PTEN磷酸酶活性对乳腺癌细胞ZR-75-1迁移能力的影响

目的:探求PTEN蛋白的磷酸酶活性对乳腺癌细胞ZR-75-1转移能力的影响。方法:采用脂质体介导法分别将野生型PTEN质粒(wt-PTEN)、磷酸酶失活的PTEN质粒(G129R-PTEN)和只具有蛋白磷酸酶活性的PTEN质粒(G129E-PTEN)转染PTEN基因缺失的人乳腺癌细胞株ZR-75-1,Western印迹法检测PTEN蛋白及P397-FAK的表达水平,体外细胞划痕实验观察PTEN磷酸酶活性对ZR-75-1细胞迁移能力的影响,细胞基质黏附试验和人工重组基底膜侵袭试验测定PTEN质粒转染和未转染的ZR-75-1细胞的黏附抑制率和侵袭抑制率,免疫组化法检测MMP-2的水平。结果:wt-PTEN、G129R-PTEN及G129E-PTEN3种质粒均成功转染ZR-75-1细胞并有PTEN蛋白的表达,其中wt-PTEN、G129E-PTEN均能抑制ZR-75-1细胞迁移;wt-PTEN和G129E-PTEN转染细胞之间的黏附抑制率和侵袭抑制率或侵袭细胞相对数均无显著性差异,但与G129R-PTEN转染的和未经转染的ZR-75-1细胞相比有显著性差异(P<0.01)。wt-PTEN和G129E-PTEN质粒转染的ZR-75-1细胞其P397-FAK水平均显著低于G129R-PTEN质粒转染的ZR-75-1细胞;wt-PTEN与G129E-PTEN质粒转染的ZR-75-1细胞MMP-2水平对比于G129R-PTEN质粒转染的和未经质粒转染的ZR-75-1细胞有显著性差异(P<0.01)。结论:具有双特异磷酸酶活性的野生型PTEN基因和只具蛋白磷酸酶活性的PTEN基因均能抑制乳腺癌细胞ZR-75-1的迁移,而磷酸酶失活的PTEN基因则无此作用。     

抑癌基因PTEN抑制乳腺癌ZR-75-1细胞转移作用机制的探讨

目的 探讨抑癌基因PTEN抑制乳腺癌细胞ZR-75-1转移的作用机制.方法 用脂质体介导法分别将野生型PTEN质粒(wt)、磷酸酶活性缺失的PTEN质粒(G129R)和只具蛋白磷酸酶活性的PTEN质粒(G129E)转染PTEN基因缺失的乳腺癌细胞ZR-75-1.转染细胞以嘌呤霉素筛选后,用PCR和Western-blot分别检测PTEN基因及其蛋白;通过黏附、侵袭实验,比较3种质粒转染细胞和未转染细胞之间的黏附、侵袭能力的差异;用Western-blot法检测各组转染细胞总的黏着斑激酶(FAK)和磷酸化黏着斑激酶(P397-FAK)的表达水平;以免疫组化法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和E-钙连素(E-Cd)的表达,并用RT-PCR检测各组转染细胞的p53mRNA水平.结果 3种质粒均成功转染ZR-75-1细胞,并证实3种转染细胞内均有PTEN基因存在及PTEN蛋白表达;wt、G129R、G129E等 3种质粒转染的细胞黏附抑制率分别为65.7%、8.8%和43.5%;侵袭抑制率分别为70.4%、6.9% 和63.5%.将wt或G129E转染细胞的黏附抑制率及侵袭抑制率与G129R转染细胞的比较,均有显著性差异(P＜0.05);但wt与 G129E转染细胞比较,均无显著性差异(P＞0.05 ).3种转染细胞总FAK水平虽无显著性差异(P＞0.05 ),但wt和G129E转染细胞其P397-FAK和 MMP-2水平都显著低于G129R转染细胞(P＜0.05).3种转染细胞间的E-Cd水平未见显著差异.RT-PCR分析显示,wt、G129E和G129R 3种转染细胞p53 mRNA水平无显著性差异,但均显著高于未转染细胞.结论 野生型PTEN基因所表达的蛋白具脂质和蛋白双特异磷酸酶活性,对乳腺癌细胞ZR-75-1的转移具有抑制作用,其机制与磷酸酶活性有关,其中蛋白磷酸酶活性可能起主要作用.     

抑癌基因PTEN与乳腺癌

目的:总结国内外在乳腺癌中关于PTEN的研究进展,探索其对于乳腺癌治疗的指导作用。方法:利用PubMed数据库检索系统,以乳腺癌、PTEN、AKT为关键词,检索近5年的相关文献,共检索到英文文献104篇。纳入标准:1)PTEN来源和分子结构特征;2)PTEN发挥功能的几种途径,特别是PI3K/AKT途径;3)PTEN与乳腺癌治疗的关系。根据纳入标准,最后精选了43篇文章分析。结果:SHIP2、PIK3CA和BRCA1对PTEN的抑癌作用起负性作用,而BMP2、E-钙黏蛋白和p27kip1能促进PTEN的抑癌作用。PTEN表达决定乳腺癌细胞对于化疗药物doxo-rubicin、tamoxifen、ZD1839和trastuzumab的敏感性,却降低了对rapamycin的反应性。结论:虽然已经知道抑癌基因PTEN与乳腺癌密切相关,但其具体机制仍不清楚,需要进一步研究。     

5-Aza-CdR诱导抑癌基因PTEN重新表达对乳腺癌细胞的影响及机制

目的观察5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡及体外侵袭能力的影响并初步探讨其机制。方法体外培养MCF-7细胞,采用不同浓度的5-Aza-CdR(1×10-6、2×10-6、5×10-6和1×10-5mol/L)分别作用24h、48h和72h,分别采用MTT法检测细胞增殖抑制率、流式细胞仪检测细胞凋亡、Transwell法检测细胞侵袭能力、Western-blot检测PTEN和VEGF-C蛋白表达的变化。结果经不同浓度的5-Aza-CdR作用后,MCF-7细胞的增殖受到不同程度的抑制并发生凋亡,细胞侵袭能力也发生不同程度的降低,且其作用随浓度增加和时间延长而增强(P<0.05)。在5-Aza-CdR作用后,MCF-7细胞PTEN的表达逐渐增强,而VEGF-C的表达逐渐减弱。结论 5-Aza-CdR可抑制乳腺癌细胞增殖、诱导其发生凋亡、降低其体外侵袭能力,其可能是通过去甲基化作用使抑癌基因PTEN重新表达并下调VEGF-C的表达而发挥作用的。     

抑癌基因PTEN的突变缺失与乳腺癌

PTEN基因是具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，大量研究表明，乳腺癌的发生常伴有PTEN蛋白表达的缺失或减弱，提示该基因的突变失活与乳腺癌的发生、发展及预后密切相关。现简要综述PTEN与乳腺癌关系的研究进展。     

抑癌基因PTEN对肝癌细胞增殖的抑制及作用机制

目的探讨抑癌基因PTEN对肝癌细胞增殖和细胞周期的调控作用。方法构建野生型PTEN基因和突变型PTEN基因的真核表达载体pEGFP—WT—PTEN和pEGFP—PTEN;G129R。采用脂质体介导的基因转染法,分别将上述载体转染不表达PTEN蛋白的人肝细胞肝癌细胞系HHCC,经G418筛选,获得稳定表达PTEN蛋白的细胞克隆。以流式细胞仪测定细胞周期,以Western blot法分析稳定表达PTEN蛋白的肝癌细胞内源性的磷酸化AKT表达水平,同时与未进行基因转染和转染空载体pEGFP-C1的HHCC细胞进行对照。结果稳定表达野生型PTEN蛋白的肝癌细胞,细胞生长受到明显抑制,与转染空载体的HHCC细胞比较,G1期细胞比例显著增高,G2期和S期细胞比例显著降低,且差异有统计学意义（P〈0．05）;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞,与转染空载体的HHCC细胞比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。与转染空载体的HHCC细胞比较,稳定表达野生型PTEN蛋白的HHCC细胞,其内源性磷酸化AKT水平明显减低;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞,其AKT水平无明显变化。结论野生型PTEN基因对肝癌细胞周期具有调控作用,而突变型PTEN基因丧失对肝癌细胞周期的调控作用;野生型PTEN基因可能通过降低AKT的活化而实现对肝癌细胞周期的调控。     

KAI1基因对乳腺癌细胞体外增殖的抑制作用

目的研究KAI1基因对乳腺癌细胞体外增殖的抑制作用。方法应用脂质体法将pCMV-KAI1质粒转染人高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,免疫印迹方法检测蛋白表达;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、平板克隆形成实验、体外黏附及侵袭力实验判断细胞增殖能力及黏附、侵袭力的变化。流式细胞术检测细胞生长周期的变化。结果获得了稳定表达KAI1基因的MDA- MB-231乳腺癌细胞克隆。MTT法显示,转染KAI1基因组的集落形成率(25.33%±2.36%)较转染前(43.17%±2.75%)明显降低(P<0.05)。体外黏附及侵袭力实验表明,转染组的细胞黏附侵袭能力低于未转染组和转染空载体组(P<0.05)。流式细胞术显示,转染KAI1后,G_0/G_1期细胞数量增高,从36.78%±0.61%升高至64.00%±7.56%;G_2/M期数量降低,由17.88%±0.76%降至7.63%±0.60%,差异有统计学意义。结论KAI1基因可以抑制乳腺癌细胞的增殖黏附和侵袭能力,并可能通过调节细胞周期来影响细胞的增殖。     

抑癌基因PTEN的突变缺失与乳腺癌

PTEN基因是具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因,大量研究表明,乳腺癌的发生常伴有PTEN蛋白表达的缺失或减弱,提示该基因的突变失活与乳腺癌的发生、发展及预后密切相关.现简要综述PTEN与乳腺癌关系的研究进展.     

抑癌基因PTEN与消化系统肿瘤相关性研究进展

随着对肿瘤相关基因研究的深入,越来越多的抑癌基因被发现.PTEN[1](phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10)为1997年发现的一个肿瘤抑制基因.该基因一经发现就受到肿瘤分子生物学等研究领域的广泛关注,随后的研究证实PTEN在许多肿瘤中均存在突变和/或缺失.目前PTEN已成为肿瘤学基础研究和临床研究的热点基因之一.     

抑癌基因PTEN与妇科恶性肿瘤关系的研究进展

肿瘤的发生包括抑癌基因的失活、原癌基因的异常激活、DNA损伤等复杂过程。自1997年以来，相继有3个研究小组发现并命名了惟一编码具有双重磷酸酶活性的抑癌基因PTEN／MMAC1／TEP1，由此对第10号染色体同源丢失性磷酸酶和张力蛋白基因（phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10，PTEN）的深入研究已成为肿瘤学研究的热点。现对PTEN抑癌基因及与妇科肿瘤关系的新近研究进展做一综述。     

乳腺癌转移抑制基因1抑制肿瘤转移的作用机制

乳腺癌转移抑制基因1 (BRMS1)在多种恶性肿瘤细胞中表达降低或缺失,具有明显降低癌细胞侵袭和转移的作用.BRMS1基因通过磷酸肌醇信号及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路等调节基因转录和蛋白翻译,还可与mSin3-组蛋白去乙酰化酶(HDAC)复合体、雌激素受体等蛋白相互作用、修复细胞间隙通讯等途径抑制肿瘤细胞的侵袭及转移.BRMS1基因将可能成为有效抑制肿瘤转移基因治疗的新靶点.     

Combined effects of 1,25-dihydroxyvitamin D3 and tamoxifen on the growth of MCF-7 and ZR-75-1 human breast cancer cells

Summary In the present study we assessed the effect of combined treatment with 1,25-dihydroxyvitamin D₃ (1,25-(OH)₂D₃) and tamoxifen (TAM) on the growth of estrogen-responsive (MCF-7) and estrogen-dependent (ZR-75-1) human breast cancer cells. Both basal and 17-estradiol (17-E₂)-stimulated growth were studied. 1,25-(OH)₂D₃ (10^–10 – 10^–7 M) time- and dose-dependently inhibited basal growth of MCF-7 cells, with growth arrest at 10^–7 M. Also, 17-E₂-stimulated growth of MCF-7 and ZR-75-1 cells was inhibited by 1,25-(OH)₂D₃ in a time- and dose-dependent manner. TAM inhibited 17-E₂-stimulated growth of both cell lines and at high concentration (10^–6 M) it also inhibited basal growth of MCF-7 cells. 10^–6 M TAM together with 1,25-(OH)₂D₃ resulted in a further inhibition of basal (MCF-7 cells) as well as 17-E₂-stimulated proliferation (MCF-7 and ZR-75-1 cells) compared to the inhibition by these agents alone. TAM in combination with 10^–7 M 1,25-(OH)₂D₃ resulted in growth arrest of 17-E₂-stimulated growth of MCF-7 cells. The inhibition of basal and 17-E₂-stimulated growth of MCF-7 cells was additive at early time points (4 days), but less than additive at later time points (8–10 days). It was demonstrated that with co-treatment of MCF-7 cells an equipotent inhibition of basal growth could be reached with lower concentrations of 1,25-(OH)₂D₃, compared to treatment with 1,25-(OH)₂D₃ alone. Studies with low concentrations (< 10^–7 M) of TAM revealed a partial estrogenic effect, i.e. stimulation of MCF-7 proliferation in the absence of 17-E₂. This effect, which may resemble TAM-induced tumor flare, was completely prevented by co-treatment with a low concentration of 1,25-(OH)₂D₃ (10^–9 M). Together, these results demonstrate the potent inhibition of breast cancer cell proliferation by 1,25-(OH)₂D₃ combined with TAM and indicate a potential benefit of combining these agents for the treatment of breast cancer.     

Tamoxifen induced apoptosis in ZR-75 breast cancer xenografts antedates tumour regression

The ZR-75-1 ER positive breast cancer cell line,xenografted in female nude mice, has been usedto determine the effect of tamoxifen on cellproliferation (as measured by mitosis) and cell death(as evidenced by apoptosis and necrosis). After 2days treatment, there was a significant rise inapoptosis (p < 0.05), whereas a fall inmitosis was not apparent until 7 days (p< 0.05). Furthermore there was an increase inthe apoptotic : mitotic ratio on day 7(p < 0.05). These changes antedated tumour regression,which did reach not significance until day 14.Tamoxifen did not increase necrosis (which significantly decreasedin treated tumours once they had regressed (p< 0.01)). In contrast tamoxifen treatment of xenograftedMDA-MB-231 ER-negative breast cancer cells produced no significanteffects on growth, apoptosis, or mitosis. This studypresents clear evidence for tamoxifen inducing apoptosis inZR-75-1 xenografts (but not MDA-MB-231 tumours). Since changesin apoptosis and mitosis antedate tumour regression, theirassessment may provide the potential by which topredict tumour response to tamoxifen therapy.     

抑癌基因PTEN在乳腺癌中的表达及意义

目的　研究一种新的抑癌基因PTEN在乳腺癌中的表达及意义。方法　应用免疫组织化学SP法 ,检测了 2 8例乳腺癌及2 1例癌旁乳腺组织PTEN蛋白的表达 ;EnVision法检测癌组织中雌、孕激素受体的表达。结果　 2 1例癌旁乳腺组织中均有PTEN蛋白的表达 ,免疫组化染色较强 ,阳性物质位于乳腺小叶腺泡上皮细胞及导管上皮细胞的胞质和胞核。在乳腺癌组织中PTEN蛋白表达于癌细胞的胞质和胞核 ,2 8例乳腺癌组织中PTEN蛋白的表达不同。 14 .2 8%乳腺癌组织无PTEN蛋白的表达 ;2 1.4 %乳腺癌组织PTEN蛋白呈弱阳性 ;6 4 .2 8%乳腺癌组织中有较强的PTEN蛋白表达 ,表达强度与正常乳腺组织无明显差异。此外 ,PTEN蛋白的表达与乳腺癌的临床病理学特点相关 ,PTEN蛋白阴性的乳腺癌 ,2 5 %为雌、孕激素受体阳性 ;而PTEN蛋白表达较强的乳腺癌 ,6 6 .6 7%为雌、孕激素受体阳性 ,且差异有显著性 (P <0 .0 5 )。另外 ,PTEN蛋白阳性的乳腺癌组织 ,腋窝淋巴结转移率为 2 2 .2 % ;而PTEN蛋白阴性的乳腺癌腋窝淋巴结转移率为 75 % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　乳腺癌组织中存在着抑癌基因PTEN的表达缺失和减弱 ,抑癌基因PTEN的表达异常可能与乳腺癌的发生、发展及预后有关。     

促进乳腺癌增殖转移和肿瘤干细胞特征的研究

目的 研究Gankyrin在乳腺肿瘤中的表达及其促进肿瘤进展的分子机制。方法 利用数据库研究Gankyrin在乳腺癌中的表达情况,并分析其表达与患者生存的关系。在BT549和MDA-MB-231乳腺癌细胞系过表达和敲减Gankyrin基因后,利用CCK-8、Transwell和流式细胞实验分析细胞增殖、转移和肿瘤干细胞的比例。结果 通过数据库分析显示Gankyrin在乳腺癌组织表达较高(P＜0.01),其高表达与患者的不良预后有关(P＜0.01)。与正常乳腺组织相比,乳腺癌组织中Gankyrin启动子甲基化水平较低(P＜0.01)。通过在乳腺癌细胞中过表达和敲减Gankyrin基因后,表明Gankyrin具有促进乳腺肿瘤细胞增殖和转移的能力,可以维持乳腺癌细胞的肿瘤干细胞特征(P＜0.01)。结论 Gankyrin在乳腺癌高表达与患者的不良预后相关,其可能作为乳腺癌肿瘤标记物。     

肿瘤抑制基因PTEN研究新进展

PTEN是具有磷酸酶活性的抑癌基因,其低表达或缺失与肿瘤的进展及不良预后密切相关,其抑制肿瘤作用机制系通过抑制PI3K/AKT信号通路,FAK/PI30C和MAPK信号通路,FRAP/Mtor信号通路及影响核转录因子-Kb/IB信号通路;另外,NEDD4-1通过泛素化蛋白体降解途径调节PTEN,BMP通过RAS/ERK信号通路抑制PTEN表达,IGF-1通过IGF-1/PI3K/Akt信号通路调节PTEN.     

沉默UHRF1对乳腺癌细胞增殖和转移的影响

目的 探讨UHRF1对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖以及侵袭的影响及其相关机制。方法 采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测沉默UHRF1基因后对乳腺癌MDA-MB-231细胞活力的影响;应用克隆形成实验检测沉默UHRF1后对乳腺癌MDA-MB-231细胞存活的影响;吖啶橙-溴乙锭(AO/EB)检测沉默UHRF1后对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响;Caspase-3活性试剂盒检测沉默UHRF1后乳腺癌细胞Casapse-3活性的变化;Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad、p-Bad、XIAP、p53、p21^Cip1/Waf1和p16^INK4a的表达;应用Transwell实验研究沉默UHRF1对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响;Wound Healing实验研究沉默UHRF1后对其迁移能力的影响。结果 沉默UHRF1使乳腺癌MDA-MB-231细胞活力降低;克隆形成实验结果显示沉默UHRF1后MDA-MB-231细胞存活能力降低,AO/EB染色显示沉默UHRF1促进MDA-MB-231细胞凋亡。同时Caspase-3活性实验结果显示沉默UHRF1后乳腺癌MDA-MB-231细胞Caspase-3的活性增加;Western blot结果显示,沉默UHRF1后,能够使凋亡蛋白Bad、XIAP和Bax的表达上调,同时抗凋亡蛋白p-Bad,Bcl-2的表达下调,也使p53,p21Cip1/Waf1,p16^INK4a蛋白表达升高;Transwell以及Wound Healing实验证明沉默UHRF1能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭和迁移。结论 沉默UHRF1能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞活力和存活,并抑制乳腺癌MDA-MB-231的侵袭和迁移。沉默UHRF1通过调控p53,p21Cip1/Waf1,p16^INK4a信号发挥作用。     

肿瘤抑制基因PTEN研究新进展

PTEN是具有磷酸酶活性的抑癌基因,其低表达或缺失与肿瘤的进展及不良预后密切相关,其抑制肿瘤作用机制系通过抑制P13K／AKT信号通路,FAK／P130C和MAPK信号通路,FRAP／mTOR信号通路及影响核转录因子-kB／IB信号通路;另外,NEDIM-1通过泛素化蛋白体降解途径调节PTEN,BMP通过RAS／ERK信号通路抑制PTEN表达,IGF-1通过IGF-1／P13K／Akt信号通路调节PTEN。     

转移抑制基因nm23—H1蛋白表达与结直肠癌的关系

目的：研究转移抑制基因nm23-H1蛋白表达与结直肠癌生物学行为的关系,探讨nm23-H1基因表达在结直肠癌发生发展中的作用。方法：采用免疫组化技术,对46例结直肠癌组织中nm23-H1基因的表达状态进行定位观察。结果：结直肠癌nm23-H1基因蛋白阳性表达率为43．5％;nm23-H1基因的表达与结直肠癌的分化程度及肿块大小无显著性差异（P＞0．05）,但与结直肠癌的淋巴结转移,临床分期以及侵犯深度有相关差异（P＜0．05）;随着转移的发生,侵犯深度的增加以及疾病向晚期发展,nm23-H1基因的阳性表达率逐渐下降,直至完全失活。结论：作为肿瘤转移抑制基因,nm23-H1基因在调控癌细胞增殖,抑制癌细胞转移方面起着重要的作用;nm23-H1蛋白可作为临床判断结直肠癌侵袭转移,临床分期和患者预后的指标之一。