促性腺激素释放激素激动剂通过ERK MAPK途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA表达

目的:促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素,通过刺激促性腺激素释放激素的合成和分泌,调节性激素的合成.GnRH对睾丸间质细胞也具有直接的刺激作用.文中研究GnRH激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞ERK MAPK信号通路和3β-HSD mRNA表达的影响. 方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,血清饥饿2 h.GnRHa(10-7 mol/L)和ERK抑制剂PD98059(50 μmol/L)刺激细胞后Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK(t-ERK)的蛋白表达,荧光实时定量PCR检测3β-HSD mRNA表达. 结果:结果显示GnRHa刺激间质细胞0、5、10、30、60和90min后,p-ERK水平在5min时达到最高,与对照组比较升高了约3.5倍(P<0.05);10min时开始下降,但与对照组相比较仍显著升高2.2倍(P<0.05);90min时恢复到正常水平.加入ERK选择性抑制剂PD98059后,p-ERK水平显著下降50%(P<0.05);再用GnRHa刺激细胞5min,p-ERK水平仍无法恢复正常水平.用PD98059处理细胞后,再加入GnRHa培养24h,3β-HSD mRNA水平也显著下降(与GnRHa组相比,P<0.05). 结论:GnRH激动剂可能通过ERK MAPK信号通路来调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA的表达,进而调控睾酮的分泌.     

促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响

目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响. 方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist, GnRHa)(10-5mol/L、10-6 mol/L、10-7 mol/L)和GnRH 拮抗剂(GnRH-antagonists, GnRHant)(10-6 mol/L、10-7 mol/L、10-8 mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD) mRNA表达的改变. 结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA 分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01).同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45% (p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义. 结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSD mRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究.     

大鼠睾丸间质细胞中促性腺激素释放激素激动剂调控睾酮合成的机制

目的:研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的调控机制?方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞,GnRHa (10-7 mol/L)分别处理间质细胞6?12?24?36?48 h后,Western blot方法分析3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)蛋白的变化;MEK1/2抑制剂PD98059 (50 μmol/L) 和GnRHa共作用于间质细胞后,分析3β-HSD蛋白表达和睾酮水平的变化?结果:GnRHa处理间质细胞不同时间后,结果显示3β-HSD蛋白的表达对GnRHa的刺激具有时间依赖性?GnRHa处理12 h后,3β-HSD蛋白表达与对照组相比显著上升45% (P < 0.05),24 h达到最高水平,升高1.0倍(P < 0.05);48 h后3β-HSD恢复至正常水平?加入PD98059后,显著抑制了GnRHa对3β-HSD的刺激作用,3β-HSD水平下降了61% (与GnRHa组相比,P < 0.05),睾酮水平也随之显著下降45% (与GnRHa组相比,P < 0.05)?结论:GnRHa可能通过细胞外信号调节激酶(ERK1/2)途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD的表达,进而促进睾酮的合成?     

光照应激对SD大鼠睾丸促性腺激素释放激素受体表达的影响

目的多种应激方式均能抑制生殖功能,但其对调控机制仍缺少系统的研究。通过观察光照应激状态下SD大鼠睾丸内促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)受体蛋白和mRNA表达变化,为寻找应激状态下生殖系统调节机制提供依据。方法建立SD大鼠光照应激模型,将70只大鼠随机分为14组,其中7组(实验组)24 h持续光照,包括短期光照应激(2、3、4和7d)和长期光照应激(14、21和28d),另7组按正常昼夜节律并作为对照组;分别取实验组和相应对照组的睾丸组织,采用Western blot和RT-PCR分析GnRH受体在各时间段大鼠睾丸组织中的蛋白和mRNA表达变化,并用化学发光法检测血清中睾酮的含量。结果 Western blot结果显示:与对照组比较,持续光照2、3、4和7 d后,实验组大鼠睾丸GnRH受体表达无明显变化;持续光照14d和21d后,实验组大鼠睾丸GnRH受体的表达分别升高了27.8%±11.2%和40.6%±24.8%,差异具有统计学意义(P<0.05);持续光照28 d后,实验组大鼠睾丸GnRH受体的表达升高了26.1%±33.6%,但差异无统计学意义...     

膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-羟基类固醇脱氢酶表达的影响

目的先前研究发现促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)刺激Leydig细胞后,膜联蛋白5(annexin 5)及睾酮水平同时增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在的联系,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)是间质细胞的标记酶。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-HSD表达的影响。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的annexin 5(0、10-10、10-9、10-8mol/L)处理间质细胞24h和用10-9mol/L的annexin 5处理细胞不同时间(6、12、24、36h),收集培养液,用化学发光法测定培养液中的睾酮含量;Western blotting方法分析睾丸间质细胞中3β-HSD的表达变化。结果不同浓度的annexin 5处理间质细胞24h后,与对照组比较,终浓度为10-10mol/L和10-9mol/L时,睾酮水平分别升高了18%[(14.38±0.30)nmol/Lvs(12.12±0.74)nmol/L](P<0.01)和26%[(15.25±0.47)nmol/Lvs(12.12±0...     

促性腺激素释放激素激动剂对卵巢癌大鼠化疗效果的影响

目的 研究促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)对大鼠卵巢组织中雌激素受体α(ERa),ERB,孕激素受体(PR)和雄激素受体(AR)的表达的影响以及对环磷酰胺在卵巢癌大鼠模型中治疗效果的影响。方法 (1)80只Fischer-344大鼠分为4组,分别接受生理盐水、环磷酰胺((3TX)、GnRHa和CTX GnRHa治疗,采用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法比较各组大鼠卵巢组织中ERα,ERB,PR和AR的表达水平;(2)使用NuTu-19卵巢癌细胞系在20只Fischer-344大鼠上建立卵巢癌模型,分为3组,分别接受生理盐水、CTX和CTX GnRHa治疗,比较各组大鼠的生存时间。结果(1)4组大鼠卵巢组织中ERct、ERβ、PR、AR mRNA强度分别为0．24～0．29、1．13～1．35、0．68～0．88、1．39～1．63,免疫组化评分结果分别为4．7～5．1、15．1～15．5、8．5～9．1、17．9～19．0,各组大鼠的受体表达水平差异没有统计学意义;(2)(3TX组和联合治疗组大鼠的生存时间分别为76．0d和79．6d,两者差异没有统计学意义。结论 在大鼠模型中应用GnRHa的过程中不会改变大鼠卵巢组织中ERα、ERβ、PR、AR的表达水平,也不会影响CTX对卵巢癌大鼠模型的治疗效果。     

去颌下腺对大鼠睾丸膜联蛋白5表达的影响

目的：观察切除颌下腺对大鼠睾丸膜联蛋白5（annexin 5）表达的影响.方法：切除大鼠颌下腺,分别于术后14、28和42d处死大鼠,Western blotting和免疫组织化学分析大鼠睾丸annexin 5表达及分布的改变.结果：Western blotting结果显示,与对照组相比,切除颌下腺14d和28d后,实验组大鼠睾丸annexin 5的表达分别升高了27.5%和35.2%,具有显著性差异（P＜0.05,P＜0.01）;切除颌下腺42d后,实验组大鼠睾丸annexin 5又恢复到与对照组几乎相同的水平.免疫组织化学显示,annexin 5在大鼠睾丸中的分布未见明显改变,但实验组annexin 5免疫组化显色较深,说明annexin 5的表达升高,这与Western blotting的结果基本一致.结论：颌下腺切除影响大鼠睾丸annexin 5的表达,颌下腺切除早期（14、28 d）颌下腺分泌的某些生物活性物质缺乏,而造成睾丸内annexin 5表达的升高.颌下腺切除后期（42 d）,机体内因颌下腺切除而缺乏的某些物质在体内又重新得到了补偿,对睾丸annexin 5的影响消除,睾丸annexin 5的表达也恢复到正常水平.其内在具体机制尚待进一步阐明.     

恐惧应激对大鼠小肠促性腺激素释放激素受体的影响

目的：观察恐惧应激状态下SD大鼠小肠黏膜促性腺激素释放激素（GnRH）受体的分布和表达变化。方法：建立SD大鼠恐惧应激模型,分别取急性应激组（2~12 h）、慢性应激组（1 d~4周）和相应对照组的小肠。用免疫组化和Western blot法检测GnRH受体在各实验组大鼠小肠中的分布和表达变化。结果：免疫组化显示：急性应激组、慢性应激组和相应对照组的小肠黏膜层均呈GnRH受体免疫反应阳性,无明显差异。阳性反应物质定位于细胞膜和细胞质,细胞核呈阴性。Western blot结果表明：在急性应激状态下,GnRH受体表达有增多的趋势,但与相应对照组相比无显著性差异（P〉0.05）;慢性应激组与其相应对照组相比,GnRH受体表达明显增加（P〈0.05）。整个慢性应激过程中,GnRH受体表达增多持续1~4 d。1~3周时,GnRH受体表达降低,3~4周时又有所回升,并接近慢性应激相应对照组。结论：随着恐惧应激时间的延长,GnRH受体在小肠中表达增加。提示GnRH在恐惧应激中,对消化功能的影响具有潜在的生理调节功能。     

促性腺激素释放激素对大鼠胰腺细胞内cAMP含量的影响

目的:通过观察GnRH类似物(GnRHR激动剂和拮抗剂)对大鼠胰腺细胞内cAMP含量的影响,了解cAMP在GnRHR介导的信号转导通路中的作用.方法:以不同浓度GnRH类似物对原代培养的大鼠胰腺细胞进行刺激,借助放免法测定观察在体外条件下GnRH类似物对大鼠胰腺细胞内cAMP含量的影响.结果:在量效实验中,各浓度GnRHR激动剂均能使细胞内cAMP含量增加,其中10<'-8>～10<'-5>mol/L中4个浓度组最为明显,与对照组相比有非常显著差异(P<0.01).应用GnRHR拮抗剂(10<'-6>mol/L)后明显抑制了激动剂组增高cAMP含量的作用,其cAMP水平与对照组比较没有显著差异(P>0.05).在时效实验中,应用10<'-7>mol/L Gn-RHR激动剂刺激细胞,从10 min起细胞内cAMP含量即开始增多,到1 h达到峰值,以后逐渐下降,8 h后恢复到原水平.结论:由以上结果推测cAMP可能是GnRHR介导的信号转导通路中的信号分子之一.     

原癌基因C-jun对基础状态下大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

目的　通过反义技术观察原癌基因c jun对基础状态下大鼠睾丸间质细胞 (Leydigcells ,LC)睾酮分泌的影响 ,探讨原癌基因c jun对基础状态下大鼠LC睾酮分泌的作用。 方法　用放射免疫方法研究c jun对基础状态下大鼠LC睾酮分泌的影响。结果　原癌基因c jun反义寡脱氧核苷酸 (c junASODNs)呈剂量依赖性地抑制基础状态的大鼠离体LC的睾酮分泌 (P <0 .0 5 )。结论　c jun能促进基础状态下LC的睾酮分泌。     

光照应激对SD大鼠小肠促性腺激素释放激素受体表达的影响

目的:机体遭受各种创伤应激后,常出现各种胃肠道症状,并且已有研究表明大鼠的消化系统广泛分布有促性腺激素释放激素(GnRH)受体免疫反应阳性细胞.文中观察光照应激状态下SD大鼠小肠黏膜GnRH受体的分布和表达变化. 方法:建立SD大鼠光照应激模型,24h持续光照,分为短期光照应激(2、3、4、7 d)和长期光照应激(14、21、28d),分别取应激组和相应对照组的小肠组织,采用免疫组化和Western blot技术分析GnRH受体在各时间段大鼠小肠组织中的分布和表达变化. 结果:Western blot结果显示:与对照组相比,持续光照2、3、4、7d后,实验组大鼠小肠GnRH受体表达无明显变化;持续光照14d和21 d后,实验组大鼠小肠GnRH受体的相对表达量分别约升高了56.5%和59.9%,具有显著性差异(P<0.05);持续光照28 d后,实验组大鼠小肠GnRH受体的相对表达量约升高了27.8%.但无显著性差异(P>0.05).免疫组织化学显示,GnRH受体在大鼠小肠中的分布未见明显改变,但长期应激后期实验组(14、21、28 d)GnRH受体免疫组化显色较深,说明GnRH受体表达升高,这与Western blot的结果基本一致. 结论:GnRH受体随着光照应激时间的延长,在大鼠小肠中表达量发生改变.提示在光照应激中,GnRH对消化功能具有潜在的生理调节功能.     

乙醇对大鼠下丘脑促性腺激素释放激素神经元功能的影响

目的 研究乙醇对雄性大鼠下丘脑促性腺激素释放激素神经元(GnRH neurons)合成和释放激素功能的影响.方法 健康Wistar雄性大鼠40只,随机分为4组:对照组、低浓度乙醇组、中浓度乙醇组和高浓度乙醇组.在灌服不同浓度的乙醇后2h,采用酶法检测血中乙醇浓度(blood alcohol concentration,BAC);免疫组织化学法观察下丘脑促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone,GnRH)神经元密度和染色反应的变化.结果 与对照组相比,随着灌胃乙醇浓度的升高,各实验组大鼠BAC值逐渐升高,并且均已达到乙醇中毒的标准(500～1000mg/L);高浓度乙醇组大鼠下丘脑内GnRH阳性神经元密度和染色强度较对照组明显减小(P<0.01),中、低浓度乙醇组下丘脑内GnRH阳性神经元密度和染色强度较对照组变化不显著(P>0.05).结论 急性乙醇中毒雄性大鼠,下丘脑神经递质GnRH神经元合成和分泌功能受抑,这可能与乙醇对生殖行为的抑制有关.     

促性腺激素释放激素激动剂长方案与拮抗剂方案对体外受精治疗妊娠结局的影响

目的:探讨采用促性腺激素释放激素激动剂(gonadotropin releasing hormone agonist,GnRH-a)长方案和促性腺激素释放激素拮抗剂(gonadotropin releasing hormone antagonist,GnRH-ant)方案促排卵对体外受精患者治疗的效果和对妊娠结局的影响。方法:对北京大学第三医院生殖医学中心2010年6月1日至2012年6月1日体外受精-胚胎移植的2 444个周期进行回顾性分析。根据促排卵方案不同将其分为:GnRH-a组(激动剂组,1 706周期)和GnRH-ant方案组(拮抗剂组,738周期),对患者的一般资料、治疗和妊娠结局进行比较。结果:患者的体重指数、年龄、不孕年限、窦卵泡数等一般情况组间比较差异均无统计学意义,人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)注射日血E2激动剂组更高[(10 595±7 368)pmol/L vs.(9 087±7 035)pmol/L],Gn用药天数激动剂组更长[(12.5±1.8)d vs.(9.4±1.7)d],Gn用量更大[(3 107±1 377)IU vs.(2 084±903)IU],获卵总数激动剂组更多[(13.4±6.6)vs.(11.8±6.4)],差异均具有统计学意义(P<0.05);两组患者移植胚胎数、卵裂率、受精率相互比较,组间差异无统计学意义,可利用胚胎数激动剂组多于拮抗剂组[(5.6±4.5)vs.(5.1±4.3)],差异具有统计学意义(P<0.05)。两种促排卵方案的流产率、胚胎停育率、异位妊娠率和早产率、过期产率和活胎畸形率比较差异无统计学意义,但激动剂组临床妊娠率较高(44.0%vs.38.3%),足月分娩率亦较高(64.2%vs.56.9%),差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:GnRH激动剂长方案促排卵治疗临床妊娠结局和分娩结局均优于拮抗剂方案。     

促性腺激素释放激素激动剂对子宫肌瘤细胞泌乳素生成的作用

目的研究促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)对体外培养的子宫肌瘤细胞泌乳素生成的抑制作用.方法来源于行子宫切除术的绝经前妇女的肌瘤细胞进行原代培养,10%胎牛血清或双丁酰环磷腺苷(db-cAMP)作用24,48,72,96 h后测定上清液中泌乳素(PRL)的浓度.再在上述培养液中加入GnRHa(buserelin 10-5M)后,同样的时段测定PRL浓度.采用半定量反转录PCR法测定GnRHa作用后的GnRH受体mRNA表达的变化.结果胎牛血清和db-cAMP可刺激PRL的产生,db-cAMP的刺激作用更强,并且PRL量随db-cAMP作用时间和剂量的增加而增加.在作用96 hGnRHa对对照组(不含胎牛血清)和10%胎牛血清组PRL产生有明显抑制,但db-cAMP对PRL的刺激作用不会被GnRHa所抑制.GnRHa在48 h对GnRH受体mRNA表达有轻微下调.结论GnRHa对子宫肌瘤细胞PRL的产生有直接抑制作用.由于GnRHa无法抑制db-cAMP对PRL的刺激作用,其抑制作用位点可能位于蛋白激酶A途径环磷酸腺苷位点以上.     

促性腺激素释放激素激动剂对卵巢储备功能影响的研究进展

促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)是人工合成的促性腺激素释放激素的衍生物,能够抑制垂体促性腺激素的分泌,使垂体功能受到抑制,导致卵泡刺激素、黄体生成素及卵巢性激素水平明显下降,但其对卵巢储备功能是否有影响没有明确的结论。     

促性腺激素释放激素激动剂对子宫肌瘤病理及增殖细胞核抗原水平的影响

目的　通过测定应用促性腺激素释放激素激动剂 (GnRH A)后子宫肌瘤病理改变及增殖细胞核抗原水平变化 ,探讨GnRH A在治疗子宫肌瘤中的作用。　方法　子宫肌瘤术后标本 33例 ,术前应用GnRH A 18例为用药组 ,对照组 15例 ,常规病理检查 ,并用免疫组织化学 (ABC)方法检测增殖细胞核抗原 (PCNA)的含量。　结果　肌瘤组织变性率及免疫组织化学测定PCNA变化两组无明显差异 ,计算机图像分析表明用药后肌瘤细胞体积及间质有明显缩小 (P <0 0 5 )。　结论　本实验证实GnRH A治疗子宫肌瘤 ,肌瘤缩小与肌瘤细胞体积及间质缩小有关 ,停药后易复发 ,用于手术前治疗效果好     

性腺激素释放激素激动剂对子宫内膜异位症在位及异位内膜细胞凋亡的影响

目的 分析子宫内膜异位症在位及异位内膜细胞凋亡受到性腺激素释放激素激动剂的影响.方法 以30例子宫内膜异位症患者为研究对象,均给予体外培养,并利用不同浓度的性腺激素释放激素激动剂处理在位细胞和异位细胞,观察细胞生长及细胞凋亡受到性腺激素释放激素激动剂的影响情况.结果 子宫内膜异位症在位细胞核异位细胞生长率与性腺激素释放激素激动剂浓度及作用时间呈反比.性腺激素释放激素激动剂作用24 h后,高浓度在位、异位细胞凋亡率均高于低浓度,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 子宫内膜异位症在位及异位内膜细胞在性腺激素释放激素激动剂作用下加速凋亡,可促进患者康复.     

糖尿病对大鼠睾丸病理变化及睾酮合成、17β-HSD3和3β-HSD1mRNA表达的影响

目的：研究大鼠糖尿病时睾丸的主要病理变化及对间质细胞（Leydig细胞）睾酮合成、17β—HSD、和3β—HSD，mRNA表达的影响。方法：雄性SD大鼠19只，随机分为正常对照（NC）组10只，糖尿病（DM）组9只。DM组予高脂饮食加小剂量（25mg／kg）链脲佐菌素（STZ）诱导2型糖尿病大鼠模型，12周后处死。用光镜及电镜观察大鼠睾丸的组织形态学改变；RT—PCR法检测睾丸组织17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅲ型（17β-HSD3）和3β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型（3β—HSD1）mRNA含量；酶联免疫吸附法测定血清中睾酮含量。结果：糖尿病大鼠光镜下主要表现为睾丸曲细精管生精细胞数量减少及生精阻滞，Leydig细胞缩小，细胞核皱缩；透射电镜下主要见到Leydig细胞萎缩，线粒体、内质网等细胞器空泡样变及扩张，细胞核皱缩，染色质聚集；睾丸组织的17β—HSD3和3β—HSD1-mRNA含量和血清中睾酮含量糖尿病组均低于正常对照组。结论：糖尿病可使大鼠睾丸Leydig细胞变性，睾酮合成降低，其机制可能与降低17β—HSD，和3β—HSD1 mRNA表达有关。     

促性腺激素释放激素类似物对特发性中枢性性早熟儿童最终成人身高的影响

目的 观察促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)对特发性中枢性性早熟(ICPP)儿童最终成人身高的影响。方法30例ICPP女童用GnRHa治疗1年，进行前后自身对照，按骨龄预测成人期最终身高(PAH)。结果 治疗6个月、12个月后的预测PAH分别比治疗前增加平均2．5cm和3．9cm，治疗6个月与治疗前相比，以及治疗12月与治疗6个月相比，PAH均显著提高。未观察到近期的不良反应。结论 GnRHa能显著抑制ICPP患儿过早的性发育，延缓骨骺成熟，阻止骨骺过早融合，有益于改善最终身高。