大鼠附睾脂肪垫脂肪源性干细胞的分离培养及分化潜能

背景：相对于骨髓基质干细胞,脂肪源性干细胞来源丰富,取材方便,干细胞丰度高,极易培养,具有多向分化潜能,有望成为组织工程、细胞治疗以及基因转染良好的源细胞,但目前对脂肪源性干细胞的研究尚处于初级阶段。 目的：拟在体外分离培养大鼠脂肪源性干细胞,并探讨其分化潜能。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-06/2009-01在南方医科大学组胚教研室和南方医院临床医学实验中心完成。 材料：SPF级成年雄性SD大鼠1只,由南方医科大学实验动物中心提供。 方法：无菌条件下切取大鼠双侧附睾尾脂肪垫,胶原酶消化法分离培养脂肪源性干细胞,胰蛋白酶消化法传代扩增。取第4代脂肪源性干细胞接种到96孔板,5×104个细胞/皿,待细胞贴壁后分成3组：成骨诱导组加入成骨培养基,成脂诱导组加入成脂培养基,对照组仍用基础培养基,培养14 d。 主要观察指标：脂肪源性干细胞的形态变化、体外增殖能力、细胞免疫化学鉴定结果。脂肪源性干细胞成骨和成脂分化能力。 结果：体外培养的脂肪源性干细胞易扩增,传代后以长梭形细胞为主,呈旋涡状排列,克隆样生长;经多次传代仍能保持较强的增殖能力,细胞生长曲线呈“S”形;细胞表面标志CD44和CD49d呈阳性表达,CD106呈阴性表达。脂肪源性干细胞经成骨诱导7 d后,碱性磷酸酶染色呈阳性;成脂诱导3 d后,油红O染色示胞浆内有脂滴出现;对照组细胞碱性磷酸酶染色呈阴性,无脂滴存在。 结论：从大鼠附睾脂肪垫内分离的脂肪源性干细胞易于培养和传代扩增,在特殊条件下可分化为成骨细胞和脂肪细胞。     

全骨髓贴壁并差速传代分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞：与密度梯度离心法的比较*☆

背景：目前国内外分离纯化骨髓间充质干细胞有两种主要方法：密度梯度离心法及全骨髓贴壁法,前者步骤较复杂,后者简单易操作,但纯化效果不理想。 目的：在全骨髓贴壁分离骨髓间充质干细胞基础上,并用差速传代消化法,建立大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养纯化方法。 方法：全骨髓贴壁培养法分离并差速消化传代大鼠骨髓间充质干细胞,利用间充质干细胞在消化传代过程中较其他骨髓细胞消化悬浮速度快,以及贴壁快的特点,代替密度梯度离心操作来分离纯化间充质干细胞,对其形态学特征进行观察,并与密度梯度离心法比较两种分离培养法的细胞生长增殖情况;观察碱性磷酸酶及油红染色情况,验证骨髓间充质干细胞的分化能力;检测细胞表面标记物,验证免疫特性及检测其纯度。 结果与结论：全骨髓贴壁培养法分离并差速传代大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞鉴定、成骨成脂肪培养结果显示其细胞免疫特性、纯度、分化能力与密度梯度离心法无显著差异,但细胞活力,增殖能力有明显提高。     

大鼠触须毛囊干细胞的分离培养和鉴定

背景：毛囊干细胞在体内膀胱及周围组织环境作用下有可能向尿路上皮细胞和平滑肌细胞分化，成为目前研究较新的干细胞之一。 目的：建立一种高效简单的分离培养和鉴定毛囊干细胞的方法。 方法：取大鼠触须部皮肤组织，体式显微镜下分离出毛囊组织，中性蛋白酶Ⅱ与胰蛋白酶和乙二胺四乙酸混合液“两步酶法”消化；所得细胞悬液中添加含体积分数10%胎牛血清的角质细胞无血清培养基，Ⅳ型胶原差速贴壁法筛选毛囊干细胞，20 min以内贴壁的细胞作为实验组，未贴壁的细胞作为对照组；待筛选后的细胞生长至70%~80%汇合后，进行传代培养。 结果与结论：筛选后的细胞形态均匀一致，折光性强，呈典型的“铺路石状”。透射电镜显示细胞处于原始状态。流式细胞仪检测实验组CD34和β1整合素的表达分别为(39.52±19.57)%和(93.46±4.73)%，对照组相应为(19.20±11.53)%和(63.57± 14.42)%，两组间差异有显著性意义(P < 0.05)。结果表明联用显微分离技术、二步酶法及差速贴壁法筛选可以获得纯度较高的毛囊干细胞。CD34和β1整合素表达是较理想的鉴定方法。     

应用改良差速贴壁法和有限稀释技术分离培养小鼠来源肌源干细胞*☆

背景：研究者们通过多种方法从肌组织中分离得到肌源干细胞，并应用于各类组织工程和再生医学研究。 目的：结合改良的差速贴壁法和有限稀释技术分离小鼠来源肌源干细胞，并培养其单细胞克隆和亚克隆集落。 方法：以新生C57BL/6小鼠四肢作为肌组织取材对象，经三重酶消化和细胞筛过滤，运用改良的差速贴壁法分离出肌源干细胞，予细胞特异标记物以免疫组织化学染色；以有限稀释技术克隆培养的方法，获得稳定的肌源干细胞单克隆和亚克隆集落。 结果与结论：差速贴壁培养过程中，肌性细胞占比逐渐增高，首次贴壁1 h可以获得足够数量的细胞进行第6次贴壁培养；肌源干细胞需72 h左右贴壁生长，经10 d左右可以增殖为300~500细胞数量的集落，细胞形态以小圆形细胞为主，并有少量梭形细胞，肌源干细胞能够维持形态并持续增殖；应用有限稀释技术可获得肌源干细胞单克隆和亚克隆集落，肌源干细胞克隆细胞均呈现Desmin染色阳性，Sca-1染色阳性，阳性率为(92.3±4.1)%。提示应用preplate法和有限稀释技术可以分离得到小鼠来源肌源干细胞及其克隆集落。     

大鼠脂肪源性干细胞的分离培养及鉴定

背景：脂肪源性干细胞在体外易于培养,增殖快,具有多向分化潜能。 目的：构建一种体外分离培养SD大鼠脂肪源性干细胞的方法,并对其部分生物学特性与表型进行分析。 方法：切取SD大鼠腹股沟脂肪垫,应用胶原酶Ⅰ消化,分离大鼠脂肪源性干细胞,进行体外培养、传代,倒置显微镜观察细胞的生长增殖及形态变化,诱导成骨、成脂,分别行碱性磷酸酶、茜素红、von Kossa染色及油红O染色,绘制生长曲线及用流式细胞仪检测细胞表面标记。 结果与结论：体外培养的脂肪源性干细胞呈梭形,增殖活跃,传代后形态均一,多次传代后细胞仍保持较强增殖能力,生长曲线呈“S”型。成骨诱导实验组碱性磷酸酶、茜素红、von Kossa染色阳性;成脂诱导实验组油红O染色阳性;对照组均为阴性。细胞CD29,CD44,CD105表达阳性,CD31,CD45表达阴性。提示SD大鼠腹股沟脂肪垫分离的脂肪源性干细胞在体外易于分离培养和传代扩增,特定条件下可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,并表达间充质干细胞相关的表型。     

Wistar大鼠胚胎脑源性神经干细胞分离、培养及其鉴定

目的 分离培养、鉴定Wistar大鼠胚胎脑源性神经干细胞.方法 从Wistar大鼠胚胎脑组织中分离胚胎脑源性神经干细胞,采用无血清培养技术进行培养、传代,应用免疫细胞化学染色对培养的细胞及其分化的细胞进行鉴定.结果 分离培养获得大量悬浮生长的细胞团,该细胞具有连续增殖的能力,并能分化为神经元和神经胶质细胞,经传代培养8代后仍具干细胞特性.结论 Wistar大鼠胚胎脑组织中可成功分离培养神经干细胞,该细胞在体外适宜的条件下能够大量增殖,并具有多向分化潜能.

Abstract：

Objective To isolate and culture the brain-derived neural stem cells (NSCs) from Wistar rat embryos and identify the ability of proliferation and differentiation of NSCs. Methods The neural stem cells were obtained from the brain of Wistar rat embryos. They were cuhured and passaged with serum-free medium. Cultured and differentiated cells were identified with immunocytochemistry staining. Results Clusters of neural stem cells were obtained in suspension and these cells could be continuously proliferated. And the cells could be differentiated into neurons and astrocytes which maintaining the main characteristics of NSCs after 8 passages of culture. Conclusions The neural stem ceils derived from rat embryonic brains are able to proliferate and multiple potent for differentiation.     

克隆筛选纯化在大鼠脂肪源性干细胞原代培养中的作用

背景：研究中发现从成体的脂肪组织中可以分离出一种间质干细胞，即脂肪源性干细胞，但传统的分离方法仍存在一些问题需要改进。 目的：在脂肪源性干细胞传统的分离方法的基础上进行改进，克隆筛选纯化脂肪源性干细胞。 方法：消化离心法分离Lewis大鼠脂肪源性干细胞，有限密度稀释法克隆化及条件培养基筛选，进行原代培养，以克隆筛选的脂肪源性干细胞为实验组，未克隆筛选的脂肪源性干细胞为对照组，观察细胞形态，对比生长曲线、倍增时间，流式细胞仪鉴定脂肪源性干细胞表面标记CD49d、CD29、CD44。 结果与结论：经克隆筛选的脂肪源性干细胞与未经克隆筛选的脂肪源性干细胞相比，前者形态均一，生长力旺盛，倍增时间短，多代培养后生长曲线无明显改变，通过流式细胞仪鉴定，实验组与对照组在3~6代之间均表达表面标记CD49d、CD29、CD44。结果证实克隆筛选的纯化方法是脂肪源性干细胞原代培养的有效、经济的纯化方法。     

脂肪间充质干细胞的分离培养和鉴定

背景：近年来的研究发现,在脂肪组织中也存在这与骨髓间充质干细胞类似的间充质干细胞。脂肪组织可以从美容吸脂中获得,来源丰富,取材方便,蕴藏着巨大的临床应用价值。 目的：分离培养人脂肪间充质干细胞并检测其生物学特性。 方法：用离心的方法获得人脂肪间充质干细胞,接种于含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养基中行贴壁培养。并进行细胞形态学观察,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面抗原。 结果与结论：采用消化、离心分离获得的脂肪间充质干细胞大小较为均匀,呈梭形或星形的成纤维细胞样。细胞生长曲线测定表明接后第5天细胞进入指数增生期,至第9天后数量减少;流式细胞仪检测表明超过90%细胞为CD29、CD45和CD105阳性。提示体外分离培养脂肪间充质干细胞生长稳定,可作为组织工程的种子细胞。     

大鼠肌源性干细胞植入糖尿病鼠胰腺后的存活能力及血糖调节

背景：肌源性干细胞易于提取、分离及扩增，在特定条件下可分化为骨软骨、肌肉等中胚层组织细胞，还可以跨胚层分化为神经细胞等。 目的：观察糖尿病鼠胰腺内植入的肌源性干细胞存活情况，及其调节血糖的效果。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-04/09在辽宁医学院科学实验中心完成。 材料：SPF/VAF级新生5 d龄SD大鼠31只，由辽宁医学院实验动物中心提供。造模使用的链脲佐菌素为星隆达公司产品。 方法：取5只大鼠的前肢肱三头肌与后肢腓肠肌，采用差速贴壁法纯化扩增大鼠肌源性干细胞，传至第3代用于移植，临用前以携带绿色荧光蛋白的腺病毒悬液进行转染。取20只大鼠，通过尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病模型，15只成功造模，取12只随机均分为2组：细胞移植组胰腺被膜下移植肌源性干细胞约2×106个，模型对照组同法给予等量不含细胞的培养液。余6只大鼠作为正常对照组。 主要观察指标：肌源性干细胞移植至胰腺后的存活情况，移植后大鼠血糖浓度的变化。 结果：移植后1周，胰腺组织呈网架样结构，表达较强的黄绿色荧光；4周后仍有荧光表达，但强度减弱。与模型对照组比较，移植前2 d细胞移植组大鼠血糖浓度无明显差异（P > 0.05）；移植后4，8 d，大鼠血糖浓度一直处于较高水平；至移植后第4，8周大鼠血糖浓度明显下降（t=-2.416~8.372，P < 0.01）。 结论：肌源性干细胞移植后能在糖尿病模型鼠的胰腺部位存活，且一定程度上可下调大鼠血糖浓度。     

新生大鼠海马区及室管膜下区神经干细胞分离、培养和分化特性

目的建立大鼠神经干细胞（NSCs）分离、培养方法，观察其生长、增殖和分化特点。方法利用无血清培养技术，从新生大鼠海马、室管膜下区分离NSCs，进行体外扩增培养、传代观察。采用荧光免疫细胞化学检测技术，观察鉴定NSCs及其分化结果。结果分离获取的细胞具有自我更新和增殖能力，原代及传代培养均可形成细胞克隆，克隆中的细胞巢蛋白（nestin）表达阳性，显微镜下观察见典型的干细胞特征，诱导后可分化神经元和星形胶质细胞。结论上法分离培养的细胞为具有自我更新和增殖能力的NSCs，可诱导分化为终末神经细胞。     

Isolation, cultivation, and differentiation of neural stem cells from adult fish brain

In contrast to mammals, teleost fish are distinct in their ability to continuously produce a tremendous number of new neurons in many regions of the adult brain. In the present study, we have isolated intrinsic stem cells from the telencephalon, corpus cerebelli, and valvula cerebelli of the teleost Apteronotus leptorhynchus and examined their properties in vitro. After 3-4 days in culture, neurospheres developed that grew through cell proliferation and reached diameters of up to 140 microm within 3 weeks. An increase in the number of developing neurospheres could be promoted by addition of epidermal growth factor or basic fibroblast growth factor, but no additive effect was observed after combined treatment. The number of neurospheres could furthermore be enhanced by seeding brain cells at densities of approximately 1 x 10(6). Differentiation conditions were optimal by exposing neurospheres to 10% fetal bovine serum and laminin as coating substrate. Neurosphere cells gave rise to both neurons, immunopositive for Hu-C/D or MAP2 (2a + 2b), and glial cells, immunopositive for glial fibrillary acidic protein or vimentin. Since, in addition to their multipotency, the cells isolated from the adult teleostean brain exhibited the ability for self-renewal, we hypothesize that they are true stem cells.     

肿瘤干细胞的分离与纯化研究进展

随着肿瘤干细胞学说的日趋成熟,针对干细胞的靶向治疗已成为新的理论,分离与纯化肿瘤干细胞是研究的重要组成部分。目前国内外主要根据肿瘤干细胞已知的细胞表型和生物学特性,用流式细胞仪分选法、磁性激活细胞分选法和旁群细胞分选法来分离与纯化肿瘤干细胞,为肿瘤的临床诊断与治疗提供了依据。     

骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定

背景：近年来骨髓间充质干细胞在组织工程、细胞移植、基因治疗等领域备受重视,得到广泛研究。 目的：对骨髓间充质干细胞的生物学特性、体外分离、培养及鉴定方法及其临床学的应用进行综述。 方法：应用计算机检索1995-01/2010-01 CNKI数据库相关文章,检索词为“骨髓间充质干细胞,分离,培养,鉴定”,并限定文章语言种类为中文。同时计算机检索1995-01/2010-01 PubMed数据库相关文章,检索词为“bone marrow mesenchymal stem cells,isolation,cultivation,identification”,并限定文章语言种类为“English”。共检索到文献68篇,最终纳入符合标准的文献30篇。 结果与结论：骨髓间充质干细胞是存在于骨髓中的一类非造血干细胞,易于获得和分离培养,且具有多向分化及高度增殖的能力。目前研究发现它具有分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞、神经细胞以及肝细胞等多种类型细胞的潜能,已经成为重要的组织工程种子细胞。     

大鼠胚胎脑皮层神经干细胞的分离和培养

目的探讨分离、培养、纯化大鼠胚胎神经干细胞(neuralstem cell,NSCs)的最佳条件,以获得充足的神经干细胞来源,用于中枢神经系统疾病的治疗.方法分离孕13～15 d胎鼠大脑皮层,在无血清含神经生长因子N2培养液中培养,利用有限稀释法单克隆培养和改良法连续传代纯化并扩增NSCs,免疫组织化学法对NSCs及分化细胞进行鉴定.结果可以通过体外培养获得大量神经源性干细胞,在体外经多次传代后仍具有很强的增殖能力和多向分化潜能.结论NSCs的存活和分裂依赖于神经生长因子和N2添加剂的浓度,胚胎脑组织和神经球分离方法影响NSCs的形成速度和数量.掌握NSCs的体外纯化培养和鉴定手段可为进一步研究NSCs生物学特性及神经系统损伤的治疗提供新方法.     

Neuronal differentiation of stem cells isolated from adult muscle

Lineage uncommitted pluripotent stem cells reside in the connective tissue of skeletal muscle. The present study was carried out with pluripotent stem cells (PPSCs) isolated from 6-month old rat muscle. Before differentiation, these cells were vimentin+, CD90+, CD45-, and varied in their expression of CD34. The PPSCs were expanded as non-adherent aggregates under similar conditions to those used to generate neurospheres from embryonic or neural stem cells. The PPSC-derived neurospheres were positive for nestin, an early marker present in neuronal precursors, and expressed the two alternative mRNA forms of the neuroectodermal marker Pax-6, as well as mRNA for Oct-4, a gene related to the pluripotentiality of stem cells. To confirm their neural potential, PPSC-derived neurospheres were plated on coated coverslips under varying conditions: Neurobasal medium with N2 or B27, and either NT3 or BDNF. After 4-6 days the cells expressed neuronal (Tuj1+, NF68), astrocytic (GFAP) and oligodendrocytic (MOSP+, MBP+) markers, both by immunocytochemistry and RT-PCR. In addition, PPSCs were cultured as monolayers under adherent conditions, exposed to growth factors and defined differentiating conditions for 5 hr, and subsequently kept for 2 days in a maturation medium. At this point they gave rise to a mixed population of early neural progenitors (Nestin+ or NG2+), immature and mature neurons (Tuj1+ and NF145+) and myelin producing oligodendrocytes (CNPase + and MOSP+). Our study shows that PPSCs present in adult muscle can overcome germ lineage restrictions and express the molecular characteristics of brain cells. Therefore, PPSCs isolated from adult muscle could provide a novel source for autologous cell replacement in neurodegenerative and demyelinating diseases.     

大鼠胚胎神经干细胞的冷冻复苏

目的：建立大鼠胚胎神经干细胞冷冻复苏方法，探讨冻存后神经干细胞的活力及生物学特性。方法：采用10％BSA＋7．5％DMSO作冷冻保护剂，于液氮中冻存；采用细胞培养和间接免疫荧光染色方法对冻存后细胞的活力，形态及分化能力作鉴定。结果：不同的冻存时间，细胞代数，组织来源以及神经营养因子对冻存后细胞存活率没有明显差异（P＞0．05）。冷冻保存复苏后培养的大鼠胚胎神经干细胞能够存活，能在体外多次传代，并能分化成神经元，星形胶质细胞细胞和少突胶质细胞。结论：大鼠神经干细胞的冻存复苏并不影响其原有的生物学特性包括其正常的，增殖能力和多向分化能力。     

Long-term cultivation of multipotential neural stem cells from adult rat subependyma

Cultivation of adult rat neural stem cells (RNSCs) from the ventricular subependyma has been reported to be more difficult than growth of mouse neural stem cells. This is unfortunate, because rats provide useful models of brain function and disease, and implantation of RNSCs in these models could provide critical information on allograft behavior. Growing the cells in an appropriate medium (NS-A+B27 supplement), plating at sufficient densities (>5 cells per mm²), and minimizing opportunities for detachment from the substratum made it possible to isolate and cultivate these cells for over 6 months for >50 passages with no apparent change in phenotype. Single clones could be expanded indefinitely and differentiated to form astrocytes, oligodendrocytes, and neurons, demonstrating that the cultures did indeed contain neural stem cells. The cells had a much shorter cell cycle time (13 h) than doubling time (35 h), suggesting that these cells produce post-mitotic cells in approximately two of three divisions, thus making expansion difficult. The optimization of methods to grow adult RNSCs and identification of characteristics that limit their growth should prove useful in increasing the use of RNSCs for studies of their potential role in brain health and disease.     

大鼠胚胎神经干细胞的冷冻复苏

目的:建立大鼠胚胎神经干细胞冷冻复苏方法,探讨冻存后神经干细胞的活力及生物学特性.方法:采用10%BSA+7.5%DMSO作冷冻保护剂,于液氮中冻存;采用细胞培养和间接免疫荧光染色方法对冻存后细胞的活力、形态及分化能力作鉴定.结果:不同的冻存时间、细胞代数、组织来源以及神经营养因子对冻存后细胞存活率没有明显差异(P＞0.05).冷冻保存复苏后培养的大鼠胚胎神经干细胞能够存活,能在体外多次传代,并能分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞.结论:大鼠神经干细胞的冻存复苏并不影响其原有的生物学特性包括其正常的形态、增殖能力和多向分化能力.     

Isolation and functional characterization of Schwann cells derived from adult peripheral nerve

To facilitate the development of autologous transplantation techniques with which to test the ability of Schwann cell (ScC) implantations to treat nervous system injury, we have developed a method for procuring large, essentially pure populations of ScCs from adult peripheral nerve. By allowing small explants of peripheral nerve trunk to undergo axonal and myelin breakdown in vitro, rather than dissociating the nerve immediately after harvest, we are able to (1) rid the explant of nearly all fibroblasts and (2) capitalize on the intrinsic ScC mitogenic response to peripheral nerve degeneration. Here, we describe a method that yields up to 98% pure ScC populations from adult rat sciatic nerve (based on cell soma and nuclear morphology, S100 staining, and behavior of dissociated cells on neurites) at cell yields of greater than 2 x 10(4) cells/mg of starting nerve weight. The purification technique was successfully applied to human tissue; human phrenic nerve yielded 98% pure ScC populations at cell yields of 2 x 10(4) cells/mg of initial nerve weight. Similar to neonatally derived ScCs, adult rat cells can be expanded in coculture with dorsal root ganglion (DRG) neurons or in isolation in the presence of glial growth factor and forskolin. Cells expanded indefinitely on DRG neurons, or up to 10 weeks on chemical mitogens, return to quiescence following removal of the mitogenic stimulus. Expanded adult-derived rat ScCs retain functional capacity, as evidenced by their ability to myelinate DRG neurites and to support regeneration of processes from embryonic rat retinal explants.     

小鼠胚胎干细胞来源平滑肌细胞的鉴定及其功能分析

背景：胚胎干细胞来源的平滑肌细胞是血管组织工程潜在的细胞来源之一,但这些细胞是否具有成熟平滑肌细胞的表型和功能仍不清楚。 目的：对小鼠胚胎干细胞分化的平滑肌细胞进行表型鉴定及功能分析。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2007-05/2008-12在解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所完成。 材料：清洁级孕12.5 d昆明小鼠1只用于制备饲养层细胞,SD大鼠1只用于制备主动脉平滑肌细胞。小鼠胚胎干细胞系R1、小鼠微血管内皮细胞系由美国ATCC公司提供,转染pSPIE载体的胚胎干细胞R1由本实验室制备。 方法：①诱导分化及筛选：用转染pSPIE载体的胚胎干细胞R1制备拟胚体,拟胚体悬浮培养5 d后贴壁培养1 d,第7天加入全反维甲酸诱导分化4 d,第 11天用10 mg/L嘌呤霉素对诱导分化后的细胞筛选2 d。②表型鉴定：对筛选到的平滑肌细胞进行SM α-actin、SM22α、SM-MHC免疫荧光染色,以大鼠原代主动脉平滑肌细胞、未经筛选的第10天分化细胞作为对照,进行Western Blot分析。③收缩功能：10-5 mol/L卡巴可处理筛选到的平滑肌细胞 30 min。④体外成血管功能：将等量的内皮细胞和筛选到的平滑肌细胞混合,在Matrigel上培养。 主要观察指标：平滑肌细胞标志物的表达,平滑肌细胞的收缩,平滑肌细胞向内皮管腔样结构的募集。 结果：分化的平滑肌细胞主要分布于贴壁生长的拟胚体的外周部位,胚胎干细胞来源的平滑肌细胞3种标志物SM α-actin、SM22α、SM-MHC免疫荧光染色均呈阳性表达,Western Blot结果显示其SM α-actin、SM22α表达水平与大鼠原代主动脉平滑肌细胞相似,高于未经筛选的第10天分化细胞。筛选到的平滑肌细胞在10-5 mol/L卡巴可刺激下出现明显收缩,且能够募集到内皮管腔样结构周围。 结论：小鼠胚胎干细胞来源的平滑肌细胞具有与成熟平滑肌细胞相似的表型和功能。