miR-20a通过ATG16L1影响细胞自噬并参与调节雷公藤甲素肝毒性

目的 观察雷公藤甲素对miR-20a及自噬相关16样蛋白L1（autophagy related 16 like protein1,ATG16L1）表达的影响,探讨miR-20a对雷公藤甲素所致肝细胞毒性的调控作用。方法 利用雷公藤甲素处理人正常肝细胞株HL7702和C57BL/6J小鼠,通过qRT-PCR和Western blotting检测miR-20a、ATG16L1及自噬标记物微管相关蛋白1轻链3II（microtubule-associated protein 1 light 3II,LC3II）的表达。利用雷公藤甲素和miR-20a模拟物或抑制物共同处理HL7702细胞,通过qRT-PCR和Western blotting检测ATG16L1及LC3II的表达;CCK-8法检测细胞存活率;试剂盒检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放量;ELISA检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）和Caspase-9的活性。结果 雷公藤甲素显著下调人正常肝细胞或小鼠肝组织中miR-20a表达（P＜0.05）,上调ATG16L1和LC3II的表达（P＜0.05）。miR-20a模拟物可抑制雷公藤甲素引起的ATG16L1、LC3II表达升高（P＜0.05）,进一步降低细胞存活率（P＜0.05）,提高LDH释放量（P＜0.05）,上调Caspase-3和Caspase-9活性（P＜0.05）,而miR-20a抑制物具有相反作用。结论 miR-20a通过ATG16L1影响自噬过程,参与调节雷公藤甲素肝细胞毒性。     

补阳还五汤对糖尿病肾病小鼠铁死亡的影响

目的 观察补阳还五汤对糖尿病肾病（DKD）小鼠铁死亡的影响,探讨补阳还五汤对DKD小鼠肾脏的保护作用及机制。方法 将73只C57BL/6小鼠随机分为造模组63只和正常组10只,造模组小鼠高糖高脂饲料喂养6周后,连续5 d以50 mg·kg^-1腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病模型,后继续高糖高脂饲料喂养8周,当小鼠出现尿蛋白阳性则DKD模型制备成功。随机将DKD小鼠分为模型组10只、罗格列酮组（7.05×10^-4 g·kg^-1）9只、补阳还五汤低剂量组（3.21 g·kg^-1）9只、中剂量组（6.41 g·kg^-1）10只、高剂量组（12.82 g·kg^-1）10只灌胃,正常组与模型组予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续8周。给药结束后检测小鼠空腹血糖（FBG）、24 h尿蛋白（24 h-UTP）,计算肾重指数（KI）;苏木素-伊红（HE）染色、高碘酸希夫（PAS）染色及马松（Masson）染色观察小鼠肾组织病理学改变;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠肾组织长链脂酰辅酶A合成酶4（ACSL4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、铁蛋白重链（FTH-1）、转铁蛋白受体-1（TFR-1）蛋白表达;测定谷胱甘肽（GSH）活性、丙二醛（MDA）及4-羟基壬烯醛（4-HNE）含量;荧光探针标记法检测小鼠肾组织活性氧簇（ROS）表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠KI、FBG、24 h-UTP显著升高,肾小球内系膜增生,基底膜增厚,肾小球周围可见糖原颗粒沉积,FTH-1表达降低、TFR-1表达增加,ROS表达增加,MDA、4-HNE升高,GSH活性降低,ACSL4表达增加,SLC7A11、GPX4表达减少（P<0.01）;与模型组比较,补阳还五汤及罗格列酮组KI、24 h-UTP降低,FBG有下降趋势,但差异无统计学意义,肾组织病理学损伤可见不同程度改善,FTH-1表达升高、TFR-1表达减少,ROS表达减少,MDA、4-HNE含量降低,GSH活性升高,ACSL4表达减少,SLC7A11、GPX4表达增加（P<0.05,P<0.01）。结论 补阳还五汤可减轻DKD小鼠肾组织病理损伤,其机制与调控铁死亡有关。     

脑泰方调控细胞铁转运抑制铁死亡保护脑卒中缺血损伤的机制研究

目的 探讨脑泰方是否通过调控热休克转录因子1（heat shock factor 1,HSF1）/热休克蛋白B1（heat shock proteins B1,HSPB1）通路降低脑铁沉积、抑制活性氧沉积及脂质过氧化产物产生、减轻神经元铁死亡,从而发挥脑卒中缺血损伤保护作用。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、脑泰方（27 g/kg）组和去铁酮（125 mg/kg）组,给予药物干预。通过大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）法制备脑缺血大鼠模型,术后2 h进行神经功能评分及取材。TTC染色法检测脑梗死体积;苏木素-伊红（HE）染色观察脑组织形态结构及损伤情况;尼氏染色观察脑组织尼氏体数目;普鲁士蓝染色观察脑组织神经元内铁聚集水平;免疫组化及Western blotting法检测脑组织HSF1、HSPB1、转铁蛋白受体1（transferrin receptor 1,TFR1）和铁蛋白重链多肽（ferritin heavy polypeptide1,FTH1）蛋白表达;铁离子检测试剂盒与丙二醛检测试剂盒及活性氧检测试剂盒检测脑组织铁、丙二醛及活性氧含量。结果 与模型组比较,脑泰方组大鼠脑梗死体积减少,神经功能评分降低（P<0.01）;脑缺血区尼氏体增多,细胞损伤程度降低;含铁聚集颗粒细胞的数目减少;脑铁、丙二醛及活性氧含量降低（P<0.05、0.01）;脑组织HSF1、HSPB1及FTH1蛋白表达上调（P<0.05、0.01）,TFR1蛋白表达下调（P<0.05）。结论 脑泰方可能通过上调HSF1/HSPB1通路,抑制TFR1的表达以减少神经元铁的吸收,上调FTH1的表达以增加铁蛋白的铁存储,以此调控铁代谢稳态平衡,进而抑制因过量的铁通过芬顿反应产生的活性氧及随后脂质过氧化产物引起的缺血性脑卒中神经元铁死亡。     

绞股蓝皂苷调控铁死亡途径对ApoE-/-小鼠肝脏脂质沉积的影响及机制研究＊

目的 探究绞股蓝皂苷改善ApoE－/－小鼠肝脏脂质沉积的可能作用机制。方法 24只健康ApoE－/－小鼠采用随机数字表法分为绞股蓝皂苷组、辛伐他汀组和模型组，每组8只；将8只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。正常对照组给予普通饲料喂养；模型组、绞股蓝皂苷组、辛伐他汀组给予高脂饲料喂养，喂养8周。8周后，绞股蓝皂苷组给予绞股蓝皂苷灌胃，辛伐他汀组给予辛伐他汀灌胃，正常对照组和模型组使用0.2 mL/10 g生理盐水灌胃，灌胃4周。灌胃期间正常对照组继续给予正常饲料喂养，模型组、绞股蓝皂苷组、辛伐他汀组继续给予高脂饲料喂养。12周后，全自动生化分析仪检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、肝脏TC、TG水平；HE染色和油红O染色观察小鼠肝脏病理形态变化与脂质沉积 情况；ELISA法检测肝脏组织过氧化脂质（LPO）和还原型谷胱甘肽（GSH）水平；Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测GPX4、xCT和p53蛋白表达水平；RT-qPCR检测GPX4、xCT和p53 mRNA表达水平。结果 与正常对照组相比，模型组小鼠血清血脂TC、LDL-C、TG水平升高、HDL-C水平降低（P<0.01）；血清肝功能AST、ALT水平升高（P<0.01）；肝细胞体积变大，细胞内可见大量大小不等的脂肪空泡，脂质沉积明显， 肝窦狭窄或消失；肝脏组织TC、TG和LPO水平显著升高，GSH水平显著下降（P<0.01）；p53蛋白和mRNA表达增高，GPX4、xCT蛋白和mRNA表达降低（P<0.01）。与模型组比较，绞股蓝皂苷组和辛伐他汀组小鼠血清血脂TG、LDL-C、TC水平降低（P<0.01），HDL-C水平没有显著变化（P>0.05）；血清肝功能AST、ALT水平降低（P<0.01）；肝细胞体积大小有所恢复，细胞内脂肪空泡显著减少，脂质沉积情况减轻，肝窦狭窄有所缓解；肝脏组织TC、TG和LPO水平显著降低，GSH水平显著升高（P<0.01）；p53蛋白和mRNA的表达降低，GPX4、xCT蛋白和mRNA表达升高（P<0.05或P<0.01）。结论 绞股蓝皂苷能明显改善肝脏脂质沉积和降低肝脏脂质过氧化反应，其机制可能与抑制肝细胞铁死亡有关。     

基于网络药理学及实验验证探析雷公藤治疗三阴性乳腺癌的分子机制

目的 利用网络药理学预测雷公藤治疗三阴性乳腺癌（TNBC）的有效成分、靶点及相关信号通路，体外细胞模型验证其分子机制。方法 通过中药系统药理数据库（TCMSP）筛选雷公藤活性成分；疾病相关基因与突变位点数据库（DisGeNET）和基因数据库（GeneCards）获取TNBC疾病靶点；Venny平台整合雷公藤治疗TNBC的潜在靶点；String 数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络；DAVID数据库进行基因本体（GO）功能注释和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析；AutoDock Vina对雷公藤甲素与核心靶点进行分子对接；噻唑蓝（MTT）比色法检测雷公藤甲素（0、5、10、20、30、40、50、60、80 nmol·L^-1）对MDA-MB-231细胞的增殖抑制活性；Hoechst 33342染色法分析雷公藤甲素（0、12.5、25、50 nmol·L^-1）诱导MDA-MB-231细胞凋亡；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测雷公藤甲素（0、25、50 nmol·L^-1）对关键靶点的表达调控。结果 预测结果显示雷公藤23个活性成分对应55个TNBC作用靶点，靶点共涉及生物过程103种，细胞组成15种，分子功能35种，参与脂质与动脉粥样硬化、细胞凋亡等细胞信号通路140条；雷公藤甲素与核心靶点蛋白激酶B1（Akt1）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、细胞肿瘤抗原p53（p53）、转录因子AP-1（JUN）、信号转导及转录激活因子3（STAT3）、肿瘤坏死因子（TNF）、丝裂原活化蛋白激酶8（MAPK8）、前列腺素G/H合成酶2（PTGS2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的对接结合活性较高；MTT比色法结果表明，与空白组比较，雷公藤甲素（20、30、40、50、60、80 nmol·L^-1）能明显抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖（P<0.05，P<0.01）；Hoechst 33342染色结果显示，与空白组比较，雷公藤甲素（12.5、25、50 nmol·L^-1）MDA-MB-231细胞凋亡率升高（P<0.05，P<0.01）；Western blot实验表明，与空白组比较，雷公藤甲素（50 nmol·L^-1）作用后细胞中p-Akt、VEGFA和TNF-α相对表达水平降低（P<0.05，P<0.01），雷公藤甲素（25、50 nmol·L^-1）组p53相对表达水平升高（P<0.05，P<0.01），呈浓度依赖性。结论 雷公藤治疗TNBC具有多成分、多靶点、多通路的特点，其机制与调节p53、VEGFA、TNF-α等靶点，进而诱导细胞凋亡、抑制血管生成及炎症反应等有关，为后续深入基础研究及临床应用提供了科学依据。     

基于靶器官铁死亡探讨绿豆汁炙黄药子的炮制减毒机制

目的 探究绿豆汁炙黄药子的炮制减毒作用,并基于其主要毒性靶器官肝铁死亡探究其减毒机制。方法 60只雄性ICR小鼠随机分为空白组、生黄药子组、水炙黄药子组,绿豆汁炙黄药子1组（黄药子-绿豆10∶1,闷润40 min,130 ℃炒18 min）、绿豆汁炙黄药子2组（黄药子-绿豆10∶1,闷润80 min,100 ℃炒14 min）、绿豆汁炙黄药子3组（黄药子-绿豆20∶3,闷润40 min,160 ℃炒14 min）。生黄药子及各炮制品组均以3 g·kg^-1·d^-1的剂量分别灌胃对应的95%乙醇提取物药液,空白组灌胃等体积的0.5%羧甲基纤维素钠,1次/d,连续14 d。苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠肝脏组织病理变化;生化检测小鼠血清谷氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平,以及肝组织丙二醛（MDA）、亚铁离子（Fe²⁺）、还原型谷胱甘肽（GSH）和超氧化物歧化酶（SOD）的水平;蛋白免疫印迹法检测铁关键蛋白铁蛋白重链1（FTH1）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的表达水平。结果 HE染色结果显示,空白组小鼠肝组织结构清晰,肝细胞形态正常;生黄药子组与水炙黄药子组小鼠肝细胞胞质疏松、空泡,病理性损伤明显;各绿豆汁炙黄药子组小鼠病理性损伤明显改善。与空白组比较,生黄药子组小鼠血清ALT、AST水平显著升高（P<0.01）,肝组织MDA及Fe²⁺水平显著升高（P<0.01）,GSH、SOD水平显著降低（P<0.01）,FTH1、GPX4蛋白表达显著下调（P<0.01）;与生黄药子组比较,各绿豆汁炙黄药子组小鼠血清ALT、AST水平显著降低（P<0.01）,肝组织MDA的水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,Fe²⁺水平显著降低（P<0.01）,GSH、SOD水平显著升高（P<0.01）,FTH1、GPX4蛋白表达显著上调（P<0.01）;与水炙黄药子组比较,各绿豆汁炙黄药子组小鼠血清AST水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,肝组织MDA水平显著降低（P<0.01）,SOD水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,FTH1蛋白表达显著上调（P<0.01）,绿豆汁炙黄药子2、3组小鼠血清ALT水平显著降低（P<0.01）,肝组织Fe²⁺水平显著降低（P<0.01）,GSH水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,GPX4蛋白表达明显上调（P<0.05,P<0.01）。各绿豆汁炙黄药子组中以绿豆汁炙黄药子3组的减毒效果最佳,即黄药子-绿豆=20∶3,闷润40 min,160 ℃炒14 min。结论 绿豆汁炙法能够缓解黄药子导致的肝损伤,其减毒机制可能与抑制其靶器官肝脏的铁死亡有关。     

槲皮素通过诱导铁死亡抑制A549细胞增殖的作用及机制研究

目的 基于铁死亡信号通路探究槲皮素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制。方法 CCK-8法筛选槲皮素作用于A549细胞的实验浓度;平板克隆法检测槲皮素对A549细胞集落形成能力的影响;利用试剂盒检测槲皮素对A549细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平的影响;采用Western blotting检测槲皮素对A549细胞铁死亡相关蛋白及线粒体凋亡蛋白表达的影响;采用流式细胞仪检测槲皮素对A549细胞内线粒体活性氧(mitochondrial reactive oxygen species,mtROS)、脂质过氧化物水平及细胞凋亡的影响。联合铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1)或ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(Nacetylcysteine,NAC)检测槲皮素对A549细胞内GSH水平及铁死亡相关蛋白表达的影响。结果 与对照组比较,槲皮素显著抑制A549细胞存活率,且呈时间和剂量相关性(P<0.01);槲皮素呈剂量相关性地抑制A549细胞集落形成(P<0.01),显著降低A549细胞内GSH水平(P<0.01),上调细胞内mtROS及脂质过氧化物水平(P<0.05、0.01),诱导细胞凋亡(P<0.01);显著促进铁死亡相关蛋白p53表达(P<0.05、0.01),并抑制谷胱甘肽过氧化物酶4(recombinant glutathione peroxidase 4,GPX4)及胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)蛋白表达(P<0.01);显著促进线粒体凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、Caspase-9、细胞色素C(cytochrome C,CytC)和B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达(P<0.05、0.01),并抑制抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达(P<0.01)。与槲皮素组比较,槲皮素+NAC组与槲皮素+Ferrostatin-1组均不同程度恢复槲皮素引起的细胞存活率下降(P<0.05、0.001),Ferrostatin-1可显著上调GPX4及SLC7A11蛋白表达水平(P<0.05),并回调GSH水平(P<0.05)。结论 槲皮素能够抑制A549细胞增殖并诱导铁死亡,进而导致细胞凋亡,具有诱导A549细胞铁死亡的生物学效应。     

灵芝多糖调控抗氧化因子表达抑制乳腺癌恶性表型研究

目的 研究灵芝多糖对乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡的影响及作用机制。方法 MCF-7和MDA-MB-231细胞分别给予灵芝多糖（25、50、75mg/mL）干预后,MTS法检测灵芝多糖对乳腺癌细胞增殖的影响;TUNEL染色及流式细胞术探测灵芝多糖对乳腺癌细胞凋亡的影响;采用流式细胞术检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;检测细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平;采用qRT-PCR技术检测抗氧化相关基因谷氨酸-半胱氨酸连接酶调节亚基（glutamate-cysteine ligase regulatory subunit,GCLM）、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基（glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLC）、人硫氧还蛋白还原酶1（human thioredoxin reductase 1,TXNRD1）、苹果酸酶1（malic enzyme 1,ME1）、硫氧还蛋白（thioredoxin,TXN）mRNA表达;采用Western blotting检测GCLM、TXNRD1蛋白表达。结果 给予灵芝多糖干预后,MCF-7、MDA-MB-231细胞活性明显降低（P＜0.01）,凋亡率显著升高（P＜0.05、0.01）,细胞内ROS水平显著升高（P＜0.05、0.01）,GSH水平明显下降（P＜0.01）;抗氧化因子mRNA及蛋白表达水平显著下调（P＜0.05、0.01）。结论灵芝多糖能够通过抑制GCLM等抗氧化基因表达诱导ROS生成,促进乳腺癌细胞凋亡,进而抑制乳腺癌恶性进展。     

比较蛋白质组学揭示茉莉酸甲酯诱导的雷公藤甲素生物合成

目的 探索雷公藤甲素生物合成途径,以提高其产量或用于合成生物学异源生产。方法 使用无标记（lable-free）比较蛋白质组学对茉莉酸甲酯（MeJA）诱导的雷公藤悬浮细胞进行测序,通过京都基因与基因组百科全书（KEGG）、基因本体（GO）分析等方法,结合基因转录表达分析和基因体内功能研究,逐步筛选参与雷公藤甲素生物合成的功能基因。结果 MeJA诱导不同时间的样品组鉴定得到376个差异蛋白质,包括8个细胞色素P450酶（CYP450）、3个转录因子（TF）和2-氧戊二酸依赖的双加氧酶（2ODD）。其中CYP71BE89、CYP82AQ2和Tw2ODD基因在MeJA诱导及植物不同组织部位中,均与已知参与雷公藤甲素母核环化的二萜合酶TwTPS7(v2) 和TwTPS27(v2) 基因具有相似的表达模式,表明其可能与雷公藤甲素生物合成相关。进一步利用植物细胞体内功能研究,验证了CYP71BE89、CYP82AQ2和Tw2ODD基因干扰使雷公藤甲素积累分别降低了24.1%、41.4%和71.4%,表明了3个基因与雷公藤甲素生物合成直接相关。结论 利用比较蛋白质组学技术揭示了几种与雷公藤甲素生物合成相关的蛋白,进一步表征了雷公藤甲素生物合成与外源激素刺激之间的关系,并为发掘中药活性成分生物合成途径提供了一种有效方法。     

基于血热证小鼠模型紫草素清热凉血与血液氧化还原稳态调控的研究

目的 探究紫草素（SK）对活性酵母诱导的血热证小鼠模型的清热凉血作用与血液氧化还原稳态调控的关系。方法 小鼠随机分为对照组、模型组、SK（10 mg/kg）组、阿司匹林（Asp,200 mg/kg）组、L-丁硫氨酸亚砜亚胺（BSO,600 mg/kg）组、N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC,400 mg/kg）组、BSO联合SK组、NAC联合SK组。小鼠颈背部sc 0.2 g/mL活性酵母提取物（10 mL/kg）,造模0.5 h后ip SK,造模8 h后ig Asp,于实验开始前ip BSO、NAC,2次/d,连续1周。考察小鼠肛温（t_R）、基本活动、代谢、凝血、血细胞计数等指标,采用OPA荧光法测定小鼠血清中还原型谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）水平。结果 与对照组相比,模型组小鼠造模4 h后t_R显著升高（P<0.05）,10 h达到（38.07±0.11）℃;小鼠出现烦躁、口唇色红、喜饮、碳末推进率降低、粪便含水量降低、凝血时间延长现象（P<0.05）;肺组织红细胞、炎性细胞浸润;血清LPO、MDA水平显著升高、SOD活性降低、GSH/GSSG比率减小（P<0.05）。与模型组相比,SK组小鼠t_R显著降低,10 h达到（37.51±0.12）℃;各指标均得到显著改善;血清LPO、MDA水平降低、SOD活性升高、GSH/GSSG比率增大（P<0.05）。BSO组可降低血清GSH/GSSG比率（P<0.05）,减弱SK对血热证小鼠的治疗作用;NAC组可增加血清GSH水平,增加GSH/GSSG比率（P<0.05）,增强SK对血热证小鼠的治疗效果。结论 SK通过调控血液氧化还原稳态,缓解血热证小鼠高热、出血瘀血、血液氧化损伤,从而发挥清热凉血作用。     

Extract of Naotaifang,a compound Chinese herbal medicine,protects neuron ferroptosis induced by acute cerebral ischemia in rats

ObjectiveOur previous research showed that Naotaifang (a compound traditional Chinese herbal medicine) extract (NTE) has clinically beneficial effects on neurological improvement of patients with acute cerebral ischemia. In this study, we investigated whether NTE protected acute brain injury in rats and whether its effects on ferroptosis could be linked to the dysfunction of glutathione peroxidase 4 (GPX4) and iron metabolism.MethodsWe established an acute brain injury model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) in rats, in which we could observe the accumulation of iron in neurons, as detected by Perl’s staining. Using assay kits, we measured expression levels of ferroptosis biomarkers, such as iron, glutathione (GSH), reactive oxygen species (ROS) and malonaldehyde (MDA); further the expression levels of transferrin receptor 1 (TFR1), divalent metal transporter 1 (DMT1), solute carrier family 7 member 11 (SLC7A11) and GPX4 were determined using immunohistochemical analysis, real-time quantitative polymerase chain reaction and Western blot assays.ResultsWe found that treatment with NTE reduced the expression levels of TFR1 and DMT1, reduced ROS, MDA and iron accumulation and reduced neurobehavioral scores, relative to untreated MCAO rats. Treatment with NTE increased the expression levels of SLC7A11, GPX4 and GSH, and the number of Nissl bodies in the MCAO rats.ConclusionTaken together, our data suggest that acute cerebral ischemia induces neuronal ferroptosis and the effects of treating MCAO rats with NTE involved inhibition of ferroptosis through the TFR1/DMT1 and SCL7A11/GPX4 pathways.     

基于PERK/Nrf2信号通路研究山豆根提取物诱导鼻咽癌细胞铁死亡作用机制

目的 基于蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)/核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)通路探究山豆根提取物(Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma extract,TSRE)诱导鼻咽癌细胞铁死亡作用机制。方法 为研究TSRE对鼻咽癌CNE1细胞的抑制作用,设置对照组和TSRE低、中、高剂量(100、200、400 mg/L)组;为研究铁死亡在TSRE致CNE1细胞增殖抑制中的作用以及PERK/Nrf2信号通路对铁死亡的影响,TSRE处理过程中分别用铁死亡抑制剂Fer-1、PERK抑制剂GSK2606414、Nrf2 siRNA进行干预。MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞周期;荧光探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)和脂质过氧化水平;比色法检测铁离子和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;Western blotting检...     

基于"异类相制"的雷公藤复方对小鼠精母细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨雷公藤复方单体成分对小鼠精母细胞凋亡及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法:建立体外培养小鼠精母细胞体系,实验分为空白组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+梓醇3 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+三七总皂苷12 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+草酸铵1.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+青藤碱0.75 mg·L~(-1)组。流式细胞仪测定药物作用24 h后精母细胞凋亡率,Western blot测定精母细胞Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达情况。结果:梓醇、三七总皂苷可减轻雷公藤甲素对小鼠精母细胞凋亡的诱导作用,与雷公藤甲素比较有明显差异(P0.05),草酸铵和青藤碱组与雷公藤甲素组相比无明显差异;雷公藤甲素促使Bax,Caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,与正常比较差异显著(P0.01),雷公藤甲素配伍梓醇、三七总皂苷后Bax,Caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,与雷公藤甲素比较较有明显差异(P0.05)。而配伍草酸铵及青藤碱则差异不明显。结论:雷公藤甲素可引起精母细胞凋亡,并通过Bax/Bcl-2,Caspase-3系统启动精母细胞凋亡。而雷公藤复方组成中其他药物组分可不同程度抑制雷公藤甲素引起的精母细胞凋亡,减轻其雄性生殖毒性。     

黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠氧化应激及铁死亡相关指标GSH-Px4，P53，SLC7A11的影响

目的:探讨黄芩汤治疗溃疡性结肠炎(UC)的可能作用机制。方法:采用葡聚糖硫酸钠进行造模,实验分正常组,模型组,黄芩汤低、中、高剂量组(4.55,9.1,18.2 g·kg^-1)5个组。造模同时给予灌胃给药,连续7 d,第8天实验结束时采集标本测量结肠长度、质量,计算结肠质量指数,苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化,生化试剂检测小鼠血清铁离子,超氧化物歧化酶(SOD),还原型谷胱甘肽(GSH),过氧化氢酶(CAT),髓过氧化物酶(MPO)等含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠中长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4),谷胱甘肽过氧化物酶4(GSH-Px4),铁蛋白重链(FTH1)蛋白的表达。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测结肠组织中肿瘤蛋白53(P53),胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清MPO,铁离子含量,ACSL4蛋白阳性表达及P53 mRNA表达均明显升高(P<0.05),血清SOD,CAT,GSH含量,GSH-Px4,FTH1蛋白表达及SLC7A11 mRNA表达均显著降低(P<0.01);与模型组比较,黄芩汤干预后,小鼠血清MPO,铁离子含量,ACSL4蛋白阳性表达及P53 mRNA表达均明显降低,血清SOD,CAT,GSH水平,GSH-Px4,FTH1蛋白表达及SLC7A11 mRNA表达均明显升高,且以高剂量组差异明显(P<0.05,P<0.01)。小鼠一般状态、结肠长度、肠重指数及HE染色结果表明,黄芩汤可在不同程度上改善小鼠临床症状及病理组织学变化。结论:以上结果表明黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠有治疗作用,其作用机制可能与抑制氧化应激及细胞铁死亡相关。     

基于代谢组学的灯盏花素抗阿霉素心脏毒性作用机制研究

目的 通过体内外实验研究灯盏花素对阿霉素诱导心脏毒性的保护作用及机制。方法 体内实验中,将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、右雷佐生(12 mg/kg)组和灯盏花素低、中、高剂量(4、8、16 mg/kg)组,给予药物干预3周后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠心肌组织的病理变化;采用ELISA法检测各组小鼠血浆N端B型利钠肽前体(amino-terminal pro-B-type natriuretic peptide,NT-proBNP)水平;采用超高效液相色谱/四极杆飞行时间质谱(UHPLC/Q-TOF MS)研究其代谢途径和主要代谢产物。体外实验中,将大鼠心肌细胞H9c2随机分为对照组、阿霉素组、右雷佐生组和灯盏花素组,给予药物处理后,检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,观察H9c2细胞抗氧化能力;采用TUNEL及Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡情况;采用Western blotting法检测H9c2细胞核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related ...     

人参糖蛋白对阿霉素所致心肌毒性的保护作用及其机制研究

目的通过体内外实验,探讨人参糖蛋白对阿霉素心脏毒性的保护作用及机制。方法建立SD大鼠心肌损伤模型,给予人参糖蛋白进行干预后,检测血清中乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)、肌酸激酶同工酶MB(creatinekinase isoenzymes-MB,CK-MB)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠心肌组织病理变化。建立心肌细胞H9c2损伤模型,采用CCK-8法检测H9c2细胞活力;通过流式细胞术检测H9c2细胞周期、细胞凋亡、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体膜电位变化;采用Western blotting法检测H9c2细胞凋亡相关蛋白、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路相关蛋白、沉默信息调节因子2相关酶类3(silent mating type information regulation 2 homolog 3,Sirt3)的表达情况。结果心肌损伤大鼠模型中,模型组大鼠心肌纤维排列紊乱,肌纤维严重变性,LDH和CK-MB活性显著升高(P0.01),SOD活性和GSH水平显著降低(P0.05、0.01);与模型组比较,人参糖蛋白高剂量组心肌肌束排列较为整齐,LDH和CK-MB活性显著下降(P0.05),GSH水平显著升高(P0.05),人参糖蛋白对阿霉素所致的心肌组织病理学损伤有明显修复作用。细胞损伤模型中,模型组细胞存活率显著下降(P0.001),细胞周期阻滞于G1期(P0.01),细胞凋亡显著升高(P0.01),ROS水平显著升高(P0.01),线粒体膜电位显著下降(P0.01),Sirt3、Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P0.01),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p38、细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)蛋白表达水平显著升高(P0.05、0.01);与模型组比较,人参糖蛋白组细胞存活率显著升高(P0.05、0.01),细胞增殖周期恢复,细胞凋亡率显著降低(P0.05),ROS水平显著降低(P0.05),线粒体膜电位显著升高(P0.05),Sirt3、Caspase-3、Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05),Bax、Cyt C、JNK、p38、ERK1/2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论人参糖蛋白能够通过抗氧化应激、降低线粒体膜电位、提高H9c2细胞内ROS水平并调控MAPK信号通路抑制细胞凋亡,从而保护阿霉素诱导的心肌损伤。     

雷公藤甲素经皮给药制剂的研究与筛选

目的 为降低雷公藤甲素经皮给药刺激性、提高经皮渗透性,筛选雷公藤甲素经皮给药载体,为雷公藤甲素经皮给药新型给药系统的开发奠定基础。方法 制备雷公藤甲素立方液晶、醇质体、胶束、凝胶等制剂,采用动态透析释药法考察雷公藤甲素不同剂型的体外释药特性;采用改良的Franz扩散池法考察雷公藤甲素不同剂型体外经皮渗透性能;通过皮肤刺激性实验评价雷公藤甲素不同剂型皮肤刺激性减毒效果。结果 雷公藤甲素立方液晶、醇质体、胶束、凝胶8 h累积释放度分别为（51.40±1.19）%、（100.67±1.37）%、（89.25±4.27）%、（42.61±4.27）%,24 h累积渗透量分别为（0.46±0.02）、（0.48±0.04）、（0.44±0.03）、（0.27±0.02）mg/cm2。皮肤刺激性结果表明,雷公藤甲素立方液晶、醇质体、胶束均呈轻度刺激性,而凝胶为中等刺激性。结论 雷公藤甲素不同剂型有着不同特性,相较醇质体、胶束、凝胶而言,雷公藤甲素立方液晶有良好的缓控释作用和经皮渗透效果,同时能显著降低雷公藤甲素的皮肤刺激性,是雷公藤甲素经皮给药最佳剂型。     

萱草花总黄酮对小鼠急性酒精性肝损伤保护作用及机制探讨

目的:观察萱草花总黄酮对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:60只小鼠随机分为正常组、模型组、联苯双酯组和萱草花总黄酮低、中、高剂量组。采用一次性灌胃乙醇的方法建立急性酒精性肝损伤模型。观察萱草花总黄酮对各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性以及肝组织超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)以及还原型谷胱甘肽(GSH)水平的影响,并观察肝组织病理改变;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肝细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果:与模型组比较,萱草花总黄酮可明显降低血清ALT,AST活性(P0.05);降低肝组织中MDA含量,提高SOD,GPX,GSH活性(P0.05,P0.01)。病理学检查可见,与模型组比较,萱草花总黄酮中、高剂量组可明显减轻肝细胞变性和坏死的程度,改善肝组织的病理学改变。Western blot结果可见萱草花总黄酮组Bcl-2蛋白表达增加(P0.05,P0.01);Bax蛋白表达减少,Bax/Bcl-2降低(P0.05,P0.01)。结论:萱草花总黄酮对乙醇所致小鼠急性酒精性肝损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用及调节凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax的表达有一定关联。