贵州江口土家族β-地中海贫血筛查及基因分析

目的 分析贵州省江口县土家族人群β-地中海贫血（β-thalassemia）的发病状况、基因突变类型及特点。方法随机选取贵州省江口县太平乡土家族居民485名，抽取静脉血，采用血红蛋白电泳分析法、一分钟碱变性法初筛β-地中海贫血阳性参考指标，同时应用全自动血细胞分析仪进行红细胞计数（RBC）等7项血液学指标分析；用常规酚-氯仿抽提法提取筛检阳性者DNA，经PCR／反向斑点杂交（PCR／RDB）技术确定基因突变类型。结果江口县土家族人群中，共检出β-地中海贫血杂合子携带者13例，检出率为2．68％。基因分析显示，该人群β-地中海贫血基因突变类型主要为CD41-42（TCTT）移码突变9例，占69．2％，CD17（A→T）无义突变3例，占23．1％和pE（Codon26）1例，占7．7％。结论贵州省江口土家族β-地中海贫血具有自身特点，检出率较高，可能与当地土家族通婚区域半径小有关，应深入研究该地区β-地中海贫血患病特征，指导当地积极预防该病，提高少数民族人口素质。     

梧州地区β地中海贫血基因突变类型分析

目的了解梧州地区β地中海贫血携带者的基因突变类型及基因型分布,对夫妇双方为地贫携带者给予婚育指导,减少出生缺陷。方法对体检者进行血液学表型分析,疑似β地贫患者的应用PCR结合膜反向点杂交(RDB)技术进行基因分析。结果 1973例β地贫初筛阳性者经基因确诊检出β地贫681例,阳性率为34.5%,共检出10种突变基因类型,其中最常见的CD41-42、-28、CD17、IVS-Ⅱ-654、CD71-725种基因型占92.05%。结论梧州地区为β地贫的高发区,做好人群中地贫携带者的筛查、基因诊断、遗传咨询和产前诊断是很有必要的,这对于优生优育、有效预防重型地中海贫血胎儿的出生具有重大的意义。     

β-地中海贫血448例的基因型与临床分析

【目的】　探讨β- 地中海贫血(β- 地贫)基因突变与临床病情的关系。　【方法】　应用PCR RDB技术对448例β- 地贫患儿进行基因诊断。　【结果】　检测出12 种基因突变类型, 有24 种基因组合形式。　【结论】　β°纯合子及β°/β°双重杂合子临床表现重,发病年龄、输血年龄均较早,β°/β+双重杂合子表现为中间型或重型,发病年龄及输血年龄均较晚。     

百色地区184例β-地中海贫血患儿基因突变类型分析

目的:研究百色地区β-地中海贫血的基因突变类型及基因频率。方法:采用PCR和β-地中海贫血芯片检测阅读系统(反向点杂交技术),对184例β-地中海贫血患者进行基因分析。结果:184例β-地中海贫血患者中,常见的基因突变位点为41~42M,基因频率为46.20%;其余基因突变位点及其频率为:17M频率为29.35%,β-EM频率为7.61%,17M(纯)频率为4.35%,IVS1-IM频率为3.80%,654M频率为3.80%,71~72M频率为2.72%,41~42M(纯)频率为1.63%,654M(纯)频率为0.54%。结论:本研究初步揭示了百色地区β-地中海贫血的基因突变类型及基因频率,为进行遗传咨询、临床治疗和婚育指导提供了有价值的基础资料。     

广东省云浮地区女性和儿童地中海贫血基因分型情况分析

目的了解和分析地中海贫血基因在云浮地区女性和儿童的携带情况,以提高婚检和产前筛查率,避免或减少中、重型地中海贫血患儿的出生,从而提高优生优育水平。方法选取2016年10月—2017年9月在医院进行地中海贫血基因检查并确诊为地中海贫血的女性和儿童,进行回顾性统计分析,将这两类人群按基因型分为α-地中海贫血和β-地中海贫血两大类进行分析。结果 144例经地中海贫血基因检测确诊为地中海贫血基因携带的妇女,其中α-地中海贫血基因89例,占阳性率的61.8%,缺失类型主要以αα/-SEA(-SEA缺失杂合子)为主,共检出63例,占阳性率的43.8%;其次为-α3.7/αα(-α3.7缺失杂合子)检出12例,占阳性率的8.3%。β-地中海贫血基因突变55例,占阳性率的38.2%,突变类型主要以CD41-42位点的单突变杂合子为主,检出16例,占阳性率的11.1%;其次为654M/N基因型15例,占阳性率的10.4%。儿童检出携带地中海贫血基因98例,其中α-地中海贫血基因70例,占阳性率的71.4%,缺失类型主要以αα/-SEA(-SEA缺失杂合子)为主,共检出45例,占阳性率的45.9%;其次为-α3.7/αα(-α3.7缺失杂合子)检出9例,占阳性率的9.2%;-α3.7/-SEA(-α3.7、-SEA双重缺失杂合子)检出7例,占阳性率的7.1%。β-地中海贫血基因突变28例,占阳性率的28.6%,主要以654M/N基因型为主,检出10例,占阳性率的10.2%;其次为41-42M/N基因型8例,占阳性率的8.2%;其他基因型较少检出。结论本地区女性与儿童携带的主要地中海贫血基因型是基本相同的,地中海贫血防控任务还很重,做好地中海贫血知识的宣传和培训,提高人们对地中海贫血的认识,加强婚、孕检人群的地中海贫血基因检测是减少和防止重型地中海贫血患儿出生的有效措施。     

慢病毒介导β-珠蛋白基因添加在β-地中海贫血基因治疗中的应用

目的:构建全长人β-珠蛋白基因慢病毒载体,稳定转染K562细胞使得β-珠蛋白高效表达,为β-珠蛋白基因添加治疗奠定基础。方法:采用PCR扩增人正常β-珠蛋白基因,加上Sph I和Not I两个酶切位点进行T载体克隆,获得重组质粒p UC57-β-globin。用限制性内切酶连接目的基因片段和慢病毒载体,筛选获得慢病毒表达载体LV-β-globin,测序。将慢病毒载体转染293T细胞,包装病毒。用LV-β-globin感染K562细胞。采用流式细胞仪检测荧光效率,运用实时PCR及Western Blotting检测K562细胞中β-珠蛋白mRNA及蛋白表达情况。结果:通过PCR获得长度为2 128 bp的目的基因。连接p UC57载体和慢病毒表达载体,慢病毒表达载体LV-β-globin构建成功,序列正确。LV-β-globin转染K562细胞72 h后,显示大量绿色荧光表达,荧光效率为94.8%。β-珠蛋白mRNA 2-ΔΔCt值为4.080±0.078,高于对照组;β-珠蛋白灰度值为1.063±0.082,高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建并包装含人β-珠蛋白基因的慢病毒载体并高效稳定表达。     

浏阳地区9 325例地中海贫血基因检测结果分析

目的：分析浏阳地区9 325例地中海贫血基因检测的阳性率和基因分布情况,为本地区地中海贫血防治工作提供依据。方法：选取2013年7月31日至2022年12月31日在浏阳市妇幼保健院进行地中海贫血基因检测的9 325例样本为研究对象,采用液相芯片的方法分析17种β点突变、3种α点突变和3种α缺失,采用多重PCR技术和第一代高通量测序的方法,进一步送检罕见地中海贫血基因突变。结果：（1）9 325例地贫基因检测中阳性结果为3 750例,阳性率为40.21%,其中检出24种α地中海贫血、20种β地中海贫血,27种α复合β地中海贫血。（2）α地贫阳性例数为2 105例,占检测总数比率为22.57%,占地贫阳性率为56.13%;β地贫阳性例数为1 535例,占检测总数比率为16.46%,占地贫阳性率为40.93%;α复合β地贫阳性例数为110例,占检测总数比率为1.18%,占地贫阳性率为2.94%。（3）α地贫位于前三类基因型别分别为--SEA（73.62%）、-α3.7（14.48%）、-α4.2（4.50%）,β地贫位于前三类基因型别分别为βIVS-2-654（40.39%）、CD41/42（26.31%）、CD17（10.35%）。α复合β地贫位于前三类基因型别分别为--SEA/ VIS-Ⅱ-654（16.36%）、-α3.7/ CD41/42（13.64%）、--SEA /CD41/42（11.81%）。结论：浏阳市地中海贫血检出率较高,地贫类型多样,应加强地贫防控以防止重型患儿出生。     

反向斑点杂交技术诊断β-地中海贫血误诊分析

β-地中海贫血（β—thalassemia）是一种以β珠蛋白肽链合成缺陷为特征的遗传性溶血性贫血,是世界最常见遗传性单基因疾病之一,绝大多数均为β珠蛋白基因点突变和少数碱基缺失或插入引起。研究表明,反向斑点杂交技术是检测β-地中海贫血突变位点行之有效的方法。     

少数民族β-地中海贫血基因突变型分布特点

目的 了解β-地中海贫血在贵州省苗族、水族、瑶族中的基因突变型特点、基因型频率及分布规律。方法 采用“红细胞休克-管定量法”测定红细胞脆性，HbF和HbA2定量等方法对人群进行β-地中海贫血初筛，用常规酚-氯仿抽提法提取β地中海贫血携带者DNA，经PCR-反向点杂交法对β株蛋白进行突变基因分析。结果 受检2566人中，共检出134例β-地中海贫血携带者，总检出率为5．22％，其中苗族、水族、瑶族检出率分别为4．72％．6．06％，4．45％。经8珠蛋白突变基因分析，在这3个民族中仅检出两种中国人常见突变型CD41-42和CD17,检出率分别为88．1％，60．0％，23％。结论 在贵州省少数民族中β-地中海贫血有很高的发病率，基因突变类型具有显著的民族特征，并且提示在贵州省少数民族中有可能存在未知或罕见的突变类型。     

β-地中海贫血基因诊断及临床应用

摘要:β-地中海贫血是β-珠蛋白基因突变导致β-珠蛋白链合成减少或缺乏所引起的一种遗传性溶血性贫血,本病发病范围广,各地区有不同的发病率。β-珠蛋白基因最常见的突变类型是点突变,中国南方地区已发现β-地中海贫血基因突变有46种。随着分子生物学研究技术的不断发展,β-地中海贫血的基因诊断方法也不断改进和完善。本文从β-地中海贫血的基因诊断角度出发,对目前仍在使用及新近出现的β-地中海贫血点突变检测技术及其在临床上的应用进行综述。     

深圳市南山区2 898例地中海贫血基因检测结果分析

目的 研究深圳市南山区地中海贫血基因型和分布特征,探讨检测该病的优化方案。方法 以2017年3月 - 2018年3月在某院进行地中海贫血检测的2 898例就诊者为研究对象,采用跨越断裂点PCR法、反向斑点杂交法和Sanger测序进行基因分析。结果 2 898例受检者中检出地中海贫血基因变异804例,检出率达27.74%。常规地贫基因检测方法检出α-地中海贫血545例,--SEA/αα检出率（11.84%）最高,其次是-α3.7/αα（3.00%）和-α4.2/αα（1.83%）;β-地中海贫血225例,CD41-42（-TTCT）杂合突变和IVS－Ⅱ－654（C＞T）杂合突变为2种检出率最高的突变类型,检出率为3.00%和2.52%;αβ复合地中海贫血30例;Sanger测序分析检出4例少见杂合变异,分别为:HBA1基因上CD5 (GCC＞ACC );HBB基因CD37G＞A、IVS-Ⅱ-806(G＞C)、IVS-Ⅱ-81C＞T。结论 深圳市南山区地中海贫血发病率较高,基因型与广东省其他地区基本一致。当血液学表型和常规基因检测不相符时,应进行基因测序排除罕见型地中海贫血或异常血红蛋白变异。     

贵州地区β-地中海贫血基因诊断

目的:探讨β-地中海贫血基因诊断的临床应用价值。方法:采用反向点杂交技术,对84例可疑β-地中海贫血患者进行基因分析。结果:84例患者中检出49例β-地中海贫血,检出率为58.3%。共检出8种突变基因型,其中CD17杂合子占46.9%,CD41-42杂合子占22.5%;检出的5种突变等位基因按发生频率由大到小排列为:CD17、CD41-42、CD71-72、IVS-Ⅱ-654、βE(CD26),其中CD17(A→T)的发生频率为51.7%。结论:反向点杂交技术是临床确诊β-地中海贫血的一种准确可靠的基因诊断方法;CD17(A→T)是贵州地区最常见的β-地中海贫血基因突变类型。     

广东省免费孕前优生健康检查地中海贫血基因检测结果分析

目的:分析近两年广东省免费孕前优生健康检查地中海贫血基因检测结果,为地中海贫血防控工作提供依据。方法:以广东省各县区参加免费孕前优生健康检查的新婚夫妇为研究对象,MCV≤82fl或(且)MCH≤27pg作为地中海贫血筛查阳性指标,夫妇双方筛查均为阳性时,需同时进行α及β地中海贫血基因检测。结果:16240例筛查阳性者中发现基因携带者12995例(80.0%)准确率为80.0%,部分县区90%。发现3382对夫妇有妊娠重型地中海贫血胎儿的可能,产前诊断的需求率为41.65%。结论:MCV联合MCH作为筛查地中海贫血阳性指标可靠,操作简单,便于在基层应用,但需加强实验室质量控制。     

β-地中海贫血4例

β -地中海贫血是我国常见的一种地中海贫血类型 ,由于遗传的缺陷 ,使珠蛋白中 β链的合成受到抑制 ,红细胞的破坏增加 ,寿命缩短 ,造成溶血 ,加以铁的利用发生障碍 ,因而形成低色素性小细胞性贫血[1] 。本病在国外以地中海沿岸国家和东南地区各国多见 ,我国广东、广西和四川等     

幼儿β-地中海贫血实验室诊断的临床意义

目的 探讨β-地中海贫血实验室诊断的临床意义.方法 曲靖市第二人民医院2008-03-2009-12用日本东亚希森美康XT2000i血细胞仪进行血液细胞分析,对检测结果红细胞指数异常者,Hb<110 g/L、MCV<70 fl、RDW-CV<16.5的14例幼儿进行了血红蛋白电泳、抗碱血红蛋白实验、不稳定血红蛋白测定.结果 通过实验室诊断14例患儿中检出5例β-地中海性贫血幼儿.结论 当血常规显示明显小细胞低色素性贫血时,RDW-CV正常或稍偏高患者必须做HB电泳分析,以鉴别血红蛋白疾病还是缺铁性贫血,对于暂时无条件开展基因检测的情况下,对小细胞低色素性贫血鉴别诊断有积极的临床意义.     

钦州市α-地中海贫血基因诊断结果回顾性分析

目的了解钦州市人群α-地中海贫血突变基因构成比。方法以2152对孕妇夫妻为研究对象,进行地中海贫血产前基因分析,基因型确诊运用PCR法或PCR结合反向点杂交(RDB)技术进行地中海贫血常见突变分析。结果在2152对孕妇夫妻中,经基因诊断后,确诊为地中海贫血基因携带者3033例,检出α-地中海贫血基因携带者1848例,β-地中海贫血基因携带者904例,β-地中海贫血复合α-地中海贫血基因携带者281例。α-地中海贫血基因携带突变频率为70.19%,3种常见α地中海贫血缺失型基因的突变频率是:--SEA占63.22%;-α3.7占12.45%,-α4.2占7.14%;3种常见的α地中海贫血非缺失型基因的突变频率是:ααWS/αα占5.35%、ααCS/αα占3.8%,ααQS/αα占1.46%;此次检测还发现了形式多种的复合型地中海贫血基因携带者,除α地贫复合β地贫基因携带者外,还有各种缺失型复合非缺失型地中海贫血基因携带者,如-SEA/ααCS,-α4.2/ααWS,-α3.7/ααCS9,-SEA/ααWS,-α3.7/ααWS,-α4.2/ααCS,-α3.7/ααQS等基因型。结论初步掌握了本区域内孕妇夫妻α-地中海贫血基因的携带特征,为在钦州市内进一步开展地中海贫血普查工作提供了重要依据。     

PCR结合反向点杂交技术在β-地中海贫血基因诊断中的应用评价

目的 评价PCR结合反向点杂交技术在β-地中海贫血基因诊断中的临床应用. 方法 应用PCR结合反向点杂交技术对4 133例受检者进行β-地中海贫血基因检测,并对检测结果进行分析. 结果 4 133例受检者共检出β-地中海贫血患者428例,阳性检出率10.36％,其中41-42杂合子178例,占的比率最高41.59％;其次为654杂合子150例(35.05％);另外还有17杂合子38例(8.88％)、-28杂合子32例(7.48％)、βE杂合子13例(3.04％)、27-28杂合子5例(1.17％)、71-72杂合子4例(0.93％)、Int杂合子2例(0.47％)、CAP杂合子2例(0.47％)、-29杂合子2例(0.47％)、14-15杂合子1例(0.23％)、IVS1-1杂合子1例(0.23％). 结论 PCR结合反向点杂交技术操作快速简便、结果准确可靠,适用于β-地中海贫血的基因诊断和实验研究,值得临床推广应用.     

β-地中海贫血表型儿童地中海贫血基因突变分析

目的:了解本地区β-地中海贫血表型儿童中地中海贫血发生情况、基因突变类型。方法:选取2010年1月~2014年6月在该院就诊的1 713例β-地中海贫血表型儿童进行β-地中海贫血基因检测,确诊为β-地中海贫血者再进行α-地中海贫血基因检测。结果:1 713例β-地中海贫血高危儿童中确诊为β-地中海贫血儿童1 428例(83.36%),其中合并α-地中海贫血222例(15.55%)。共发现11种突变、30种基因类型中以CD41-42(-TCTT)(42.23%)和CD17(A→T)(27.31%)杂合子突变为主,双重杂合子突变111例(7.77%),纯合子突变42例(2.94%)。6种α-地中海贫血突变、11种基因类型中以--sea(31.99%)、αWSα(18.91%)和-α3.7(18.47%)突变杂合子最常见,Hb H病3例(1.35%),其中合并β-地中海贫血双重杂合子和纯合子突变30例(13.51%)。结论:本地区儿童地中海贫血突变类型、基因类型多样,中重型β-地中海贫血及α-合并β-地中海贫血发生率高,应加强地中海贫血干预工作,以避免中间型或重型地中海贫血儿的出生。     

侗族人群β地中海贫血的调查

目的 了解贵州从江县侗族人群B地中海贫血的发病状况、基因突变类蛩及特点。方法 抽取受检者静脉血，应用HbF和HbA2定量测定对人群进行β-地中海贫血初筛，同时应用全自动血细胞分析仪进行红细胞计数(RBC)、血红蛋白测定(Hb)、红细胞比容测定(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度(RDW)等7项血液学指标分析，然后用常规酚-氯仿抽提法提取受检者DNA，经PCR-反向点杂交法对β珠蛋白基因进行突变分析。结果 从江县侗族人群中，β地中海贫血的检出率为7．85％，检出CD41-42(TCTT)移码突变(9例,23％)和CD17(A→t)无义突变(30例，77％)2种基因突变类蛩。结论 该地区侗族人群中β地中海贫血患病率较高，β珠蛋白基因变异情况独特，可能与族内婚配、家族发病聚集性和通婚地理半径狭小有关。     

α和β地中海贫血无创产前诊断研究进展

地中海贫血是我国南方地区最常见的一种单基因遗传病,难以治愈且代价昂贵,通过穿刺术采集高风险胎儿的遗传物质进行产前基因诊断,防止重型患儿出生是国内外公认的首选措施。通过穿刺手术采集绒毛、羊水或脐带血而获取胎儿遗传物质进行产前诊断的有创性操作,可能造成胎儿损伤、流产或宫内感染等。自从母体血浆中发现存在胎儿DNA,以此胎儿遗传物质为检测靶标的无创产前诊断技术迅速发展。基于此类游离胎儿DNA的无创产前诊断更安全,且易于被受试者接受,也避免了获取胎儿遗传物质的创伤性操作导致的不必要风险。综述地中海贫血无创产前诊断的技术策略及其应用。