食品中单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法研究

[目的 ]　建立一种快速准确检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法。　 [方法 ]　以miniVIDAS仪结合API系统 ,将该法与传统方法进行比较。　 [结果 ]　该方法能检出 <10个 /mL模拟样品中的单核细胞增生李斯特氏菌 ,与食品中常见的细菌无交叉反应 ,能对非单核细胞增生李斯特氏菌作出正确鉴定。在 4天内能作完全鉴定结果。对 2 2 6份实样的检测 ,检出率为 11.5 %。　 [结论 ]　以miniVIDAS仪结合API系统建立的方法具有特异性好、灵敏度高、快速简便的特点 ,是一种较好的检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法     

全自动微生物磁珠分选系统检测单核细胞增生李斯特菌效果研究

目的:研究全自动微生物磁珠分选系统对食品中单增李斯特氏菌的检测效果。方法:取400份自然样品,用磁珠分选系统和国标法对样品进行对比检测。结果:全自动微生物磁珠分选系统相较国标法对自然样品中单核细胞增生李斯特氏菌阳性检出率有一定程度提高。结论:全自动微生物磁珠分选系统简单易用,标准化程度高,可以和国标检测方法相结合以提高单增李斯特氏菌的检出率。     

单核细胞增生李斯特菌PCR鉴定技术的研究

目的建立单核细胞增生李斯特菌PCR鉴定技术.方法选择Hly Inl基因设计扩展片段分别为300～400bp、600～700bp的二对特异性引物,进行PCR扩增.结果单增李斯特菌标准菌株及本实验室分离保存的单增李斯特菌均扩增出两条明显条带,其它食品中常见致病菌及非单核细胞增生李斯特菌均不见扩增条带.52株李斯特菌生化符合菌中,有30株菌同时扩增出两条明显条带,与Mini-VIDSA测定法比较,两者符合率达92.31%.结论本实验建立的PCR鉴定技术为一种简便、快速、敏感、特异的单增李斯特菌鉴定方法.     

深圳市东门菜肉市场单核细胞增生李斯特氏菌污染状况分析

目的通过对深圳市东门菜肉市场单核细胞增生李斯特氏菌污染状况的调查,加大对冷藏食品中威胁人类健康单核细胞增生李斯特氏菌的重视。方法根据中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验总则单核细胞增生李斯特氏菌检验(GB4789.30-2003)、荧光PCR法。结果对所采的50份样品用国标方法和荧光PCR法均检出3株单核细胞增生李斯特氏菌。结论深圳市东门菜肉市场存在着单核细胞增生李斯特氏菌污染,本次调查的污染率为6%,建议管理部门和卫生部门加大卫生监督力度,预防单核细胞增生李斯特氏菌食物中毒的发生。     

荧光免疫吸附法定量检测单核细胞增生李斯特菌

目的研制荧光免疫吸附法定量检测单核细胞增生李斯特菌。方法采用双抗夹心免疫吸附法筛选7株抗单核细胞增生李斯特菌的单克隆抗体,获得最佳配对抗体10E7H6和10A11。以生物素化的10A11为检测抗体,10E7H6为捕获抗体,建立了基于链霉亲和素标记荧光微球为检测探针的荧光免疫吸附法检测单核细胞增生李斯特菌。结果该方法中最佳捕获抗体浓度为10μg/mL,最佳检测抗体浓度为5μg/mL,反应最佳pH为7.4;在该条件下,单核细胞增生李斯特菌最低检测限为10~5 CFU/mL,比传统酶联免疫吸附法提高了两个数量级;与李斯特菌属内其他几种主要李斯特菌有一定的交叉反应,与其他非李斯特菌属的主要致病菌无显著交叉反应。结论该方法可用于纯培养液中单核细胞增生李斯特菌的检测,也可用于李斯特菌属内其他几种主要李斯特菌的免疫学快速筛查检测。     

RT-PCR方法检测单核细胞增生李斯特活菌研究

目的:建立单核细胞增生李斯特活菌快速检测技术,解决PCR带来的假阳性问题。方法:采用以mRNA为基础的RT-PCR方法对单核细胞增生李斯特氏菌的hlyA基因进行检测,设计引物,扩增,并作了特异性和灵敏度比较。结果:该引物能较好地扩增单核细胞增生李斯特菌的特异性片断,而对其它的李斯特菌以及常见食源性致病菌无特异性扩增条带;检测的灵敏度纯菌可达到1×104cfu/m l,人工污染样品猪肉、虾肉和牛奶等培养12~16 h,可达4.5 cfu/m l(g)。结论:可以应用该方法对样品中单核细胞增生李斯特活菌进行检测,能较好地解决PCR检测所带来的假阳性问题。     

丹东口岸进口水产品中单核细胞增生性李斯特菌检验结果分析

[目的]通过对丹东口岸进口水产品进行单核细胞增生性李斯特菌检验结果的分析，更好地了解该口岸进口水产品中单核细胞增生性李斯特菌的分布情况，以便有针对性地开展微生物的检验工作。[方法]对2004年经丹东口岸进口的水产品共746批样品的单核细胞增生性李斯特菌的检验结果进行统计分析。[结果]共检出单核细胞增生性李斯特菌21株，总检出率2．8％，以活的水产品检出率最高，为38．9％。[结论]朝鲜海岸很可能已被单核细胞增生性李斯特菌污染，应加强对从朝鲜进VI的水产品中的单核细胞增生性李斯特菌的检测，并对从朝鲜入境人员进行李斯特菌病的监测。     

3种方法鉴定单核细胞增生李斯特菌比较

[目的]采用分子生物学方法(accuprobe和PCR)对传统方法经ATB鉴定为单核细胞增生李斯特菌和疑为单核细胞增生李斯特菌的菌株进行鉴定比较,建立灵敏,快速,可靠的鉴定方法。[方法]对经传统方法结合ATB鉴定分离的菌株(单核细胞增生李斯特菌)分别采用accuprobe和PCR试剂盒进行鉴定比较。[结果]对10株经传统方法结合ATB鉴定的Lm菌(包括疑似Lm菌)经PCR鉴定,3株为阳性,7株为阴性,与accuprobe法鉴定结果一致。[结论]分子生物学方法检测单核细胞增生李斯特菌是对传统方法的有效补充,可用于大批量样品中致病菌的快速鉴定     

荧光定量PCR监测单核细胞增多性李斯特菌研究

目的 探索一种快速、敏感、特异的单核细胞增多性李斯特菌检验方法。方法 以单核细胞增多性李斯特菌hlyA基因作为靶序列设计一对引物，并以标准单核细胞增多性李斯特菌菌株中提取的DNA作为模板，用常规PCR和荧光定量PCR对单核细胞增多性李斯特菌进行监测与鉴定。结果 含有一段特征基因的600bp片段，具有良好的单核细胞增多性李斯特菌检测特异性。结论 荧光定量PCR比普通PCR具有特异性强、灵敏度高、重现性好。可以定量、快捷的应用于监测检验单核细胞增多性李斯特菌。     

显色培养基在单核细胞增生李斯特菌快速检测中的应用研究

目的:研究显色培养基对单核细胞增生李斯特菌的检测效果,探讨建立新型快速检测方法。方法:检测按国标GB4789-33程序进行。结果:人工污染样品和实际样品检测中,显色培养基CHROM agar L isteria和HKL isteria与传统平板OXA和MMA可以达到相同的检测限和灵敏度,且具有更高的特异性。结论:用显色培养基检测单核细胞增生李斯特菌是一种新途径,可大大提高检测效率。