苯那普利对乳鼠心肌细胞缺氧复氧自由基损伤的保护作用

目的观察苯那普利对乳鼠心肌细胞缺氧复氧自由基损伤的保护作用和作用途径.方法采用纯化的乳鼠心肌细胞复制缺血再灌注模型.实验分为6组:正常对照组、单纯缺氧复氧组、缺氧复氧 苯那普利低剂量组(1×107 mol/L)、缺氧复氧 苯那普利组中剂量组(1×106 mol/L)、缺氧复氧 苯那普利高剂量组(1×105 mol/L)、缺氧复氧 中剂量苯那普利 缓激肽B2受体拮抗剂(HOE140)组(1×106 mol/L).细胞缺氧1 h复氧2 h后取培养液测定乳酸脱氢酶(LDH)的活性,取细胞测定MTT代谢率、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA).结果细胞缺氧复氧时LDH及MDA含量较对照组明显增高(P＜0.01),SOD活性及MTT代谢率较对照组明显降低(P＜0.01);不同剂量的苯那普利组降低LDH和MDA含量,提高SOD活性和MTT代谢率,与缺氧复氧组比较(P＜0.01),并呈剂量依赖性改变;苯那普利与HOE140合用时,与中剂量苯那普利组比较上述指标呈反向变化,差异有统计学意义(P＜0.01).结论苯那普利通过抗自由基达到对缺氧复氧损伤心肌的保护作用,其作用可能与激活激肽-缓激肽释放系统,促进缓激肽的合成有关.     

苯那普利对缺氧复氧心肌心胞内钙离子的影响及机制研究

目的研究苯那普利对乳鼠缺氧复氧心肌细胞内钙离子浓度的影响及作用机制。方法采用纯化培养的乳鼠心肌细胞复制缺血再灌注模型。实验分为4组,每组8例：空白对照组、单纯缺氧复氧组（H／R）、缺氧复氧＋苯那普利（1×10^6mol／L）组、缺氧复氧＋苯那普利（1×10^6mol／L）＋缓激肽B2受体拮抗剂（HOE140）（1×10^6mol／L）组。细胞缺氧1h,复氧2h后取细胞培养液测定乳酸脱氢酶（LDH）,取细胞测定超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）含量,测定细胞内钙浓度。结果单纯缺氧复氧组与对照组比较,LDH、MDA、[Ca^2＋]i含量升高,SOD活性下降（P〈0．01）;苯那普利组与缺氧复氧组比较,LDH、MDA、[Ca^2＋]i含量降低,SOD活性升高（P〈0．01）;苯那普利＋HOE140组与苯那普利组比较,LDH、MDA、[Ca^2＋]i含量升高,SOD活性下降（P〈0．01）。结论苯那普利能降低细胞内钙离子浓度,有明显保护心肌的作用。其作用可能与激活激肽-缓激肽释放系统、抑制缓激肽的降解有关。     

生脉注射液对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的探讨生脉注射液对纯化培养的乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用纯化培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型,随机分为正常对照组、缺氧复氧损伤组、缺氧复氧损伤＋维拉帕米组、缺氧复氧损伤＋生脉注射液组,分别测定其乳酸脱氢酶（LDH）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）及ATP水平。结果生脉注射液可明显提高LDH、SOD活性,降低MDA、提高ATP水平。结论生脉注射液具有明显的抗缺氧复氧损伤、保护心肌的作用。     

刺囊酸对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 研究刺囊酸预处理对原代培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax及聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP 89 kDa)表达的影响.方法 实验随机分为6组:对照组,缺氧复氧损伤组,缺氧预处理组及低、中、高剂量刺囊酸组(0.5 μmol/L、5μmol/L和50 μmol/L),分别予以缺氧3h后再复氧2h,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western Blot杂交法检测心肌细胞Bcl-2、Bax及PARP(89 kDa)蛋白表达变化.结果 与对照组比较,缺氧复氧损伤组心肌细胞Bcl-2蛋白表达显著低于对照组(P＜0.01),Bax蛋白及PARP(89 kDa)表达显著高于对照组(P＜0.01),细胞存活率明显低于对照组(P＜0.05).与缺氧复氧损伤组比较,不同剂量的刺囊酸预处理能显著提高细胞存活率,降低LDH活性,呈剂量依赖性;中剂量刺囊酸显著增加Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),抑制Bax及PARP(89 kDa)蛋白表达(P＜0.05).结论 刺囊酸预处理可通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制PARP(89 kDa)及Bax蛋白表达,抑制细胞凋亡,对抗心肌细胞缺氧复氧损伤.     

硫化氢对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用

目的:研究不同浓度的硫化氢(H_2S)对缺氧不同时间的乳鼠心肌细胞损伤的直接影响及其对复氧损伤的间接影响,分析其对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用.方法:原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为正常对照组、缺氧硫氢化钠(NaHS)0组、缺氧硫氢化钠 100 μmol/L组、缺氧硫氢化钠 200 μmol/L组、缺氧硫氢化钠400 μmol/L组以及缺氧-复氧硫氢化钠0组、缺氧-复氧硫氢化钠100 μmol/L组、缺氧-复氧硫氢化钠 200 μmol/L组、缺氧-复氧硫氢化钠 400 μmol/L组.在缺氧24 h、48 h、72 h后及复氧2 h后均检测细胞存活数量、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果:缺氧硫氢化钠100 μmol/L组、缺氧硫氢化钠200 μmol/L组和缺氧硫氢化钠 400 μmol/L组缺氧培养24 h、48 h和72 h后与各自时间点缺氧硫氢化钠0组比心肌细胞存活数量升高(P<0.01)、培养液中乳酸脱氢酶活性降低(P<0.01),差异均有统计学意义;缺氧硫氢化钠 200 μmol/L组和缺氧硫氢化钠 400 μmol/L组在缺氧培养24 h后较缺氧硫氢化钠100 μmol/L组心肌细胞存活数量升高(P<0.01)、培养液中乳酸脱氢酶活性降低(P<0.05～0.01),差异均有统计学意义.缺氧-复氧硫氢化钠100 μmol/L组、缺氧-复氧硫氢化钠200 μmol/L组和缺氧缺氧-复氧硫氢化钠400 μmol/L组缺氧培养24 h、48 h、72 h并复氧2 h后较各自时间点缺氧-复氧硫氢化钠0组比心肌细胞存活数量升高(P<0.01)、复氧后心肌细胞乳酸脱氢酶漏出量降低(P<0.01),差异均有统计学意义.结论:100~400 μmol/L 硫氢化钠对缺氧-复氧心肌细胞具有保护效果.200~400 μmol/L 硫氢化钠对缺氧24 h的心肌细胞保护作用较好.     

丝裂素活化蛋白激酶参与心肌缺氧预处理的延迟保护作用

目的　探讨丝裂素活化蛋白激酶 (mitogen- activated protein kinase,MAPK)在心肌缺氧预处理延迟保护中的作用。方法　在培养乳鼠心肌细胞缺氧预处理的模型上 ,检测预处理后即刻、1h、6 h和 12 h的 MAPK活性变化 ,观察细胞缺氧 /复氧损伤后、延迟预处理后及蛋白激酶 C(PKC)抑制剂 chelerythrine(Ch)干预后的细胞存活率、L DH的释放、MDA含量和 SOD活性。结果　 MAPK活性在预处理后即刻明显增加 (P<0 .0 1) ,在 6 h后降至或接近对照水平。与未预处理组心肌细胞缺氧 /复氧损伤相比较 ,预处理后 2 4 h心肌细胞存活率增高 [(5 8.6 4± 5 .5 3) %vs (44 .2 9± 4 .2 7) % ,P<0 .0 1],L DH[(5 9.5 0± 11.0 8) U/ L vs(83.17± 13.6 9) U/ L,P<0 .0 1]和 MDA含量[(2 .33± 0 .4 9) nmol/ L vs(3.2 9± 0 .2 6 ) nmol/ L,P<0 .0 1]均降低 ,SOD活性增加 [(2 1.5 3± 3.6 3) n U/ m l vs(12 .86± 2 .6 8) n U/ ml,P<0 .0 1]。PKC抑制剂 chelerythrine可消除预处理的延迟保护作用。结论　预处理 2 4 h心肌细胞对再次缺氧 /复氧有保护作用 ,PKC、MAPK均参与心肌细胞预处理后的延迟保护作用     

当归、红芪超滤膜提取物对培养乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响

目的 探讨当归、红芪超滤膜提取物对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响.方法 通过给原代培养乳鼠心室肌细胞进行缺氧1 h/复氧1 h,建立缺氧/复氧(A/R)心肌细胞损伤模型.于复氧期开始随机将心肌细胞分为正常对照组(C)、缺氧/ 复氧组(A/R组)、药物低剂量组(LD)、药物高剂量组(HD),于药物作用24 h后测定各组缺氧/复氧后细胞损伤指标肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO).结果 LD、HD组MDA、MPO、肌酸激酶(CK)明显较A/R组降低(P<0.01),SOD明显增高(P<0.01).结论 当归、红芪超滤膜提取物(10万分子量)可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤.     

丁苯酞激活Hedgehog信号通路抑制缺氧复氧心肌细胞氧化应激、炎症、凋亡的机制研究

目的探讨丁苯酞(NBP)对缺氧复氧(H/R)心肌细胞氧化应激、炎症、细胞凋亡的影响及其分子机制。方法将心肌细胞分为空白组、H/R组、NBP-L组(NBP浓度为2μmol/L)、NBP-M组(NBP浓度为10μmol/L)、NBP-H组(NBP浓度为50μmol/L)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)水平,试剂盒检测活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、活化的多聚ADP-核糖聚合酶(cleaved PARP)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、PTCH、Smoothened(SMO)和Gli-1蛋白表达。使用Hedgehog信号通路抑制剂HPI-4处理心肌细胞,观察其对丁苯酞诱导的缺氧复氧心肌细胞氧化应激、炎症、凋亡的影响。结果与空白组比较,H/R组心肌细胞存活率、cyclinD1、CDK2蛋白表达量、SOD活性、PTCH、SMO和Gli-1蛋白表达量明显减少(P0.05),H/R组心肌细胞凋亡率、cleaved PARP、cleaved caspase-3蛋白表达量、TNF-α、IL-6、IL-1β、ROS、MDA水平显著增加(P0.05)。与H/R组比较,NBP-L、NBP-M、NBP-H组显著提高H/R心肌细胞存活率、cyclin D1、CDK2蛋白表达量、SOD活性(P0.05),显著降低心肌细胞凋亡率、cleaved PARP、cleaved caspase-3蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1β、ROS、MDA水平、PTCH、SMO和Gli-1蛋白水平(P0.05)。HPI-4部分逆转丁苯酞对缺氧复氧心肌细胞的保护作用。结论丁苯酞通过激活Hedgehog信号通路,促进缺氧复氧心肌细胞增殖,并抑制缺氧复氧心肌细胞氧化应激、炎症、凋亡。     

内皮素-1对缺氧/复氧所致心肌细胞凋亡的影响

目的探讨在缺氧/复氧过程中不同时期给予内皮素-1（ET-1）对缺氧/复氧所致心肌损伤与凋亡的影响。方法乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,Hoechst 33258染色计算凋亡率,试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）的活性。结果ET-1预处理组（EP）细胞生存率较缺氧复氧组（HR）提高,凋亡率下降,LDH活性下降;ET-1缺氧即刻处理组（EH）细胞生存率较HR组降低,凋亡率升高,LDH释放量增加;ET-1复氧处理组（ER）的细胞生存率、凋亡率及LDH活性与HR组均无统计学差异。结论ET-1预处理有心肌细胞保护作用,ET-1缺氧时有促进心肌细胞损伤和凋亡的作用。     

加味丹参饮预处理对乳鼠缺氧/复氧心肌细胞的延迟保护作用及对蛋白激酶C的影响

目的观察加味丹参饮预处理对乳鼠缺氧/复氧心肌细胞的延迟保护作用及对蛋白激酶C(PKC)的影响。方法将培养72h的乳鼠心肌细胞随机分为6组,空白组正常培养;血清对照组加50%大鼠血清培养;含药血清组加50%含加味丹参饮的药物血清培养;缺氧/复氧组予缺氧再给氧。缺氧预处理组、加味丹参饮预处理组先给予缺氧预处理和加味丹参饮预处理,24h后再予缺氧再给氧。结果加味丹参饮预处理24h后可防止缺氧/复氧心肌细胞存活率的降低,防止乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性的升高(P<0.01),提高蛋白激酶C活性(P<0.01)。结论加味丹参饮预处理具有延迟保护作用,其机制与激发细胞内PKC信号转导通路有关。     

参附注射液对原代培养乳鼠心肌细胞缺氧一复氧损伤的影响

目的探讨参附注射液（SFI）对原代培养的乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用及其机制。方法建立大鼠心肌细胞原代培养缺氧／复氧损伤模型,将培养心肌细胞随机分为4组。正常对照组（C组）;缺氧／复氧组（H／R组）;低浓度SFI处理组（SFI-L组）：加入终浓度为50tlmol／mLSFI30min后再缺氧／复氧;D组：高浓度SFI处理组（SFI-H组）：加入终浓度为1（）（]umol／mI。参附注射液30rain后再缺氧／复氧。检测各组上清液中肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌肌钙蛋白I（cTn-I）含量,心肌细胞内丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性以及心肌细胞凋亡指数。结果与C组比较,H,0R组心肌细胞培养液cK-MB、cTn-I含量、心肌细胞内MDA含量以及凋亡指数显著上升,SOD活性显著下降,差异有统计学意义（P〈0．01）。与H／R组比较,SFI-L组、SFI-H组中除SOD活性显著上升外,上述其他指标均显著下降,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论SFI对缺氧／复氧损伤心肌细胞具有保护作用,其具体机制可能是与通过抑制脂质过氧化程度,减少心肌细胞凋亡有关。     

碱性成纤维细胞生长因子诱导老年大鼠心肌细胞保护及其机制研究

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对老年大鼠心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的影响及其保护机制。　方法　在分离的老年大鼠心肌细胞H/R模型上,观察bFGF预孵育对H/R后心肌细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出、ATP含量和细胞存活率的影响,并采用滤纸法测定心肌细胞外信号调节激酶(ERKs)活性的变化。　结果　bFGF激活ERKs,并呈剂量依赖性减轻H/R所致心肌细胞损伤,表现为细胞存活率〔bFGF10ng组(70.0±4.6)%,H/R组(53.0±4.5)%,P＜0.01〕和细胞内ATP含量〔bFGF10ng组(23.1±2.3)nmol/106细胞,H/R组(12.3±2.1)nmol/106细胞,P＜0.01〕升高,细胞浆酶LDH漏出〔bFGF10ng组（257.3±51.0）U/L,H/R组（372.5±69.2）U/L,P＜0.05〕减少;ERKs上游激酶抑制剂PD098059完全消除上述保护作用〔PD098059组细胞存活率（57.0±5.8）%,ATP含量（15.1±2.6）nmol/106细胞,培养液中LDH活性（325.5±59.0）U/L,与bFGF10ng组比较均为P＜0.01〕。　结论　bFGF可以提高老年大鼠心肌细胞对于缺氧的耐受性,其保护机制涉及ERKs的活化。     

腺病毒介导HIF-1基因转染对心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究腺病毒介导缺氧诱导因子-1α基因转染对心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用纯化培养的新生大鼠心肌细胞建立缺血再灌注损伤模型,实验分6组:正常细胞培养组,缺氧复氧损伤模型组(I/R组),基因转染小、大剂量组(AdHIF-1α组,MOI50,100),转染腺病毒空载体组(AdBlank组),转染HIF-1α核酶基因组(AtHIF-1α组)。测定各组缺氧复氧后细胞损伤指标乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量及细胞活性情况。结果:AdHIF-1α组(MOI50,100)较I/R组、AdBlank组、AtHIF-1α组LDH、MDA明显降低,细胞活性高(P<0.05)。结论:腺病毒介导HIF-1α基因转染心肌细胞具有抗缺血再灌注损伤、保护心肌的作用。     

氯离子通道阻滞剂对心肌低氧复氧损伤的影响

目的研究氯离子流在心肌缺氧、缺氧再灌注、缺氧预处理中的病理生理作用。方法利用培养的心肌细胞，制作低氧复氧、缺氧预处理和低渗预处理模型，并使用氯离子通道阻滞剂SITS和Tamoxifen进行干预，最后检测细胞存活率及培养细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性变化。结果使用氯离子通道阻滞剂后的低氧复氧组，其细胞存活率及上清液中LDH、MDA及SOD活性与对照组相比无明显差异；加入氯离子通道阻滞剂后再进行缺氧预处理、低渗预处理的各组，细胞存活率及LDH、MDA和SOD的活性与单纯低氧复氧组相比无显著性差异。结论氯离子通道阻滞剂、缺氧预处理、低渗预处理对心肌缺氧损伤均具有保护作用，而缺氧预处理、低渗预处理的这一保护作用能被氯离子通道阻滞剂阻断。     

条件培养液预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响及其机理探讨

目的观察短暂缺氧条件培养液对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响，并探讨其作用机理。方法采用乳鼠心肌细胞缺氧／复氧（A／R）损伤模型。用短暂缺氧条件培养液进行预处理。结果条件培养液预处理能够提高A／R损伤后心肌细胞存活率（7638±4．12vsA／R组56．87±3．17％，P＜0．01），减少细胞MDA产生（0．91±0．05VSA／R组1．61±0．06nmol／mg·pr，P＜0．01），减少LDH漏出（35．12±845vsA／R组56．47±9．15U／L，P＜0．01）及细胞内蛋白漏出（0．32±0．04vsA／R组0．43±0．07，P＜0．01）。PKC抑制剂（H_7）完全阻断条件培养液预处理的上述保护作用。结论条件培养液对乳鼠心肌细胞的缺氧复氧损伤具有保护作用，其机理是通过PKC介导的。     

白藜芦醇通过TLR4通路对H9C2细胞高糖缺氧/复氧损伤的作用

目的 观察白藜芦醇(RES)对H9C2心肌细胞高糖及缺氧/复氧条件下Toll样受体4(TLR4)表达的影响,探讨RES通过TLR4通路对糖尿病心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护机制。方法 培养H9C2心肌细胞建立缺氧/复氧及高糖心肌细胞损伤模型,并给予白藜芦醇处理。随机将H9C2心肌细胞分为对照组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+RES处理组、高糖组、高糖+缺氧/复氧组、高糖+缺氧/复氧+RES处理组。ELISA法测定各组乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,CCK8和AnnexinV/PI分别检测细胞增殖和凋亡,Western-blot法检测TLR4蛋白的表达水平。结果 与对照组相比,缺氧/复氧组及高糖组细胞增殖、SOD水平明显下降(P<0.05),LDH、MDA水平明显升高(P<0.05),TLR4表达明显增多,缺氧/复氧组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),而高糖组细胞凋亡率有所升高,但差异无统计学意义。RES处理后,缺氧/复氧+RES组、缺氧/复氧+高糖+RES组LDH、MDA水平及细胞凋亡率与缺氧/复氧组、高糖组及缺氧/复氧+高糖组比较明显降低(P<0.05),SOD水平及细胞增殖能力与缺氧/复氧组、高糖组及缺氧/复氧+高糖组比较显著提高(P<0.05);TLR4蛋白的表达在缺氧/复氧和高糖组均有明显上升,在加入RES后,缺氧/复氧+RES组、缺氧/复氧+高糖+RES组TLR4蛋白表达量与缺氧/复氧组、高糖组及缺氧/复氧+高糖组比较均有下降,但差异无统计学意义。结论 白藜芦醇通过TLR4通路抑制TLR4蛋白表达可能是其减轻糖尿病心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制之一。     

Wnt5a对缺氧复氧导致的心肌细胞氧化损伤的影响

目的探讨Wnt5a对缺氧复氧导致的心肌细胞氧化损伤的影响。方法以心肌细胞HCM为研究对象,分为:正常组、模型组、siRNA control组、Wnt5a siRNA组。其中正常组细胞正常培养,模型组、si RNA control组、Wnt5a siRNA组细胞按照缺氧复氧处理,siRNA control组、Wnt5a siRNA组细胞分别用转染Wnt5a siRNA和siRNA control后的HCM细胞。Western blot和RT-PCR检测Wnt5a mRNA和蛋白水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,二硝基苯肼显色法检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果模型组心肌细胞中Wnt5a mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、MDA水平、LDH水平均明显高于正常组(P0.05),而细胞存活率、SOD水平均明显低于正常组(P0.05)。si RNA control组细胞中Wnt5a mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、MDA水平、LDH水平、SOD水平及细胞存活率与模型组相比没有明显差异。Wnt5a siRNA组Wnt5a mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、MDA水平、LDH水平均明显低于模型组(P0.05),而细胞存活率、SOD水平均明显高于模型组(P0.05)。结论 Wnt5a在缺氧复氧心肌细胞中表达升高,干扰Wnt5a表达能够降低缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化损伤,减少细胞凋亡。     

血红素氧合酶-1在胰岛素对乳鼠心肌细胞保护机制中的作用

目的探讨血红素氧合酶（HO）1在胰岛素对缺氧/复氧心肌细胞保护机制中的作用。方法体外培养SD乳鼠心肌细胞,分为7组常氧对照组,缺氧/复氧对照组,不同剂量胰岛素组（160、320、640、960mU/L）,胰岛素加原卟啉锌组（胰岛素640mU/L、原卟啉锌10μmol/L）。除常氧对照组外,其余各组均给于缺氧3h,再复氧1h处理。检测心肌细胞HO1蛋白表达、HO活性、细胞生存率及乳酸脱氢酶（LDH）值。结果与缺氧/复氧对照组比较,各胰岛素组心肌细胞HO1蛋白表达显著增加,HO活性、细胞生存率显著增高,LDH显著降低。原卟啉锌能显著抑制HO活性,阻止胰岛素对心肌细胞的保护作用。结论胰岛素能够增加缺氧/复氧心肌细胞HO1的表达,增高HO活性,从而减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

苦参素对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞氧化应激和细胞凋亡的影响

目的研究苦参素(OMT)对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞氧化应激和细胞凋亡的影响。方法无菌环境下分离SD大鼠乳鼠心肌细胞并培养72 h后随机分为:空白对照组、缺氧/复氧(H/R)模型对照组、OMT(20μg/m L、40μg/m L和80μg/m L)干预组和舒血宁注射液(SXN,100μg/m L)干预组(阳性对照组),每组设10个复孔。药物干预6 h后,通过MTT法检测细胞存活率;检测细胞培养液中心肌酶[谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)]释放量;测定细胞中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)]活性和丙二醛(MDA)含量;通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过RT-PCR检测细胞中bcl-2mRNA、BaxmRNA表达并计算bcl-2/Bax比值,通过Western blot方法检测细胞caspase-3蛋白表达水平并进行半定量分析。结果与模型对照组比较,OMT40μg/m L、80μg/m L干预组、SXN干预组乳鼠心肌细胞存活率显著升高,培养液中AST、CPK、LDH释放量显著降低,细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低,细胞凋亡状况显著改善、凋亡率显著降低,细胞中bcl-2 mRNA表达显著上调且Bax mRNA表达显著下调、bcl-2/Bax表达比值显著升高,细胞中caspase-3蛋白表达显著升高,上述差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);其中OMT 80μg/m L干预组细胞中GSH-Px活性显著升高(P0.05)。结论苦参素对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞氧化应激和细胞凋亡具有抑制作用,其作用机制可能与苦参素能有效改善抗氧化酶活性、调节凋亡相关基因表达有关。     

Janus激酶2/信号转导和转录激活子3信号通路在心肌细胞缺氧损伤中的作用

目的探讨Janus激酶2/信号转导和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在心肌细胞缺氧损伤中的作用。方法体外培养的新生大鼠心肌细胞,构建缺氧模型,按随机数字表法分为正常对照组、缺氧组、JAK2抑制剂AG490处理组和STAT3抑制剂Statti c处理组。采用细胞计数试剂盒CCK-8检测心肌细胞活力,采用比色法检测细胞上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,并采用缺口末端标记法(TUNEL)检测各组细胞的凋亡率。采用蛋白质印迹(Western blot)检测JAK2及STAT3蛋白表达及磷酸化情况。结果与正常对照组相比,缺氧组心肌细胞成活率明显降低,为对照组的30.14%±6.23%(P<0.01),细胞上清液中LDH、MDA含量升高明显,分别为(50.11±2.58)U/L和(19.55±1.81)mol/L(均为P<0.01),SOD活力则显著降低,为(10.21±0.57)U/ml(P<0.01),缺氧组凋亡率明显升高,为24.24%±4.37%(P<0.01),JAK2、STAT3磷酸化水平上调。AG490及Stattic预处理后,JAK2及STAT3磷酸化水平降低,心肌细胞成活率明显升高(P<0.01),LDH、MDA含量显著低于缺氧组(均为P<0.01),SOD活力则高于缺氧组(P<0.01)。结论 JAK2/STAT3信号通路参与了缺氧所致心肌细胞损伤,抑制JAK/STAT通路有助于减轻缺氧所致心肌损伤。