术及共聚焦激光扫描显微术（CLSM）对生物信息学分析的部分结果进行了验证．结果：MACF1由5430氨基酸组成,M,约为620×10^3,主要定位于胞质及细胞骨架．MACF1结构中包含1个ABD、37个血影蛋白重复单元、1个SH3结构域、2个EF手臂钙结合位点结构域、1个生长捕获特异蛋白2结构域等基序,并包含4个序列谱及5个序列模式．MACF1的德温特人藏号为Q9UPN3,MACF1包括4个亚型即MACF1／2／3／5,主要功能可能是将微丝、微管与其它骨架蛋白交联．同源模建结果表明,MACF1与α-辅肌动蛋白的ABD结构域一级序列的同源性为50．2％．免疫荧光显微术及CLSM结果表明,MACF1主要分布与细胞质,且与微丝、微管骨架部分共定位．结论：MACF1是一种大分子量的骨架交联蛋白,主要定位于细胞质,且与微丝、微管骨架部分共定位,MACF1结构功能可能与Ot辅肌动蛋白有一定的相似性．     

Y盒结合蛋白1及其对肿瘤发生的双刃剑作用

Y盒结合蛋白1(YB-1)是一类包含冷休克结构域的蛋白家族成员,YB-1从结构上分为三部分:N端的单链DNA结构域、冷休克结构域和C端结构域。它与DNA及RNA的相互作用、转录调节、翻译调控等有关。YB-1参与肿瘤细胞的转化、多重耐药及转移。YB-1对肿瘤具有促进和抑制作用,可作为诊断肿瘤的重要指标,是治疗肿瘤的重要的分子靶点。总之,YB-1不仅在肿瘤细胞的生长中起重要作用,而且在肿瘤相关的血管内皮细胞生长中也扮演着重要的角色。该文就YB-1的功能及其对肿瘤发生的促进及抑制等方面进行概述。     

ERp29基因的克隆及其在IEC-6细胞中的表达

目的克隆小鼠ERp29基因并在IEC-6细胞中表达.方法采用RT-PCR方法从小肠上皮细胞克隆该基因的编码区,经T-载体克隆并测序证实后构建真核表达载体,并转染IEC-6细胞,RT-PCR分析外源基因的表达.结果从小肠上皮细胞总RNA中成功地克隆了ERp29基因,序列测定结果表明克隆的序列与数据库中序列完全一致.构建的真核表达载体与预期一致,表达质粒转染细胞后的RT-PCR分析结果表明:外源的质粒得到了有效的表达.结论成功地克隆了ERp29基因,并获得真核表达.     

高迁移率族蛋白B1在免疫应答中作用的研究进展

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种DNA结合蛋白,在细胞外有细胞因子功能,能启动免疫反应,引起细胞炎性效应。生理状态下,HMGB1有核结合蛋白的作用,释放进入细胞间隙后,则表现出晚期炎性因子作用。HMGB1的识别及跨膜信号转导需要一系列分子的参与,其受体主要是晚期糖基化终产物、Toll样受体等。HMGB1作为一个内源性分子,促进免疫反应和组织内稳态。     

应用Discovery Studio软件预测烟酸姜黄素酯抗动脉粥样硬化的作用靶点

目的运用计算机虚拟筛选技术预测烟酸姜黄素酯抗动脉粥样硬化作用的靶标蛋白。方法查阅与动脉粥样硬化相关靶标的文献,筛选出60余种与动脉粥样硬化相关的蛋白（分子对接的受体）,再对蛋白质晶体结构数据库PDB中的目标蛋白的三维结构活性部位进行分析,采用北京创腾科技有限公司的Discovery Studio分子模拟软件包（版本3.0）中的LibDock模块将烟酸姜黄素酯（配体）与受体蛋白进行分子对接。结果以对接得出的配体在受体结合位点处的结合形式（poses≥80）和对接吻合度参数（LibDockscore≥100）作为阈值,筛选出CRP、MMP13、ACAT、CETP等11种受体蛋白与烟酸姜黄素酯存在较强的相互作用。结论该研究结果可预测烟酸姜黄素酯抗动脉粥样硬化的可能作用靶点,对该药的抗动脉粥样硬化药效学研究有一定的指导意义。