抗人类疱疹病毒7型南京分离株YY5单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人类疱疹病毒7型(HHV-7)单克隆抗体,应用于临床与科研。方法:用纯化的HHV-7南京株YY5免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA法筛选。间接免疫荧光、免疫印迹试验等方法鉴定单抗。结果:获得了3株分泌抗(HHV-7)单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为6H9、6C11、4D5。单克隆抗体亚类鉴定表明:6H9为IgG1类,6C11、4D5为IgM类。用间接ELISA方法检测单抗腹水滴度分别为:1:6.40×104,1:1.28×105,1:1.00×103。免疫印迹试验结果表明:6C11能与分子质量约70 ku大小的病毒蛋白结合。结论:成功制备并鉴定3株抗HHV-7单克隆抗体,为进一步研究HHV-7的特性及为临床快速诊断提供可能。     

重组人3型腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备抗人3型腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体并对单抗进行鉴定.方法 用纯化的重组六邻体蛋白免疫BALB/c小鼠.取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合.经ELISA间接法筛选和克隆化培养,获得4株分泌抗腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,纯化其腹水获得单抗.使用ELISA、Western blot和中和实验等方法鉴定单抗的敏感性、特异性以及中和活性.结果 ELISA和免疫印迹结果表明这4株单抗与腺病毒六邻体蛋白可以特异性结合.而且,4C6株单抗具有中和活性.结论 获得了4个单抗为腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体,可用于3型腺病毒的早期诊断和药物治疗的研究.     

抗HBsAg单克隆抗体的制备与生物学特性的鉴定

目的:制备分泌抗HBV S蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并鉴定其特性,为建立快速诊断HBV感染的方法奠定基础.方法:以重组乙肝疫苗免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合建立了能稳定分泌抗HBsAg单抗的杂交瘤细胞株,利用间接ELISA技术和Western blot进行单抗特异性的鉴定,同时采用间接ELISA方法鉴定mAb的Ig亚类,检测mAb的效价及相对亲和力.结果:获得1株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞4D2,其抗体亚类为IgG1型,腹水效价为1:10(6),相对亲和力在10(5)以上.结论:成功地制备出抗HBV S蛋白的单克隆抗体,为建立快速特异检测HBV感染的实验方法提供了有力的工具.     

抗粉尘螨主要变应原Der f1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb）。方法利用重组Derf1蛋白为免疫原,免疫BALB／c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选特异性分泌的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。结果获得6株可稳定分泌鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体,其Ig亚型均为IgG1,且6株单抗均具有良好的效价。ELISA和Western—blotting分析表明,该6株单抗均能识别重组Derf1蛋白和天然的粉尘螨提取物。其中,除了484不识别屋尘螨提取物,其他均能识别。结论成功制备了6株鼠抗粉尘螨主要变应原Derf1的单克隆抗体,为建立粉尘螨主要变应原Derf1检测及纯化方法奠定了基础。     

抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及筛选

目的获得稳定、高效分泌抗氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法以CAP-HS-BSA免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞,体内诱生腹水法大量制备单抗。捕获ELISA法测定小鼠免疫球蛋白亚型,间接ELISA法测定腹水效价;用两步硫酸铵法和G蛋白亲和层析法来纯化腹水。结果成功建立了一株分泌抗CAP单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞4D10。经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1,杂交瘤染色体数目90-110条,间接ELISA检测诱生小鼠腹水的抗体效价达1∶2.56×105,纯度达95%,该细胞连续培养生物学性状稳定。结论成功制备的抗氯霉素单克隆抗体4D10效价高、纯度高,为利用该单抗研制检测氯霉素残留试剂盒提供原材料。     

三株抗白念珠菌单克隆抗体的制备与鉴定

目的 :为进一步研究白念珠菌保护性抗体以及系统性念珠菌病早期诊断奠定基础。方法 :运用细胞融合、间接ELISA、IIF、SDS PAGE及免疫印迹等技术 ,制备并鉴定抗白色念珠菌单克隆抗体。结果 :建立了3株分泌抗白念珠菌胞壁单克隆抗体杂交瘤细胞株1B5、3E8、4C7 ,亚类分析显示1B5为IgM ,3E8和4C7为IgG1,3株单抗皆能使白念珠菌孢子和芽管染上荧光 ,1B5单抗能识别白念珠菌胞壁外膜上分子量约为32×103u抗原成分。结论 :制备成功3株抗白念珠菌胞壁外膜成分单克隆抗体 ,其中1B5单抗是抗白念珠菌胞壁外膜上分子量约为32×103u抗原成分的单克隆抗体。     

PDGFR单克隆抗体的制备和鉴定

目的 通过谷胱甘肽转硫酶偶联的血小板衍生因子受体氮端的融合蛋白(GST-PDGFR-N)制备有生物活性的单克隆抗体.方法 用GST-PDGFR-N融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗PDGFR的单克隆抗体,用间接ELISA、Western blot、免疫组化等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定.结果 获得两株能稳定分泌抗PDGFR单克隆抗体的细胞3B12F5和3C6H7C11,亚类鉴定两种单抗均为IgG1.间接ELISA法测定两株细胞腹水抗体的效价分别为1:102400为和1:25600.Western blot法显示PDGFR单克隆抗体特异性地识别免疫原和胶质瘤细胞株U251中的抗原成分.细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别胶质瘤细胞株U251和膀胱癌细胞株BIU87中表达的PDGFR抗原.结论 成功制备PDGFR单克隆抗体,为研究PDGFR的表达情况和临床检测提供了一个有用的工具.     

鼠抗早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备鼠抗早孕因子（EPF）单克隆抗体,纯化并进行鉴定。方法用重组EPF免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术获得抗EPF杂交瘤细胞株,注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水型单抗,Protein-G亲和层析纯化后,SDS-PAGE电泳鉴定其纯度,用间接ELISA法测抗体效价,ELISA相加试验测定抗原表位,用Western blotting鉴定其特异性,并进行类及亚类、细胞染色体核型分析。结果筛选出2株具有较高活性和良好稳定性的分泌抗EPF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其腹水的抗体效价均高于2×10^-5,2株单抗均为IgG类IgG1亚类,轻链类型均为κ,细胞核型分析符合杂交瘤细胞特征,特异性良好,2株单抗有不同的抗原表位。SDS-PAGE电泳显示纯化后抗体有较高的纯度,Western blotting表明其与EPF抗原有特异结合性。结论成功制备2株具有较高活性的鼠抗EPF单克隆抗体,为建立检测EPF方法奠定了良好的基础。     

抗人胰岛素样生长因子-1单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备稳定分泌抗人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定.方法:用纯化后的hIGF-1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术制备抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鉴定mAb的特异性,用间接ELISA法检测mAb腹水效价及mAb的亲和力,杂交瘤细胞染色体分析,鉴定Ig亚类.结果:获得2株能稳定分泌抗hIGF-1的mAb杂交瘤细胞系,Western blot分析显示,该mAb能与具有生物学活性的成熟IGF-1蛋白结合.腹水mAb效价可达6×104.mAb相对亲和力为2.1×109/mol～7.8×109/mol.2株单抗属IgM亚类.染色体分析符合杂交瘤细胞特征.结论:成功制备出抗hIGF-1的2株mAb杂交瘤细胞,为进一步用于hIGF-1的临床检测和实验研究创造了条件.     

许旺细胞源运动神经营养因子单克隆抗体的研制及特性鉴定

目的 研制针对许旺细胞源神经营养因子(SDNF)的单克隆抗体并鉴定Ig亚类.方法 用SDNF免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与同系小鼠SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞按1:5比例进行融合,间接ELISA法筛选阳性克隆,有限稀释法进行克隆化培养;制备单克隆抗体,鉴定MeAb的Ig亚类.结果 获得4株能稳定分泌抗体的细胞株6D3,B8,C9E9,A6C6.效价为1:5120,亚类为IgG1.结论 所获得的4株杂交瘤细胞株均又较强稳定分泌抗BDNF单克隆抗体的能力,这为进一步的研究打下了基础.     

原位杂交法检测胃癌组织中IL-6及其受体mRNA的表达

胃癌是最常见的癌肿之一,应用原位杂交技术检测胃癌组织中IL—6及其受体mRNA的表达情况,具有灵敏度高、特异性强的特点,而且较直观地在组织原位和转录水平对标本中IL—6及其受体进行研究,这使得形态学观察与功能学检测相结合,更能反映胃粘膜不同病变细胞分泌IL—6及其受体的情况。     

新生儿高胆红素血症时血IL—6的观察研究

目的了解新生儿高胆红素血症时血白细胞介素－６（ＩＬ－６）的改变。方法应用ＥＬＩＳＡ法测定２０例新生儿高胆红素血症患儿与同期１１例对照组正常足月新生儿血ＩＬ－６含量。结果新生儿高胆红素血症组血ＩＬ－６浓度增高,其均值±标准差（ｘ±ｓ）为（４３２．２３±２５６．８４）ｎｇ／Ｌ,对照组为（２８．８２±９．６６）ｎｇ／Ｌ,Ｐ＜０．００１。结论新生儿高胆红素血症时细胞因子白细胞介素－６增高,白细胞介素－６可能在新生儿高胆红素血症的发病中起一定的作用。     

小鼠β-防御素6与甲型流感病毒M2e基因融合表达及其免疫特性研究

目的构建小鼠β防御素6（mBD6）与甲型流感病毒M2蛋白胞外功能区（M2e）真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法（overlap-PCR）将M2e与mBD6通过一段多肽接头Gly4Ser融合成为mBD6-M2e。将其插入载体pcDNA3．1（＋）,构建成pcDNA3．1（＋）／mBD6-M2e。鉴定正确后,转染MDCK细胞,免疫荧光、MTT检测mBD6-M2e表达和分泌。免疫小鼠,半定量PCR检测脾细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α、CCR7表达。结果融舍基因mBD6-M2e真核表达载体pcDNA3．1（＋）／mBD6-M2e构建成功,在MDCK细胞膜上成功表达融和蛋白,转染细胞的培养上清刺激淋巴细胞增殖。免疫小鼠细胞因子表达改变。结论融合基因mBD6-M2e真核表达载体成功构建,为研究防御素在流感病毒核酸疫苗中的佐剂作用奠定了基础。     

IL-6/IL-6受体与相关临床疾病的研究进展

IL-6作为一个多效的细胞因子,在损伤、修复、免疫应答、炎症反应以及造血中担任重要角色,且影响着许多疾病的发生发展,如自身免疫病、肿瘤、神经系统疾病等。因此,调节IL-6有可能成为治疗某些疾病的新战略。     

G6PD缺乏症酶学诊断与多重SNaPshot基因诊断的比较

目的了解葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏症酶学诊断与基因诊断检出情况,并对这两种方法学进行分析比较。方法通过G6PD/6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydro-genase,6PGD)比值法和多重SNa Pshot基因诊断技术对168例血样进行G6PD缺乏症酶学诊断和基因型诊断,分析各自的检出情况,比较比值法和多重SNa Pshot法的结果,并以测序结果为金标准对两种方法进行方法学评价。结果酶学诊断阳性率为4.76%。基因诊断突变率为22.02%,以c.[1311C>T(;)1365-13T>C]同义突变最常见(72.97%),错义突变率为5.35%。错义突变标本的G6PD/6PGD比值较同义突变及未检出突变低,差异有统计学意义(P<0.05);而同义突变与未检出突变间G6PD/6PGD比值无统计学差异(P>0.05)。多重SNa Pshot法基因分型结果均与DNA直接测序分析的结果完全一致。比值法无法检出同义突变,且漏检一例错义突变杂合子,其筛查错义突变的灵敏度和特异度分别是88.89%和100.00%。结论 G6PD/6PGD比值法虽可较有效地筛查错义突变但不能检出同义突变和全部的女性杂合子,而多重SNaPshot基因分型方法可有效检出多种G6PD基因突变类型。     

病毒性心肌炎患者血清IL-6的检测及其临床意义

为了观察病毒性心肌炎患者血清 IL-6的水平变化 ,我们对 1 8例病毒性心肌炎患者血清 IL -6水平进行了检测 ,并与正常对照组进行比较 ,现报告如下。对象与方法1　对　象　健康对照组 48例 ,男 2 5例 ,女2 3例 ,年龄 2 5～ 58岁 ,平均年龄 44 .0 5± 1 1 .76岁。病毒性心肌炎组 1 8例 ,男 7例 ,女 1 1例 ,年龄1 8～ 45岁 ,平均年龄 3 9.4± 8.56岁。按 1 995年全国心肌炎、心肌病专题会议诊断参考标准入选 ,排除急、慢性肝病 ,其中急性心肌炎 1 5例 ,慢性心肌炎 3例。2　方　法　正常对照组、心肌炎组均空腹抽静脉血 3 ml,分离血清后置于 -2…     

固定化酶裂解Pen-GK生产6-APA的实验设计及其工业化

本文通过研究固定化青霉素酰化酶裂解青霉素工业钾盐(Pen-GK)生产6-APA的反应机理，确定了最佳裂解实验流程，并对裂解罐的搅拌装置、pH自控装置、加氨装置、温度自控装置、过滤系统等进行了最佳设计。     

实验鼠脑组织对新型光敏剂 NPe6吸收的荧光研究

目的测量了新型光敏剂NPe6(Mone-L-Aspartyl Chlorin e6,NPe6)在白鼠(BALB/C,雄性)脑组织中的吸收情况,为减少光动力学疗法对正常脑组织的损伤提供关键的实验数据.方法首次采用了激光诱导荧光产额测量的方法,测得NPe6在脑组织中的吸收情况,并观测激光照射下给予NPe6和未给予组鼠的不同反应.结果实验测量光敏剂NPe6在鼠脑组织的浓度随时间变化的情况,与已报道的同位素标记方法所得结果一致.观测了激光照射下给药和未给药组鼠的不同反应,发现在相同给药量和激光辐照能量下,随着给药和激光辐照时间间隔的延长,死亡的鼠数目减少;未给药组鼠对激光照射没有可察觉的反应.结论 NPe6能被正常脑组织迅速摄取和排除,可望能用于临床.     

ROC曲线评价IL-6对重症感染患者预后的评估价值

目的研究发现正常人血中IL-6水平很低,然而重症病人感染时其水平急剧升高.方法为了给该类病人预后的正确评估提供科学依据,本研究采用ROC曲线对此类病人IL-6的预后价值进行评价.结果40例重症合并感染的病人血清IL-6水平均数为(152.02±55.77)pg/mL,重症非合并感染病人的血清IL-6水平均数为(130.98±50.72)pg/mL,二者均升高,但该两组的血清IL-6水平比较无显著性差异(P>0.05),它们与正常对照组IL-6(85.79±30.96)pg/mL比较均有显著性差异(P<0.01).IL-6水平的ROC曲线下面积值为0.885;APACHEⅡ评分ROC曲线下的面积值为0.766.结论血清IL-6水平和A-PACHEⅡ评分相比,对于重症合并感染病人预后的预测,血清IL-6水平是较好的预测因子.