巢式PCR检测CK19 mRNA和LUNX mRNA诊断肺癌淋巴结微转移

目的：探讨非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）淋巴结微转移的基因诊断方法，并分析CK19 mRNA、LUNX mRNA作为肺癌微转移检测分子标记物的可行性。方法：采用巢式RT—PCR技术检测39例NSCLC患者的149枚淋巴结和20例肺良性病变患者的47枚淋巴结中的细胞角蛋白19（CK19 mRNA）、肺特异性X蛋白（LUNX mRNA）的表达。结果：39例NSCLN患者的149枚淋巴结中，46枚（30．9％）淋巴结存在CK19 mRNA阳性表达，56枚（37．6％）存在LUNX mRNA阳性表达，常规病理组织学检出20枚（13．4％）有癌转移，巢式RT—PCR方法和常规病理方法比较差异有统计学意义（P〈0．01）；20例肺良性病变患者的47枚淋巴结中CK19 mRNA和LUNX mRNA表达均为阴性，与肺癌组比较均有统计学意义（P〈0．01）。淋巴结微转移与病理类型、细胞分化程度和临床分期有密切关系（P〈0．05）。结论：CK19 mRNA、LUNX mRNA可作为检测NSCLC患者淋巴结微转移的分子标记物，联合检测可能有助于早期诊断肺癌转移，从而指导临床个体化治疗。     

实时荧光定量RT—PCR检测NSCLC患者外周血CK19mRNA和LUNXmRNA实验研究

[目的]应用实时荧光定量RT—PCR检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血CK19mRNA和LUNXmRNA,探讨其诊断NSCLC外周血微转移的临床意义。[方法]选取初治NSCLC患者40例及健康志愿者50例,用实时荧光定量RT—PCR检测外周血CK19mRNA和LUNXmRNA相对定量分析结果。[结果]（1）肺癌组与健康对照组的CK19mRNA阳性表达率及相对表达量均有显著差异;肺癌组阳性表达率与原发肿瘤部位、原发肿瘤大小、临床分期、分化程度及病理类型无相关性,其相对表达量鳞癌患者高于腺癌患者（P〈0．05）。（2）肺癌组与健康对照组的LUNXmRNA阳性表达率有显著差异,其表达与临床病理特征无相关性。[结论]CK19mRNA和LUNXmRNA作为实时荧光定量RT—PCR法检测NSCLC外周血微转移的分子标志物,具有一定临床应用价值。     

非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA的表达及与临床的关系

目的：研究非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血中细胞角蛋白19（cytokeratin 19，CK19）mRNA的表达变化及与临床的关系。方法：采用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）法进行外周血CK19mRNA表达的测定。结果：NSCLC组患者外周血CK19mRNA的阳性率为60．7％。显著高于良性病变组的3．3％和健康对照组的0（P〈0．01）；Ⅲ和Ⅳ期NSCLC患者的阳性率显著高于Ⅰ和Ⅱ期患者的阳性率（P〈0．05）；而不同病理类型NSCLC患者外周血CK19mRNA阳性率之间无显著性差异（P〉0．05）。结论：外周血CK19mRNA的检测有助于我们对NSCLC患者的病情、预后和治疗进行判断．且这并不受病理分型的影响。     

检测LUNX mRNA表达诊断非小细胞肺癌微转移的可行性及其临床意义

背景与目的 微转移的检测对非小细胞肺癌的个体化治疗和指示预后具有重要意义。LUNX为近年新发现的人类肺组织特异性基因。本研究的目的是检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者LUNX mRNA的表达情况，探讨其作为微转移检测分子标志物的可行性。方法 选择初治的NSCLC患者62例，以肺部良性疾病10例与健康人10例作为对照组，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT—PCR）和普通RT—PCR技术，检测肺癌、良性病变肺组织、骨髓和外周血LUNX mRNA的表达。结果肺癌和良性病变肺组织中LUNX mRNA阳性表达率均为100％。肺良性病变组骨髓及外周血标本和健康对照组外周血标本中LUNX mRNA表达皆为阴性。62例NSCLC患者骨髓LUNX mRNA阳性表达率为38．7％（24／62），外周血LUNX mRNA阳性表达率为29．0％（18／62），至少一项阳性表达者占45．2％（28／62）；骨髓LUNX mRNA阳性表达率随分期升高且有统计学意义（P=0．02），与病理类型、肿瘤分化程度无明显关系；外周血LUNX mRNA表达与病理分期、病理类型、肿瘤分化程度均无明显关系。NSCLC患者骨髓和外周血LUNX mRNA表达有相关性（P〈0．001）。结论 LUNX mRNA可作为检测NSCLC患者微转移的特异、敏感的分子标志物，可能有助于早期诊断肺癌转移，从而指导临床分期和治疗。     

非小细胞肺癌LUNX mRNA的表达及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血中肺特异性X蛋白（LUNX）mRNA的表达及其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测56例NSCLC患者（实验组）及34例肺良性病变患者（对照组）外周血中LUNXmRNA的表达情况,分析其与临床病理组织学特征的关系。结果①实验组NSCLC患者外周血中LUNXmRNA阳性表达率为58．93％,而对照组无表达（P〈0．05）。②NSCLC患者外周血LUNXmRNA阳性表达率与肿瘤淋巴结转移、分化程度和临床分期有关（P〈0．05）,而与患者年龄、性别、吸烟以及肿瘤部位、病理类型等均无关（P〉0．05）。结论外周血LUNXmRNA的检测可作为评价NSCLC发生、发展潜在指标,对判断病程和指导治疗具有重要的临床意义。     

检测细胞角蛋白在食管癌外周血和骨髓微转移中的意义

目的：探讨食管癌患者外周血和骨髓中CK18mRNA基因表达及临床意义。方法：采用巢式RT—PCR方法检测50例M0、10例M0的食管癌患者及10例食管良I生病变患者外周血及肋骨骨髓中细胞角蛋白CK18mRNA基因的表达。结果：50例M0食管癌患者外周血、骨髓中CK18mRNA阳性表达率分别为38．0％（19／50）和42．0％（21／50）;10例M,的食管癌患者外周血、骨髓中CK18mRNA阳性表达率分别为90．0％（9／10）、100％（10／10）;食管良性病变患者的外周血和骨髓中K18mRNA阳性表达率均为0％（0／10）,CK18mRNA阳性表达在三组间差异有显著性（P〈0．01）。CK18mRNA在Ⅳ期食管癌患者外周血和骨髓中阳性表达率与III期以前患者相比,有显著性差异（P〈0．05）。CK18mRNA在外周血和骨髓中表达无差异（P〉0．05）,但呈正相关性（r=0．704,P〈0．01）。结论：应用RT—PCR法检测食管癌患者外周血或骨髓中CK18mRNA微转移有助于食管癌的分期和预后的判断。     

LunX和CK19基因定量表达在肺癌诊断及疗效观察中的应用研究

目的：探讨采用荧光定量RT—PCR检测肺癌患者外周血LunX和CK19基因的表达，以及在肺癌诊断和疗效观察中的应用价值。方法：建立定量检测LunX和CK19 mRNA的荧光定量RT—PCR技术，检测在肺癌患者外周血的表达及治疗前后的表达水平的比较。结果：外周血标本中治疗前病例、治疗后病例和肺部良性病例LunX mRNA的表达分别为83．87％（26／31）、46．67％（7／15）和10％（1／10）。治疗前肺癌组和肺部良性病例组LunX mRNA的表达差异有统计学意义，X^2=15．2，P〈0．001；肺癌治疗前后LunX mRNA的表达也有统计学意义，X^2=4．9，P〈0．05。正常对照10例和非肺癌的肿瘤患者4例LunX mRNA的表达均为阴性，与LunX基因相比较，CK19基因灵敏度相近，但特异性较差。结论：荧光定量RT—PCR检测LunX基因的表达可以作为肺癌诊断及治疗前后疗效考核的重要参考指标，应用价值优于CK19基因。     

非小细胞肺癌组织中蛋白激酶CK2的表达及其意义

目的：酪蛋白激酶Ⅱ（casein kinaseⅡ，CKⅡ）也被称为蛋白激酶CK2。本研究探讨了蛋白激酶CK2的蛋白和基因的表达以及活性与非小细胞肺癌（non—small—cell lung carcinoma，NSCLC）临床病理之间的关系。方法：应用免疫组织化学SP法检测35例石蜡包埋的NSCLC组织及其癌旁“正常”组织和7例非肿瘤性肺组织标本中CK2催化亚基α、α＇和调节亚基B蛋白的表达。应用RT—PCR检测10例新鲜肺癌灶组织及其癌旁“正常”组织和4例非肿瘤性肺组织标本中CK2各亚基mRNA的表达。应用同位素参入法测定细胞内CK2的活性。结果：免疫组织化学检测结果显示，CK2α和β亚基在NSCLC组织中的阳性率分别为62．9％和57．1％，高于癌旁“正常”组织的11．4％和25．7％（P〈0．05），也高于非肿瘤性肺组织的28．6％和42．9％，但P〉0．05。CK2α亚基在NSCLC组织中的阳性率为65．7％，高于癌旁“正常”组织和非肿瘤性肺组织（42．9％和42．9％，但P〉0．05）；CK2各亚基的表达与患者的年龄、性别和肿瘤临床分期无关（P〉0．05）。CK2α的表达与细胞的分化程度和组织学分型无关；CK2α的表达与细胞的分化程度相关（r=0．388，P〈0．05），与组织分型无关。低分化组的CK2α的表达高于中、高分化组（P〈0．05）。CK2β在肺鳞癌中的表达高于腺癌（P〈0．05），且与细胞的分化程度无关。在NSCLC组织中，无论是CK2α．还是CK2α’，均与CK2β的表达呈正相关（r=0．439，P〈0．05；r=0．45，P〈0．05）。CK2各亚基mRNA的表达水平均高于其癌旁“正常”组织和非肿瘤良性病变组织。肺癌组织CK2的活性约为其癌旁“正常”组织的5．4倍，是非肿瘤良性病变组织的3．6倍。结论：蛋白激酶CK2在NSCLC组织中有较高表达，其高表达与NSCLC的发生和发展有关。与CK2α＇亚基相比，CK2α或β亚基可能是更为理想的生物学标志物。     

CK19mRNA和CK19蛋白联合检测在恶性胸腔积液诊断中的价值

[目的]探讨联合检测细胞角蛋白19（CK19）mRNA和CK19蛋白在恶性胸腔积液患者诊断中的价值。[方法]32例恶性胸腔积液患者和30例良性胸腔积液患者的胸水标本,以定量逆转录-聚合酶链反应法（RT—PCR）测定胸液CK19mRNA和酶联免疫吸附法（ELISA）测定胸液CK19蛋白。[结果]恶性良性胸腔积液组CK19mRNA的阳性率分别为62．5％和16．7％：恶性良性胸液组CK19蛋白的阳性率为43．8％和10．0％（P〈0．01）。联合检测胸液CK19mRNA和CK19蛋白诊断恶性胸腔积液敏感性和准确性分别为81.3％和79．0％。[结论]CK19mRNA和CK19蛋白联合检测可提高恶性胸腔积液诊断的准确性．对良恶性胸腔积液的鉴别诊断有重要参考价值。     

COX-2mRNA、CD105mRNA在骨肉瘤中表达的临床意义

目的研究环氧合酶-2mRNA（COX-2mRNA）在骨肉瘤中的表达及其与CD105mRNA的相关性。方法应用原位杂交的方法检测人骨肉瘤中COX-2mRNA和CD105mRNA的表达，并计算CD105mRNA标记的微血管密度（MVD）。结果COX-2mRNA在骨肉瘤中表达阳性率为77.5％，COX-2mRNA的表达与外科分期和肿瘤的转移密切相关（P〈0．05）；外科分期的I期与IIb期、III期间的MVD值的差异有统计学意义（P〈0．05），而I期与IIa期、IIa期与IIb期之间的差异无统计学意义（P〉0．05）；转移组的骨肉瘤其MVD值高于未转移组，二者之间的差异有统计学意义（P〈0．05）；COX-2mRNA表达与MVD值呈正相关（P〈0．05）。结论COX-2mRNA在骨肉瘤组织中呈现高表达，其高表达可能促进了骨肉瘤新生血管的生成。     

EGF mRNA和EGFR mRNA在肝细胞癌组织中的表达及其意义

背景和目的有众多证据表明表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)家族在一系列恶性肿瘤的发生发展中起重要作用,但EGFR与肝癌的关系目前尚未明确。本文旨在探讨表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)及其受体的mRNA在人肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)组织中的表达及其意义。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测60例HCC患者癌组织及癌旁肝组织中EGFmRNA和EGFRmRNA的表达情况。结果EGFmRNA阳性率在肝癌组织中(60%,36/60)显著低于癌旁组织(80%,48/60)(P<0.05);EGFRmRNA阳性率在肝癌组织中(60%,36/60)显著高于癌旁组织(41.67%,25/60)(P<0.05)。EGFRmRNA在肝癌组织中的检出率与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移、术后复发、肿瘤数目等明显有关,而与肿瘤直径、血清AFP水平、分化程度以及癌旁肝硬化无明显关系。EGFmRNA检出率与肿瘤直径明显有关,而与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移、术后复发、肿瘤数目、血清AFP水平、分化程度以及癌旁肝硬化等无明显关系。结论本研究结果提示EGF可能与肝癌的发生、发展无关;而EGFR与肝癌的发生、发展及术后复发有关;可作为预测肝癌复发、转移的参考指标。     

Survivin mRNA、CEA mRNA在大肠癌患者外周血中表达及意义

[目的]检测大肠癌患者外周血中survivin mRNA、CEA mRNA表达情况,探求大肠癌早期诊断及早期血道微转移检测的特异、敏感指标。[方法]RT-PCR法检测50例大肠癌患者及50例对照组患者外周血中survivin mRNA及CEA mRNA的表达。[结果]Survivin mRNA和CEAmRNA在大肠癌组的阳性率分别为54.0%（27/50）和62.0%（31/50）,与对照组比较有显著性差异（P〈0.05）;两指标阳性率在大肠癌复发转移组与原发无转移组比较差异有显著性（P〈0.01）。两指标阳性表达率与Dukes’分期及有无远处转移有关（P〈0.01）,而与性别、年龄、肿瘤部位、大体分型、肿瘤大小、组织类型无关（P〉0.05）。联合检测的敏感性高于任一单一指标的敏感性（P〈0.05）,而特异性无显著性差异（P〉0.05）。复发转移组双阳性率与原发无转移组比较差异有显著性（P〈0.01）。[结论]Survivin mRNA作为大肠癌早期诊断及早期血道微转移的指标具有较好的特异性。联合检测survivin、CEA相对单项指标检测显著提高了检出率,且具有良好的特异性,两者联合检测有助于预测大肠癌患者病情发展及预后评估。     

骨肉瘤中RECK和MMP-2基因的表达及其临床意义

目的 探讨RECK和MMP-2基因在骨肉瘤中的表达及其临床意义。方法 采用荧光实时定量PCR（RT-PCR）对我院2001年至2006年45例骨肉瘤手术切除标本中RECK mRNA、MMP-2 mRNA进行检测,同时结合患者的性别、年龄、转移、复发等临床病理特征,分析其表达的临床意义。结果 45例骨肉瘤组织中RECK mRNA和MMP-2 mRNA的相对表达量分别为38.15±14.15和65.00±22.86,两者表达呈负相关（r=-0.740,P=0.000）。RECK mRNA和MMP-2 mRNA表达与性别、年龄、肿瘤部位、组织亚型无关（P＞0.05）,与肿瘤复发、转移及5年生存期显著相关（P＜0.05）。结论 RECK mRNA和MMP-2 mRNA表达与骨肉瘤转移、复发及预后相关,可作为预测骨肉瘤转移、复发及预后的分子指标。     

TLR2mRNA和TLR4mRNA在蕈样肉芽肿皮损中的表达

目的:探讨Toll样受体2(TLR2) mRNA和Toll样受体4(TLR4) mRNA在蕈样肉芽肿皮损中的表达水平.方法:采用原位杂交技术检测蕈样肉芽肿皮损和正常皮肤中TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达.结果:蕈样肉芽肿皮损中TLR2 mRNA和TLR4 mRNA主要表达于表皮基底上层,正常皮肤则表达于表皮的基底层.统计学分析表明TLR2 mRNA和TLR4 mRNA在正常皮肤和蕈样肉芽肿皮损处基底层和基底上层的表达均有显著性差异(P＜0.05),且TLR2 mRNA和TLR4 mRNA在蕈样肉芽肿皮损中的表达均高于在正常皮肤中的表达(P＜0.05).结论:TLR2 mRNA和TLR4 mRNA可能在蕈样肉芽肿的发生与发展过程中发挥重要作用.     

HOTAIR mRNA和EZH2 mRNA在肾细胞癌组织中的表达情况

目的 探讨HOTAIR mRNA和EZH2 mRNA在肾细胞癌组织中的表达情况.方法 选取行手术切除的经病理学检查确诊的肾细胞癌患者的肾细胞癌组织标本61例,同时选取对应的癌旁正常肾组织标本61例为对照;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肾细胞癌组织和癌旁正常肾组织中HOTAIR mRNA和EZH2 mRNA的表达水平.结果 肾细胞癌组织中HOTAIR mRNA和EZH2 mRNA的相对表达量均明显高于癌旁正常肾组织(P﹤0.01);不同临床分期、淋巴结转移情况肾细胞癌患者的肾细胞癌组织中HOTAIR mRNA和EZH2 mRNA的相对表达量比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01);肾细胞癌组织中HOTAIR mRNA的相对表达量为(0.76±0.20),EZH2 mRNA的相对表达量为(2.04±0.51),两者呈正相关(r=0.683,P﹤0.01).结论 HOTAIR mRNA和EZH2 mRNA在肾细胞癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常肾组织,检测肾细胞癌患者的HOTAIR、EZH2水平对其肿瘤的恶性程度判断具有一定参考价值.     

乳腺癌hMAM mRNA和CD44V6 mRNA表达及临床意义

目的研究人乳腺珠蛋白(human mammoglobin,hMAM)mRNA及CD44V6 mRNA在乳腺癌中的表达,探讨它们作为乳腺癌微转移标志物的可能性.方法采用巢式逆转录聚合酶链反应(nested-RT-PCR)技术,检测乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织、乳腺良性肿瘤中hMAM mRNA及CD44V6 mRNA,检测乳腺癌、乳腺良性肿瘤患者及健康志愿者外周血hMAM mRNA和CD44V6 mRNA,同时对胃癌、结直肠癌、食管癌、肺癌、卵巢癌组织中hMAM mRNA的表达进行检测.结果 hMAM-mRNA在胃癌、结直肠癌、食管癌、肺癌、卵巢癌组织中无表达,在乳腺癌、癌旁组织及乳腺良性肿瘤组织中的阳性表达率分别为96.72%、96.72%和93.75%,3组间差异无显著性(P>0.05);CD44V6 mRNA在乳腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织及乳腺良性肿瘤组织(P<0.05).乳腺癌患者外周血hMAM mRNA检出率为45.90%,Ⅳ期乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA的阳性表达率明显高于其他各组(P<0.05);而hMAM mRNA在健康人及乳腺良性肿瘤患者外周血中均无表达;CD44V6 mRNA在乳腺癌、乳腺良性肿瘤患者和健康人外周血中的阳性表达率各组之间无显著性差异(P>0.05).结论 hMAM mRNA相对特异性地表达于乳腺组织,外周血检测出hMAM mRNA提示已有癌细胞进入血流,因此可能作为检测乳腺癌血道微转移的标志物;而CD44V6 mRNA作为血液中乳腺癌细胞的特异性标志物缺乏特异性.     

MRP1 mRNA、GST-π mRNA在食管癌组织中的表达及意义

目的探讨多药耐药相关蛋白MRP1和谷胱甘肽-S-转移酶GST-π在食管癌组织中的表达水平以及与食管癌生物学特性的关系.方法采用RT-PCR、凝胶电泳半定量方法检测48例食管癌组织中MRP1mRNA和GST-π mRNA的表达,并采用SAS6.12统计软件分析它们在不同TNM临床病理分期中的表达情况.结果 MRP1mRNA、GST-π mRNA 在食管癌组织中表达阳性率分别为83.3%、90.7%;随着浸润程度的增加,MRP1mRNA和GST-π mRNA表达均有增高趋势,但无统计学意义(P＞0.05);二者在有淋巴结转移组和有远端转移组中的表达均明显高于无淋巴结转移组和无远端转移组( P＜0.05). 结论 MRP1和GST-π在食管癌的原发性多药耐药中可能起重要作用; 它们在食管癌组织中的表达与浸润程度无关,与有无淋巴结转移和有无远端转移有关,MRP1 mRNA和GST-π mRNA表达的增高可能是食管癌较高临床病理分期的标志;对这两个基因的检测有助于临床预测预后及指导用药.     

肝癌组织GPC-3 mRNA和IGF-Ⅱ mRNA表达及其临床意义的研究

目的:探讨人肝细胞癌(HOC)组织GPC-3 mRNA和胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)mRNA的表达夏其与肿瘤发生发展的关系.方法:RT-PCR法检测70例HCC组织、癌旁肝组织和18例正常肝组织中GPC-3 mRNA和IGF-ⅡmRNA的表达.结果:HOE组织GPC-3阳性率(82.85%)及其mRNA表达水平(0.596±0.205)均明显高于癌旁组织(34.28%,0.428±0.137),P<0.01;HOC组织IGF-Ⅱ阳性率(92.86%)及其mRNA表达水平(0.750±0.309)也均明显高于癌旁组织(81.43%,0.648±0.237),P<0.05,GPC-3 mRNA和IGF-Ⅱ mRNA在HOC组织中的表达水平均与肿瘤直径、肿瘤分化程度和肝外转移等明显相关,而与临床分期、门静脉癌栓、肿瘤个数、血清AFP水平及术后复发等无明显关系.GPC-3 mRNA和IGF-Ⅱ mRNA在HOC组织中的表达呈正相关,r=0.281,P=0.038;而两者在癌旁肝组织的表达不相关.结论:HCC组织中GPC-3及IGF-Ⅱ高表达,可促使HCC细胞增殖,与HCC的发生发展密切相关.