Survivin反义寡核苷酸联合化疗药物诱导儿童急性白血病细胞凋亡的实验研究

目的研究Survivin基因在儿童急性白血病细胞中的表达,Survivin反义寡核苷酸对儿童急性白血病细胞凋亡的影响,并探讨反义寡核苷酸与传统化疗药物对白血病的协同治疗作用。方法用PCR的方法检查儿童白血病细胞Sur-vivin表达,将Survivin基因反义寡核苷酸转染入白血病细胞,用TUNEL及流式细胞仪检查各组细胞的凋亡率。结果Sur-vivin基因在儿童急性白血病细胞中高表达,Survivin反义寡核苷酸及足叶乙甙均能够单独诱导白血病细胞凋亡,两者合用时细胞凋亡率更高。结论Survivin在儿童急性白血病细胞中高表达;Survivin反义寡核苷酸可诱导白血病细胞凋亡;Sur-vivin反义寡核苷酸可促进足叶乙甙诱导的儿童急性白血病细胞凋亡。     

Survivin反义核酸对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

Survivin是凋亡抑制蛋白（IAP）家族的一个成员，具有强大的抗细胞凋亡功能，在几乎所有肿瘤组织中特异性表达，而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不表达。本研究针对Survivin mRNA序列设计了反义寡核甘酸，RT—PCR检测表明，该序列反义寡核苷酸可明显降低细胞中survivin基因的mRNA含量；Western印迹显示Survivin蛋白水平也被降低。MTT比色实验法检测结果说明人Survivin反义寡核苷酸抑制SMMC-7721细胞增殖，抑制率为43％，远高于无义寡核苷酸组和空白对照组。反义寡核苷酸还显著增强SMMC-7721细胞对于抗肿瘤药高三尖杉酯碱的敏感性，TUNEL法检测结果显示，在较低高三尖杉酯碱浓度下，反义寡核苷酸转染细胞的凋亡率明显高于其它对照组。本研究结果提示，survivin表达的靶向抑制有望应用于肿瘤的辅助治疗之中。     

西红花酸对H2O2诱发心肌细胞凋亡及相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2表达改变的影响

目的：探讨西红花酸对过氧化氢（H₂O₂）诱导的培养心肌细胞凋亡及相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2表达改变的作用。 方法： 通过光镜观察细胞形态、碘化丙啶（PI）染色法和流式细胞术相结合检测培养细胞凋亡率、免疫荧光染色法和流式细胞术相结合检测细胞中caspase-3、Bcl-2蛋白。 结果： 在本实验使用浓度范围内，各浓度H₂O₂组细胞形态明显改变、凋亡率明显高于正常对照组，1×10^-4 mol·L^-1 H₂O₂可使培养心肌细胞Bcl-2蛋白表达明显减少，而caspase-3表达明显增多；各剂量西红花酸组细胞形态学改变减少、凋亡率明显低于1×10^-4 mol·L^-1 H₂O₂组，细胞中Bcl-2蛋白减少幅度与caspase-3增加幅度均减小，且较高浓度（5×10^-5 mol·L^-1）西红花酸组比较低浓度（5×10^-7 mol·L^-1）西红花酸组作用也更明显（P<0.05）。 结论： 西红花酸能够减轻H₂O₂对培养心肌细胞的损伤性凋亡作用，可能与稳定细胞内凋亡相关调控蛋白caspase-3、Bcl-2的功能有关。     

Survivin反义寡核苷酸联合足叶乙甙诱导K562细胞株凋亡的研究

目的探讨Survivin反义寡核苷酸及VP-16对K562细胞株凋亡的影响。方法将Survivin反义寡核苷酸通过脂质体转染K562细胞株,用免疫组化法测定转染前后K562细胞survivin基因及Caspase-3的表达差异,并加入足叶乙甙,用Tenu l及Annexin V-FITC测定各组细胞的凋亡率。结果转染后survivin基因表达下降,Caspase-3的表达升高,K562细胞生长受抑,细胞凋亡率升高;联合反义寡核苷酸与足叶乙甙,细胞凋亡率明显增加。结论Survivin反义寡核苷酸能够促进白血病细胞株K562的凋亡,能够提高K562对足叶乙甙的敏感性。     

rhTGF-β1及转染TGF-β1基因对兔角膜内皮细胞增殖的影响

目的： 探讨不同浓度的重组人转化生长因子-β₁(rhTGF-β₁)及TGF-β₁基因转染对体外培养兔角膜内皮细胞增殖的影响。方法: 用MTT法检测不同浓度rhTGF-β₁作用下角膜内皮细胞的增殖。用脂质体介导转染方法，将TGF-β₁基因转移入培养的兔角膜内皮细胞，HE染色法观察细胞组织形态学变化；ELISA法检测转染细胞培养上清中TGF-β₁表达量；流式细胞仪检测细胞生长周期变化；DNA电泳法检测转染细胞凋亡情况。结果: MTT检测示5-20 μg/L rhTGF-β1抑制角膜内皮细胞增殖；0.5-1 μg/L组对增殖无影响；0.05~0.1 μg/L组促进细胞增殖。TGF-β₁基因转染细胞形态无明显异常，细胞培养上清中TGF-β₁的浓度约为(98±3)ng/L。流式细胞仪检测示，基因转染组S期和G₂/M期细胞比例减少、PI值降低，但加入EGF后细胞生长基本正常。DNA电泳检测示基因转染组未见凋亡带。结论: rhTGF-β₁对角膜内皮细胞增殖的影响具有剂量依赖性；TGF-β₁基因转染影响角膜内皮细胞增殖、但不诱发凋亡，其抑制作用可被外源性EGF拮抗。     

Survivin基因对大肠癌细胞HT29生物学行为的影响

目的探讨Survivin基因对人大肠癌细胞HT29增殖及凋亡的影响。方法以脂质体Lip-2000为载体,用针对Survivin特异靶点的siRNA转染人大肠癌细胞HT29后,应用免疫细胞化学SP法、Western blot技术检测Survivin蛋白表达变化;采用MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞技术检测细胞凋亡。结果免疫细胞化学结果:正常对照组、脂质体对照组及阴性错配对照组中Survivin均呈细胞质强阳性表达,Survivin-siRNA组细胞质呈弱阳性表达;Western blot检测结果:Survivin-siRNA组细胞的蛋白条带亮度明显低于正常对照组、脂质体对照组和阴性错配对照组;MTT检测结果:与阴性错配对照组相比,Survivin-siRNA组细胞生长出现明显的抑制(P<0.05)。不同时段(24、48、72 h)肿瘤细胞增殖抑制率之间差异有显著性(P<0.05);流式细胞术检测结果显示Survivin-siRNA组细胞凋亡比例显著高于空白对照组及阴性错配对照组(P<0.01)。结论 Sur-vivin基因参与调控大肠癌细胞的增殖和凋亡,Survivin有望成为大肠癌基因治疗的新靶点。     

RNA 干扰抑制BAG-1 基因表达对皮肤鳞状细胞癌增殖及凋亡的影响研究

目的:探讨抑制BAG-1(Bcl-2-associated athanogene-1)基因表达对皮肤鳞状细胞癌增殖及凋亡的影响。方法:采用LipofectamineTM2000 将BAG-1 的siRNA 转染皮肤鳞状细胞癌A431,转染后48 h,RT-PCR 检测BAG-1 的mRNA 表达,Western blot 检测BAG-1 的蛋白表达;CCK8 和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡情况;Western blot 检测B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2(Bcl-2)家族促凋亡蛋白Bcl-2 相关X 蛋白(Bax)及Wnt/β-catenin 信号通路β-连环蛋白(β-catenin)、Survivin 的蛋白表达;ELISA 试剂盒检测白介素6 (IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果:与空白组和阴性对照组比较,转染BAG-1 的siRNA 可明显抑制BAG-1 在转录和翻译水平上的表达;与空白组较,BAG-1-siRNA 组细胞增殖显著降低,细胞凋亡率显著增加,Bax 蛋白表达上调, β-catenin、Survivin 蛋白表达下调,IL-6、VEGF 含量均显著降低(P<0.05)。结论:BAG-1 表达沉默可降低皮肤鳞状细胞癌增殖,促进细胞凋亡,上调Bax 及下调Wnt/ β-catenin 信号通路表达,降低IL-6、VEGF 因子的分泌。     

脂肪间充质干细胞条件培养基诱导结肠癌HT29细胞凋亡

目的:观察脂肪间充质干细胞条件培养基(ASC-CM)对结肠癌HT29细胞的增殖抑制作用。方法:将体外培养生长良好的HT29细胞分为两组,一组加入ASC-CM再培养(实验组),另一组加入DMEM/F12培养基再培养(对照组),然后进行如下实验:(1)分别于再培养24h、48h和72h,采用CCK-8检测两组HT29细胞增殖水平,并计算实验组HT29增殖率;(2)于再培养48h采用流式细胞术检测两组HT29细胞凋亡率;(3)再培养48h后,采用实时荧光定量PCR检测两组HT29细胞凋亡因子Caspase-3、Caspase-9、Survivin、XIAP的mRNA表达水平。结果:(1)与对照组比较,实验组HT29细胞24h增殖水平(吸光度OD值)无明显差异(P0.05),培养48h、72h的OD值显著降低(P0.01),且其增殖率下降趋势与培养时间呈明显负相关(r=-0.974,P0.01)。(2)实验组HT29细胞ASC-CM培养48h凋亡率较对照组明显增加(P0.01)。(3)实验组HT29细胞ASC-CM培养48h凋亡因子Caspase-3、Caspase-9mRNA表达较对照组显著升高(P0.01),Survivin、XIAP mRNA表达较对照组显著降低(P0.01)。结论:ASC-CM能有效抑制结肠癌HT29细胞增殖和促进凋亡。     

Polo-like激酶l反义RNA对肺癌细胞A549生长的实验研究

目的： 探讨Polo-like激酶1（Plk1）基因表达下调对肺癌细胞周期分布及其生长的影响。方法： 培养肺腺癌细胞株A549，构建表达Plk1反义RNA的质粒pcDNA3-Plk1，通过脂质体介导转染A549细胞，采用RT-PCR和Western blotting的方法检测Plk1基因的表达，细胞计数、BrdU脉冲标记检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞周期变化和凋亡，MTT法检测长春瑞宾（NVB）对各组细胞的生长抑制率。结果： A549细胞转染pcDNA3-Plk1后24 h，Plk1 mRNA及蛋白表达均下降；细胞变圆、漂浮、增殖减慢；S期细胞百分数（BrdU标记指数）显著低于对照组（P<0.05）；转染后48 h A549细胞出现G₂/M期阻滞（P<0.05）并发生凋亡；等浓度化疗药物诺维本对转染pcDNA3-Plk1细胞的抑制率明显高于各对照组（P<0.05），转染pcDNA3与未转染的对照细胞差异无显著（P>0.05）。结论： pcDNA3-Plk1的转染能下调Plk1基因的表达，抑制A549细胞增殖，诱导凋亡，并能增加A549细胞对化疗药物的敏感性。     

RNAi 结肠癌HOXB7 基因表达对癌细胞增殖及凋亡的机制研究

目的:探讨抑制HOXB7 基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响。方法:通LipofectamineTM2000 脂质体介导法将合成的阴性对照siRNA(阴性对照组)及HOXB7-siRNA(HOXB7 转染组)转染人结肠癌SW480 细胞,未经特殊处理的细胞为空白组。收集转染48 h 的细胞,RT-PCR 及Western blot 分别检测细胞中HOXB7 的mRNA 及蛋白表达;分别于转染后的24、48、72、96 h,CCK8 法检测细胞增殖;流式细胞仪检测转染后48 h 细胞的凋亡情况;Western blot 检测凋亡相关蛋白B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2(Bc-2)、Bcl-2 相关X 蛋白(Bax)及Notch1 信号通路Notch1、Hes1 的蛋白表达。结果:HOXB7 转染组HOXB7 的mRNA 及蛋白表达均显著低于空白组(P<0.05);转染24 h 后三组细胞的OD 值间差异无统计学意义(P>0.05),48、72、96 h 后,与空白组比较,HOXB7 转染组OD 值均显著降低(P<0.05);与空白组比较,HOXB7 转染组细胞凋亡率显著升高,Bcl-2、Notch1、Hes1 蛋白显著下调表达,Bax 蛋白显著上调表达(P<0.05)。结论:RNAi 结肠癌HOXB7 基因表达可通过抑制Notch1 信号通路降低癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

Src/Stat3通路在高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖及迁移中的作用

目的:探讨Src酪氨酸激酶(Src)/信号转导子和转录激活子3(Stat3)在高糖(HG)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移中的作用。方法:首先将VSMC细胞株A7R5与HG(10~40 mmol/L)共同孵育24h,MTT法及EdU染色检测VSMCs增殖,Transwell小室检测VSMCs迁移,Western blot检测p-Src、Src、p-Stat3和Stat3的蛋白水平。q PCR检测Stat3靶基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Myc、基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达。为了进一步证实Src在高糖诱导VSMCs增殖和迁移中的作用,将HG与Src抑制剂saracatinib(100 nmol/L)共同孵育24 h,观察Src对HG诱导VSMCs增殖、迁移及Stat3激活的影响。结果:HG能浓度依赖性地促进VSMCs的增殖及迁移并激活Src和Stat3,上调Stat3靶基因cyclin D1、Myc、MMP2及MMP9的表达。抑制Src激活可抑制HG诱导的VSMCs增殖及Stat3的激活,同时下调cyclin D1及Myc的表达。结论:Src/Stat3通路可能在HG诱导的VSMCs增殖及迁移中发挥重要作用。     

survivin反义寡核苷酸诱导SGC7901细胞凋亡及增强紫杉醇敏感性

目的 研究转染生存素(survivin)反义寡核苷酸(Asodn)抗肿瘤作用以及是否增强紫杉醇敏感性.方法 实验分为:空白对照组(Control组)、脂质体组(Lip组)、正义寡核苷酸组(Sodn组)及反义寡核苷酸组(Asodn组).人工合成Asodn,经脂质体转染SGC7901细胞,MTT检测细胞增值抑制率,Western blot检测survivin蛋白表达,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学改变及流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 ① 荧光显微镜下Control组、Lip组及Sodn组细胞核呈均匀蓝色、圆形或椭圆形,而Asodn组细胞核染色增强,核质浓缩,核碎裂;② Asodn 组细胞增殖抑制率增高,并呈时间-剂量依赖性;survivin 蛋白表达减低;凋亡率增高.与Control组、Lip组及Sodn组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);③ Asodn联合紫杉醇组其抑制率 (78.1±0.8)%明显高于单纯 Asodn组(54.9±1.6)%和紫杉醇组 (56.7±0.7)% (P<0.05).结论 转染Asodn 能明显抑制SGC7901细胞增殖、诱导凋亡并增强紫杉醇抗肿瘤作用.     

Effect of Bcl-2 antisense oligonucleotide on drug-sensitivity in association with apoptosis in undifferentiated thyroid carcinoma

Although attempts have been made to treat undifferentiated thyroid carcinoma using multidisciplinary therapeutic procedures including surgery, radiotherapy, and chemotherapy, the prognosis of undifferentiated thyroid carcinoma remains quite poor. New approaches to increase the sensitivity of patients to anticancer drugs and radiation will be needed to improve the survival rate for undifferentiated thyroid carcinoma. We examined the effect of Bcl-2 antisense oligonucleotide on drug-sensitivity in association with apoptosis in the 8305C undifferentiated thyroid carcinoma cell line. The drug sensitivity was evaluated by MTT assay for 48 h, while apoptosis was assessed according to the formation of internucleosomal DNA ladders. The Bcl-2 antisense was introduced into 8305C cells by using a 18-mer phosphorothioate oligonucleotide by lipopolyamine-mediated transfection twice for 12 h. The expression of apoptosis genes was assessed by Western blotting. The 8305C cells were sensitive to adriamycin (ADM), mitomycin (MMC), docetaxel (TXT), and paclitaxel (TXL), showing mean IC50 values of 0.72, 1.1, 1.3, and 4.1 microM, respectively. In contrast, the 8305C cells were resistant to cisplatin (CDDP) and 5-fluorouracil (5-FU), with mean IC50 values of 42.0 and 48.0 microM, respectively. Treatment with Bcl-2 antisense suppressed the protein level of Bcl-2 in 8305C cells in a dose-dependent manner up to 1.0 microM. Drug-sensitivity was increased by pretreatment with Bcl-2 antisense as assessed by the IC50 (x-fold): 0.48 (1.5-fold) in ADM; 0.42 (2.6-fold) in MMC, 0.56 (2.3-fold) in TXT, 1.5 (2.7-fold) in TXL, 8.6 (4.9-fold) in CDDP, and 25.0 (1.9-fold) in 5-FU, respectively. The increased drug-sensitivity was associated with the induction of apoptosis-related proteins, Fas, caspase 8, cytochrome c, caspase 3, and to subsequent apoptosis, as determined by the formation of internucleosomal DNA ladders and PARP in the treated cells. Susceptibility in apoptotic cell death following treatment with anticancer drugs was associated with induction of apoptosis-related genes in undifferentiated thyroid carcinoma cells, and induction of apoptosis was enhanced by pretreatment with Bcl-2 antisense oligonucleotide. These results imply a potential new strategy targeting an antiapoptotic protein, Bcl-2, by its antisense oligonucleotide for enhancement of chemotherapeutic efficacy in undifferentiated thyroid carcinomas.     

表达反义细胞周期蛋白cyclinD1载体对胰腺癌细胞生长和凋亡的 …

观察反义细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎＤ１对胰腺癌细胞的生长影响。方法采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｍｂｌｏｔ方法检测了５株人胰腺癌细胞中ｃｙｃｌｉｎＤ１的扩增及表达情况。     

Cell cycle effects of IL-10 on malignant B-1 cells

IL-10 is overexpressed in human chronic lymphocytic leukemia (CLL), and is an autocrine growth factor involved in the development of malignant B1 clones in NZB mice, a murine model for CLL. Antisense IL-10 oligonucleotide treatment induces apoptosis and cell cycle disruption in these cells both in vitro and in vivo. In addition, NZB IL-10 knock-out mice fail to develop the B-1 clones. Dampening of IL-10 protein production via antisense IL-10 oligonucleotide treatment is correlated with decreased p27/Kip1 protein expression which results in increased cyclin D2, cyclin E and cyclin A associated kinase activity. The action of the antisense oligonucleotides is through alterations in cell cycle regulation, resulting in accelerated cell cycle progression, a G2/M block which culminates in apoptosis induction in the malignant cells. This implies that the role of IL-10 as an autocrine growth factor in malignant B-1 cells lies in its ability to inhibit apoptosis induction through the maintenance of sustainable cell cycle progression in malignant cells.     

GSK-3β抑制剂对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的: 探讨糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)抑制剂(2'Z,3'E)-6-溴靛'-3'-肟(BIO)对结肠癌SW480细胞β-catenin 、Bcl-2蛋白表达及细胞周期、凋亡的影响。方法: 应用不同浓度BIO作用于结肠癌SW480细胞,采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡,Western blotting检测β-catenin 和Bcl-2蛋白表达,免疫细胞化学检测β-catenin 及cyclin D1的表达,HE染色观察细胞形态。结果: 与BIO处理前SW480细胞相比,BIO处理组SW480细胞β-catenin蛋白表达明显上调并出现部分细胞核移位,cyclin D1蛋白表达及S期和G₂/M期细胞不同程度增多,Bcl-2蛋白表达有所下调,细胞凋亡率明显下降,并出现细胞形态改变。结论: GSK-3β抑制剂BIO作用于结肠癌SW480细胞呈现促增殖及抑凋亡作用,其机制主要与β-catenin信号转导通路激活以及与Bcl-2调控通路的平衡有关,其中β-catenin上调可能是影响结肠癌SW480细胞转归的主要因素。     

胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU的建立及其耐药机制的研究

目的：建立5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导的胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU，探讨凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax及caspase-3与其耐药性产生的关系。 方法:采用反复短期暴露并逐渐增加5-FU浓度的方法建立胃癌耐药细胞株BGC823/5-FU，MTT法检测此耐药细胞株对5-FU的耐药倍数及其对临床常用化疗药物阿霉素、丝裂霉素和顺铂的交叉耐药性，流式细胞术检测细胞P-糖蛋白的表达和柔红霉素积累量；Western blotting法检测耐药胃癌细胞株BGC823/5-FU与其亲代药物敏感胃癌细胞株BGC823凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax及caspase-3的表达。 结果:成功诱导出胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU，较其亲代细胞BGC823对5-FU、阿霉素、丝裂霉素和顺铂的耐药性分别提高10.82、2.50、22.23和2.00倍。其P-糖蛋白表达较BGC823细胞增高（P<0.01），柔红霉素积累量较BGC823细胞减低（P<0.01）。与亲代药物敏感BGC823细胞相比，耐药细胞株BGC823/5-FU细胞Survivin表达上升（P<0.05），Bcl-2表达升高（P<0.05），Bax表达下降（P<0.05），caspase-3表达减低（P<0.05）。结论:胃癌细胞株BGC823在5-FU的诱导下可形成多药耐药细胞株BGC823/5-FU，P-糖蛋白、凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2、Bax及caspase-3可能参与其耐药性的形成。     

表达反义细胞周期蛋白cyclinD1载体对胰腺癌细胞生长和凋亡的影响

目的观察反义细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎＤ１对胰腺癌细胞生长的影响。方法采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法检测了５株人胰腺癌细胞系中ｃｙｃｌｉｎＤ１的扩增及表达情况，发现ＰＣ７细胞中基因有扩增及过度表达。我们构建了反义（ＡＳ）ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达载体，采用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染方法转染ＰＣ７细胞，获得转化细胞系ＰＣ７／ＡＳｃｙｃｌｉｎＤ１。经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转化细胞系，表明有外源反义ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达，而内源性ｃｙｃｌｉｎＤ１ｍＲＮＡ表达及蛋白合成下调，并进行了细胞凋亡分析。结果转化细胞系细胞恶性生物学行为及表型部分逆转，细胞生长速度、ＤＮＡ合成及细胞增殖和代谢能力均明显下降，软琼脂集落形成能力减低。流式细胞术分析发现细胞被阻滞于Ｇ１期，ＤＮＡ凝胶电泳、原位凋亡检测发现凋亡细胞增多。结论通过反义ＲＮＡ技术，下调在细胞周期调控中起重要作用的ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达，可使胰腺癌细胞恶性表型部分逆转。     

沉默JAG1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

 目的:探究沉默Jagged 1 (JAG1)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其分子生物学机制。方法:
用已构建的pRS-JAG1重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞, 采用Western blotting方法检测重组质粒对JAG1蛋白表达的影响;MTT比色法测定沉默JAG1对细胞生长的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白印记分析细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21CIP1/WAF1、p27KIP1、p-Rb、Bcl-2、Bax、Bcl-xL和cleaved caspase-3蛋白水平的变化。结果:Western blotting结果证实重组质粒可在72h内有效抑制JAG1蛋白表达;人乳腺癌MDA-MB-231细胞JAG1被沉默后,细胞的生长速度明显减慢,细胞明显阻滞于G 0/G 1期,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),cyclin D1、p-Rb、Bcl-2和Bcl-xL蛋白水平被下调(P<0.05),而p21CIP1/WAF1、p27KIP1、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:沉默JAG1可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡。本研究为以JAG1为分子靶点的三阴乳腺癌治疗提供实验依据。