细胞外基质凝胶支架混合人脐静脉来源内皮细胞构建组织工程化的内皮细胞片层

背景：由于血管内皮细胞是形成血管网络的主要功能细胞，因此通过在支架复合体中复合血管内皮细胞的方式促进再造心肌的血管化是目前研究的热点。 目的：以细胞外基质凝胶为支架混合人脐静脉内皮细胞，观察内皮细胞在细胞外基质凝胶中的生长过程及发育情况。 设计、时间及地点：观察实验，于2006-11/2008-01在解放军军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究室实验室完成。 材料：取健康剖腹产孕妇的脐带分离培养人脐静脉内皮细胞。取新生SD大鼠鼠尾制备Ⅰ型液态胶原溶液。 方法：将2.4 g/L液态Ⅰ型胶原与2×M199培养基等比例混合，用0.1 mol/L NaOH 调为中性，加入分离培养3 d的人脐静脉内皮细胞，使其终浓度为4×109 L-1，再加入200 g/L的Matrigel基质凝胶。最后加入有静态拉伸力的组织工程化片层所需的模具中，构建组织工程化内皮细胞片层。 主要观察指标：体外培养20 d后光学显微镜、常规苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色和透射电镜观察。 结果：显微镜下观察可见内皮细胞在细胞外基质凝胶中形成明显的管腔样、分支样、类似血管样结构。通过组织学和免疫组织化学的检测，证实其确为来源于人脐静脉中分离培养的内皮细胞。电镜观察可见随着时间的延长，在组织工程化内皮细胞片层中，内皮细胞可形成管腔，细胞间有紧密连接。 结论：以细胞外基质凝胶为支架混合人脐静脉内皮细胞构建的组织工程化内皮细胞片层中具有类似血管样结构。     

三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1表达的影响*☆◆

背景：氧化低密度脂蛋白能诱导血管内皮细胞活化和黏附分子表达,在动脉粥样硬化形成早期起重要作用。三七总皂苷在心血管系统方面具有保护血管内皮细胞、显著改善动脉粥样硬化病变程度的药理作用。 目的：验证三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白损伤内皮细胞后血管细胞黏附分子1的表达及与人单核细胞黏附的影响。 设计、时间及地点：体外实验,分组对照,于2007-03/2008-05 在北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室完成。 材料：原代人脐静脉内皮细胞为美国Cascade Biologics公司产品;三七总皂苷(血塞通冻干粉针)为黑龙江珍宝岛制药有限公司产品,成分为三七总皂苷,批号：20040207。 方法：以培养原代人脐静脉内皮细胞作为靶细胞, 用氧化型低密度脂蛋白造成人脐静脉内皮细胞损伤模型。将培养的人脐静脉内皮细胞分为5组：氧化型低密度脂蛋白组(100 mg/L)、氧化型低密度脂蛋白 + 三七总皂苷组(终浓度分别为200,100, 50 mg/L)、正常对照组。 主要观察指标：光镜下观察细胞形态变化, 四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性;采用蛋白定量法检测人脐静脉内皮细胞与单核细胞的黏附率;用流式细胞仪测定人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的蛋白表达。 结果：氧化型低密度脂蛋白作用人脐静脉内皮细胞后12,24 h时,人脐静脉内皮细胞损伤明显,细胞活性显著降低,人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率显著升高, 人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的蛋白表达水平也均明显升高,均明显高于正常对照组(P < 0.05,P < 0.01),而三七总皂苷能使氧化型低密度脂蛋白损伤的人脐静脉内皮细胞形态趋于正常,活性增强,并明显降低人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率,以及显著降低血管细胞黏附分子1的蛋白的表达水平,与氧化型低密度脂蛋白组相比均有显著性差异(P < 0.05,P < 0.01),这种作用随着剂量的增加而增强。 结论：三七总皂苷能通过下调血管细胞黏附分子1的表达抑制单核-血管内皮细胞黏附, 从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,这可能是其治疗动脉硬化闭塞症的机制之一。     

二苯乙烯苷对人脐静脉血管内皮细胞缺氧复氧损伤的影响

背景：大量实验表明，中药何首乌有效活性成分二苯乙烯苷具有降血脂、抗动脉粥样硬化和保护心血管等作用。在许多病理过程中，活性氧可引起细胞脂质过氧化，引起细胞转运功能和酶的性质发生改变，丧失了对细胞离子的调节功能。 目的：观察二苯乙烯苷对人脐静脉血管内皮细胞缺氧/复氧损伤是否具有保护作用。 设计、时间及地点：以血管内皮细胞为观察对象的随机对照实验，于2006-04/10在九江学院医学院分子生物实验中心完成。 材料：人脐静脉血管内皮细胞株。 方法：采用人脐静脉血管内皮细胞建立缺氧复氧损伤模型，干预实验分为8组，每组重复6次。对照组为人脐静脉血管内皮细胞常氧条件下培养；缺氧复氧组为人脐静脉血管内皮细胞缺氧3 h后分别复氧2 h；10，5，2.5 ng/L二苯乙烯苷治疗组分别在缺氧复氧损伤前及缺氧复氧损伤后给予相应剂量的二苯乙烯苷；10，5，2.5 ng/L二苯乙烯苷预处理组分别在缺氧复氧损伤前给予相应剂量的二苯乙烯苷。 主要观察指标：应用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞活力；用UV-1206紫外光分析光度计检测乳酸脱氢酶、总抗氧化能力、丙二醛、超氧化物歧化酶及一氧化氮。 结果：二苯乙烯苷能剂量依赖性的提高缺氧复氧血管内皮细胞的存活率，降低乳酸脱氢酶活性及丙二醛浓度，提高总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性及一氧化氮浓度(P < 0.01)，且治疗组比预处理组作用更明显(P < 0.01)。 结论：二苯乙烯苷对血管内皮细胞缺氧复氧损伤具有明显的保护作用，而且其治疗作用优于预防作用。     

外加直流电场对内皮细胞增殖与迁徙的影响

背景：已有研究证明,电刺激可以引起内皮细胞的增殖、趋阴迁徙,同时伴随细胞分泌物释放的增加,从而调节血管张力和血管平滑肌细胞的生长,介导血管收缩和舒张。 目的：观察外加直流电场对人脐静脉内皮细胞HY926增殖和迁徙的影响。 方法：MTT 法检测在外加电压3,5, 8,10 V作用12 h后人脐静脉内皮HY926细胞的增殖情况。并选择内皮细胞增殖最佳的外加电压5 V,在5 V外加电压作用10 h内追踪人脐静脉内皮HY926细胞的运动轨迹,包括细胞的平均累计移行距离和平均移行速率,细胞的平均最终位移大小及其方向,以及所有单个细胞每小时的平均追踪sine值。 结果与结论：在外加电压3,5,8,10 V下作用12 h,人脐静脉内皮细胞生长均受到不同程度的抑制,但在外加电压5 V,电场强度163.46 mV/cm时内皮细胞增殖情况最好。在该生理电场下培养72 h,发现细胞生长贴壁生长、增殖正常,初步说明该生物反应器的细胞相容性良好,并且随时间的延长,内皮细胞的平均移行速率呈下降趋势。在5 V外加电压作用 10 h后,内皮细胞整体明显持续朝向阴极方向迁徙。提示外加直流电场对人脐静脉内皮细胞增殖有显著的抑制作用,并且可诱导细胞定向向阴极迁徙。     

与胶原浮胶细胞共培养中内皮细胞血管新生相关基因的表达

背景：内皮细胞和平滑肌细胞的相互调节是稳定血管壁结构的关键因素，两者共同培养能够分别影响各自的形态和功能。 目的：利用Ⅰ型胶原浮胶建立人脐静脉内皮细胞与人血管平滑肌细胞共培养体系，分析细胞之间的相互作用。 设计、时间及地点：单一样本观察，于2006-10/2008-01在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成。 材料：新鲜脐带取自国际第一妇婴保健医院，产妇知情同意。 方法：取新鲜脐带，利用胶原酶灌注法分离人脐静脉内皮细胞，组织块培养法分离人血管平滑肌细胞。人血管平滑肌细胞直接种植于培养板表面，人脐静脉内皮细胞种植于鼠尾Ⅰ型胶原表面制成胶原浮胶，并与培养板上的人血管平滑肌细胞共培养。以人脐静脉内皮细胞单独在浮胶底面培养，培养板表面无人血管平滑肌细胞为对照。 主要观察指标：①免疫荧光方法鉴定人血管平滑肌细胞和人脐静脉内皮细胞。光镜和电镜观察人脐静脉内皮细胞形态。②反转录-聚合酶链反应进行基因表达分析。 结果：原代培养的内皮细胞呈铺路石样形态，CD31染色阳性。原代培养的人血管平滑肌细胞免疫荧光染色α-SMA呈阳性。胶原支架上内皮细胞伸展，胶原纤维重新排列，24 h 后出现管腔样结构。在共培养体系中，人脐静脉内皮细胞的金属蛋白酶1和金属蛋白酶9基因表达量显著高于单独培养组人脐静脉内皮细胞的表达量（P < 0.05）。但层粘蛋白γ2和组织因子途径抑制物2的基因相对表达量在两组间未见明显变化。 结论：实验建立的共培养体系，可以观察到与平滑肌细胞共培养的血管内皮细胞形成更加丰富的网络状管腔样结构，更易于血管结构的形成。     

红花黄色素可促进人脐静脉内皮细胞的增殖*

背景：心血管疾病的发生、发展与内皮细胞增生及凋亡有关。 目的：观察红花黄色素对血管内皮细胞模型的保护作用。 方法：体外培养人脐静脉内皮细胞,先采用红花黄色素进行干预,随后采用溶血卵磷脂体外诱导建立人脐静脉内皮细胞损伤模型,并设置对照组。 结果与结论：与对照组比较,溶血卵磷脂干预的人脐静脉内皮细胞增殖减弱(P < 0.05),细胞凋亡增加(P < 0.05),一氧化氮浓度降低(P < 0.01),而经红花黄色素干预后上述现象均可被逆转(P < 0.05)。结果证实,红花黄色素可通过促进内皮细胞增殖,抑制其凋亡并增加一氧化氮浓度对溶血卵磷脂诱导的内皮细胞损伤起保护作用。     

雷帕霉素-聚乳酸纳米磁性微球复合材料影响血管平滑肌细胞增殖的能力

摘要 背景：聚乳酸类材料是目前常用的血管支架涂层材料,具有可降解、可塑性强、抗原性低和组织相容性好等优点,而磁化的金属裸支架可显著降低血栓和再狭窄的发生。 目的：分析新型支架涂层材料雷帕霉素-聚乳酸纳米磁性微球复合材料的细胞生物相容性及对血管平滑肌增殖的影响。 方法：分散聚合法制作雷帕霉素-聚乳酸纳米磁性微球复合材料小膜片,标准条件下与3~5代SD大鼠主动脉平滑肌细胞共培养7 d,MTT法检测平滑肌细胞的生长增殖情况。 结果与结论：不同磁性微球浓度的聚乳酸复合材料膜片对平滑肌细胞的增殖均有不同程度的抑制作用(P < 0.05),雷帕霉素-聚乳酸纳米磁性微球复合材料膜片对平滑肌细胞增殖的抑制作用程度与未添加磁性微球的膜片无明显差异(P > 0.05),但强于未添加雷帕霉素的膜片(P < 0.05)。提示,雷帕霉素-聚乳酸纳米磁性微球复合材料既能显著抑制血管平滑肌细胞增殖又具有很好的细胞生物相容性。 关键词：雷帕霉素;纳米;聚乳酸;磁性微球;生物相容性 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.42.007     

过氧化氢体外诱导人血管内皮细胞损伤与人参皂苷Ｒｂ１的保护效应★

目的: 内皮细胞损伤可以导致心血管疾病及经皮冠状动脉介入术后再狭窄的发生。实验以过氧化氢（H2O2）体外诱导的人脐静脉损伤内皮细胞为对象，观察人参皂苷Rb1的保护作用，并探讨其可能的作用途径。 方法：实验于2006-09/11在扬州大学医学院中西医结合肿瘤研究所完成。①实验材料：人脐静脉血管内皮细胞（武汉大学培养物保存中心）；人参皂苷Rb1(含量>95%，HPLC；由吉林大学化学学院提供)。②实验过程及分组：在体外培养的人脐静脉内皮细胞上建立H2O2损伤模型，实验分为正常对照组； H2O2损伤对照组：在培养基中加入2 mmol/L的H2O2诱导损伤4 h；人参皂苷Rb1 50，100，200 μmol/L组：分别在培养基中先加入终浓度为50，100，200 μmol/L的人参皂苷Rb1孵育24 h，再加入相同的H2O2诱导损伤。试验重复6次。③实验评估：采用四甲基偶氮唑盐比色法测定各组细胞活力；硫代巴比妥酸法测定丙二醛含量；黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活性；酶联免疫吸附法检测血管内皮生长因子蛋白表达。 结果：①与损伤对照组比较，不同剂量组人参皂苷Rb1可以提高H2O2诱导损伤的人脐静脉内皮细胞活性（P < 0.01），并随着浓度的增高，细胞活力（A值）也增高，呈一定的剂量相关性。②与损伤对照组比较，不同剂量组人参皂苷Rb1可以降低H2O2诱导损伤的人脐静脉内皮细胞丙二醛含量、增加超氧化物歧化酶活性，随着浓度的增高，丙二醛含量降低，超氧化物歧化酶活性升高呈一定的剂量相关性。③与损伤对照组比较，不同剂量组人参皂苷Rb1可以促进H2O2诱导损伤的人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子蛋白的分泌，且随着人参皂苷Rb1浓度的增高，血管内皮生长因子蛋白表达也增高，呈一定的剂量相关性。 结论：人参皂苷Rb1对氧化损伤的内皮细胞具有保护作用，其作用途径可能与保护了细胞的线粒体，提高了该细胞的抗氧化酶活性，上调了血管内皮生长因子的表达有关。     

血管内皮细胞生长因子对人脐静脉间充质干细胞生长增殖的影响

背景：在体外构建组织工程材料的过程中，快速获得足够数量且纯度高的种子细胞极为重要，但目前人脐静脉间充质干细胞原代培养的增殖率仍较低。 目的：观察血管内皮细胞生长因子对人脐静脉间充质干细胞原代生长、增殖的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2008-03/07在辽宁医学院解剖学实验室完成。 材料：正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带20条，由锦州市凌河区妇幼保健院及辽宁医学院附属第一医院提供。 方法：采用胶原酶消化法分离人脐静脉间充质干细胞，以1×108 L-1的密度接种于24孔培养板，设立2组，实验组加入150 g/L血管内皮细胞生长因子，对照组不加入任何细胞因子。 主要观察指标：观察细胞形态变化，MTT法检测细胞生长曲线，免疫细胞化学法鉴定细胞CD166的表达。 结果：接种后6 h细胞开始贴壁，48 h后细胞完全贴壁生长，出现呈椭圆形、多角形的内皮细胞，以及呈梭形的成纤维样细胞，有的形成漩涡状生长集落；原代培养1周后细胞以梭形为主；传代后24 h细胞基本完成贴壁，48 h细胞开始分裂增殖，5~7 d可见多核的成纤维样细胞贴壁，呈长杆状、三角形、梭形等。与对照组比较，实验组细胞生长状态较好，增殖较快，单位时间内获得的细胞数量明显增加(t=2.235，P < 0.05)，CD166阳性细胞率显著升高(t=1.638，P < 0.01)。 结论：血管内皮细胞生长因子可促进人脐静脉间充质干细胞贴壁，且更有利于间充质干细胞的增殖和纯化。     

心脏瓣膜组织工程中理想种植细胞的来源比较

背景：现有的人工瓣膜,无论是机械瓣膜还是生物瓣膜,都存在与取材有关、无法从工艺制作方式改进解决的固有缺陷。组织工程心脏瓣膜概念的提出为解决该难题提供了新的方向。 目的：通过比较成熟分化血管内皮细胞和骨髓间充质干细胞骨的获取手段、体外增殖能力以及在脱细胞基质上的生长情况,分析何者更适合作为制备组织工程人工心脏瓣膜的种植细胞。 设计、时间及地点：单一样本观察,于2008-06/09在上海市胸科医院动物实验基地完成。 材料：用胰蛋白酶(胰酶)-EDTA、Triton X-100、DNase、RNase消化猪主动脉瓣膜获得脱细胞基质。从1只12 kg 2岁雄性杂交犬大隐静脉、股外侧动脉及肋骨骨髓获取种植细胞。 方法：用胰酶消化并收集内皮细胞,收集骨髓细胞,分别进行培养。通过贴壁法获得内皮细胞及骨髓间充质干细胞。利用内皮细胞生长因子诱导骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化,并绘制细胞生长曲线。以抗Ⅷ因子抗体以及抗血管内皮生长因子抗体荧光染色,荧光显微镜观察。将细胞种植于脱细胞瓣膜上培养3 d后进行扫描电镜观察。 主要观察指标：①试验犬伤口愈合情况。②细胞培养、增殖情况。③骨髓来源骨髓间充质干细胞表型分析以及形态学观察。 结果：成熟血管内皮细胞体外增殖能力低下,骨髓间充质干细胞则增殖旺盛。生长曲线显示骨髓间充质干细胞的倍增时间约30 h,而成熟内皮细胞生长曲线平直。对骨髓间充质干细胞进行抗Ⅷ因子抗体以及抗VEGF抗体荧光染色,可见荧光染色阳性。扫描电镜见种植骨髓间充质干细胞的脱细胞瓣膜上散在星状细胞贴附。 结论：骨髓间充质干细胞体外增殖能力强,在内皮细胞生长因子诱导下可向内皮细胞转化,并可以生长贴附于脱细胞瓣膜,是作为组织工程人工心脏瓣膜制备的理想细胞来源。     

创伤弧菌攻击对人脐静脉内皮细胞系的影响

背景：创伤弧菌感染后患者死亡率高达50%以上，且感染后大量创伤弧菌侵入血液之中，而血管内皮细胞是阻挡创伤弧菌进入血管的第一道屏障。 目的：观察创伤弧菌对人脐静脉内皮细胞增殖能力和细胞形态的影响。 方法：将对数生长期的人脐静脉内皮细胞消化后，调整细胞浓度至5×108 cfu/L，依培养基中创伤弧菌细菌浓度不同分为5个组：104，105，106，107 cfu/L创伤弧菌组和对照组。对照组不加创伤弧菌，仅用体积分数为10%胎牛血清DMEM培养基培养。锥虫蓝拒染法检测细胞存活率、MTT法观察创伤弧菌对人脐静脉内皮细胞增殖的影响，及光镜下观测细胞面积、周长、细胞核的面积、核浆比以及形状不规则指数。 结果与结论：随着创伤弧菌作用浓度和时间的增加，人脐静脉内皮细胞的增殖能力逐渐减弱，攻击组细胞的面积和周长，细胞核的面积以及核浆比都比对照组明显增大，形状不规则指数比对照组更偏离。提示创伤弧菌对体外培养的人脐静脉内皮细胞系的增殖有明显的抑制作用，其抑制能力与创伤弧菌作用的浓度和时间有关。     

Epidermal growth factor stimulates prostacyclin production by cultured human vascular endothelial cells

Epidermal growth factor (EGF) stimulated prostacyclin (PGI2) production by cultured human umbilical vein endothelial cells, as measured by radioimmunoassay of its stable metabolite 6-keto-prostaglandin F1 alpha. This effect of EGF was dose-dependent, the lowest stimulatory concentration of EGF was 1.0 ng/ml and 100 ng/ml caused a 2.7 +/- 0.3 (mean +/- SEM) fold increase in the PGI2 synthesis. The stimulation appeared at 3-6 h of incubation and lasted at least 24 h. It was suppressed by EGF antibodies and blocked by protein synthesis inhibitor cycloheximide. Cells preincubated 12 h with EGF released also higher amounts of PGI2 when incubated with thrombin for 5 min. It is concluded that EGF liberated from platelets during aggregation may prevent local thrombogenesis and atherogenesis by stimulating the release of the antiaggregatory, vasodilatory PGI2 from vascular endothelial cells.     

Human fibroblast cells produce a factor that stimulates prostacyclin synthesis by vascular endothelial cells

The prostacyclin (PGI2) produced by vascular endothelium plays a key role in maintaining vascular homeostasis. The present study demonstrated that the conditioned medium (CM) of human diploid fibroblast cells contained PGI2-stimulatory activity (PSA) for bovine aortic endothelial cells (BAEC) and human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). CM significantly stimulated the production of 6-keto-PGF₁, a stable PGI₂ metabolite, by both cultured BAEC and HUVEC in a concentration-dependent manner. Since the factor responsible for the PSA seemed to be negatively charged, PSA was partially purified using a DEAE-5PW high performance liquid chromatography column. The partially purified PSA was completely inhibited by preincubation with 15 μM indomethacin, a cyclooxygenase inhibitor. However, partially purified PSA was partially inhibited by preincubation with 50 μM mepacrine, a phospholipase A₂ inhibitor. These findings suggest that PSA stimulates preferentially cyclooxygenase relative to phospholipase A₂ in vascular endothelial cells. The partially purified PSA showed no effect on thromboxane A₂ production by human washed platelets, and had no growth-promoting activity on BAEC. We conclude that cultured human fibroblast cells produce factor that stimulate the synthesis of prostaglandin by vascular endothelial cells but not by platelets.     

Endothelial cell seeding on crosslinked collagen: effects of crosslinking on endothelial cell proliferation and functional parameters

Endothelial cell seeding, a promising method to improve the performance of small-diameter vascular grafts, requires a suitable substrate, such as crosslinked collagen. Commonly used crosslinking agents such as glutaraldehyde and formaldehyde cause, however, cytotoxic reactions and thereby hamper endothelialization of currently available collagen-coated vascular graft materials. The aim of this study was to investigate the effects of an alternative method for crosslinking of collagen, using N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide (EDC) in combination with N-hydroxysuccinimide (NHS), on various cellular functions of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) in vitro. Compared to non-crosslinked type I collagen, proliferation of seeded endothelial cells was significantly increased on EDC/NHS-crosslinked collagen. Furthermore, higher cell numbers were found with increasing crosslink densities. Neither the morphology of the cells nor the secretion of prostacyclin (PGI2), von Willebrand factor (vWF), tissue plasminogen activator (t-PA) and plasminogen activator inhibitor (PAI-1) was affected by the crosslink density of the collagen substrate. Therefore, EDC/NHS-crosslinked collagen is candidate substrate for in vivo application such as endothelial cell seeding of collagen-coated vascular grafts.     

Endothelial cell function alteration after Junin virus infection

Hematologic involvement is the main feature of Argentine hemorrhagic fever (AHF), an endemo-epidemic disease caused by Junin virus (JV). Since endothelial dysfunction could play a role in AHF-altered hemostasis, we studied human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) infection with a virulent (JVv) and a non-virulent (JVa) JV strain. Cells were infected by the two JV variants with no detectable apoptosis or cytopathic effect. Both viral variants up-regulated ICAM-1 and VCAM-1 levels, while von Willebrand factor (VWF) production was decreased. Prostacyclin (PGI2) release and decay accelerating factor (DAF) expression were greater in JVv- than in JVa-infected or control cells. Furthermore, nitric oxide (NO) production and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) expression was only raised in JVv-infected supernatants. Significant NO and PGI2 values were also detected in AHF patient sera. These data demonstrate that endothelial cell responses are triggered subsequently by JV infection, suggesting that such alterations play a major role in the pathogenesis of AHF and perhaps in other viral-induced hemorrhagic diseases.     

The effect of ticlopidine on human endothelial cells in culture

The effect of ticlopidine at various concentrations (150, 30, 6 microM), has been studied on cultured endothelial cells derived from human umbilical cord vein. Ticlopidine affects the initial attachment of endothelial cells to artificial substrata and has an inhibitory effect on endothelial cell growth rate which correlates to the concentration of the chemical in the culture medium. These effects are related to a marked reduction of intra- and extracellular fibronectin as evidentiated by immunofluorescence. The drug seems to interfere with the formation of fibronectin filaments from intracellular granules. The reduction of fibronectin availability could affect platelet adhesion to subendothelium as well as endothelial cell repair, and subsequently influence the bleeding time. The inhibition of cell proliferation and its possible effect on the thickness of the vessel wall should be considered as additional mechanisms of action for this substance.     

血性脑脊液对内皮细胞分泌ET和NO的影响

目的观察血性脑脊液对内皮细胞分泌内皮素(Endothelin，ET)和一氧化氮(NitricOxyde，NO)的影响。方法建立脐静脉内皮细胞体外培养的方法，用放射免疫方法测定ET含量，用硝酸还原酶法测定NO的代谢产物NO     

碱性成纤维细胞生长因子荧光真核表达载体构建及对过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡的影响

背景：已证实外源性碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor , bFGF)可抑制血管内皮细胞凋亡。 目的：构建表达bFGF的荧光真核表达载体,探讨其对过氧化氢(H2O2)诱导的血管内皮细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。 方法：通过基因亚克隆构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,利用脂质体介导将bFGF 基因导入人脐静脉内皮细胞内,通过荧光观察和RT-PCR检测基因的表达。实验分为3组,对照组(转染pcDNA3.1)、过氧化氢组(转染pcDNA3.1+ H2O2)和bFGF转染+过氧化氢组(转染pcDNA3.1-bFGF-GFP+H2O2),流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3 P17活性亚单位和Bax蛋白表达。 结果与结论：成功构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,该载体转染人脐静脉内皮细胞后,bFGF mRNA显著增加,并可观察到绿色荧光。与对照组相比,过氧化氢组细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量都明显增加(P < 0.01),而bFGF 转染+过氧化氢组的细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量则比过氧化氢组显著降低(P < 0.01)。证实bFGF基因转染能抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调控Bax蛋白表达和caspase-3活性有关。     

西洛他唑对人血管内皮细胞增殖及P38MAPK表达的抑制作用

目的 观察西洛他唑(CLZ)对体外培养的血管内皮细胞(VEC)增殖和磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达的影响.方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞饵(HUVECs)株EA.hy926,应用10、30、100、300 μmo/L CLZ作用24h(同时设空白对照组)后采用MTT法检测HUVECs的增殖状态,Western blotting检测细胞磷酸化P38MAPK蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,30、100、300 μmo/L CLZ组细胞A值降低,且30、100、300μmo/L CLZ组之间比较细胞A值依次降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);与空白对照组比较,30、100、300 μmol/L CLZ组细胞磷酸化P38MAPK蛋白的表达下降,且300 μmol/L CLZ组细胞磷酸化P38MAPK蛋白表达低于30μmol/L CLZ组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CLZ对体外培养的VEC增殖和磷酸化P38MAPK蛋白的表达均有明显的抑制作用.