SEREX技术在筛选疾病相关抗原中的应用

重组cDNA表达文库血清学分析(SEREX)方法是一种筛选疾病相关抗原的有效分析方法,其筛选鉴定的疾病抗原不仅可对疾病进行早期检测,还能作为免疫治疗的靶标.本综述从肿瘤和其它具有免疫原性的疾病方面介绍了SEREX技术的应用价值,在总结SEREX缺点的基础上提出了SEREX技术的改进方向.     

SEREX在肿瘤抗原分析中的研究进展

重组cDNA表达文库的血清学分析(SEREX)为一种新的寻找抗原的方法,即利用患者自体血清对重组表达的cDNA克隆进行筛选,以获得相关抗原基因.这类抗原在荷瘤患者体内能诱导出多重免疫反应,且其核苷酸序列和蛋白质结构较易在分子水平确定,这一方法的运用,为发现新的肿瘤抗原开辟了一个崭新的领域,为肿瘤的免疫治疗的发展提供了一个现实的基础.     

重组cDNA表达文库血清学分析技术筛选肿瘤抗原的研究进展

1995年Sahin等首先建立了重组cDNA表达文库血清学分析法（SEREX）以来,大量的人类肿瘤抗原被发现和鉴定,并建立了SEREX技术合作组及相应的数据库。本文对SEREX技术的基本原理和流程及其在肿瘤抗原筛选中的应用和存在问题作一综述。     

SEREX肿瘤抗原基因表达蛋白的研制和血清学初步筛选

目的 :利用基因工程方法获得SEREX肿瘤抗原基因原核表达蛋白 ,为进一步血清学分析奠定基础。方法 :采用SEREX方法 ,筛选中国人卵巢癌cDNA表达文库。对获得的 3个阳性克隆基因MY OVA 2、MY OVA 7和MY OVA 13,利用基因工程的方法克隆其全长基因 ,原核表达和亲和层析获得目的蛋白 ,并采用Dot blot的方法初步检测了目的蛋白抗原在正常人和肿瘤患者中的血清学反应格局。结果 :获得了纯化的目的蛋白 ,采用点杂交对 13例正常人和 74例肿瘤患者血清的测定结果显示 ,MY OVA 13的抗体只在肿瘤组中检测到 ,在正常组中为阴性 ;MY OVA 2和MY OVA 7在两组人群的血清中自身抗体检出率均呈现阳性 ,不同的肿瘤类型的阳性率各不相同。结论 :基因工程获得的蛋白质抗原可望成为肿瘤的血清学诊断工具     

从卵巢癌cDNA文库中筛选新的肿瘤标志物

采用SEREX法筛选了自行构建的中国人卵巢癌cDNA表达文库 ,得到 2 7个阳性克隆 ,其中 3个为全长cDNA。序列分析和同源性比对结果表明所获得的 2 7个克隆分属于分化抗原、细胞结构蛋白及功能未知三类。选择其中一个全长cDNAMY OVA 13(该基因编码的蛋白是MAD2 ) ,利用基因工程方法克隆、表达和纯化得到目的蛋白 ,采用点杂交方法检测了MY OVA 13目的蛋白与正常人和肿瘤患者中的血清学反应。MY OVA 13抗体只在肿瘤组中检测到 (5 / 74 ) ,在正常组中均为阴性 ;间接ELISA测定结果显示 ,MY OVA 13抗体的水平在肿瘤组中均高于正常组 ,其中肝癌和前列腺癌组与正常组相比 ,在统计学上有显著差异 ,P值分别 <0 0 1和 <0 0 5。我们的初步结果表明MY OVA 13及其抗体具有一定的肿瘤特异性 ,有可能作为肿瘤诊断的标志物     

从卵巢癌cDNA表达文库筛选肿瘤抗原基因的研究

目的：利用肿瘤患者自体血清筛选患者肿瘤cDNA表达文库（SEREX）,寻找肿瘤特异性抗原是肿瘤免疫学研究的新策略,由此方法所获B细胞抗原肽可为进一步寻找T细胞抗原肽,开展肿瘤免疫治疗和诊断提供线索。方法采用SEREX方法,筛选中国人卵巢癌cDNA表达文库,对获得的阳性克隆片段测序鉴定和进行BLAST同源性比较。采用RT－PCR,分析政党组织和肿瘤组织及肿瘤细胞株中6个新的EST片段的表达。结果,所获基因片段大多数为已知抗原基因（20／27）。根据其来源又可归类为结构基因。线粒体基因和调控基因。另外,获6个未知的EST片段。RT－PCR的结果表明,4个EST（EST87888、1750、1754和3533）片 肿瘤和正常组织中均有表达,2个EST在正常组织中未见表达,而在肿瘤组织中有表达,可能是与肿瘤相关或特异的EST片段。结论SEREX方法不失为一种有效筛选卵巢癌肿瘤抗原的新方法。所获肿瘤抗原候选基因,可进一步进行结构和功能的研究。     

类风湿关节炎滑膜组织cDNA文库的构建及自身抗原的筛选和鉴定

目的 通过SEREX（serological analysis of recombinant cDNA expression library）技术对类风湿关节炎滑膜组织cDNA文库进行初步筛选,得到新的类风湿关节炎自身抗原.方法 利用SMART技术构建类风湿关节炎患者滑膜组织cDNA文库,并对该文库进行SEREX筛选,获得特异性结合阳性克隆,对阳性克隆同源性分析.然后进行酶联免疫吸附实验（ELISA）验证,分析该阳性克隆对于类风湿关节炎诊断临床敏感度和特异度.结果 构建cDNA文库滴度约为6.89×10^6 pfu/mL,筛选文库获得12个阳性克隆,同源性分析3个阳性克隆插入片段为已知蛋白,分别是：Filaggrin、SERPINE2和p68.进行血清学初步验证,抗-Filaggrin和抗-SERPINE2具有高敏感度和低特异度,而抗-p68具有高敏感度和高特异度.结论 抗-Filaggrin、抗-SERPINE2和抗-p68对于类风湿关节炎的诊断具有不同的敏感度和特异度.     

一种基于免疫印迹的高通量肿瘤相关抗原筛选和鉴定方法

目的:为了分析SEREX抗原克隆在异体食管癌患者血清中和健康对照人血清中的反应情况, 我们发展了一种基于免疫印迹的高通量肿瘤相关抗原筛选和鉴定方法.方法:采用新发展的基于免疫印迹原理的抗原克隆微阵列检测方法与传统的噬菌斑检测法对食管癌患者血清中IgG的反应情况进行了比较, 并采用两种方法分析了两个SEREX阳性克隆与40例食管癌患者血清和40例健康人血清中的IgG的阳性反应率.通过ELISA对两种方法得到的结果进行了验证.结果:两个阳性克隆在两种检测方法中均与同一例食管癌病人血清起反应, 采用抗原克隆微阵列检测方法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为25%和37.5%, 采用噬菌斑检测法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为27.5%和 37.5%;ELISA方法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为25.0%和31.25%.结论:本研究采用两种方法检测患者血清IgG反应的结果是一致的, 抗原克隆微阵列检测方法可以代替传统的噬菌斑筛选法.     

卵巢癌自身抗体谱研究及应用

目的 肿瘤自身抗原可以诱导机体免疫反应,产生与肿瘤相关的自身抗体.因此,在肿瘤患者血清中存在肿瘤自身抗体谱.本研究拟寻找鉴定卵巢癌自身抗体谱,研究这些自身抗体作为卵巢癌诊断候选血清标志物的可能性;同时鉴定这些自身抗体的抗原,为卵巢癌的免疫治疗提供候选靶抗原.方法 用卵巢癌组织建立了库容量达1.82×106pfu的cDNA表达文库,用卵巢癌患者血清进行了文库血清学分析(SEREX),筛选获了阳性抗原克隆,进一步分析了其中5个克隆与48例卵巢癌48例正常人血清的反应情况.结果 获得的67个阳性克隆中,5个克隆与已知EST序列明显无同源性,另外49个克隆与已知基因高度同源.BHLHB2等5个抗原克隆与卵巢癌患者和正常人血清反应阳性率分别为41.6%(14.6%)、29.2%(6.25%)、29.2%(12.5%)、31%(18.7%)、31%(6.2%).联合5个克隆诊断卵巢癌的敏感性为81%,特异性75%.结论 本研究发现的45个卵巢癌抗原可能作为卵巢癌诊断新的候选血清学标志物和免疫治疗潜在分子靶点.BHLHB2等5个克隆与卵巢癌患者血清的反应阳性率明显高于正常人的血清,5个克隆联合诊断卵巢癌有较好的敏感性和特异性,其相关自身抗体可作为卵巢癌诊断的血清标志物.     

用重组抗原检测鼻咽癌病人血清IgA／gp125抗体

用重组抗原检测鼻咽癌病人血清ＩｇＡ／ｇｐ１２５抗体薛绍礼１皮国华２谷淑燕２李平１抗Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒（ＥＢＶ）壳抗原（ＶＣＡ）ＩｇＡ抗体，是鼻咽癌（ＮＰＣ）早期诊断的一个重要血清学指标。曾先后用免疫荧光法（ＩＦ）和免疫酶法（ＩＥ）进行检测［１...     

鳞状细胞癌抗原及其在肿瘤诊断中的应用

鳞状细胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen, SCC Ag)最初于1977年从宫颈鳞癌组织中分离得到,并命名为TA-4,它是一组肿瘤相关蛋白,其血清水平检测广泛应用于多种鳞癌的诊断和管理.     

人大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库的构建和鉴定

目的:为获得大肠癌的特异性抗原基因,构建人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库.方法:从2株人大肠癌细胞CCL-187和CX-1中提取总RNA,分离纯化mRNA,并以此为模板合成第1链cDNA,用置换法合成第2链cDNA.双链cDNA经末端削平、EcoR Ⅰ接头连接、Xho Ⅰ酶切、过柱分级分离,除去＜400 bp片段.收集符合需要的cDNA片段与噬菌体ZAP Express载体连接,体外包装后获得人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库.结果:构建的人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体文库,原始库容量为2.3×109 pfμ/L,重组率97%.重组子插入cDNA片段平均大小1 kb以上.结论:成功地构建高质量的人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库,为大肠癌的特异性抗原筛选奠定了基础.     

新生抗原肿瘤治疗性疫苗进展评述

肿瘤新生抗原是指由肿瘤细胞的基因组突变产生的新生表位免疫原,是一类肿瘤特异性抗原。肿瘤新生抗原比肿瘤相关抗原免疫原性高,没有产生自身免疫应答的风险,是一类极具吸引力的肿瘤治疗性疫苗的抗原。随着新一代测序技术的发展,基于新生抗原的肿瘤治疗性疫苗在过去5年中获得了突破性的进展,呈现出极好的临床前景。本文首先简述新生抗原的免疫学特点,然后展示了新生抗原特异性T细胞应答是抗肿瘤的核心驱动力的证据,最后介绍了新生抗原疫苗的临床前景和临床研究的最新进展,并提出了该领域目前存在的问题和挑战。     

肿瘤抗原NY-ESO-1研究进展

肿瘤抗原NY-ESO-1是肿瘤-睾丸(cancer-testis，CT)抗原，其编码基因是一基因家族，目前发现的主要包括NY-ESO-1、LAGE-1和ES03三个成员。NY-ESO-1是迄今发现的最具免疫原性的肿瘤抗原之一，可以在NY-ESO-1表达阳性的肿瘤患者体内引起自发性体液免疫反应和T细胞免疫反应，因此在抗原特异性肿瘤免疫治疗中具有广泛的应用前景。     

肿瘤抗原鉴定研究进展

肿瘤抗原的鉴定是设计肿瘤疫苗用于肿瘤免疫治疗的前提。随着对机体抗肿瘤免疫机制的深入了解,发现CD8+、CD4+T细胞识别肿瘤抗原具有MHC分子约束性,CD8+、CD4+T细胞协同作用以清除肿瘤细胞。本文就CD8+、CD4+T细胞识别的肿瘤抗原鉴定方法以及肿瘤抗原特性作一综述。     

肿瘤抗原NY-ESO-1研究进展

肿瘤抗原NY-ESO-1是肿瘤-睾丸(cancer-testis,CT)抗原,其编码基因是一基因家族,目前发现的主要包括NY-ESO-1、LAGE-1和ESO3三个成员。NY-ESO-1是迄今发现的最具免疫原性的肿瘤抗原之一,可以在NY-ESO-1表达阳性的肿瘤患者体内引起自发性体液免疫反应和T细胞免疫反应,因此在抗原特异性肿瘤免疫治疗中具有广泛的应用前景。     

肿瘤抗原MAGE-A3研究进展

肿瘤抗原MAGE-A3为肿瘤共同抗原,广泛表达于多种组织类型的肿瘤细胞,而在正常组织细胞(除睾丸和胎盘外)却不表达.该抗原不仅能被HLAⅠ类分子呈递,而且能被HLAⅡ类分子呈递.MAGE-A3抗原已被广泛应用于肿瘤治疗性疫苗的研究.     

免疫蛋白质组学技术在肿瘤相关抗原筛选中的应用

蛋白质组学研究在后基因组时代得到快速发展,免疫蛋白质组学技术为肿瘤相关抗原的发现提供了一种有效的分析方法:,其筛选的肿瘤相关抗原不仅可用于肿瘤诊断和预后的检测,还可能成为新的治疗靶标。本文就免疫蛋白质组学技术的研究进展作一综述。     

肿瘤特异性抗原基因克隆技术的新进展

肿瘤特异性抗原的获得、鉴别一直是肿瘤免疫研究的热点之一 ,分子生物学技术的飞速发展 ,给这一领域带来了勃勃生机。本文综述了应用分子生物学技术分离肿瘤特异性基因 ,并用免疫学方法鉴定其抗原性 ,为获取肿瘤特异性抗原开避新途径