金匮肾气丸对雄激素部分缺乏大鼠血清睾酮及StAR蛋白mRNA表达的影响

目的 探讨金匮肾气丸对雄激素部分缺乏模型大鼠血清睾酮及StAR蛋白mRNA表达的影响.方法 将40只SD大鼠采用腹腔注射环磷酰胺(20mg/kg·d-1)复制模型后,随机分为4组,即模型组、金匮肾气丸高、中、低剂量组,每组各10只,分别采用蒸馏水及金匮肾气丸水溶液高、中、低剂量灌胃,治疗28d后,观察血清睾酮及睾丸StAR蛋白mRNA表达.结果 与模型组(98.33±8.36)ng/dl比较,金匮肾气丸高剂量组(301.17:1:46.90)ng/dl、中剂量组(21.5.46±26.73)ng/dl血清睾酮显著性升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);金匮.肾气丸高剂量组(11.08±1.45)、中剂量(10.47±1.26)、低剂量组(7.30±1.08)之间睾丸StAR蛋白mRNA表达水平分别与模型组(4.87±0.95)比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 金匮肾气丸可提高雄激素部分缺乏大鼠血清睾酮水平,其机制可能是通过提高睾丸StAR蛋白mRNA表达水平实现.     

金匮肾气丸对雄激素部分缺乏大鼠血清睾酮及Leydig细胞的影响

目的:探讨金匮肾气丸对雄激素部分缺乏模型大鼠的影响及可能作用机制.方法:50只15月龄SD大鼠随机分成5组:正常组,模型组,金匮肾气丸高、中、低剂量组.采用腹腔注射环磷酰胺20 mg/(kg·d)复制模型,金匮肾气丸连续灌胃28 d后,观察实验大鼠睾丸及附睾的湿重、血清睾酮及睾丸间质细胞变化.结果:金匮肾气丸各组可增加实验大鼠睾丸及附睾的脏器指数,提高血清睾酮水平,增加睾丸间质细胞数目.结论:金匮肾气丸治疗雄激素部分缺乏大鼠有效,其机制可能是通过提高睾酮水平,增加睾丸间质细胞数目.     

金匮肾气丸拮抗环磷酰胺对大鼠生殖毒性的实验研究

目的 探讨金匮肾气丸对腹腔注射环磷酞胺(CTX)雄性SD大鼠生殖功能的影响.方法 取15月龄雄性SD大鼠40只,随机分成模型组和金匮肾气丸高、中、低剂量治疗组,每组均10只,每组大鼠均给予腹腔注射环磷酰胺混悬液(1ml/kg·d-1,qd)连续5d.模型组以蒸馏水灌胃,治疗组以金匮肾气丸混悬液高、中、低剂量灌胃,连续28d.末次给药24h后处死动物,测睾丸、附睾的湿重:观察精子密度、活力和活率.结果 用药后,金匮肾气丸组大鼠睾丸及附睾脏器系数与模型组相比显著提高(P＜0.01):与模型组比较,金匮肾气丸各组精子密度明显升高(P＜0.05);与模型组比较,高剂量组精子活力升高(P＜0.05),而中、低剂量组则差异无统计学意义,P＞0.05;与模型组比较,中、高剂量组精子活率明显升高(P＜0.05),其中,以高剂量组最为明显(P＜0.01),而低剂量组则差异无统计学意义.结论 金匮肾气丸可以提高环磷酞胺染毒大鼠的睾丸、附睾脏器系数,提高精子密度、活力和活率.金匮肾气丸可以有效拮抗环磷酞胺对SD大鼠的生殖毒性,保护其生殖功能.     

补肾方对自然衰老大鼠睾酮调节作用及机制研究

目的:探讨补肾方对自然衰老大鼠睾酮调节作用及机制,为临床治疗迟发性睾丸功能减退提供理论和实验依据。方法:将32只18月龄老年雄性SD大鼠随机分为4组,自然衰老模型组,补肾方低、中、高剂量组,每组8只;另选4月龄青年雄性SD大鼠8只作为正常对照。正常对照组、自然衰老模型组予生理盐水,补肾方低剂量、中剂量、高剂量组分别按生药量3.25、7.5、15.0 g/kg体重予中药复方连续灌胃,各组给药3周后处死。采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠睾丸组织形态,放免法检测大鼠血清睾酮水平,RT-PCR法检测大鼠类固醇合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素胆固醇侧链裂解酶(P450 scc)、3β-羟类固醇脱氢酶Ⅰ(3β-HSDⅠ)mRNA的相对表达。结果:睾丸组织病理切片显示补肾方干预后大鼠睾丸间质细胞数目增多,补肾方低、中、高剂量组血清睾酮水平[(6.74±1.56)、(8.50±1.99)、(12.41±2.91)nmol/L]与自然衰老模型组[(3.48±0.75)nmol/L]比较显著提高(P<0.05),睾酮合成相关酶StAR、P450 scc、3β-HSDⅠmRNA相对表达(StAR:0.74±0.29、0.83±0.32、1.35±0.50;P450 scc:0.72±0.36、1.02±0.30、1.41±0.37;3β-HSDⅠ:0.58±0.14、0.72±0.07、0.85±0.18)与自然衰老模型组(StAR:0.44±0.09;P450 scc:0.33±0.05;3β-HSDⅠ:0.34±0.02)比较均提高,其中高剂量组StAR,中、高剂量组P450 scc、3β-HSDⅠ的表达与自然衰老模型组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:改善睾丸组织衰老的病理状态,提高睾酮合成酶表达可能是补肾方调节自然衰老大鼠睾酮水平的作用机制。     

金匮肾气丸对去势大鼠骨微结构及ALP、OPG、IL-6的影响

目的研究金匮肾气丸防治骨质疏松的机制,探讨"温补肾阳,以生髓壮骨"中医理论在绝经后骨质疏松中的应用。方法采用卵巢切除法复制绝经后骨质疏松大鼠模型,随机分为模型组、金匮肾气丸高、低剂量组、雌二醇组,同时设置假手术组作为对照组,各组分别给予相应的药物灌胃。给药3月后处死取材,计算子宫系数; HE染色观察子宫的病理变化; Micro-CT检测大鼠骨密度及骨微结构的变化;全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中血糖、血脂及钙磷的变化; ELISA检测各组大鼠血清中ALP、IL-6及OPG表达的变化。结果与假手术组相比,模型组大鼠骨密度显著下降(P0.05),骨微结构破坏明显;与模型组相比,金匮肾气丸低剂量组大鼠骨密度得到了有效提高、骨微结构获得改善,血糖、血脂水平降低,血清中钙磷的含量明显提高,血清中ALP、IL-6含量降低,OPG含量升高。结论金匮肾气丸能够提高去卵巢大鼠的骨量,防治绝经后骨质疏松症,其作用机理可能与降低ALP、IL-6,提高OPG含量有关。     

金匮肾气丸对庆大霉素诱导肾损伤大鼠肾组织Notch2/hes1信号通路的影响

目的:动态观察肾气丸对Notch2/hes1通路在庆大霉素诱导肾损伤及修复过程中表达的影响。方法:72只大鼠随机分成空白组(生理盐水灌胃,6ml/kg;生理盐水腹腔注射,3ml/kg,1次/d,持继10d)、金匮肾气丸组(金匮肾气丸灌胃:0.6g·kg-1·d-1);Gen,120mg/kg(3ml/kg,1次/d,腹腔注射,持继10d)和模型组(生理盐水灌胃,6ml/kg;Gen,120mg/kg,1次/d,腹腔注射,持继10d)。应用光镜观察肾小管损伤情况;应用免疫印迹蛋白、实时定量PCR观察大鼠Notch2/hes1信号通路在造模后1、14、28d肾脏的动态表达情况。结果:肾脏病理切片显示:在第1、14天,与空白组相比,模型组、肾气丸组造成的肾脏损伤程度有所不同;在第28天,各组肾小管基本恢复正常。免疫印迹蛋白、RT-PCR显示:在第1、14天,与空白组相比,模型组和金匮肾气丸组Notch2/hes1的表达明显增高(P<0.05);在第28天,各组表达差异无统计学意义(P>0.05);在第1、14天,与模型组相比,金匮肾气丸组Notch2/hes1的表达明显减少(P<0.05);在第28天,两组表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Notch2/hes1信号通路可能是庆大霉素诱导肾损伤及修复过程中的重要角色之一,肾气丸可能通过抑制Notch2/hes1信号通路减轻肾脏损伤并促进肾小管上皮细胞修复。     

金匮肾气丸联合葡萄糖酸钙对去势大鼠骨质疏松的影响

目的观察金匮肾气丸联合葡萄糖酸钙对去卵巢大鼠骨质疏松的影响,探究其防治骨质疏松的机制。方法将75只雌性大鼠随机分成空白对照组,模型组,葡萄糖酸钙组,金匮肾气丸组,金匮肾气丸及葡萄糖酸钙联合用药组共5组,采用卵巢切除的方法制成骨质疏松动物模型,灌胃给药3个月后进行血钙,磷,骨钙含量的测定和组织病理学的观察。结果模型组与空白对照组相比,去势大鼠血清钙磷含量无明显变化,钙片组、金匮肾气丸组及联合组血钙,磷含量相比空白组也无明显差异;去势大鼠骨钙含量较正常大鼠明显降低,钙片组,金匮肾气丸,以及联合组去势大鼠骨钙含量较模型组明显改善,以联合组改善最明显(P<0.01)。组织病理学观察见:经钙片和金匮肾气丸治疗后骨皮质可见蚕食样改变区域变小,骨小梁较细,排列较为一致。联合用药组骨皮质厚度基本正常,骨小梁略变细,排列较整齐,骨小梁厚度基本正常。结论金匮肾气丸联合葡萄糖酸钙可以减少去卵巢骨质疏松大鼠骨矿物质的丢失,对骨质疏松具有较好的防治作用。     

雄蚕益肾方对雄性迟发性性腺功能减退大鼠睾丸组织生物钟基因表达的影响

目的:探讨雄蚕益肾方对雄性迟发性性腺功能减退症(LOH)大鼠睾丸组织细胞生物钟基因表达的影响。方法:48只8周龄雄性SD大鼠随机分为正常组，模型组，丙酸睾酮组，雄蚕益肾方低、中、高剂量组。模型组，丙酸睾酮组，雄蚕益肾方低、中、高剂量组大鼠腹腔注射480 mg/(kg·d)D-半乳糖(D-gal),连续注射56 d进行LOH造模，正常组大鼠每日腹腔注射相同体积生理盐水。造模成功后，雄蚕益肾方低、中、高剂量组分别给予10.4、20.8、41.6 g/(kg·d)体重剂量的雄蚕益肾方中药汤剂灌胃，每组每日均早、晚各灌胃1次；丙酸睾酮组大鼠肌注5.21 mg/(kg·d)体重剂量的丙酸睾酮，每周3次；正常组和模型组给予相同体积的蒸馏水灌胃；各组均连续操作28d。实验结束后，采血离心取上清液ELISA法检测睾酮(T)水平，取睾丸组织进行RT-qPCR、Western印迹分别检测BMAL1、NR1D1、PER2、CRY1、StAR、CYP11A1 mRNA表达量和蛋白表达水平。结果:模型组大鼠血清睾酮水平、睾丸组织BMAL1、NR1D1、PER2、CRY1、StAR、CYP11A1在mRNA表达量...     

HSD3B1(1245C)突变在前列腺癌治疗及预后中的研究进展

<正>雄激素相关信号通路的持续激活在前列腺癌的发生及进展过程中起着核心的作用^[1],雄激素合成的关键酶是产生具有生物活性雄激素双氢睾酮(Dihydrotest-osterone,DHT)的必要条件。非去势状态下I型3β羟基类固醇脱氢酶(3 beta-and steroid delta-isomerase 1,3β-HSD1)是多种雄激素前体物质,包括雄烯二酮(Androstenedione,AD)、睾酮(Testosterone,T)等合成的关键酶。     

肝络欣丸对酒精性肝纤维化动物肝功能和血清肝纤维化指标的影响

目的:研究肝络欣丸治疗肝纤维化(hepatic fibrosis HF)的效果及部分作用机制.方法:采用酒精诱导HF动物模型.68只大鼠随机分为6组:正常组,模型组,秋水仙碱阳性对照组(简称对照组)、肝络欣丸低、中、高剂量(剂量分别为2.5、5和10g/kg)治疗组.模型组和肝络欣丸治疗组造模4周后,模型组和正常组0.85%氯化钠灌胃,治疗组大鼠予肝络欣治疗,低、中、高剂量组(剂量分别为2.5、5和lOg/kg),灌胃,每日2次,对照组试验时用生理盐水配制成浓度为1.25mg/ml的混悬液使用.实验8周后结束,检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST),透明质酸(HA),层黏连蛋白(LN),Ⅳ型胶原(1V-C).结果:与正常组比较:模型组大鼠血清ALT、AST、HA、LN、Ⅳ-C水平明显升高(P<0.01);肝络欣丸低、中、高剂量治疗组与对照组均可降低血清ALT、AST水平与模型组比较均有统计学意义(P<0.01).肝络欣丸低、中、高剂量治疗组与对照组均可降低HA、LN、Ⅳ-C水平与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);肝络欣丸低剂量治疗组与模型组比较LN、HA变化无统计学意义(P>0.05).结论:肝络欣丸能有效改善酒精诱导的HF大鼠肝组织损伤程度,可以有效降低模型大鼠血清ALT、AST等酶学指标和HA、LN、Ⅳ-C肝纤维化指标的含量水平.其机制可能是通过保护肝细胞,减轻肝脏炎症,抑制星状细胞活化和胶原合成,减轻肝细胞纤维增生以及肝细胞脂肪样变,促进肝脏代谢和肝细胞再生来实现的.     

大豆黄酮对睾酮诱导的大鼠前列腺增生预防作用的实验研究

目的:探讨大豆黄酮对雄激素诱导的大鼠前列腺增生的预防作用。方法:成年雄性SD大鼠36只,随机分为Ⅰ~Ⅵ组,每组6只。Ⅰ组(正常对照组)、Ⅱ组(模型组)给予1ml生理盐水、Ⅲ~Ⅵ组(低、中、高大豆黄酮组及阳性对照组)分别给予2、20、100mg/kg大豆黄酮及0.1mg/kg己烯雌酚灌胃,1次/d,连续90d。从第91d开始,Ⅱ~Ⅵ组分别皮下注射丙酸睾酮(7.5mg/kg,1次/d,连续10d)诱导前列腺增生。观测各组大鼠前列腺湿重、前列腺指数;HE染色观察前列腺组织变化情况;免疫组化方法检测大鼠前列腺内雌激素受体α、β(ERα、ERβ)表达的变化。结果:与模型组相比,低、中、高大豆黄酮组及阳性对照组的前列腺湿重与前列腺指数均有显著降低(P<0.05或P<0.01)。中、高剂量大豆黄酮组大鼠前列腺增生减轻更明显,表现为上皮变薄,腺腔内分泌物明显减少,间质减少。ERα在模型组的表达与其余各组无明显差异;ERβ在各剂量大豆黄酮组与模型组相比明显减少。结论:大豆黄酮对睾酮诱导的前列腺增生有一定预防作用。     

邻苯二甲酸二乙基己酯对新生小鼠睾丸及Leydig细胞影响的实验研究

目的:探讨邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对新生小鼠睾丸及Leyd ig细胞形态结构及功能的影响。方法:DEHP分别以低、中、高3组剂量[100、200、500 mg/(kg.d)]灌胃作用于怀孕12 d到产后3 d(GD12~PND3)的KM母鼠,观察DEHP对新生雄性仔鼠体重、睾丸重量、Leyd ig细胞形态结构和3β-羟基类固醇脱氢酶(3-βHSD)活性、酶反应面积的影响。结果:DEHP作用于母鼠后,其雄性子代幼鼠体重和睾丸重量减轻,睾丸Leyd ig细胞形态、超微结构发生改变;高剂量组Leyd ig细胞数量明显增多;低、中剂量组睾酮合成关键酶3β-HSD酶活性下降,酶反应面积减小,但高剂量组在仔鼠出生后15 d时酶活性降低[(吸光度值(0.154±0.011)vs空白对照组(0.222±0.013),P<0.01],而酶反应面积增大[(6 303.0±745.6)μm2vs空白对照组(5 091.4±214.4)μm2,P<0.01)]。结论:DEHP能影响新生雄性小鼠体重、睾丸重量、Leyd ig细胞的形态结构和3β-HSD活性,具有抗雄激素效应。     

小金丸对前列腺炎性疼痛大鼠前列腺组织COX-2表达的影响

目的:观察环氧合酶2(COX-2)在前列腺炎性疼痛大鼠前列腺组织中的表达变化,探讨小金丸治疗前列腺炎性疼痛可能的作用机制。方法:60只雄性Wistar大鼠,随机取10只用作空白组,与其前列腺腹叶注入无菌注射用水,其余50只注射弗氏完全佐剂(CFA)制备前列腺炎性疼痛模型,术毕3d后,随机分为模型组、塞来昔布胶囊组、小金丸高、中、低剂量组,每组10只。空白组与模型组给予蒸馏水0.1g/(kg·d),塞来昔布胶囊组给予塞来昔布胶囊0.1g/(kg·d),小金丸高、中、低剂量组给予小金丸0.8、0.4、0.2g/(kg·d),以灌胃为给药形式,各级药物灌胃前皆配制为混悬液。各组大鼠灌胃均1次/d,连续给药4周后,断颈处死大鼠,无菌条件下摘除前列腺,10%中性甲醛液固定。免疫组化法并结合图形图像分析系统检测前列腺组织COX-2表达的变化。结果:模型组大鼠前列腺组织COX-2呈强表达,小金丸高、中剂量组及对照组较模型组COX-2表达明显降低(P<0.01),小金丸高剂量组COX-2表达较中、低剂量组降低(P<0.01)。结论:小金丸可抑制前列腺炎性疼痛大鼠前列腺组织COX-2的表达,并可能通过此抑制作用而达到缓解疼痛的目的。     

大鼠睾丸间质细胞体外培养不同时间3β-羟基类固醇脱氢酶的表达

目的探讨通过差速贴壁法获得的7天龄、3周龄大鼠睾丸间质内细胞的细胞群体构成、体外培养不同时间3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）的表达水平变化,以及细胞睾酮分泌功能变化。方法联合应用胶原酶消化、不锈钢滤网过滤及差速贴壁法获得7天龄、3周龄雄性Wistar大鼠睾丸间质组织内细胞,贴壁细胞以DMEM/F12培养液培养,分别对原代培养2h、4d细胞进行3β-HSD免疫化学染色及流式细胞分析,原代培养细胞同时给予人绒毛膜促性腺激素（HCG）刺激,测定HCG刺激组和非刺激组各代细胞培养液上清中睾酮水平及其对HCG刺激的反应。结果7天龄、3周龄鼠差速贴壁法获得的睾丸间质内细胞群经流式细胞鉴定,3β-HSD阳性细胞所占比例分别为（5.4±1.2）%、（59.2±3.2）%;培养4d后,两组3β-HSD阳性细胞比例分别为（93.6±1.2）%、（95.4±3.2）%。两组原代培养细胞均有睾酮生成功能,在HCG刺激下睾酮分泌均明显上升,7天龄组培养细胞睾酮分泌高峰迟于3周龄组。结论差速贴壁法获得的7天龄、3周龄大鼠睾丸间质细胞群中均含有部分Leydig干细胞（Stem Leydig cells,SLCs）,SLCs在体外培养过程中逐渐分化,表达3β-羟基类固醇脱氢酶,并产生睾酮。     

IgA大鼠肾组织中TGF-β_1的表达与肾损害关联性研究

目的:检测IgA肾病大鼠血清尿液中转化生长因子-β_1(transforming growth factor beta-1,TGF-β_1)的含量和肾组织中TGF-β_1表达水平,探讨TGF-β_1体内表达与肾损害程度的关联性。方法:将60只SD大鼠随机分为3组,每组20只,以牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)灌胃剂量不同分为正常对照组,低剂量组(400 mg/kg),高剂量组(600 mg/kg),各组接受相应的建模干预处理。建模后第8周、12周每组各处死10只大鼠,留取血、尿、肾组织标本检测。酶联免疫吸附法(ELISA)测血清尿液TGF-β_1的含量,免疫组织化学法测TGF-β_1在各组肾组织中的表达。结果:第8、12周时,高剂量组尿液中TGF-β_1的含量和肾组织中MPC-1表达明显高于低剂量组(P0.05),高剂量组血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白定量明显高于低剂量组,高剂量组间质损害的评分高于低剂量组。三组间血清TGF-β_1的含量差异无统计学意义(P0.05)。结论:高剂量BSA灌胃可增加IgA肾病大鼠尿液TGF-β_1含量和肾组织中表达,随着尿液TGF-β_1含量和肾组织中TGF-β_1表达水平的增加,肾脏损害程度加重,提示TGF-β_1可作为肾脏损害检测指标。     

DEHP对宫内仔鼠睾酮水平、IGF-1和 StAR mRNA表达的影响

目的 探讨不同剂量的邻苯二甲酸二(乙基)己酯(DEHP)对宫内期仔鼠睾酮水平及胰岛素样生长因子1(IGF-1)、类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)基因表达的影响.方法 雌性S-D大鼠24只,随机均分为4组:正常组、低剂量组、中剂量组和高剂量组.后三组给予不同剂量的DEHP灌胃,剂量分别为(10mg/kg·d-1)、(100mg/kg·d-1)、和(750mg/kg·d-1),时间自雌鼠怀孕后第一天开始至仔鼠出生后第一天止.正常组给予等剂量的玉米油.测量各组雄仔出生时肛门生殖器距离(AGD)和血清睾酮(T)水平;并用光镜和电镜观察仔鼠睾丸Leydig细胞形态学改变;Real-timePCR检测睾丸组织中IGF-1和StARmRNA表达水平.结果 与正常组比较,高剂量组AGD明显缩短,中剂量组AGD呈下降趋势;低剂量组T水平升高、中高剂量组T水平降低;低、中、高剂量组StARmRNA表达下降;低剂量组IGF-1mRNA表达升高,中、高剂量组表达下降.光镜下见随着剂量的升高,睾丸Leydig细胞聚集越明显,高剂量组Leydig细胞呈瘤样聚集;电镜下见低剂量组Leydig细胞线粒体和滑面内质网增多,中、高剂量组均减少,并见脂滴增加.结论 DEHP可以影响富内仔鼠睾酮的合成,不同剂量具有不同的效应,其机制可能与DEHP影响IGF-1和StARmRNA表达有关.     

GnRH通过ERK途径来调控大鼠睾丸间质细胞类固醇激素的合成

GnRH是由下丘脑神经元分泌,且在脊椎动物生殖功能中非常的必要。GnRH还被发现存在于脑以外的组织中,在睾丸间质细胞的炎阎醇激素合成过程中发挥了重要的作用。然而,信号通路对其的调节作用仍然不清楚。本研究我们主要检测MAPK信号通路是否参与GnRH激动剂（GnRHa）诱导的雄激素的合成。我们建立了间质细胞的原代培养的方法。不同浓度GnRHa刺激间质细胞不同时间后3D—HSD和苇酮的量通过RT-PCR,Westernblot和RIA测定。在MAPK抑制剂PD-98059存在或不存在的情况下,我们也通过Westernblot的方法检测GnRHa对ERK1／2,JNK和p38的作用。结果显示GnRHa诱导睾酮的合成并且上调3β-HSDmRNA水平以及蛋A水平,同时也激活了ERK1／2水平,但是对JNK和p38的活化没有作用。虽然GnRHa最佳的浓度是100nmnol L-1,最佳时间是24h,但是GnRHa~]激细胞5min后ERK1／2活化作用达到最高水平,60min之内恢复到本地水平。而PD-98059则能完全阻滞ERKl／2活化,3β-HSD的上调以及睾酮合成。我们的数据显示GnRH通过ERK途径来调控大鼠睾丸间质细胞雄性激素的合成。GnRH对ERK1／2的活化诱导了3β—HSD基因和蛋白的表达,最终调节大鼠间质细胞类固醇激素的合成。     

大鼠睾丸Leydig细胞的培养和鉴定

目的:研究体外培养大鼠睾丸Leyd ig细胞的有效方法。方法:原代培养大鼠睾丸Leyd ig细胞,用4 U/m l人绒毛膜促性腺激素(hCG)作用细胞,对照组未用hCG,放射免疫法测定培养液中睾酮浓度,3β羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)免疫组化染色观察睾丸Leyd ig细胞形态和生物学特性。结果:培养细胞成分均一、增殖旺盛、分化率高。接种72 h后大鼠睾丸Leyd ig细胞纯度达95%。接种后24 h内,hCG刺激组较对照组睾酮分泌量明显提高(P<0.05)。结论:体外培养的睾丸Leyd ig细胞可分泌高浓度的睾酮;睾丸Leyd ig细胞的纯化和培养方法的建立,可为中老年男性雄激素部分缺乏综合征睾酮替代治疗的基础和临床研究提供一条可行的思路。     

养阴活血方药对环孢素A慢性肾毒性的影响

目的:探讨养阴活血方药对环孢素A(CsA)慢性肾毒性的治疗作用.方法:将40只SD大鼠随机分为高剂量组、低剂量组、对照组、空白组,采用钠耗竭法建立CsA慢性肾毒性大鼠模型,分别以20倍成人剂量养阴活血方药、5倍成人剂量养阴活血方药、10倍成人剂量依那普利及自来水灌胃4周,分别于第1、2、3、4周末检测24 h尿蛋白定量、血肌酐、肌酐清除率;光镜观察大鼠肾脏病理,免疫组化法测定TGF-β1、FN、Ⅳ型胶原,采用RT-PCR技术测定中药对肾间质TGF-βmRNA表达的影响并对各组结果进行比较.结果:空白组24 h尿蛋白定量4周后稍有上升,但无统计学差异(P＞0.05).对照组治疗后24 h尿蛋白定量呈显著性下降(P＜0.05).低剂量组治疗后24 h尿蛋白定量亦呈下降趋势(P＜0.05).高剂量组治疗4周后24 h尿蛋白定量降低较低剂量组明显,但无统计学差异(P＞0.05);空白组治疗后血肌酐值呈上升趋势但无统计学差异(P＞0.05);对照组及高、低剂量组治疗后第4周血肌酐值较第1周有明显下降,均有统计学差异(P＜0.05).对照组及高、低剂量组与空白组治疗后有统计学差异(P＜0.01).空白组治疗后肌酐清除率无明显变化(P＞0.05),对照组及高、低剂量组治疗后肌酐清除率呈上升趋势,无统计学差异(P＞0.05).各组经治疗4周后大鼠肾皮、髓质交界区可见肾小管上皮细胞空泡变性,部分小管上皮细胞萎缩及轻度的间质纤维化,淋巴或单核细胞浸润.空白组明显,对照组及中药高、低剂量组改变有不同程度减轻,以高剂量组肾间质空泡变性改善明显.各实验组肾间质均表达TGF-β1、FN、Ⅳ型胶原,其中空白组上述成分的表达遍布皮髓质肾小管,灌喂依那普利及中药后表达程度减轻,而以中药高剂量组减轻更为明显.各组肾间质均表达不同程度的TGF-β1 mRNA,其表达的丰富程度按空白组、对照组、低剂量组和高剂量组依次减弱.结论:养阴活血方药可减少CsA慢性肾毒性大鼠蛋白尿、改善肾脏功能,且对蛋白尿的治疗作用呈剂量依赖性.养阴活血方药抗纤维化的作用可能与其下调CsA诱导的肾间质TGF-β1 mRNA的表达,从而阻断TGF-β导致的间质ECM成分的合成有关.     

金匮肾气丸对环磷酰胺所致睾丸损伤小鼠睾丸组织Nrf2信号通路基因表达的影响

目的:探究金匮肾气丸对环磷酰胺致小鼠睾丸损伤保护作用及其抗氧化机制。方法:将30只雄性小鼠均分为空白组、模型组和金匮肾气丸治疗组。治疗组小鼠给予1.2 g/kg体重剂量的金匮肾气丸进行灌胃,空白组和模型组小鼠给予相同体积的生理盐水灌胃,每天1次;在治疗的第7天,模型组和治疗组小鼠给予50 mg/kg体重剂量环磷酰胺进行腹腔注射,每周1次,连续用药35 d。实验结束后对所有小鼠称重(体重和睾丸重量)并采集血液进行睾酮含量检测,取附睾头用于精子质量检测,取睾丸进行组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),病理组织学及核因子E2相关因子2 (Nrf2)信号通路相关基因PCR检测。结果:实验结束时,模型组小鼠体重[(34.63±1.92) g vs(48.32±1.64) g]、睾丸质量[(80.0±3.9) mg vs(140.0±6.1) mg]、睾丸脏器系数[(0.22±0.01)%vs(0.31±0.03)%]、精子活率[(48.66±8.08)%vs(89.33±4.04)%]、精子浓度[(28.42±5.26)×10~6/ml vs(77.67±8.73)×10~6/ml]、SOD [(140.82±10.08) U/mg prot vs(358.52±40.41) U/mg prot]和血清睾酮[(8.75±0.96) pg/ml vs(21.75±1.71) pg/ml]水平较空白组显著降低(P<0.05),畸形精子百分率[(37.33±2.08)vs(15.33±1.53)%]和MDA[(54.89±6.09) nmol/ng prot vs(30.21±2.17) nmol/ng prot]水平显著升高(P<0.05);金匮肾气丸治疗组小鼠体重[(39.80±2.89) g vs(34.63±1.92) g]、睾丸质量[(130.00±11.00) mg vs(80.00±3.90) mg]、睾丸脏器系数[(0.28±0.01)%vs(0.22±0.01)%]、精子活率[(76.00±5.29)%vs(48.66±8.08)%]、精子浓度[(56.08±4.29)×10~6/ml vs(28.42±5.26)×10~6/ml]、SOD[(206.59±16.38) U/mg prot vs(140.82±10.08) U/mg prot]和血清睾酮[(15.50±1.29) pg/ml vs(8.75±0.96) pg/ml]水平较模型组显著升高(P<0.05),畸形精子百分率[(25.01±2.99)%vs(37.33±2.08)%]和MDA[(35.84±3.61) nmol/ng prot vs(54.89±6.09) nmol/ng prot]水平显著降低(P<0.05)。模型组依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶1(NOQ-1)、Nrf2、血红素氧合酶1(HO-1)mRNA的表达水平较空白组显著降低(P<0.05),半胱天冬酶3(Caspase 3)mRNA表达水平显著升高(P<0.05);金匮肾气丸治疗组小鼠Nrf2和HO-1 mRNA的表达水平较模型组显著升高(P<0.05),Caspase 3 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。病理组织学结果发现,模型组小鼠生精小管管腔内各级生精细胞层数减少,部分生精小管细胞完全脱落,精子数量减少;治疗组小鼠生精小管恢复趋于正常。结论:金匮肾气丸可有效抑制环磷酰胺造成的睾丸损伤,其机制可能与金匮肾气丸能调控Nrf2信号通路基因表达,增强抗氧化酶的活性有关。