MTT法检测通络止痛方对人膝骨关节炎滑膜成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨通络止痛方对人膝关节骨性关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)滑膜成纤维细胞增殖的影响。方法:取本院行全膝关节置换术患者术中废弃滑膜组织,经I型胶原酶消化后进行原代培养,取3~4代成纤维细胞进行高、中、低浓度通络止痛方干预。应用四甲基偶氮唑盐法测定(MTT)法检测KOA滑膜细胞的增殖水平,并用倒置显微镜下观察各浓度下的细胞形态。结果:加药组组间与加药组与空白组比较,差异有统计学意义(P0.05)。MTT法检测随通络止痛方浓度减小KOA滑膜细胞在490 nm波长处吸光OD值数越大;高中浓度组抑制率为正值,随浓度增加抑制率增大,低浓度抑制率为负值,随浓度降低抑制率减少。结论:高、中浓度通络止痛方对滑膜细胞增殖有抑制作用,低浓度组的通络止痛方对滑膜细胞有增殖有促进作用。     

桂皮醛对miRNA-146a干扰的骨关节炎滑膜炎性反应影响的实验研究

目的:研究miRNA-146a基因及桂皮醛对miRNA-146a干扰的滑膜成纤维细胞释放TLR4、NO、MMP-13的影响,探寻其在OA滑膜炎性反应分子学机制中的作用。方法:采用脂质体转染法将miR-146a基因模拟及抑制性质粒载体对经LPS诱导后的OA滑膜炎性反应效应细胞滑膜成纤维细胞进行基因导入,并用桂皮醛对干扰后的细胞进行干预,检测不同组间TLR4、NO及MMP-13表达的差异。结果:miRNA-146a相关质粒转染后的TLR4、NO、MMP-13浓度的变化趋势大致相同:与对照组比较,三者的inhibitor组均升高,mimics组则均呈下降趋势(P0.05)。桂皮醛单独作用于miRNA-146a干扰后的细胞时,与对照组比较,TLR4、NO、MMP-13浓度均有明显下降(P0.05),而当mimics和CA联合干预时,三者释放量显著下降(P0.05)。结论:miRNA-146a及桂皮醛均对骨关节滑膜炎性反应产生影响,当mimics和桂皮醛联合作用时,抑制炎性反应效果最好。为进一步阐明骨关节炎分子机制和药物靶点的识别与开发提供实验依据。     

桂皮醛对滑膜成纤维细胞增殖、凋亡及周期影响的实验研究

[目的]研究不同浓度的桂皮醛(CA)对滑膜成纤维细胞(FLS)的增殖、凋亡及细胞周期的影响,进而探讨CA对骨关节炎滑膜炎症的调控机制。[方法]不同浓度的CA分别作用于LPS诱导后的FLS,通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、流式细胞术(FCM)对其增殖、凋亡和周期进行测定。[结果]低浓度的CA可轻度促进FLS的生长,较高浓度CA则可显著降低FLS的存活率(P0.05),呈浓度依赖性。LPS可减少FLS的凋亡率,缩短G1期、延长S期,可用来制备炎症模型。与对照组相比,CA高浓度组与低浓度组均能是Q2和Q4区细胞比率明显增加(P0.05),延长G1期并缩短S期(P0.05),诱导FLS凋亡及抑制FLS的增殖,尤其是CA高浓度组作用更加显著。[结论]不同浓度的CA对FLS的生长均有一定的抑制作用,其中CA高浓度组的抑制作用更强,这可能是CA抗炎作用的潜在机制。     

高浓度葡萄糖对成纤维细胞增殖活性的影响

目的:探讨成纤维细胞在高浓度葡萄糖环境中的增殖活性。方法:分离培养人真皮成纤维细胞,传代后分别用含不同高浓度葡萄糖的DMEM培养基培养,在不同时段进行细胞记数并用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:随着葡萄糖浓度的增高,成纤维细胞的增殖数量明显减少,凋亡细胞比例显著增加。结论:高浓度葡萄糖对成纤维细胞的增殖活性可能有抑制作用。     

黄芪多糖、桂皮醛、川芎嗪对实验性糖尿病大鼠创面成纤维细胞增殖作用的影响

目的:探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharides,AP)、桂皮醛(japanese cinnamon bark aldehyde,JA)、川芎嗪(ligustrazine,LZ)对实验性糖尿病大鼠创面成纤维细胞增殖的影响.方法:利用MTT法观察不同浓度黄芪多糖、桂皮醛、川芎嗪单体及药物有效浓度之间的不同配伍,在不同时间点上对实验性糖尿病大鼠创面成纤维细胞增殖的影响.结果:发现黄芪多糖浓度为625μg/ml、2.44μg/ml,川芎嗪浓度为50 0μg/ml、125μg/ml时可抑制体外培养成纤维细胞的生长,而桂皮醛浓度在2.8μg/ml、1 .4μg/ml时无明显促进或抑制作用.黄芪多糖浓度为39μg/ml、9.75μg/ml、2.44μg/m l,桂皮醛浓度为22.4μg/ml、11.2μg/ml、5.6μg/ml,川芎嗪浓度为31μg/ml、7.75 μg/ml、1.94μg/ml时可促进成纤维细胞的增殖,并且其增殖作用随时间的延长而增强. 黄芪多糖、桂皮醛、川芎嗪三种单体有效浓度之间配伍,在黄芪多糖和川芎嗪的配伍浓度为 187μg/ml、46.75μg/ml、11.69μg/ml,川芎嗪和桂皮醛的配伍浓度为53.4μg/ml、18 .95μg/ml、7.54μg/ml,黄芪多糖和桂皮醛的配伍浓度为178.4μg/ml、50.2μg/ml、15.35μg/ml,黄芪多糖、桂皮醛和川芎嗪三者配伍浓度为209.4μg/ml、57.95μg/ml、 17.29μg/ml时可促进成纤维细胞的增殖,并且其增殖作用随时间的延长而增强.结论:黄芪多糖、桂皮醛和川芎嗪三种单体联合应用时,对实验性糖尿病大鼠创面成纤维细胞增殖作用优于黄芪多糖、桂皮醛和川芎嗪单独应用(P<0.01)及两种单体联合应用(P<0.05).     

吴门芪藤汤对大鼠膝骨关节炎成纤维样滑膜细胞氨基末端激酶的影响

目的:通过观察吴门芪藤汤对弗氏完全佐剂(CFA)诱导的大鼠膝骨关节炎(KOA)模型关节成纤维样滑膜细胞炎性细胞因子表达以及c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路活化的影响,探讨吴门芪藤汤治疗膝骨关节炎的抗炎和抑制成纤维样滑膜细胞过度凋亡的作用机制。方法:采用CFA诱导的KOA大鼠模型为研究对象,各给药组分别用SP600125(JNK抑制剂)和吴门芪藤汤灌胃干预后,观察原代培养的成纤维样滑膜细胞中白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达差异以及细胞凋亡和JNK通路的活化情况。结果:与模型组比较,吴门芪藤汤组明显降低成纤维样滑膜细胞原代培养上清中IL-1β,TNF-α及MMP-3含量水平,差异有统计学意义(P0.05);显著抑制成纤维样滑膜细胞过度凋亡,差异有统计学意义(P0.01);显著抑制成纤维样滑膜细胞JNK通路蛋白的磷酸化,差异有统计学意义(P0.001)。结论:吴门芪藤汤通过降低CFA诱导的KOA大鼠成纤维样滑膜细胞分泌炎性细胞因子水平减弱JNK通路活化,进而抑制滑膜组织过度凋亡,这可能是其治疗膝骨关节炎潜在的机制之一。     

桂皮醛对人舌癌Tca8113细胞体外增殖的影响

目的：探讨中药桂皮醛对人舌癌Tca8113细胞株增殖的影响。方法：体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞,采用256,128,64,32,16,8μg／mL浓度的桂皮醛对其进行干预,用倒置相差显微镜及扫面电镜观察桂皮醛对细胞生长形态的影响,用细胞增殖检测法（MTT）检测桂皮醛对细胞增殖的影响。结果：16,8μg／mL组的桂皮醛对Tca8113细胞生长形态无明显影响,128,64,32μg／mL组Tca8113细胞的生长形态发生改变。8μg／mL的桂皮醛对Tca8113细胞生长有促进作用,256,128,64,32,16ug／mL的桂皮醛对Tca8113细胞生长有抑制作用,呈明显浓度依赖性。结论：桂皮醛对人舌癌Tca8113细胞的增殖有明显浓度依赖性,低浓度能促进其生长。     

桂枝挥发油抗甲型流感病毒作用

目的:观察桂枝挥发油及其主要成分桂皮醛体外对甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)增殖的影响及对该流感病毒株感染小鼠的治疗作用。方法:MTT法检测受试药物对狗肾传代细胞(MDCK)的半数中毒浓度(TC50)及最大无毒浓度(TC0);血凝法测定甲型流感病毒(H1N1)对MDCK细胞的感染性;MTT法和细胞病变法(CPE)测定两种药物体外抑制流感病毒增殖的有效浓度(IC50)和治疗指数(TI)。计算肺指数及HE染色观察药物对流感病毒(H1N1)感染小鼠的治疗作用。结果:桂枝挥发油和桂皮醛对MDCK细胞的TC50分别为5.38×10-3mg/ml和5.49×10-3mg/ml,TC0均为2.5×10-3mg/ml。桂枝挥发油和桂皮醛能抑制流感病毒在MDCK细胞内的增殖,其IC50分别为5.80×10-5mg/ml与5.31×10-5mg/ml,TI分别为92.82和103.35。桂枝挥发油0.174mg/kg和桂皮醛0.132mg/kg连续灌胃5d,明显降低病毒感染小鼠的肺指数,抑制率分别为26.7%和27.4%,并对病理组织形态有改善作用。结论:桂枝挥发油与桂皮醛体外明显抑制甲型流感病毒(H1N1)在MDCK细胞中的增殖,并对流感病毒株感染小鼠有较好的治疗作用。表明桂枝挥发油及桂皮醛具有抗甲型流感病毒作用,桂皮醛是桂枝挥发油抗病毒效应的主要有效成分之一。     

桂皮醛对小鼠成纤维细胞瘤NIH3T3细胞碱性成纤维细胞生长因子及转化生长因子β1表达的影响

目的 研究桂皮醛刺激小鼠成纤维细胞瘤NIH3T3细胞后碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白在不同时相点表达的规律,探讨桂皮醛促进成纤维细胞增殖及胶原合成的机制.方法 采用MTT法观察不同质量浓度桂皮醛对NIH3T3细胞增殖的影响;利用羟脯氨酸(Hyp)测试法测定细胞上清中胶原水平;利用免疫细胞化学技术检测桂皮醛对NIH3T3细胞bFGF、TGF-β1蛋白表达的影响.结果 桂皮醛作用NIH3T3细胞48 h后,细胞增殖速度和细胞上清中的胶原量均较对照组明显增加.桂皮醛刺激后,bFGF和TGF-β1蛋白表达增加,其中bFGF蛋白表达高峰在18 h,TGF-β1蛋白在刺激后12 h达到峰值.结论 桂皮醛可以上调内源性生长因子bFGF、TGF-β1蛋白的表达,这可能是桂皮醛体外促进NIH3T3细胞增殖及胶原合成,以及在创伤愈合、组织修复方面发挥作用的分子生物学机制.     

桂皮醛经JAK2/STAT3通路抑制VEGF诱导的内皮细胞增殖、迁移及成管

目的:为探讨桂皮醛对糖尿病视网膜病变新生血管的作用及机制,观察了桂皮醛对血管内皮生长因子(VEGF)诱导EA. hy926细胞增殖、迁移、成管以及Janus激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法:将EA.hy926细胞分成空白组、模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+桂皮醛(60,90,120,150μmol·L-1)组,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和划痕实验检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞增殖和迁移作用的影响;将EA. hy 926细胞分成空白组,模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+桂皮醛(90,150μmol·L-1)组,采用管腔形成实验检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞成管作用的影响;将EA. hy 926细胞分成空白组,模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+AG490 (50μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(90μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(150μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(150μmol·L-1)+AG490(50μmol·L-1)组,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞JAK2/STAT3通路的影响。结果:与空白组比较,模型组能够显著地促进EA. hy 926细胞增殖和迁移(P 0. 01)。与模型组比较,桂皮醛(60,90,120,150μmol·L-1)组能显著抑制VEGF诱导EA. hy 926细胞的增殖和迁移(P 0. 01)。与空白组比较,VEGF对EA. hy 926细胞成管具有一定的促进作用,成管的节点数、交叉点数、网眼数和血管分支数均有增加,但无统计学差异。与模型组比较,桂皮醛(90,150μmol·L-1)组对成管的节点数、交叉点数和网眼数均有明显抑制作用(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,模型组p-JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。与模型组比较,桂皮醛(150μmol·L-1)能够显著抑制VEGF引起的p-JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达升高(P 0. 01),桂皮醛(90μmol·L-1)能够显著抑制VEGF引起的p-STAT3,STAT3蛋白表达升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞的增殖、迁移、成管具有明显的抑制作用,该作用与抑制JAK2/STAT3通路的激活有关。     

温针灸与电针治疗膝关节骨性关节炎临床疗效对比观察

目的:比较温针灸与电针对膝关节骨性关节炎的治疗效果。方法:将86例膝骨关节炎患者用随机数字表法分成3组,其中温针灸组30例,电针组30例,单纯针刺留针组26例。对不同组别2个疗程后的疗效情况进行综合比较。结果:3组疗效率无显著差异(P0.05);温针灸组、电针组分别与单纯针刺留针组进行等级比较,差异有统计学意义(P0.05);温针灸组与电针组疗效等级比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:温针灸与疏密波电针均比单纯针刺留针治疗膝关节骨性关节炎疗效好;尚不能认为温针灸与电针治疗膝骨关节炎疗效有明显差异。     

观察复方丹参冲洗液对膝骨关节炎远期的临床疗效

目的:探讨复方丹参注射液冲洗对膝关节骨性关节炎患者远期的临床疗效,阐明其可能的作用机制。方法:抽取我科2005年以来的住院病例,根据不同治疗方法分为复方丹参注射液组、生理盐水组,每组各30例,冲洗三次后进行随访,对远期疗效的相关数据进行统计、研究。结果:复方丹参注射液冲洗组能改善膝关节骨关节炎的临床症状、减轻关节疼痛、改善关节功能,效果优于生理盐水组。结论:关节腔内用复方丹参注射液冲洗,能缓解膝骨关节炎的症状,预防复发,提高临床疗效,研究表明可能是通过减少炎症反应、润滑关节软骨等途径来实现的。     

艾灸对膝骨性关节炎不同分期临床疗效比较

目的：比较艾灸对膝骨性关节炎不同分期临床疗效.方法：选入早、中、晚期膝关节骨性关节炎患者各30例,进行规范化艾灸治疗,然后对3组病人治疗前后WOMAC问卷评分变化及临床改善情况进行比较.结果：三组患者治疗后疼痛程度WOMAC评分均显著改善,早期组和晚期组改善幅度无显著差异、且显著优于中期组.三组患者治疗后僵硬程度均显著改善,三组改善幅度无显著差异.三组患者治疗后日常生活能力均显著改善,晚期组其改善幅度显著优于早期组和中期组、早期中期两组改善幅度无显著差异.早期组治疗后改善率显著高于中期组及晚期组,中、晚期组间比较无显著差异.结论：艾灸对不同分期膝骨性关节炎均有显著的疗效.     

针灸扶阳法治疗膝骨性关节炎不同证型疗效观察

目的：观察针灸扶阳法治疗膝骨性关节炎不同证型的疗效。方法：80例膝关骨性关节炎患者按中医辨证分痛痹组、着痹组、行痹组、热痹组各20例,均采用针灸扶阳法治疗,比较四组患者JOA评分及疗效。结果：治疗后四组患者JOA积分均显著高于治疗前（P〈0.05）,其中痛痹组及着痹组JOA积分显著高于行痹组及热痹组（P〈0.05）;痛痹组及着痹组总有效率显著高于行痹组及热痹组（P〈0.05）。结论：针灸扶阳法是一种治疗膝骨性关节炎有效的方法。     

盘龙七片联合塞雪风湿胶囊治疗膝骨关节炎的疗效分析

目的：探讨盘龙七片联合塞雪风湿胶囊治疗骨关节炎的方法和疗效.方法：将100例膝骨关节炎患者随机分为治疗组和对照组,治疗组口服盘龙七片每次3片,每日3次,塞雪风湿胶囊每次2粒,每日两次;对照组口服盐酸氨基葡萄糖胶囊250mg,每日3次.两组均为6周一个疗程.疗程结束后评定其疗效.结果：两组治疗后近期疗效差异有统计学意义（p〈0.05）.结论：盘龙七片联合塞雪风湿胶囊是治疗膝骨关节炎的有效药物.     

贯叶金丝桃治疗膝关节骨性关节炎的临床研究

目的:探讨贯叶金丝桃治疗膝关节骨性关节炎的临床疗效。方法:我院2009年5月~2010年5月收治膝关节骨性关节炎患者180例,随机分为2组,每组90例。治疗组给予口服贯叶金丝桃制剂,对照组给予口服盐酸氨基葡萄糖片。结果:治疗组和对照组的临床症状均有明显改善,治疗组总有效率达92.2%,对照组总有效率为91.1%,2组疗效比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:贯叶金丝桃片是治疗膝关节骨性关节炎的一种有效方法。     

温和灸治疗膝关节骨性关节炎（肿胀型）不同灸感的临床疗效比较研究

目的：比较艾灸治疗膝关节骨性关节炎不同灸感的临床疗效差异,为临床辨敏施灸提供科学依据。方法：依据61例膝关节骨性关节炎患者在艾灸患侧内膝眼、外膝眼二穴治疗过程中有无热感透至膝关节腔内为标准,将患者分为热敏灸感组27例和普通灸感组34例,每次温和灸时间为40min,每日施灸1次,共治疗30d。治疗结束后及治疗结束后3个月进行疗效评价。结果：热敏灸感组总有效率为85.19%,明显优于普通灸感组的58.82%（P〈0.05）,热敏灸感组治疗后3个月症状总积分及关节消肿程度亦明显优于普通灸感组（P〈0.05）。结论：艾灸治疗膝关节骨性关节炎能有效改善临床症状;艾灸治疗中出现热敏灸感的临床疗效明显优于普通灸感,且远期疗效更稳定。     

中医外治法辨证治疗膝骨性关节炎120例

目的：观察运用不同外治法辨证治疗膝骨性关节炎的临床疗效。方法：将120例患者随机分为治疗组和对照组各60例,治疗组运用不同的方剂采用各种中医外治法,包括中药外敷、中药熏洗、中药涂擦、中药离子导入进行治疗,1次／d,以7天为1个疗程,治疗2个疗程后观察疗效。对照组60例均用甘肃省中医院中药洗剂（协定方）外敷、熏洗、离子导入进行治疗,1次／d,以7天为1个疗程,治疗2个疗程后观察疗效。结果：治疗组总有效率为96．7％,对照组总有效率为78．3％,2组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：运用多种中医外治疗法对膝骨性关节炎进行辨证治疗临床疗效显著,多种治疗方法协同作用,优势互补。     

伤速康巴布膏对兔膝骨性关节炎模型关节液中SOD、NO水平变化影响的实验研究

目的：本实验选用伤速康巴布膏作为干预因素,观察在兔膝骨性关节炎模型用药后关节液中NO和SOD含量变化,从而探讨伤速康巴布膏治疗膝骨性关节炎疗效及其作用机理。方法：日本大耳白兔30只,雌雄不限,体重（1.85±0.15）kg,随机分为A组（模型对照组）、B组（伤速康巴布膏组）、C组（骨痛贴组）,每组10只。A、B、C 3组在＂Hulth造模法＂的基础上制作膝骨性关节炎模型。A组只以胶布固定,B组伤速康敷贴,C组骨痛贴敷贴胶布固定。于第2、4周,各组随机空气栓塞处死5只兔子,处死后用注射器抽取1mL生理盐水注入关节腔进行冲洗,4000r/min,取上清液,按试剂盒方法,检测关节液中超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）的含量。结果：模型组关节液NO含量显著高于伤速康巴布膏组及骨痛贴组（P〈0.05）,伤速康巴布膏及骨痛贴可降低关节液NO水平,伤速康巴布膏组与骨痛贴组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。模型组关节液SOD含量显著低于伤速康巴布膏组与骨痛贴组（P〈0.05）,伤速康巴布膏组与骨痛贴组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：伤速康巴布膏敷贴可对骨关节炎软骨退变起明显缓解作用;能显著降低兔关节液中N0含量以及升高关节液中SOD含量,并激发OA早期的关节软骨细胞增殖而治疗骨关节病,改善关节功能。     

基于“三脏一体”辨证理论治疗膝骨性关节炎疗效分析

目的：基于“三脏一体”辨证理论,探讨膝三脏汤治疗膝骨性关节炎的临床疗效。方法：将60例膝骨性关节炎患者按随机数字表法分为2组,治疗组采用膝三脏汤内服治疗,对照组采用单味吲哚美辛片（消炎痛）口服治疗,2周后对两组患者治疗结果进行评定,评定内容包括：a、目测类比疼痛程度评分法（VAS）评定;b、膝关节功能评定量表评定;C、临床疗效评定;d、停止治疗1个月复发率评估。结果：a、治疗1个疗程后,两组在缓解膝关节疼痛、改善膝关节功能、临床疗效等比较差异有统计学意义,治疗组优于对照组（P〈0．05）;b、停止治疗1个月,治疗组复发率低,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：膝三脏汤内服治疗膝骨性关节炎较单味吲哚美辛片（消炎痛）口服效果好,复发率低。