FQ—PCR检测尖锐湿疣皮损中HPV—DNA

目的：了解尖锐湿疣（CA）组织中人乳头瘤病毒（HPV）感染的型别及其DNA含量。方法：采用HPV6／11和HPV16／18型荧光定量PCR诊断试剂盒,对临床表现典型的CA组织进行FQ－PCR检测。结果：HPV－DNA阳性检出率95．15％,其中HPV6／11型阳性检出率86．4％。HPV6／11含量在10^5～10^9opies,占92．13％。结论：CA主要为HPV6／11感染,皮损中HPV6／11DNA含量检测可以临床提供一定的参考。     

PCR引物法及随机引物法标记cDNA探针杂交效率的研究

目的：为提高原位杂交所用ｃＤＮＡ探针的杂交效率。方法：采用正义引物ＰＣＲ法及正义、反义引物ＰＣＲ法制备地高辛（Ｄｉｇ）标记的ＴＧＦ－βｃＤＮＡ探针。同时采用常规的随机引物法标记上述探针。用斑点杂交及原位杂交法比较三者的效率。结果：在斑点杂交中，正义引物ＰＣＲ法所标记的单链探针的杂交效率最高，高于随机引物法一个数量级。在探针浓度相同条件下，正义引物ＰＣＲ法标记探针的原位杂交效果优于随机引物法标记的探     

PCR反向膜杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌的临床意义

目的 探讨聚合酶链反应（PCR）反向膜杂交技术检测临床标本中结算分枝杆菌（TB）DNA的价值。方法 用PCR反向膜杂交技术检测522例结核及60例非结核患者临床标本中TB－DNA,同时用培养、抗酸染色涂片及常规PCR法作对照。结果 PCR反向膜杂交法阳性率为80．6％（556／690）,培养为18．1％（125／690）,镜检为13．9（96／690）,常规PCR为59．6％（411／690）,PCR反向膜杂交法与常规法比较（P＜0．001）,差异具显著意义。PCR反向膜杂交法阳性检出率高于常规PCR,差异具显著意义（P＜0．001）;该技术假阳性为零。结论 PCR反向膜杂交技术检测临床标本中TB－DNA具有快速、高度特异性和敏感性,可为结核病的临床早期诊断提供一种新的病原学诊断手段。     

Taqman荧光探针技术检测结核分枝杆菌

目的：比较Taqman荧光探针技术与常规PCR电泳技术检测结核分枝杆菌的灵敏度及特异性，评价Taqman荧光探针技术（Taqman技术）检测临床标本中结菌的应用价值。方法：应用细菌培养法，常规PCR电泳技术与Taqman技术检测300份临床结核病患者痰标本及50份非结核呼吸系统疾病患者痰标本。结果：细菌培养法检测结核阳性率为112/300；常规PCR电泳技术检测结核菌阳性率为169/300，特异性96%；Taqman荧光探针技术检测结核菌阳性率为141/300，特异性100％。结论：Taqman荧光探针技术是一种全新的PCR分子杂交模式，集PCR扩增、荧光探针杂交、荧光检测一体化，在单一管内完成，简便、快速、防污染、敏感性高、特异性强，是结核病辅助诊断的有效方法。     

运用实时荧光定量PCR技术研究孕妇TORCH感染情况

目的：运用实时荧光定量PCR技术（Real0time fluorogenic quantitative PCR)研究孕妇早期合并TORCH感染情况及其对胎儿和新生儿的危害，方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）技术对166例早中孕妇女（小于20孕周）进行TORCH病原体检测（包括RV，CMV，TOX，HSV－I，Ⅱ）。结果：166例孕妇中TORCH的阳性率分别为：RV＝1．81％（3／166），HSV．7．23％（11／166），CMV＝4．22％（7／166），TOX＝15．66％（26／166），部分病例在羊水中检测到病原.结论：（1）实时荧光定量PCR技术是一项简便快速准确的检测病原体的方法，与传统PCR法相比有独特的优越性，在临床上具有广泛的应用前景；（2）孕妇TORCH感染是不容忽视的生物致畸因子，各地妇保机构应加强孕妇及育龄妇女的筛查和管理，以减少畸形儿出生。     

荧光定量聚合酶链反应检测血清HBV DNA及临床应用价值

目的：应用光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）技术检测血清HBV DNA,评价其临床应用价值。方法：选取乙型肝炎病毒感染各时期血清标本331例,用荧光定量PCR法测定HBV DNA浓度。结果：119例HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性标本,HBV DNA阳性率为98．3％;182例HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性的血清标本,阳性率为52．3％;HBsAg,HBeAg阴性标本20便,1例阳性。结论：FQ－PCR技术检测血清HBV DNA,可以反映乙肝病毒感染的实际情况及复制水平,为确定乙型肝炎的临床诊断,可为选择治疗方案和评估药物疗效提供较可靠的理论依据。     

聚合酶链反应和DNA探针杂交法检测沙眼衣原体的比较

目的：探讨聚合酶链反应（PCR）和DNA探针杂交法检测泌尿生殖道沙眼衣原体（Ct)的临床诊断价值。方法：应用这两种方法对未使用过抗衣原体药物的80例宫颈炎患者同时进行Ct检测。结果：PCR法检出Ct基因的阳性率（23．8％）高于探针杂交法（15．0％），两者比较有显著性差异。结论：PCR法检测Ct较DNA探针杂交法敏感，如将两法结合应用结果将更可信。     

阴道炎患者HPV6/11-DNA定量分析

目的：了解女性阴道炎患者人乳头瘤病毒6／11型（HPV6／11）的感染情况。方法：荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）技术检测258例门诊患者阴道分泌物中HPV6／11的病毒拷贝数。结果：共检出HPV6／11阳性者94例,阳性率36．43％,拷贝数在10^5以上者78例,占阳性者中82．98％,40岁以上年龄组阳性率高且病毒复制量均在10^5以上。结论：（1）中老年阴道炎患者就诊晚,感染重。（2）FQ－PCR检测HPV敏感,快速,准确,特别是其定量特点对临床很有意义。     

荧光定量PCR检测石蜡组织中结核杆菌的临床应用

目的探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测石蜡包埋组织结核分枝杆菌DNA（TB—DNA）在结核病诊断中的应用价值。方法33例石蜡包埋组织标本采用FQ—PCR技术检测TB—DNA,同时进行组织病理学检查,分别计算FQ—PCR和病理学检查的灵敏度和准确度。结果29例临床诊断为结核病的组织标本中,FQ—PCR检测阳性26例,病理学拟诊为结核阳性20例,4例临床诊断非结核病的标本中,FQ—PCR检测和病理学检查都为阴性,两者的灵敏度和准确度分别为89．66％、90．91％和68．97％、72．73％。结论FQ—PCR技术检测石蜡包埋组织的TB—DNA用于结核病的诊断具有较高的灵敏度和准确度,与病理学检查相结合可以大大提高结核病的检出率。     

不同分子生物学方法检测乙型肝炎病毒DNA的研究

目的：研究不同分子生物学方法检测乙型肝炎病毒（HBV）DNA的敏感性及影响因素。方法：用饱和酚抽提和血清蛋白变性后聚合酶链反应（PCR－1和PCR－2）检测48例慢性肝病患者的HBVDNA，并与分子斑点杂交法（Dot－H）检测结果进行比较。结果：Dot－H、PCR－1和PCR－2法对HBVDNA的检出率分别为70．83％、87．50％和91．67％，PCR－1和PCR－2中有17．02％表现为交叉阳性，慢性肝炎患者的检出率高于肝硬化患者，HBeAg阳性者高于其它HBV血清标志物（HBVm）阳性者。结论：PCR检测HBVDNA的敏感性高于Dot－H，所用PCR包含的多种引物可以提高HBVDNA的检出率。     

荧光定量聚合酶链反应法和液体培养法检测新生儿解脲支原体的临床意义

目的探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）法和液体培养法检测新生儿解脲支原体（Uu）的临床意义。方法采用FQ—PCR法和液体培养法检测新生儿痰中Uu,比较两者阳性检出率,及治疗后Uu含量的变化。结果FQ—PCR法、液体培养法Uu阳性检出率分别为32．87％、22．69％,FQ—PCR法明显高于液体培养法（χ^2=5．58,P〈0．05）。治疗后Uu阳性检出率为8．33％,且拷贝数明显下降。Uu对大环内酯类克拉霉素敏感率最高,为93．88％;对喹诺酮类环丙沙星耐药率最高,为89．80％。结论FQ—PCR联合液体培养法检测Uu对诊治新生儿Uu感染有临床指导意义。     

采用聚合酶链反应检测肺结核病患者中的结核杆菌

目的：建立一种快速，敏感及特异的早期诊断肺结核病方法。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，检测了６４例肺结核患者的外周血与痰标本结核杆菌－ＤＮＡ。结果：外周血结核杆菌－ＤＮＡ的阳性率为６７．２％（４３／６４），痰标本的阳性率为２９．６％（１９／６４）（Ｐ〈０．０５），结论：用ＰＣＲ技术诊断肺结核病，可提高临床检测的特异性和敏感性。     

胎盘HBV-DNA定量检测与宫内感染关系的研究

目的 探讨胎盘HBV—DNA含量与官内感染的关系及作为胎盘传染性和病毒复制的直接指标的可靠性。方法 采用FQ～PCR（荧光探针定量聚合酶链反应）检测344例HBV标志物阳性孕妇足月分娩后的胎盘的HBV—DNA含量，并分别检测同一孕妇分娩前的外周血及脐血的HBV—DNA含量，比较其测定值范围及相互关系。结果 344例孕妇按乙肝标志物组合，分为三组，分别检测分娩前外周血HBV—DNA、胎盘HBV—DNA及脐血HBV—DNA，检出率分别为：（1）HbsAg携带组90例，22．2％（20／90）、33．3％（30／90）和5．6％（5／90）；（2）大三阳组134例，70．9％（95／134）、85．8％（115／134）和11．9％（16／134）；（3）小三阳组120例，20.8％（25／120）、20．8％（25／120）和3．3％（4／120）。孕妇乙肝标志物阳性以大三阳组HBV—DNA阳性率最高，胎盘组织HBV—DNA含量与母血HBV—DNA含量有一致性和相关性。结论 外周血HBV—DNA阳性孕妇更易发生胎盘感染。官内感染的程度可随胎盘组织HBV—DNA含量增加而程度加重。胎盘HBV—DNA含量可作为一个宫内感染的判断指标。     

快速检测耐甲氧西林葡萄球菌方法的应用评价

目的：对耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)两种快速检测方法的可靠性和临床实用性进行评估。方法：临床分离的215株葡萄球菌中，120株MRS同时采用mecA基因探针快速分析、PBP2a快速检测和甲氧西林琼脂筛选平板．并与mecA基因的PCR分析比较。结果：mecA基因探针快速分析鉴定MRS的灵敏度为97．7％，特异性为100％；PBP2a快速检测的灵敏度为97．7％，特异性为100％．甲氧西林琼脂筛选平板的灵敏度为97．7％．特异性为85％。结论：两种快速检测方法都具有灵敏度高，特异性强，简单易行的特点，是常规实验室检测MRS可靠的分析方法。PBP2a分析方法因其不需特殊设备、更快速而将有更好的临床应用前景。     

套式RT—PCR在丙型肝炎诊断中的应用

目的：探讨逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）在丙型肝炎诊断中的应用。方法：应用套式RT－PCR检测肝炎病人血清中HCVRNA,并同时用固相放射免疫法（RLA）检测病人血清中抗HCVRNA抗体。结果：193份肝炎病人血清中11．9％（23／193）可检出HCVRNA,10．9％（21／193）可检出抗HCVRNA抗体,两种检测结果相符率达98．4％,结论：套式RT－PCR对诊断丙型肝炎快速、特异性高,同时该检测法可避免放射性损伤和污染,在临床上对丙型肝炎的诊断有很大的应用价值。     

聚合酶链反应检测重型肝炎患者血清HBVDNA

采用ＰＣＲ法检测４８例重型肝炎患者血清中ＢＨＶＤＮＡ存在情况，并与斑点杂交检测进行比较，结果表明：ＰＣＲ检测３９例阳性，检出率为８１．３％（３９／４８）．ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）组ＰＣＲ检测均阳性（８／８），ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（－）组阳性率为８８．０％（２２／２５），抗体阳性组检出率为７２．７％（８／１１），检测灵敏度为１．０ｆｇ；斑点杂交检测１５例阳性，阳性率３０．２％（１５／４８），各组斑点杂交阳性率均低于ＰＣＲ法．提示：（１）大多数重型肝炎患者血清中存在低滴度的病毒颗粒，对重肝发病有一定作用；（２）大部分ＨＢｅＡｇ阴性，抗体阳性的重型肝炎患者血清仍有传染性，应考虑抗病毒治疗．     

实时荧光定量PCR检测丙型肝炎病毒

目的探讨实时荧光定量PCR（FQ—PCR）技术检测丙型肝炎病毒（HCV）RNA载量与抗-HCV及丙氨酸氨基转移酶（ALT）异常的相关性。方法用FQ—PCR检测115份疑似HCV感染的病人血清HCV—RNA，ELISA法检测抗-HCV，全自动生化分析仪测定ALT。结果以80拷贝／ml血清为标准，115份标本中HCV—RNA阳性率为54．8％（63／115）；抗-HCV阳性率为53．9％（62／115）；ALT异常率为40．9％（47/115）。HCV—RNA载量与抗-HCV（＋）例数呈正相关（r=0．986，P〈0．01）。HCV—RNA载量与ALT异常例数（r=0．94，P〈0．01）、含量（r=0．624，P〈0．01）呈正相关。结论HCV—RNA载量升高，抗-HCV阳性率相应增加，ALT高于正常值（40U／L）的异常率和浓度也增高，均呈正相关。FQ—PCR法可作为临床检测丙型肝炎的确诊方法之一。     

荧光定量聚合酶链反应诊断乙型肝炎病毒感染研究进展

荧光定量聚合酶反应（FQ－PCR）是国内外近年发展起来的核酸检测技术，它在常规PCR基础上，加入了一条用荧光基因标记的特异性探讨。能克服常规PCR易受污、不可定量、准确度低的缺点，能更好地用于乙型肝炎病毒（HBV）的检测。本文就FQ－PCR的原理，标本收集和处理以及在HBV诊断中的影响因数和临床意义进行综述。     

老年慢性乙型肝炎乙肝标志物及乙肝病毒DNA的检测

目的：了解老年慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒（HBV）复制与血清标志物之间的关系。方法：分别用血清斑点杂交、PCR和PCR产物斑点杂交方法对100例老年慢性乙型肝炎标本进行检测。结果：在HBsAg、HBeAg及抗－HBc阳性的老年慢性乙肝中，三种方法的HBV－DNA检出率分别为66.67%、96.67%、100%；在HBsAg、抗－HBc及抗－HBe阳性患者中，三种方法的HBV－DNA检出率分别为27.78%、46.30%、51.85%；在抗－HBs、抗－HBc或抗－HBe阳性患者中三种方法的HBV－DNA检出率分别为0％、12．50％、18．75％。结论：在HBsAg、HBeAg同时阳性时，HBV复制最为活跃；在HBsAg、抗－HBc、抗－HBe同时阳性时，HBV受到一定程度的抑制；抗－HBs并伴有其它抗体阳性时HBV仍有复制。用杂交方法来判断PCR产物的结果更为准确。     

聚合酶链反应—微孔板杂交技术用于乙型肝炎病毒DNA的检测

目的：建立乙肝病毒DNA的聚合酶链反应（PCR）－微孔板杂交法,使PCR结果判定更加客观。方法：我们使用煮沸裂解法提取模板DNA,将PCR引物5′端标记生物素,用PCR产物与包被有亲和素的微孔板结合,并与含荧光素特异探针杂交,酶标记抗荧光素抗体与之结合进行显色反应,通过测定其吸光度来判断结果,结果：所建立的PCR－微孔板杂交法的阳性检出率（68／160）比PCR－电泳地（60／160）高,检测时间约是Keller法的1／10。结论：该法较敏感、特异和客观地检测临床标本中的乙型肝炎病毒DNA。