Herpetic stromal keratitis: an immunopathologic disease mediated by CD4+ T lymphocytes.

To investigate the role of T cell subsets in the development of herpetic stromal keratitis (HSK) in a well defined model, we used an adoptive transfer approach in which thymectomized and T cell-depleted mice [T(-)] were reconstituted with different numbers of syngeneic immune T lymphocytes after topical corneal challenge with RE strain of herpes simplex virus-1. In vitro stimulated or unstimulated immune T cells obtained from cervical and retropharyngeal lymph nodes of mice with HSK were used in adoptive transfer experiments. Although T(-) mice developed an initial epithelial inflammation, stromal keratitis did not occur. Reconstitution experiments revealed that mice that received 2 x 10(7) or more unfractionated immune T cells could develop HSK lesions with severity comparable to immuno-competent control mice. In mice receiving CD8(+)-depleted populations, even fewer cells (5 x 10(6)/mouse) were able to induce significant HSK. In contrast, mice that received similar or increased numbers of cells depleted of CD4+ T lymphocytes did not develop HSK. Immune T lymphocytes transferred to mice that were mock infected on the cornea did not develop HSK, indicating that the immunopathogenic cells were virus specific and not merely reacting to autoantigens. Histopathologic examination of the diseased corneas demonstrated that the stromal inflammation in euthymic normal and T(-)-reconstituted mice was characterized by extensive polymorphonuclear leukocyte infiltration. Scattered lymphocytes, and occasional macrophages also were observed. These results provide further evidence that HSK represents an immunopathologic process mediated mainly by CD4+ T cells.     

可溶性B、T淋巴细胞衰减因子及其配体在单纯疱疹性角膜基质炎小鼠体内的异常表达

目的 研究B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)及其配体疱疹病毒侵入介体(herpes virus entry mediator,HVEM)在单纯疱疹性角膜基质炎(herpetic stromal keratitis,HSK)小鼠角膜组织中及外周血CD4+T细胞上的表达水平,探讨共抑制信号BTLA-HVEM是否参与了CD4+T细胞介导的HSK免疫病理反应.方法 将106 PFU的单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)KOS毒株接种于BALB/c鼠的角膜上建立HSK动物模型,分别于角膜接种病毒前(0 d),接种病毒后的第3、7、10、14、21天,用毛细管取小鼠的左眼眼眶静脉窦血1 mL,分离淋巴细胞,行荧光抗体染色,用流式细胞仪检测CD3+ CD4+ BTLA+T细胞和CD3+ CD4+ HVEM+T细胞阳性率;在裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜变化;免疫组织化学方法检测BTLA蛋白及HVEM蛋白在角膜组织中的表达.结果 BALB/c鼠的角膜接种HSV-1后的1～5d,角膜擦拭液中均检测出HSV-1复制,表明小鼠感染了单纯疱疹病毒.裂隙灯显微镜观察显示:角膜接种HSV-1后第3天,所有小鼠均患了急性上皮性角膜炎,并于感染后1周内痊愈,自病毒接种后第8天起,小鼠出现角膜基质炎的改变,表现为角膜基质呈灰白色混浊,角膜基质混浊于病毒接种后的第10天达到高峰,持续至第14天后逐渐减轻.流式细胞仪检测显示,小鼠外周血淋巴细胞中CD3+CD4+BTLA+T细胞和CD3+ CD4+ HVEM+T细胞的阳性率,在角膜接种病毒前(0 d)分别为(3.15±0.60)％和(9.84±1.06)％,在角膜接种病毒后第10天(HSK疾病程度最严重时)分别增加到(20.47±3.15)％和(45.18±3.90)％(与0d相比差异均有显著统计学意义,均为P＜0.01).免疫组织化学方法检查HSK小鼠角膜组织中BTLA和HVEM的蛋白表达结果一致:HSK临床表现最严重时,即病毒接种后第10天时,BTLA蛋白和HVEM蛋白在角膜组织中表达最强,主要表达于角膜基质层内浸润的炎性细胞上,角膜上皮层和内皮层也有表达.结论 在HSK小鼠模型中,BTLA及其配体HVEM蛋白在角膜组织中及外周血CD4+T细胞上表达明显增强,共抑制信号BTLA-HVEM参与了CD4+T细胞介导的HSK的免疫病理过程.     

单纯疱疹性角膜炎活动期行穿透性角膜移植术的疗效评价

目的 评价复发型单纯疱疹性角膜炎（herpes simplex keratitis,HSK)基质型活动期行穿透性角移植术的治疗效果。方法 对66例（66只眼）HSK基质型活动期患者行穿透性角膜移植术（penetrating keratoplasty,PKP),并与同期59例（59只眼）HSK基质型稳定期的PKP术后患者的疗效进行对比。结果 两组HSK患者术后角膜植片透明率、原发病复发率及视力间比较差异无显著性（P＞0．05）。结论 HSK基质型活动期行PKP术,只要术前和术中处理得当,不仅可缩短病程和减少并发症,而且还能取得与HSK基质型稳定期行PKP手术同样的疗效。     

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4融合蛋白对鼠单纯疱疹性角膜基质炎抑制作用的研究

研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4融合蛋白(cytotoxic Tlymphocyte-associated antigen-4 immunoglobulin,CTIA-4Ig)对鼠单纯疱疹性角膜基质炎(herpetic stromal kerafifis,HSK)的抑制作用。方法用单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)接种于BALB／c鼠角膜上建立HSK动物模型,采用CTIA-4Ig阻断B7：CD28／CTIA-4协同刺激途径,抑制T淋巴细胞增殖、分化为效应细胞;观察HSK的发病率、临床特征、角膜组织学改变、角膜病毒滴度、迟发型超敏反应及抗原刺激脾细胞分泌细胞因子的情况。结果CTIA-4Ig可减少小鼠外周血中CD4^ T淋巴细胞(81．6％)及CD8^ T淋巴细胞(67．9％),阻止鼠发生HSK、减轻角膜混浊程度及角膜内炎性细胞的浸润、损伤鼠的迟发型超敏反应能力,抑制鼠脾细胞分泌辅助性T淋巴细胞1型(T-helper 1,Th1)细胞因子;但不影响角膜病毒滴度及小鼠死亡率。结论用CTIA-4Ig阻断B7：CD28／CTIA-4协同刺激途径,能够抑制T淋巴细胞增殖并抑制CIM^ Th1细胞的功能,阻止HSK发病,减轻HSK的严重程度。     

单疱性角膜炎患者细胞免疫状态的研究——以Wu系列McAb测定外周血T细胞亚群

应用Wu系列McAb以直接致敏红细胞花环法测定70例受检者78份外周血T细胞亚群。结果表明:活动期HSK基质型及上皮型患者均表现为OKT_4~+细胞百分值及OKT_4/T_8比值降低,基质型HSK患者OKT_8~+细胞百分值增高。非活动期患者OKT_4~+、OKT_8~+及OKT_4/T_8比值与对照组无显著差异。分析了患者外周血T细胞亚群改变在HSK免疫发病机制中的意义,提出观察T细胞亚群改变有助于监测HSK复发及指导HSK治疗。     

单疱角膜炎患者外周血白细胞介素Ⅱ活性与自然杀伤细胞活性的关系

目的了解单疱角膜炎（ＨＳＫ）患者的细胞免疫功能状态，从免疫学角度探讨ＨＳＫ的发病与复发机制。方法检测４０例正常人，２８例活动期ＨＳＫ（上皮型１３例、基质型１５例），２１例非活动期ＨＳＫ的外周血淋巴细胞白细胞介素Ⅱ（ＩＬ－２）活性及自然杀伤细胞（ＮＫ）活性水平。结果ＨＳＫ患者的ＩＬ－２及ＮＫ活性明显低于正常人，二者呈正相关关系，且基质型ＨＳＫ的变化显著。结论在ＨＳＫ的发生与发展过程中有免疫机制的参与，表现为细胞免疫功能低下。     

复发性单疱角膜炎红细胞免疫功能初步研究

对６７例实质型、复发性单疱角膜炎患者进行红细胞Ｃ３ｂ受体花环和红细胞免疫复合物花环试验，结果表明：红细胞Ｃ３ｂ受体花环率降低，而红细胞免疫复合物花环率则明显增加，与对照组比较，均有显著意义（Ｐ＜０．０１）。同时对红细胞免疫在ＨＳＫ免疫发病机制中的意义进行了初步探讨。     

单疱病毒性角膜炎患者外周血T淋巴细胞体外活化的研究

目的:了解单疱病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis,HSK)患者外周血T细胞体外活化的能力。方法:应用流式细胞技术对7例HSK基质型患者及4例溃疡型患者外周血、外周血体外培养、外周血与植物凝集素(phytohemagglutinin,PHA),沸波醇酯(phorboll2,13-dibutyrate PDB)及PDB加钙离子导入剂(ionophore,IONO)体外培养后T细胞表面HLA-DR、CD25、CD69、CD71的表达进行检测,并与6例正常人进行对照。结果:HSK基质炎型患者外周血CD3~ DR~ 细胞高于正常组,CD3~ CD71~ 细胞低于正常组。外周血培养72小时后,HSK基质炎型组CD8~ CD71~ 低于正常组,溃疡型CD8~ CR~ 、CD8~ CD69~ 、CD8~ CD71~ 低于正常组,CD8~ DR~ 也低于基质炎型组。外周血加PHA培养72小时后,HSK基质炎型及溃疡型组CD3~ CD71~ 、CD8~ CD69、CD8~ CD71均低于正常组,溃疡型组CD8~ CD25~ 也低于正常组,CD8~ CD69~ 低于基质炎型组。HSK基质炎型组在外周血加PDB培养组的CD3~ CD71~ 及在外周血加PDB及IONO培养的CD3~ CD69~ 均低于正常组。结论:HSK患者外周血T细胞的体外活化能力明显降低,HSK溃疡型患者的外周血T细胞的活化能力较HSK基质型更差。眼科学报1999;15:225-228。     

IL-17在单纯疱疹性角膜基质炎小鼠中表达的变化

目的:研究IL-17在小鼠单纯疱疹性角膜基质炎模型中的表达。方法:将1.0×106空斑单位的单纯疱疹病毒1型KOS毒株接种于BALB/c鼠的角膜上,建立HSK动物模型。免疫组织化学染色观察IL-17在角膜中的表达。分别取正常小鼠及接种病毒后的第1～3,7,10,14,21,28d,用毛细管取小鼠的左眼眼眶静脉窦血1mL,分离淋巴细胞,行荧光抗体染色,用流式细胞仪检测IL-17阳性的CD4+T细胞的表达。在裂隙灯显微镜下观察角膜的变化,检查角膜的组织学病理改变。结果:实验组中,角膜和外周血均有IL-17表达。实验组角膜基质内炎性细胞、角膜混浊程度非常严重。IL-17的表达与HSK小鼠炎症表现的严重程度成正相关(r=0.609,P<0.01)。结论:IL-17在HSK小鼠模型中呈高表达,且IL-17在HSK的发病过程中起一定作用。