大鼠小肠移植排斥反应中细胞凋亡的动态研究

目的 研究小肠移植后排斥反应与细胞闻过则喜良心的关系以及雷帕霉素（RAPA）对移植后排斥及细胞凋亡的作用。方法 以SD大鼠为假移植组作对照（1组）,其他各组采用Wistar→SD大鼠异位小肠移植模型,移植后随机分为排斥反应组（2组）、雷帕霉素2mg.kg^-1组（3组）和雷帕霉素4mg.kg^-1.d^-1组（4组）,每组术后1、3、5、7d分别处死6只大鼠,获取移植肠组织行病理学检查和细胞凋亡检测。结果 各组在术后1、3d均未发现排斥反应,2组术后5、7d分别出现I度和Ⅱ度排斥,3组仅在术后7d出现早期排斥迹象,4组枯术后一直未见排斥证据,小肠细胞凋亡数量在排斥反应前期和排斥反应时显著增加,不同强度的排斥反应,细胞凋亡数量差异有显著性。结论 排斥反应中可出现大量的肠细胞凋亡,其始发时间早于排斥的组织学发现,凋亡细胞数量与排斥强度呈正相关,可作为小肠移植后排斥反应的另一种可信的标志物。雷帕霉素对排斥反应的抑制能力与剂量有关,并不能抑制肠细胞凋亡的发生。     

大鼠小肠移植后淋巴管重建对他克莫司药代动力学的影响

目的　研究大鼠小肠移植后淋巴管重建对他克莫司 (FK5 0 6 )吸收、转运等药代动力学的影响。方法　近交系雄性BrownNorway (BN)大鼠为供者 ,Lewis (LEW )大鼠为受者。将实验大鼠随机分为两组。A组 (n =12 ) :LEW大鼠在异位双造口小肠移植后 ,立即作淋巴管重建术 (LR)。B组 (n =12 ) :LEW大鼠在异位双造口小肠移植后 ,不作LR。两组术后均给予FK5 0 6 ,用量为 0 .5mg/kg ,经移植肠腹壁造口注入 ,1次 /d。分别在小肠移植术后 1、4、7、14d给予FK5 0 6后1.2、2、3h ,取静脉血约 0 .5ml,用微粒子免疫分析仪进行FK5 0 6全血质量浓度测定。结果　术后 1、4、7d给药后各时段 ,B组大鼠血浆FK5 0 6水平均显著低于A组 (P <0 .0 5 )。术后第 14d ,B组给药后各时段的血浆FK5 0 6水平仅轻度低于A组 ,但在给药后 1.2h ,差异仍有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　大鼠异位小肠移植后淋巴管立即重建 ,对FK5 0 6的吸收和转运能力显著提高。     

临床肝-小肠联合移植的若干问题

90年代以来，肝一小肠联合移植技术在国外发展迅速，临床应用于不可逆小肠功能衰竭合并肝功能衰竭患者的治疗取得了良好的效果。本文结合有关文献，介绍了临床肝一小肠联合移植的现状、适应证、手术方法、免疫抑制剂方案、术后监测及营养支持等若干问题。     

脾肠联合移植对大鼠小肠移植免疫耐受的影响

目的　探讨脾肠联合移植对小肠移植免疫耐受的诱导作用。方法　选用SD大鼠为供体、Wistar大鼠为受体 ,进行异位全小肠和脾脏联合移植。实验分 3组 ,每组 6只。A组 :小肠移植非免疫干预组 ;B组 :受体脾切除 ,脾肠联合移植组 ;C组 :小肠移植环孢霉素A(CsA)治疗组。术后 3、5、7、10d取移植小肠回肠段 0 .5～ 1.0cm进行病理学检查 ,用病理图像分析系统测量黏膜厚度 ,绒毛高度和隐窝深度。采用TdT介导的脱氧核苷酸原位末端标记法 (TUNEL)检测 3、5、7d移植小肠黏膜细胞凋亡 ,评价移植小肠急性排斥反应损伤程度。结果　A、B两组均有不同程度的急性排斥反应损伤 ,但A组高于B组 ,移植后 3、5、7d分别属于轻、中、重度排斥 ,10d黏膜基本完全脱落。B组移植后 3、5d符合轻度排斥 ,7d中度以下排斥 4只 ,重度排斥 2只 ,10d中度排斥 2只 ,重度 4只 ,但仍可见黏膜层。C组移植后 10d 1只出现轻度排斥其余未见明显损伤。黏膜厚度、绒毛高度和隐窝深度B组明显高于A组 ,黏膜上皮细胞凋亡数目较A组低。结论　受体脾切除 ,脾肠联合移植可减轻移植小肠急性排斥反应损伤 ,诱导一定程度的小肠移植免疫耐受     

肠移植早期黏膜地址素细胞黏附分子在大鼠移植小肠及其肠系膜淋巴结的表达

目的 探讨黏膜地址素细胞黏附分子（MAdCAM-1）在大鼠小肠移植早期移植肠及其肠系膜淋巴结中的表达及意义。方法 选用近交系F344／N和BN大鼠建立全小肠异位移植模型后分3组：第1组，非手术对照组（F344／N）；第2组，同基因移植组（F344／N→F344／N）；第3组，异基因移植组（BN→F344/N）。术后1、3、5、7d取各组移植肠及其肠系膜淋巴结检测MAdCAM-1表达的分布及变化，同期进行移植肠组织病理学检查。结果 同基因移植组各检测时点的肠黏膜组织表现与正常小肠的组织学特征基本相同；异基因移植组肠黏膜组织表现符合轻-中-重度排斥反应的渐进过程，2周后移植肠绒毛变的低平，散在黏膜上皮脱落，移植肠相关肠系膜淋巴结萎缩明显。MAdCAM-1在急性排斥反应期，高表达于移植肠固有层及其肠系膜淋巴结，特别是高表达于肠黏膜固有层中的扁平血管内皮细胞表面。同基因移植组术后MAdCAM-1的表达在1—7d均无明显量的变化；而异基因移植组MAdCAM-1在移植肠中的表达呈上升趋势，而在其肠系膜淋巴结中的表达呈下降趋势。结论 MAdCAM-1与小肠移植急性排斥反应的进展关系密切。     

大鼠小肠移植动物模型研究进展

小肠移植（SBT）虽然已开展40余年，但由于手术技术、免疫排斥、感染等原因，成功率远低于其他脏器移植，因此建立可靠、重复性好的实验动物模型是非常重要的，其中大鼠小肠移植是应用和研究最广泛的动物模型，[第一段]     

大鼠肝小肠联合移植的研究

采用封闭群大鼠建立一种肝小肠联合移植模型，研究肝移植后的自然耐受状态对小肠移植物的保护作用。结果发现：在封闭群单独小肠移植组大鼠，术后１４天内排斥率为１００％。     

环孢素A与他克莫司对大鼠原位小肠移植慢性排斥反应的影响

目的 建立稳定可靠的长期存活大鼠原位小肠移植慢性排斥反应(CR)模型,比较环孢素A(CsA)与他克莫司(Tac)诱导的CR的特点.方法 供、受鼠分别为雄性近交系F344、Lewis大鼠,移植小肠肠系膜上动脉、门静脉分别与受鼠肾下腹主动脉及下腔静脉端侧吻合,切除受鼠原小肠,移植小肠两端分别与受鼠肠行端端吻合.研究Ⅰ为受鼠手术当天至术后第13天肌肉注射CsA,5mg·kg-1 ·d-1.研究Ⅱ为手术当天至术后第13天及术后第20、27天肌肉注射Tac,低、中、高剂量组的剂量分别为0.3、0.5、1.0 mg·kg-1 ·d-1.观察大鼠存活率、体重及组织形态学改变.结果 研究Ⅰ中,受鼠术后60、90 d的病理表现均为CR,但肠黏膜钝化不明显.研究Ⅱ中,低、中剂量组受鼠最长存活126 d,而高剂量组受鼠存活超过180 d,体重增长曲线接近同系移植组.CsA与Tac制备的受鼠移植小肠病理学表现均为中、重度CR,但Tac制备的模型更接近临床小肠移植的CR病理学特征.结论 以F344大鼠为供鼠、Lewis大鼠为受鼠,分别以CsA、Tac为免疫抑制剂均可建立稳定的大鼠原位小肠移植CR模型,Tac制备的受鼠存活时间更长,病理学特征更为典型.     

大鼠肝小肠联合移植肠壁酶活性变化的研究

目的探讨肝小肠联合移植后肠壁酶活性的变化及其与移植肠功能和免疫排斥反应之间的关系。方法用封闭群大鼠建立肝小肠联合移植模型,术后定期对移植组织进行病理学、酶组织化学检查。结果单独小肠移植组术后均发生排斥反应,肠壁酶活性消失。肝小肠联合移植组５６％可避免排斥反应,肠壁酶活性和神经成分得以保持和恢复。结论肝小肠联合移植可使供肠避免或推迟被排斥。术后检测肠壁酶活性和神经成分的变化可用于监测排斥反应     

Host immune suppression after small bowel/liver transplantation in rats

Simultaneous liver grafting in the Lewis (RT1¹)-to-DA (RT1^a) rat strain combination protects small intestinal grafts from rejection. The present study examined host immune responses after combined small bowel/liver transplantation (SBL) in this model. Orthotopic liver transplantation and heterotopic small intestinal transplantation were performed simultaneously and compared with isolated small bowel allografts (SBA) and isolated small bowel isografts (SBI). All rats were sacrificed on postoperative day (POD) 7 or 14 for immunological and histological studies. The mean time to rejection of the SBA was 6.6±0.3 days. Incontrast, there was no clinical or histological evidence of intestinal rejection in SBL recipients during the 14 days of follow-up. The SBL recipients showed clinical and histological evidence of graft-versushost disease (GVHD). Lmphocyte proliferation and IL-2 production in response to donor antigens were suppressed after SBL transplantation compared with the SBA or the SBI controls (P<0.05). Cell-mediated cytotoxicity and lymphocytotoxic antibody production against donor cells were also significantly inhibited in the SBL recipients compared with the SBA control group (P<0.05). We conclude that SBL transplantation in the Lewis-toDA rat strain combination: (1) suppresses host alloimmune responses, (2) prevents early intestinal rejection, and (3) favors the development of GVHD.     

小肠移植后并发侵袭性真菌感染的治疗

目的 总结小肠移植术后侵袭性真菌感染(IFI)的治疗经验和教训.方法 将1994年至2009年6月间15例小肠移植患者分为3个阶段,1994-1995年的3例患者为第1阶段,2003-2006年的7例患者为第2阶段,2007年以后的5例患者为第3阶段.第1和第2阶段患者围手术期真菌感染的预防方案采用静脉注射氟康唑,IFI的治疗以静脉注射氟康唑为主,在病情危重时静脉注射两性霉素B或两性霉素B脂质体,首次用量为1～5 mg/d(或0.02～0.10 mg·kg~(-1)·d~(-1)),视患者耐受情况每日增加5 mg;第3阶段患者围手术期真菌感染的预防方案采用静脉注射两性霉素B脂质体,治疗IFI时,两性霉素B脂质体首次给药便达到目标治疗剂量,用量高达6 mg·kg~(-1)·d~(-1),并严密监测患者的生命体征,肝肾功能及电解质的变化,根据患者病情的变化和肾功能的状况调整剂量.结果 15例患者中有4例术后发生IFI,发生率为26.7%,其中第1、2和第3阶段患者中分别有1例、2例和1例发生IFI.第1和第2阶段3例发生IFI的患者经治疗无效死于严重IFI,第3阶段1例发生IFI的患者经两性霉素B脂质体治疗44 d后被成功救治.治疗期间,患者尿素氮和血清肌酐水平均显著升高,停药后逐渐下降至正常水平.3个阶段患者总体病死率为75%.结论 小肠移植术后IFI是极其凶险的并发症,病死率极高;两性霉素B脂质体能够成功救治IFI患者,在严密监测肾功能下,大剂量应用两性霉素B脂质体是安全的.     

添加谷氨酰氨强化的早期肠内营养对肝移植大鼠肠屏障的保护作用

目的 观察使用添加谷氨酰胺(Gln)强化的早期肠内营养(EEN)对原位肝移植大鼠肠黏膜屏障的影响.方法 取Wistar大鼠,采用随机数字表法将大鼠分为对照组、肝移植组和EEN组.对照组仅手术分离肝十二指肠韧带;肝移植组和EEN组按两袖套法进行肝移植,供者为同批Wistar大鼠.术前3、2、1d及术后3h开始,给予EEN组受鼠添加了Gln(0.3 g·kg-1 ·d-1)的肠内营养混悬液(125 ml·kg-1 ·d-1)灌胃,肝移植组受鼠给予等体积生理盐水灌胃;对照组无特别处理.术后检测各组小鼠血浆内毒素、D-乳酸及血清肿瘤坏死因子α (TNF-α)的含量,测定肠黏膜TNF-αmRNA的表达,并对回肠肠壁组织进行超微结构观察.观察和记录各组小鼠的存活时间.结果 肝移植组和EEN组术后12、24和72 h的血浆内毒素、D-乳酸及血清TNF-α含量均明显高于对照组(P＜0.01),而EEN组术后24和72 h时较上述指标肝移植组均明显下降(P＜0.01).电镜下,对照组回肠黏膜上皮间隙正常,微绒毛排列整齐;术后12、24和72 h时,肝移植组小肠黏膜上皮间隙扩大,上皮细胞线粒体肿胀,微绒毛肿胀、空泡化,而EEN组超微结构的改变较肝移植组明显减轻.肝移植组和EEN组术后TNF-α mRNA表达明显升高(P＜0.01),而EEN组较同时点肝移植组的TNF-αmRNA表达明显下降(P＜0.01).对照组存活时间明显长于肝移植组和EEN组(P＜0.05),而EEN组存活时间较肝移植组明显延长(P＜0.05).结论 肝移植后可导致肠黏膜屏障损害,添加Gln强化的EEN对肝移植大鼠肠黏膜屏障具有明显的保护作用,可明显延长肝移植后大鼠的存活时间.     

Effects of donor pretreatment with antilymphocyte serum and cyclosporin on rejection and graft-versus-host disease after small bowel transplantation in immunosuppressed and nonimmunosuppressed rats

After fully allogeneic small bowel transplantation, both graft-versus-host disease (GVHD) and rejection may occur. Donor pretreatment may prevent GVHD, but this sometimes leads to accelerated graft rejection. To study a possible balance between GVHD and rejection, fully allogeneic total orthotopic small bowel transplantation was performed in rats using the WAG-to-BN donorhost combination. Untreated control grafts were rejected in 16.6±2.7 days (mean ±SEM), and 35% of the animals had mild, transient GVHD. Pretreatment of the donor with antilymphocyte serum on days-2 and-1 before grafting, either intravenously or intraperitoneally, completely eliminated the occurrence of clinical GVHD but led to significantly shortened survival times (12.3±0.8 and 10.3±0.9 days, respectively). Donor pretreatment with 50 mg/kg cyclosporin (CyA) on days-2 and-1 prolonged graft survival significantly to 22.1 days but had no significant effect on the incidence of GVHD. Administration of 25 mg/kg CyA on days 0, 1, 2, 4, and 6 after grafting prolonged survival to 38.3 days with no evidence of GVHD. Pretreatment of the donor with antilymphocyte serum (ALS), combined with the same postoperative, short-term CyA regimen, increased survival to more than 50 days, again with no evidence of GVHD. When CyA was used as both donor pretreatment and postoperative therapy, there was no survival advantage compared to the use of postoperative CyA alone. These results show that an in vivo balance between GVHD and rejection exists and that abrogation of GVHD leads to accelerated rejection. Immunosuppression of the recipient may overrule this accelerated rejection while preserving the beneficial effect of donor pretreatment: elimination of clinical GVHD.     

猪小肠血管在小肠移植中的解剖研究

目的探讨小猪小肠移植时供体、受体和最佳血管的选择。方法麻醉,先后称量30头小猪及其小肠的体重与长度,测算两者比例关系;对离体小肠行造影、色料灌注、X线摄片,观测腹主动脉、肠系膜血管及其分支在体和离体的分布情况。结果小肠的长度平均为体长的11.5倍;小肠的重量平均为体重的2.3%。腹主动脉和肠系膜前动脉近段在体与离体灌注后血管外径分别为4.3/4.6mm和2.5/2.7mm左右,肠系膜前静脉较肠系膜前动脉粗1～2mm。肠系膜前动脉水平段分支多为6～8支。一般第5、6支最长[(20.0±7.0)mm和(22.0±8.2)mm],在体与离体血管外径分别达到1.9、2.2mm左右。结论腹主动脉、近段肠系膜前动脉及其第5、6分支水平肠系膜前动脉可以分别作为小猪全小肠和节段小肠移植的首选血管;在实行节段小肠移植时,可以利用肠管长度比例系数,进行初步筛选实验动物。     

Graft-vs-host disease after small bowel transplantation in children

Purpose

Graft-vs-host disease (GVHD) is a rare complication of transplantation of organs rich in immunocompetent cells. The goal of this study was to report the features of GVHD after small bowel transplantation (SBTx) in children.

Methods

The study involved a retrospective review of patients undergoing SBTx between 1999 and 2009 who had GVHD.

Results

Of 46 children receiving 52 intestinal grafts (2 liver-intestine and 3 multivisceral), 5 (10%) developed GVHD. Median age at transplant was 42 (19-204) months. Baseline immunosupression consisted of tacrolimus and steroids supplemented with thymoglobulin (n = 2) or basiliximab (n = 3) for induction. Median time between transplantation and GVHD was 47 (16-333) days. All patients had generalized rash, 2 had diarrhea, and 2 had respiratory symptoms. Other symptoms were glomerulonephritis (n = 1) and conjunctivitis (n = 1). Four developed severe hematologic disorders. The diagnosis was confirmed by skin biopsy in 4 patients and supported by chimerism studies in two. Colonoscopy and opthalmoscopic findings were also suggestive in one. Treatment consisted of steroids and decrease of tacrolimus, with partial response in four. Other immunosuppressants were used in refractory or recurrent cases. Three patients died within 4 months after diagnosis.

Conclusion

Graft-vs-host disease is a devastating complication of SBTx, with high mortality probably associated with severe immunologic dysregulation.     

The pattern of rejection after combined stomach,small bowel,and pancreas transplantation in the rat

This study was designed to investigate whetherin combined stomach, small bowel, and pancreas transplantation allograft rejection occurs in the individual organs concomitantly and with the same intensity. Heterotopic enbloc transplantation of the stomach, small bowel, and pancreas was performed in a Lewis-to-Brown Norway rat combination. Group 1 animals received no immunosuppressive therapy while animals in group, 2 were treated with cyclosproin (10 mg/kg body weight, orally) daily. Grafts were histologically evaluated on the 5th (subgroups 1a and 2a) and 10th (subgroups 1b and 2b) postoperative days. The degree of rejection was defined as moderate, intermediate, or severe according to predefined criteria. The results indicate that the small bowel is more susceptible to rejection than either the stomach or the pancreas. Mucosal biopsies of the stomach are unlikely to provide a reliable guide to rejection in the small bowel.     

猪节段性小肠移植免疫耐受的研究

目的 探讨免疫耐受在移植领域的应用前景,建立猪节段性小肠移植免疫耐受模型。方法 １２只幼猪为受者,随机分为实验组及对照组,另选体重相近的异性猪为供者,实验组用供者骨髓细胞预处理,２周后行节段性小肠移植,术后不使用免疫抑制剂;对照组不作预处理。结果 实验组部分移植小肠获长期存活,Ｔ细胞亚群明显下降,外周血白细胞介素（ＩＬ－６均无明显变化,外周血白细胞发现嵌合现象,病理表现为轻度急性排异和慢性排异或无     

小肠移植术后内镜引导下移植肠黏膜活检的时机及诊断价值

目的 总结小肠移植术后内镜引导下移植肠黏膜活检的时机及该技术对急性排斥反应和感染的诊断价值.方法 根据免疫抑制方案的不同,将15例小肠移植受者分为3个阶段.1994-1995年为第1阶段(3例),2003-2006年为第2阶段(7例),2007年以后为第3阶段(5例).第3阶段进行计划性内镜引导下移植肠黏膜活检的监测,既术后第3天进行首次内镜引导下移植肠黏膜活检,此后活检的频次在术后第1个月为2次/周,术后第2～3个月为1次/周,术后第4～6个月为1次/2周,术后7个月以后为1次/月,在受者出现排斥反应的临床症状和抗排斥反应治疗期间,也进行内镜引导下移植肠黏膜活检.结果 15例共进行内镜引导下移植肠黏膜活检255次,移植肠腹壁造口肉眼直视下取材活检21次.以上276份样本中,诊断排斥反应共51份(18.5%),其中诊断不确定急性排斥反应至轻度排斥反应32份(11.6%)、中度排斥反应9份(3.3%)、重度排斥反应10份(3.6%),巨细胞病毒(CMV)感染2份(0.7%),细菌感染2份(0.7%).15例共发生病理证实并需l临床治疗的排斥反应20次,其中不确定急性排斥反应至轻度排斥反应11次、中度5次、重度4次,发生细菌性和CMV肠炎各1次.结论 内镜引导下移植肠黏膜活检及其病理学检查是小肠移植术后诊断排斥反应和感染的重要手段,有计划的进行该检查对排斥反应有术后监测、早期诊断、鉴别诊断和指导治疗的价值.