基底细胞癌和鳞状细胞癌皮损中Smad2、Smad3和Smad4 mRNA表达下调

目的：检测转化生长因子β（TBF-β）/Smad信号转导途径中Smad2、Smad3和Smad4mRNA在基底细胞癌（BCC）和鳞状细胞癌（SCC）中的表达水平。方法：应用反转录一实时定量聚合酶链式反应（PCR）方法分别检测BCC、SCC与正常对照皮肤中Smad2、Smad3和Smad4mRNA的表达情况。结果：BCC和SCC皮损中Smad2、Smad3和Smad4mRNA的表达水平均显著低于正常人对照皮肤。结论：皮肤BCC和SCC中Smad2、Smad3和Smad4表达下调可直接或间接导致TGF-β抑制上皮细胞异常增殖和转化的作用受阻，从而有助于上述表皮肿瘤的形成和发展。     

干扰NDRG1表达通过调控PI3K/Akt信号通路对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)干扰N-myc下游调节基因1(NDRG1)基因表达对皮肤鳞状细胞癌A431细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法将siRNA-NDRG1干扰质粒转染至人皮肤鳞状细胞癌A431细胞中,采用RT-PCR和Western blot检测A431细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达;采用CCK-8、流式细胞术分别检测A431细胞增殖活性和凋亡率;采用Western blot检测A431细胞中凋亡相关蛋白Caspase3、Bax和Bcl-2以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT表达水平。采用100μg/L的PI3K/AKT信号通路特异性激活剂IGF-1与si-NDRG1单独或联合处理A431细胞,流式细胞术和Western blot检测细胞凋亡率以及PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达水平。结果 NDRG1 siRNA干扰可显著抑制A431细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达;干扰NDRG1基因表达可显著抑制A431细胞增殖活性,提高细胞凋亡率,并上调Cleaved-Caspase3和Bax蛋白表达水平,下调Bcl-2、p-PI3K及p-AKT蛋白水平;然而,IGF-1与si-NDRG1联合作用时,IGF-1可抑制NDRG1基因干扰后对A431细胞凋亡的促进作用以及对p-PI3K和p-AKT蛋白的下调作用。结论干扰NDRG1基因表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路活化诱导人皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡。     

皮肤鳞状细胞癌组织中p16及14-3-3σ基因启动子甲基化检测及其相关性分析

目的:通过检测皮肤鳞状细胞癌组织及正常皮肤组织中p16及14-3-3σ基因启动子甲基化,探讨p16及14-3-3σ基因启动子甲基化在皮肤鳞状细胞癌发生发展中的作用。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)法检测53例皮肤鳞状细胞癌组织及48例正常皮肤组织中p16和14-3-3σm RNA表达,免疫印迹(western blot)法检测p16和14-3-3σ蛋白表达,应用甲基化特异性PCR对所提DNA进行p16及14-3-3σ基因启动子甲基化检测,并分析这两个基因的相关性。结果:皮肤鳞状细胞癌标本中p16及14-3-3σm RNA表达均低于正常皮肤组织,皮肤鳞状细胞癌标本中p16和14-3-3σ蛋白亦低于正常皮肤组织,皮肤鳞状细胞癌标本中p16及14-3-3σ基因启动子甲基化的阳性率分别为54.72%(29/53)和67.92%(36/53),高于对照组的8.33%(4/48)和18.75(9/48),差异有统计学意义(P0.001);皮肤鳞状细胞癌组织中p16和14-3-3σ的甲基化存在正相关关系(r=0.431,χ~2=9.825,P=0.002,P0.05)。结论:皮肤鳞状细胞癌标本中p16及14-3-3σ低表达及甲基化与鳞状细胞癌发生发展可能有关,皮肤鳞状细胞癌基因启动子甲基化可能是多位点参与的。     

MMP-2及VEGF在尖锐湿疣组织中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase2,MMP-2）及血管内皮生长因子（vascular endothelialgrowth factor,VEGF）mRNA在尖锐湿疣组织中表达及其意义。方法采用荧光定量聚合酶链反应法测定24例尖锐湿疣患者皮损和19例健康对照者皮肤（包皮）中MMP-2mRNA和VEGF mRNA的定量表达及其临床意义。结果尖锐湿疣患者皮损中MMP-2mRNA和VEGF mRNA的表达明显高于健康对照者皮肤的表达（均P〈0.01）。尖锐湿疣患者皮损中MMP-2mRNA的表达与VEGF mRNA的表达呈显著相关性（r=0.59263,P〈0.01）。结论MMP-2mRNA和VEGF mRNA的表达上调可能与尖锐湿疣发生、发展有关。     

1,25-二羟维生素D3对HaCaT细胞增殖活性及基因组DNA和增殖相关基因启动子甲基化水平的影响

【摘要】 目的 探讨1,25-二羟维生素D3［1,25（OH）2D3］对人表皮角质形成细胞株HaCaT细胞增殖活性、基因组DNA总体甲基化水平及增殖相关基因启动子甲基化水平的影响。 方法 10-6、10-7、10-8 mol/L 1,25（OH）2D3作用HaCaT细胞24 h后,噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度1,25（OH）2D3对HaCaT细胞增殖活性的影响;总体DNA甲基化试剂盒检测基因组DNA总体甲基化水平。10-6 mol/L 1,25（OH）2D3作用HaCaT细胞24 h后,实时定量聚合酶链反应（PCR）法检测DNA甲基转移酶（DNMT）和甲基结合蛋白（MBD）mRNA表达水平,甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测凋亡相关基因程序化细胞死亡因子5（PDCD5）和基质金属蛋白酶组织抑制因子2（TIMP2）启动子区DNA甲基化状态。 结果 与溶媒对照组比较,10-6 mol/L 1,25（OH）2D3处理组HaCaT细胞增殖活性及基因组DNA总体甲基化显著降低（细胞活力：0.152 ± 0.027比0.290 ± 0.017,P < 0.01;总体甲基化：0.187 ± 0.071比0.316 ± 0.049,P < 0.05）,DNA甲基转移酶DNMT3a和DNMT3b mRNA水平显著降低（P值 < 0.01或0.05）,甲基结合蛋白MECP2和MBD2、凋亡相关基因PDCD5、TIMP2 mRNA水平显著升高（P值 < 0.01或0.05）。此外,MS-PCR结果显示,1,25（OH）2D3处理组PDCD5、TIMP2基因启动子区DNA甲基化水平（0.380 ± 0.135,0.460 ± 0.172）较溶媒对照组（0.720 ± 0.121,0.680 ± 0.133）显著降低（均P < 0.05）。 结论 1,25（OH）2D3可降低HaCaT细胞基因组DNA总体甲基化水平,调控DNA甲基化修饰基因表达。此外,1,25（OH）2D3可降低凋亡相关基因PDCD5、TIMP2特异性启动子区甲基化水平,诱导PDCD5、TIMP2基因表达增加,抑制HaCaT细胞增殖。 【关键词】 骨化三醇; 角蛋白细胞; DNA甲基化     

白藜芦醇对人皮肤鳞状细胞癌A431裸鼠移植瘤生长的影响

目的：评价白藜芦醇（Resveratrol,Res）对皮肤鳞状细胞癌（简称鳞癌）移植瘤生长的影响。方法：建立人皮肤鳞癌（A431）裸鼠移植瘤模型,分别予以药物干预后处死荷瘤鼠,称取瘤质量;HE染色观察各组移植瘤组织细胞病理形态学变化;应用原位末端标记（TUNEL）技术检测细胞凋亡;采用sP免疫组化法检测Res对各组裸鼠移植瘤组织中凋亡调控基因Bcl-2及Bax的蛋白表达的影响。结果：Res实验组移植瘤体积、瘤质量低于阴性对照组,肿瘤组织的凋亡指数高于阴性对照组,瘤组织中Bcl-2蛋白表达低于阴性对照组,Bax蛋白表达高于阴性对照组（均P〈0．05）。结论：白藜芦醇可通过下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达诱导皮肤鳞癌细胞凋亡,从而抑制移植瘤的生长。     

脂溢性角化病、基底细胞癌和鳞状细胞癌中几种Smad蛋白质表达的检测

目的：探讨转化生长因子（TGF）-β信号转导途径中Smad1、Smad2、Smad3（Smad1／2／3）,磷酸化Smad2,磷酸化Smad3（p-Smad2／3）Smad4蛋白在脂溢性角化病、基底细胞癌和鳞状细胞癌中的表达特点及其意义。方法：采用EliVision^TMplus免疫组化技术分别检测脂溢性角化病、基底细胞癌、鳞状细胞癌以及正常对照皮肤中Smad1／2／3、p-Smad2／3、和Smad4的表达情况。结果：Smad1／2／3、p-Smad2／3和Smad4蛋白在脂溢性角化病、基底细胞癌和鳞状细胞癌中的表达较正常表皮显著降低。结论：脂溢性角化病、鳞状细胞癌和基底细胞癌中Smadl／2／3、p-Smad2／3和Smad4蛋白表达降低可能通过阻断TGF—B信号转导,有助于上述表皮肿瘤的形成和发展。     

c—jun c—fos在尖锐湿疣和宫颈鳞状细胞癌发病中的作用

目的 探讨c-jun、c-fos在宫颈鳞状细胞癌、尖锐湿疣发病中的作用。方法 采用免疫组化方法和RT－PCR方法检测c-jun、c-fos mRNA和蛋白在宫颈鳞状细胞癌及宫颈尖锐湿疣、外阴尖锐湿疣的表达情况，PCR方法检测标本中HPV感染情况。结果 宫颈鳞状细胞癌、宫颈尖锐湿疣、外阴尖锐湿疣中c-jun、c-fos mRNA表达增高。宫颈鳞细胞癌、宫颈尖锐湿疣及外阴尖锐湿疣中c-jun蛋白的表达分别为47．8％、21．0％、64．7％；c-fos蛋白的表达分别为63．0％、89．5％、88．2％。结论 HPV感染促进了c-jun、c-fosmRAN和蛋白在宫颈尖锐湿疣和宫颈鳞状细胞癌中表达，低危型HPV中其蛋白表达高于高危型HPV感染。     

西罗莫司体外诱导Colo-16细胞凋亡的研究

目的 研究西罗莫司对体外培养的皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞凋亡的影响。方法 用不同浓度的西罗莫司处理Colo-16细胞,以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测西罗莫司对Colo-16细胞体外增殖的影响;AnnexinV-FITC和PI双染检测Colo-16细胞凋亡率;Hoechst33258荧光染色法观察凋亡细胞的形态学变化;半定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）测定Bcl-2、Bax mRNA的表达。结果 不同浓度的西罗莫司对Colo-16细胞体外增殖均具有抑制作用,这种抑制作用与西罗莫司的作用时间和剂量呈明显的依赖关系（P < 0.05）。西罗莫司显著增加Colo-16细胞的早期凋亡,西罗莫司（50,100,150, 200 nmol/L）作用48 h后诱导Colo-16细胞的早期凋亡率分别为7.26% ± 0.26%、8.34% ± 0.19%、9.86% ± 0.14%、11.92% ± 0.15%,与对照组1.53% ± 0.09%比较,差异有统计学意义（P < 0.05）,且Colo-16细胞早期凋亡率与西罗莫司浓度呈剂量依赖关系（r = 0.955,P = 0.000）。荧光染色可见细胞核染色质凝聚、边集、核裂解的形态学改变;Bcl-2 mRNA表达显著下调而Bax mRNA的表达显著增强。结论 西罗莫司在体外能诱导Colo-16细胞凋亡,其发生机制可能与其调节Bcl-2、Bax等凋亡调控基因的表达有关。     

鳞状细胞癌组织中HHV-8 K15等位基因型研究

目的 探讨皮肤鳞状细胞癌和食道鳞状细胞癌患者癌组织中人类疱疹病毒8型（HHV-8）K15等位基因型与肿瘤的发病关系。方法 序列特异性引物-巢式PCR技术检测40例皮肤鳞状细胞癌、40例食道鳞状细胞癌石蜡包埋组织中HHV-8 K15基因,并确定HHV-8 K15等位基因型,运用χ2检验对结果进行统计学分析。结果 9例皮肤鳞状细胞癌（22.5%）石蜡包埋组织中检测到HHV- 8 K15P型,8例食道鳞状细胞癌（20%）石蜡包埋组织中检测到 HHV- 8K15P型,两种肿瘤均未检测出K15M基因型。HHV-8在皮肤鳞状细胞癌与食道鳞状细胞癌感染率组间比较差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 鳞状细胞癌中感染HHV-8K15P基因为K15P等位基因型,其发生发展可能与HHV-8的感染有一定的关系。     

实时定量PCR检测慢性荨麻疹患者T-bet和GATA-3的表达水平研究

目的:定量检测慢性荨麻疹患者T-bet、GATA-3 mRNA表达,并分析其表达水平.方法:按入选标准选择慢性荨麻疹患者30例和健康对照者30例,提取外周血单一核细胞(PBMC),采用实时定量PCR方法,以GAPDH基因作为内对照,检测T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达,并计算两者的比值.结果:慢性荨麻疹患者PBMC 中T-bet mRNA表达水平明显低于对照组(1.51±1.28,2.87±1.40,P<0.01),GATA-3 mRNA的表达水平明显高于对照组(9.32±8.42,0.037±0.016,P<0.01),T-bet/ GATA-3比值明显低于对照组(0.26±0.32,96.63±85.03,P<0.01 ).结论:慢性荨麻疹病的发生伴有Th1/Th2免疫失衡.     

Ki67启动子调控的肿瘤增殖腺病毒对黑素瘤细胞的杀伤作用

目的：研究Ki67启动子调控增殖腺病毒Ki67-ZD55对黑素瘤A375细胞的杀伤作用。方法：将PBS、ZD55-EGFP和Ki67-ZD55分别作用于A375细胞。FIT—PCR法检测Ki67-promotermR—NA的表达;荧光显微镜观察Ki67-ZD55增殖过程;MTr法检测细胞存活率;WesternBlot法检测E1A蛋白及线粒体途径凋亡相关蛋白BAX、Bcl—XL、MCL-1和Caspase-3的表达。结果：RT—PCR检测结果显示Ki67-ZD55能够在A375细胞中表达Ki67-promoter序列;荧光显微镜观察结果显示Ki67-ZD55增殖明显;MTT结果表明Ki67-ZD55组对A375细胞的增殖具有明显抑制作用,抑制效果大于ZD55-EGFP组（P〈0．05）;WesternBlot法检测结果表明E1A、BAX的表达量增加,Bcl—XL、MCL-1的表达量均降低,Procaspase-3发生了明显剪切。结论：Ki67-ZD55能够明显抑制A375细胞增殖,促进A375细胞凋亡。     

银屑病皮损中Survivin、VEGF和Ang—2的表达

目的：检测存活素（Survivin）、血管内皮生长因子（VEGF）及血管生成素-2（Ang-2）等因子在寻常型银屑病（PV）皮损中的表达。方法：用免疫组化方法检测30例PV皮损及30例正常皮肤组织中Survivin、VEGF及Ang-2的表达。结果：PV皮损中Survivin、VEGF及Ang-2的表达明显强于正常皮肤组织。Survivin，VEGF和Ang-2之间的表达呈正相关。结论：Survivin、VEGF及Ang-2共同参与了银屑病新生血管的生成过程。     

先天性厚甲症I型一家系K6a基因突变检测

目的：研究先天性厚甲症I型（Pachyonychia congenitatype1,PC-1）一家系K6a基因突变。方法：提取PC-1患者和100名正常对照的外周血白细胞基因组DNA,采取长片段聚合酶链反应（PCR）扩增基因的全部编码序列,然后以产物为模板,采用巢式PCR扩增突变热点区,最后通过DNA直接测序确定基因突变位点和类型。结果：DNA测序发现患者K6a基因第1403位核甘酸由胸腺嘧啶（T）变为腺嘌呤（A）,导致K6a的2B螺旋区末端第468位密码子由亮氨酸（L）变为谷氨酰胺（Q）。而该家系中的正常人及100名正常对照均未发现此突变。结论：该患者存在角蛋白K6aIA68Q突变,进一步证明了螺旋边界序列是角蛋白K6a基因的突变热点区。     

红斑狼疮皮损中CD4^＋、CD8^＋T细胞表达及其与Bcl-2关系的研究

目的：确定Bcl-2及CD4^＋、CD8^＋T细胞在红斑狼疮皮损区的表达并探讨其与红斑狼疮发病的关系。方法：采用免疫组化法对30例红斑狼疮皮损区T细胞亚群CD4^＋、CD8^＋T细胞及淋巴细胞Bcl-2进行检测，并与17例正常皮肤作对照。结果：红斑狼疮患者皮损中Bcl-2淋巴细胞和CD4^＋T细胞的表达明显高于正常对照组，而CD8^＋T细胞表达明显低于正常对照组；Bcl-2的表达与CD4^＋T细胞表达呈正相关，与CD8^＋T细胞表达呈负相关。结论：红斑狼疮皮损区淋巴细胞Bcl-2的表达增强可能会导致CD4^＋和CD8^＋T细胞凋亡异常，从而导致免疫紊乱而发病。     

皮肤鳞状细胞癌中NF-κB、VEGF的表达及其临床意义

目的：探讨皮肤鳞状细胞癌（简称鳞癌）核因子-κB（NF-κB）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其与肿瘤分化和淋巴结转移的关系。方法：用ABC免疫组化技术检测50例皮肤鳞癌标本（其中高分化鳞癌34例,低分化鳞癌16例,伴有淋巴结转移14例）中NF-κB、VEGF表达。结果：NF-κB、VEGF表达阳性率分别为80%、72%;二者在低分化鳞癌中的表达明显高于高分化者（P〈0.05）,且其表达与淋巴结转移有关（P〈0.05）。结论：皮肤鳞癌中NF-κB和VEGF表达与其分化程度及淋巴结转移有关。     

寻常型银屑病患者外周血单个核细胞TLR9-mRNA的表达及与IFN-γ的相关性分析

目的：探讨寻常型银屑病患者外周血外周血单一核细胞（PBMCs）Toll样受体9（Toll—like receptor9,TLR9）的表达及其与血清中IFN-γ浓度的相关性,初步探讨TLR9在寻常型银屑病发病中的作用。方法：采用荧光定量PCR技术检测外周血单个核细胞TLR9的表达,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清IFN-γ的浓度。另取20例正常人作为对照组．结果：寻常型银屑病患者外周血中单核细胞TLR9的表达较正常人对照组明显增高（P〈0．01）,TLR9表达与血清IFN-γ浓度变化呈正相关（P〈0．05）。结论：结果提示TLR9及其介导的天然免疫鹰答在银屑病发病机制中起重要作用,其机制可能是通过上调IFN-γ的表达促使炎症因子产生和分泌而介导银屑病的发病。     

ROCK1基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与迁移及相关分子表达的影响

目的研究ROCK1基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和迁移能力及相关分子表达的影响。方法免疫组化检测人瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中ROCK1蛋白的表达, Western印迹检测人瘢痕疙瘩组织中ROCK1、转化生长因子β1(TGF-β1)和E钙黏附蛋白(E-Cad)的表达。体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF), 分为ROCK1基因过表达对照组(ROCK1 NC组, 转染ROCK1基因过表达对照载体)、ROCK1基因过表达组(ROCK1 OE组, 转染ROCK1基因过表达载体)、ROCK1基因干扰对照组(sh NC组, 转染ROCK1基因干扰对照载体)、ROCK1基因干扰组(shROCK1组, 转染ROCK1基因干扰载体)共4组。细胞计数试剂盒8(CCK8)检测ROCK1基因对HKF存活率的影响;Transwell小室检测ROCK1基因对HKF迁移的影响;实时荧光定量PCR、免疫印迹检测ROCK1、TGF-β1和E-Cad基因mRNA和蛋白的表达。结果免疫组化检测显示, 人瘢痕疙瘩组织中ROCK1表达较正常组织显著降低(t = 6.47, P = 0.003);Western印迹检测显示, 与正常...     

狼疮肾炎患者外周血单个核细胞NF-κB与糖皮质激素受体mRNA的表达

目的：检测狼疮肾炎患者单个核细胞核因子-κB（NF一κB）与糖皮质激素受体mRNA（GR-mRNA）的表达水平。方法：免疫组织化学方法及逆转录酶链反应检测狼疮肾炎患者和正常对照组外周血单个核细胞NF-κB与糖皮质激素受体mRNA的表达。结果：与对照组相比,狼疮肾炎患者外周血单个核细胞GRmRNA表达水平降低,NF-κB表达水平升高（P〈0．01）;激素治疗前,激素敏感组、激素依赖组及激素抵抗组GRmRNA表达水平均降低（P〈0．01）,NF—κB表达水平升高（P〈0．01）。激素敏感组与激素抵抗组GRmRNA表达水平有统计学差异（P〈0．01）。结论：NF—κB与GRmRNA的异常表达可能与狼疮。肾炎病情及糖皮质激素疗效不同有关。