功能性电刺激对急性脑梗死大鼠运动功能和缺血半影区与镜区突触素表达的影响

目的：观察功能性电刺激（FES）对急性脑梗死大鼠运动功能和缺血半影区与镜区突触素（SYN）表达的影响。方法：采用Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,MCAO造模步骤结束后,在大鼠偏瘫侧上肢埋置金属导线连接FES治疗仪。将大鼠随机分为3组：假手术组、安慰电刺激组和FES组,每组又分为0d、3d、7d、14d 4个亚组,每亚组6只。FES在术后3d开始,使大鼠偏瘫上肢产生伸腕和伸指动作,每天1次,每次10min。在FES刺激前后的各个时间点进行网屏实验以观察各组的运动功能变化;应用Western-blot技术检测缺血半影区和镜区SYN蛋白表达。结果：FES组在刺激7d和14d后运动功能较安慰电刺激组明显改善(P<0.05)。脑缺血半影区在刺激3d、7d、14d后、镜区在刺激7d、14d后,FES刺激组较安慰电刺激组SYN蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论：FES可以改善急性脑梗死大鼠的运动功能,并增强脑梗死周围缺血半影区和镜区SYN的蛋白表达,即增强脑的可塑性,但半影区的可塑性出现早于镜区,且表达强于镜区。     

功能性电刺激对急性脑梗死大鼠运动功能及室管膜下区内源性神经干细胞的影响

目的 观察不同时间点功能性电刺激(FES)对急性脑梗死大鼠神经功能和室管膜下区（SVZ）内源性神经干细胞增殖、迁移及分化的影响。 方法 采用大脑中动脉阻塞(MCAO)法制作急性脑梗死大鼠模型212只,其中128只大鼠符合入选标准,最终108只完成实验。将这108只大鼠按随机数字表法分为对照组、假刺激组和FES组,每组36只,每组再按治疗时间的不同分为治疗1、3、7和14d四个亚组,每亚组9只大鼠。术后第3天开始以表面电极刺激瘫痪侧前肢,治疗强度（约4～5mA）以引起瘫痪侧出现伸腕伸指动作为准,每日1次,每次治疗15min。分别于治疗前和治疗各时间点,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)法评定各组大鼠神经功能变化情况;采用免疫组织荧光化学法检测缺血侧脑组织SVZ的BrdU+/GFAP+、BrdU+/DCX+、BrdU+/NeuN+阳性细胞表达的动态改变。 结果 治疗第7天和第14天,FES组的mNSS评分与其余2组比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗第14天,单独行运动功能项目的评分比较,FES组的评分与其余2组比较,差异有统计学意义(P<0.05);FES组大鼠梗死侧SVZ的BrdU+细胞数目在FES治疗第7天达到高峰;FES组BrdU+/GFAP+阳性细胞数目表达在治疗第7天和第14天分别与假刺激组和对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);BrdU+/DCX+细胞数目随着时间延长增加,在治疗第14天时FES组阳性细胞数目均高于假刺激组和对照组(P<0.05);BrdU+/NeuN+仅在治疗第14天时有少量表达,组间差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 FES治疗能够改善急性脑梗死大鼠神经功能,促进SVZ神经干细胞的增殖和分化。     

功能性电刺激对急性脑梗死大鼠神经功能及梗死侧皮质巢蛋白表达的影响

目的 观察功能性电刺激(FES)对急性脑梗死大鼠梗死侧顶叶皮质巢蛋白(nestin)表达的影响,初步探讨FES治疗在脑梗死后早期促进神经功能恢复的分子机制.方法 将60只雄性SD大鼠分为电刺激组、安慰刺激组、对照组,每组20只,每组大鼠再分为治疗1,3,7,14 d共4个亚组,每个亚组5只.参照改良Longa线栓法制作急性脑梗死大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型.电刺激组与安慰刺激组于MCAO后第3天开始治疗.电刺激组以表面电极刺激偏瘫侧前肢,FES参数设置的强度以前肢能发生明显的伸腕、伸趾动作为宜.安慰刺激组将FES治疗仪的治疗电极放在偏瘫侧前肢伸肌群的运动点上,但关闭电源不予以电刺激,对照组不给予任何治疗.所有大鼠分别于治疗前、治疗后第1,3,7,14天给予改良的神经功能缺损评分(mNSS)评定,同时,以免疫组织化学技术分析大鼠脑梗死侧周围远隔区顶叶皮质nestin表达的阳性细胞数.结果 治疗3 d后,电刺激组与安慰刺激组和对照组大鼠的mNSS评分组间差异无统计学意义(P>0.05);在治疗7 d和14 d后,电刺激组大鼠mNSS评分显著高于安慰刺激组和对照组(P<0.05);但安慰刺激组与对照组之间mNSS评分在各时间点差异无统计学意义(P>0.05);治疗3,7,14 d后电刺激组大鼠脑梗死侧周围顶叶皮质nestin表达的阳性细胞数较安慰刺激组和对照组明显增加(P<0.05),安慰刺激组和对照组之间在各时间点脑梗死灶周围远隔区顶叶皮质nestin的阳性细胞数差异无统计学意义(P>0.05).结论 FES治疗脑梗死早期大鼠偏瘫肢体可显著促进其神经功能的恢复;FES治疗可促进梗死灶周围nestin的表达,这可能说明了FES治疗的另一个分子机制.     

功能性电刺激对急性脑梗死大鼠神经功能及梗死侧皮质巢蛋白表达的影响

目的 观察功能性电刺激(FES)对急性脑梗死大鼠梗死侧顶叶皮质巢蛋白(nestin)表达的影响,初步探讨FES治疗在脑梗死后早期促进神经功能恢复的分子机制.方法 将60只雄性SD大鼠分为电刺激组、安慰刺激组、对照组,每组20只,每组大鼠再分为治疗1,3,7,14 d共4个亚组,每个亚组5只.参照改良Longa线栓法制作急性脑梗死大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型.电刺激组与安慰刺激组于MCAO后第3天开始治疗.电刺激组以表面电极刺激偏瘫侧前肢,FES参数设置的强度以前肢能发生明显的伸腕、伸趾动作为宜.安慰刺激组将FES治疗仪的治疗电极放在偏瘫侧前肢伸肌群的运动点上,但关闭电源不予以电刺激,对照组不给予任何治疗.所有大鼠分别于治疗前、治疗后第1,3,7,14天给予改良的神经功能缺损评分(mNSS)评定,同时,以免疫组织化学技术分析大鼠脑梗死侧周围远隔区顶叶皮质nestin表达的阳性细胞数.结果 治疗3 d后,电刺激组与安慰刺激组和对照组大鼠的mNSS评分组间差异无统计学意义(P>0.05);在治疗7 d和14 d后,电刺激组大鼠mNSS评分显著高于安慰刺激组和对照组(P<0.05);但安慰刺激组与对照组之间mNSS评分在各时间点差异无统计学意义(P>0.05);治疗3,7,14 d后电刺激组大鼠脑梗死侧周围顶叶皮质nestin表达的阳性细胞数较安慰刺激组和对照组明显增加(P<0.05),安慰刺激组和对照组之间在各时间点脑梗死灶周围远隔区顶叶皮质nestin的阳性细胞数差异无统计学意义(P>0.05).结论 FES治疗脑梗死早期大鼠偏瘫肢体可显著促进其神经功能的恢复;FES治疗可促进梗死灶周围nestin的表达,这可能说明了FES治疗的另一个分子机制.     

成对关联刺激对脑缺血再灌注大鼠感觉运动功能和MAP-2、GAP-43表达的影响

目的 观察成对关联刺激（PAS）对局灶性脑缺血再灌注大鼠感觉运动功能恢复的影响,并从神经可塑性角度探讨其可能的作用机制。 方法 选取90只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和PAS组,每组又分为7 d、14 d、28 d 3个亚组,每组10只。模型组和PAS组大鼠采用Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,假手术组除不插入线栓外,其余操作与模型组和PAS组相同。PAS组于术后第1天开始给予0.05 Hz、共90对脉冲的PAS治疗［其中周围神经电刺激（PNS）脉冲波宽200 μs、刺激强度6 mA;经颅磁刺激（TMS）强度120%静息运动阈值（RMT）］,持续30 min,每日1次;模型组和假手术组不予任何干预措施。术后第1、7、14、28天采用Garcia神经行为学评分评定大鼠感觉运动功能,各时间点治疗结束后,采用免疫组化和蛋白质印记法（Western blot）检测大鼠缺血半暗带区微管相关蛋白-2（MAP-2）、生长相关蛋白43（GAP-43）的表达。 结果 假手术组大鼠在各时间点均无神经功能损伤的体征。与假手术组同时间点比较,模型组、PAS组Garcia神经功能评分均较低（P<0.05）。与模型组同时间点比较,PAS组术后7 d、14 d、28 d的Garcia神经功能评分均较高（P<0.05）。与组内术后1 d比较,模型组、PAS组术后28 d的Garcia神经功能评分显著较高（P<0.05）。与组内术后7 d比较,仅PAS组术后28 d的Garcia神经功能评分较高（P<0.05）。与假手术组同时间点比较,模型组、PAS组GAP-43蛋白表达水平较高（P<0.05）,MAP-2蛋白表达水平较低（P<0.05）。与模型组同时间点比较,PAS组GAP-43、MAP-2蛋白表达水平较高（P<0.05）。与组内术后7 d比较,PAS组术后14 d GAP-43、MAP-2蛋白表达水平较高（P<0.05）。与组内术后14 d比较,PAS组术后28 d GAP-43、MAP-2蛋白表达水平降低（P<0.05）。 结论 PAS可促进缺血性脑卒中大鼠感觉运动功能的恢复,其机制可能与促进缺血半暗带区MAP-2、GAP-43的表达有关。     

强化运动训练对脑缺血再灌注大鼠运动功能及MAP-2表达的影响

目的：探讨应用常规和强化运动训练对脑缺血再灌注大鼠运动功能以及海马区和梗死灶周围微管相关蛋白-2（MAP-2）表达的影响。方法：采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞1h,再灌注第7、14和21天,54只造模成功的大鼠随机分为造模对照组（A组）、常规运动训练组（B组）和强化运动训练组（C组）,分别采用姿势反射试验、肢体不对称应用试验和角落试验观察各组大鼠的运动功能。结果：3组实验大鼠的3项行为学测试评分在造模后24h均无明显差异,但在第7、14和21天时则有一定差异,与A组比较,除造模后第21天时B组角落试验评分外,B组和C组3项测试评分在造模后第7天、14d和21天均明显好于A组;与B组比较,除造模后第21天肢体不对称应用试验评分外,C组评分在第14天和21天均明显好于B组。MAP-2的免疫组化结果显示,与A组比较,B组和C组在海马区和梗死灶周围MAP-2表达的光密度值在第14天和21天时均明显高于A组,而且C组MAP-2表达的光密度值在第14天和21天时也明显高于B组。结论：运动训练可促进脑缺血再灌注大鼠运动功能的恢复,其机制可能与脑内MAP-2水平上调有关,强化运动训练的效果更明显。     

丹红治疗对急性脑梗死大鼠运动功能改善的影响

目的观察丹红注射液治疗对急性脑梗死大鼠运动功能改善的影响。方法制作大鼠急性大脑中动脉栓塞模型。随机分为假手术组、缺血组、缺血＋小剂量丹红组（0.25 ml/kg）和缺血＋大剂量丹红组（0.5 ml/kg）,术后6h开始丹红注射液治疗,每天1次。在治疗前和治疗后的各个时间点采用网屏试验评定运动功能。结果治疗7 d和14 d后,大剂量丹红治疗组的运动功能较小量丹红治疗组明显改善（P〈0.05）。结论大剂量丹红注射液治疗可以改善急性脑梗死大鼠的运动功能。     

功能性电刺激对急性脑梗死大鼠神经功能及梗死侧皮质巢蛋白表达的影响

目的 观察功能性电刺激(FES)对急性脑梗死大鼠梗死侧顶叶皮质巢蛋白(nestin)表达的影响,初步探讨FES治疗在脑梗死后早期促进神经功能恢复的分子机制.方法 将60只雄性SD大鼠分为电刺激组、安慰刺激组、对照组,每组20只,每组大鼠再分为治疗1,3,7,14 d共4个亚组,每个亚组5只.参照改良Longa线栓法制作急性脑梗死大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型.电刺激组与安慰刺激组于MCAO后第3天开始治疗.电刺激组以表面电极刺激偏瘫侧前肢,FES参数设置的强度以前肢能发生明显的伸腕、伸趾动作为宜.安慰刺激组将FES治疗仪的治疗电极放在偏瘫侧前肢伸肌群的运动点上,但关闭电源不予以电刺激,对照组不给予任何治疗.所有大鼠分别于治疗前、治疗后第1,3,7,14天给予改良的神经功能缺损评分(mNSS)评定,同时,以免疫组织化学技术分析大鼠脑梗死侧周围远隔区顶叶皮质nestin表达的阳性细胞数.结果 治疗3 d后,电刺激组与安慰刺激组和对照组大鼠的mNSS评分组间差异无统计学意义(P>0.05);在治疗7 d和14 d后,电刺激组大鼠mNSS评分显著高于安慰刺激组和对照组(P<0.05);但安慰刺激组与对照组之间mNSS评分在各时间点差异无统计学意义(P>0.05);治疗3,7,14 d后电刺激组大鼠脑梗死侧周围顶叶皮质nestin表达的阳性细胞数较安慰刺激组和对照组明显增加(P<0.05),安慰刺激组和对照组之间在各时间点脑梗死灶周围远隔区顶叶皮质nestin的阳性细胞数差异无统计学意义(P>0.05).结论 FES治疗脑梗死早期大鼠偏瘫肢体可显著促进其神经功能的恢复;FES治疗可促进梗死灶周围nestin的表达,这可能说明了FES治疗的另一个分子机制.

Abstract：

Objective To study the effects of functional electric stimulation(FES) on neural function recovery and expression of nestin around cerebral infract area of rats with acute stroke.Methods The model of middle cerebral artery occlusion(MCAO) of male adult SD rats was established with the method of modified intraluminal filament occlusion.Sixty successfully established model rats were randomly allocated into FES group, placebo group and control group(20/group).Three days after MCAO' s surgery, rats in FES group were treated with FES device while the ones in placebo stimulation group were treated with the same FES device but without electrical output.Rats in control group had no treatment.All groups were randomly assigned into 4 subgroups according to treatment time:1 d,3 d ,7 d and 14 d (5/subgroup).The modified neurological severity score(mNSS) was adopted to evaluate neural function recovery before and after treatment in 4 time points as mentioned above.Meanwhile,the nestin expression in various time points was detected by immunohistochemistry stain in distant area of ipsilateral cortex of infarction.Results The mNSS sours in FES group is lower than that in placebo simulation group and control group at the 7 thd and 14thd (P < 0.05 ) ;The expression of nestin-positive cells in distant area of ipsilateral cortex of infarction of rats in FES group is higher than that in placebo stimulation group and control group ( P < 0.05 ).Conclusions FES may improve the recovery of neural function in the earlier stage of cerebral infarction.FES treatment could improve the expression of nesitin around cerebral infarct area and it could be one of the mechanisms of FES' s effect.     

步态诱发功能性电刺激改善痉挛型双瘫型脑瘫患儿下肢运动功能的疗效观察

摘要 目的：探讨功能性电刺激（FES）对痉挛型双瘫型脑瘫患儿下肢功能的影响。 方法：25例痉挛型双瘫型脑瘫患儿随机分为FES组（n=14）及对照组（n=11）,两组均进行运动训练、物理疗法等。对照组在此基础上进行步行训练30min,每天1次,每周5d,共12周。前6周FES组在此基础上应用FES对双侧腓总神经进行神经肌肉电刺激（NMES）治疗,同时进行步行训练30min,每天1次,每周5d。后6周FES组在此基础上进行步行训练30min,每天1次,每周5d。在治疗前、治疗6周和治疗12周后,分别进行腓肠肌痉挛评分（改良Ashworth 分值,MAS）、踝关节主动背屈活动度（ROM）和粗大运动功能量表（GMFM-88）之D区（站立）、E区（走跑跳）评定。 结果：两组患儿治疗6周和12周后,踝关节ROM增加,GMFM之D区（站立）评分提高,与各自治疗前相比,差异均有显著性意义(P<0.05或0.01);FES组患儿治疗6周和12周后,对照组患儿治疗12周后,MAS评分及GMFM-88之E区分值均优于治疗前(P<0.05或0.01)。治疗6周和12周后,FES组MAS、踝关节ROM及GMFM-88之D区（站立）、E区（走跑跳）等指标均优于对照组,差异有显著性意义（P<0.05或0.01）。 结论：FES配合康复功能训练能降低痉挛型双瘫型脑瘫患儿的下肢肌张力,增加踝关节活动度,提高下肢运动功能。     

功能性电刺激对脑梗死大鼠梗死周边区谷氨酸受体表达的影响

目的探讨功能性电刺激（FES）是否是通过增加局灶性脑缺血大鼠梗死周边区突触谷氨酸通路相关蛋白的表达，增加突触可塑性，促进运动功能和感觉功能改善。 方法选择雄性Wistar大鼠81只，采用随机数字表法分为假手术组、安慰刺激组及FES组，每组27只。安慰刺激组和FES组采用光化学诱导法制作Wistar大鼠右侧脑局灶缺血模型，假手术组予以冷光源照射但不注射玫瑰红。造模成功3d后，FES组给予功能性电刺激，每日1次，每次刺激10min，间歇10min后再刺激10min；安慰刺激组连接电刺激器，但不打开电源；假手术组常规饲养，不予任何处理。3组大鼠均于干预3、7、14d后测定其运动和感觉功能，于测定结束后处死对应时间点大鼠，取梗死周边区皮质行Western blot检测，测定NMDAR1，pGluR1和GluR1的含量，并采用单因素方差分析比较3组大鼠不同时间点的感觉、运动功能和蛋白定量。 结果干预7、14d后，FES组大鼠的运动功能评分分别为（0.30±0.08）分和（0.20±0.07）分，与安慰刺激组同时间点比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；干预7、14d后，FES组大鼠的贴纸去除时间分别为（15.1±7.2）s和（10.3±4.7）s，与安慰刺激组同时间点比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。干预7d后，FES组大鼠的NMDAR1含量与安慰刺激组同时间点比较，差异有统计学意义(P<0.05)；干预14d后，FES组大鼠的GluR和pGluR1含量与安慰刺激组同时间点比较，差异均有统计学意义 (P<0.05)。 结论功能性电刺激可促进脑缺血大鼠运动和感觉功能的恢复，其可能机制可能与功能性电刺激可促进梗死周边区NMDAR1，pGluR1和GluR1通路中相关蛋白的表达以及沉默突触的去沉默化有关。     

Band 3 protein, anion exchange protein of the erythrocyte membrane]

Band 3 protein is the major transmembrane protein of the erythrocyte membrane, comprising 25% of the total membrane protein and existing at 10(6) copies per cell, and mediates the rapid exchange of anions across the membrane. The exchange of Cl- for HCO3- anions plays an important role on the regulation of oxygen and bicarbonate delivary to or from peripheral tissues. Band 3 protein has functionally distinct two domains. The membrane-spanning domain, 55K domain, is believed to span the membrane bilayer 14 times and mediates the rapid anion exchange. The complementary cytosolic domain, 40K domain, is an anchor for the cytoskeletal proteins and regulates the cell deformability and the cell life span. The purpose of this paper is to review the physiological functions of band 3 protein and the anion exchange mechanisms.     

釉基质蛋白对牙周膜成纤维细胞合成蛋白的影响

目的:检测釉基质蛋白作用下牙周膜成纤维细胞合成蛋白的变化,分析釉基质蛋白促进牙周组织再生的作用。方法:实验于2004-04/08在第四军医大学口腔医院组织工程实验室完成。选取11～14岁儿童因正畸需要拔除的无牙周病及龋病的健康新鲜前磨牙,锐利刀片刮除牙根颈部1/3牙龈及牙周膜,采用全牙胶原酶消化法培养获得牙周膜成纤维细胞,经免疫细胞化学检测证实为外胚间充质细胞。取第3代细胞用于实验,分为2组:对照组为含10mL/L新生牛血清的低糖DMEM培养液,实验组为100mg/L釉基质蛋白,用含10ml/L新生牛血清的低糖DMEM培养液配制。将第3代人牙周膜成纤维细胞制备成密度为1×104/mL的细胞悬液,接种入预先放置有细胞爬片的6孔板中,24h后按实验分组更换诱导液。逐日倒置显微镜下观察细胞形态。第3,7天利用免疫组化方法和图像分析技术检测两种细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白、牙骨质附着蛋白的表达。结果:①细胞形态学观察:加入诱导因子初期细胞形态无明显变化,随时间延长,实验组细胞突起逐渐变短,与对照组相比有明显差异。②免疫细胞化学检测结果:对照组骨涎蛋白、骨桥蛋白呈弱阳性到阳性表达,实验组与对照组相比,骨涎蛋白、骨桥蛋白均呈现不同程度胞浆着色加深,与作用时间成正比。对照组细胞骨粘连蛋白基本为阴性表达,而实验组细胞第3天时即检测到了骨粘连蛋白的表达,且随时间的延长染色加深。未经釉基质蛋白处理的牙骨质附着蛋白抗体为阴性表达,经过釉基质蛋白作用第3,7天均检测到牙骨质附着蛋白抗体的弱阳性表达,胞浆着色呈淡棕黄色。设立的空白对照和阴性对照均未见着色。③釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞合成骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的影响:与对照组比较,实验组第3,7天骨涎蛋白和骨桥蛋白均明显上调(184.31±5.67,168.20±6.93;181.42±4.99,163.91±5.86;213.02±5.40,194.81±5.06;211.12±5.59,182.06±6.66;P均<0.01),骨粘连蛋白对照组未表达,实验组第3天时检测到表达;实验组第7天骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白上调幅度均明显高于第3天(163.91±5.86,168.20±6.93,P<0.05;182.06±6.66,194.81±5.06,P<0.01;196.73±5.47,204.67±5.12,P<0.01)。结论:釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的作用,随时间延长这种促进作用愈明显;并能诱导细胞表达牙骨质附着蛋白。釉基质蛋白在一定浓度下可使人牙周膜成纤维细胞向成骨、成牙骨质样细胞分化。     

釉基质蛋白对牙周膜成纤维细胞合成蛋白的影响

目的：检测釉基质蛋白作用下牙周膜成纤维细胞合成蛋白的变化，分析釉基质蛋白促进牙周组织再生的作用。方法：实验于2004—04／08在第四军医大学口腔医院组织工程实验室完成。选取11～14岁儿童因正畸需要拔除的无牙周病及龋病的健康新鲜前磨牙，锐利刀片刮除牙根颈部1／3牙龈及牙周膜，采用全牙胶原酶消化法培养获得牙周膜成纤维细胞，经免疫细胞化学检测证实为外胚间充质细胞。取第3代细胞用于实验，分为2组：对照组为含10mL／L新生牛血清的低糖DMEM培养液，实验组为100mg／L釉基质蛋白，用含10ml／L新生牛血清的低糖DMEM培养液配制。将第3代人牙周膜成纤维细胞制备成密度为1&;#215;10^4／mL的细胞悬液，接种人预先放置有细胞爬片的6孔板中，24h后按实验分组更换诱导液。逐日倒置显微镜下观察细胞形态。第3，7天利用免疫组化方法和图像分析技术检测两种细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白、牙骨质附着蛋白的表达。结果：①细胞形态学观察：加入诱导因子初期细胞形态无明显变化，随时间延长，实验组细胞突起逐渐变短，与对照组相比有明显差异。②免疫细胞化学检测结果：对照组骨涎蛋白、骨桥蛋白呈弱阳性到阳性表达，实验组与对照组相比，骨涎蛋白、骨桥蛋白均呈现不同程度胞浆着色加深，与作用时间成正比。对照组细胞骨粘连蛋白基本为阴性表达，而实验组细胞第3天时即检测到了骨粘连蛋白的表达，且随时间的延长染色加深。未经釉基质蛋白处理的牙骨质附着蛋白抗体为阴性表达，经过釉基质蛋白作用第3，7天均检测到牙骨质附着蛋白抗体的弱阳性表达，胞浆着色呈淡棕黄色。设立的空白对照和阴性对照均未见着色。③釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞合成骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的影响：与对照组比较，实验组第3，7天骨涎蛋白和骨桥蛋白均明显上调（184．31&;#177;5．67，168．20&;#177;6．93；181．42&;#177;4．99，163．91&;#177;5．86；213．02&;#177;5．40．194．8l&;#177;5．06；211．12&;#177;5．59，182．06&;#177;6．66；P均〈0．01），骨粘连蛋白对照组未表达，实验组第3天时检测到表达；实验组第7天骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白上调幅度均明显高于第3天（163．91&;#177;5．86，168．20&;#177;6．93，P〈0．05；182．06&;#177;6．66，194．81&;#177;5．06，P〈0．01；196．73&;#177;5．47，204．67&;#177;5．12，P〈0．01）。结论：釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的作用，随时间延长这种促进作用愈明显；并能诱导细胞表达牙骨质附着蛋白。釉基质蛋白在一定浓度下可使人牙周膜成纤维细胞向成骨、成牙骨质样细胞分化。     

Hypercoagulability test strategies in the protein C and protein S pathway

The protein C-protein S pathway is critical in controlling normal clot formation to provide homeostasis between thrombosis and hemorrhage. Abnormalities have been described in which the pathway is altered because factor V cannot be degraded by activated protein C, producing activated protein C resistance. It has been known for nearly two decades that deficiencies in protein C and protein S can result in impaired inhibition of clot formation resulting in increased risk for thrombosis. This article describes the testing strategies associated with the diagnosis of activated protein C resistance, protein C deficiency, and protein S deficiency.     

Comparative properties of the Charcot-Leyden crystal protein and the major basic protein from human eosinophils.

Guinea pig eosinophil granules contain a protein, the major basic protein (MBP), which accounts for more than half of the total granule protein, has a high content of arginine, and displays a remarkable tendency to form disulfide-linked aggregates. In this study we have purified a similar protein from human eosinophil granules and have compared the human MBP to the protein comprising the Charcot-Leyden crystal (CLC). Eosinophils from patients with various diseases were purified and disrupted, and the granule fraction was obtained. Examination of the granule fraction by transmission electron microscopy showed numerous typical eosinophil granules. Analyses of granule lysates by gel filtration and by polyacrylamide gel electrophoresis revealed the presence of peroxidase and MBP with properties similar to that previously found in guinea pig eosinophil granules. The human MBP had a molecular weight of 9,200, contained less than 1% carbohydrate, was rich in arginine, and readily formed disulfide-bonded aggregates. CLC were prepared from eosinophil-rich cell suspensions by homogenization in hypotonic saline. The supernates following centrifugation of cell debris spontaneously formed CLC. Analysis of CLC revealed the presence of a protein with a molecular weight of 13,000 containing 1.2% carbohydrate. The protein displayed a remarkable tendency to aggregate even in the presence of 0.2 M acetic acid. Human MBP and CLC protein differed in their molecular weights, carbohydrate compositions, and amino acid analyses. Mixtures of the MBP and the CLC protein yielded two bands in polyacrylamide gel electrophoresis. Neither eosinophil protein increased vascular permeability in the guinea pig skin or contracted the guinea pig ileum. The results indicate that the human MBP and the CLC are distinct substances with properties such that one cannot be derived from the other.     

Autoimmune sequence of streptococcal M protein shared with the intermediate filament protein, vimentin

The crossreactivity of antibodies against a renal autoimmune epitope of Streptococcus pyogenes M protein with glomerular mesangial cells was investigated. The antibodies directed against the amino acid sequence Ile-Arg-Leu-Arg of the nephritogenic type 1 M protein reacted in a fibrillar pattern with mesangial cells cultured from isolated glomeruli. In Western blots of urea-extracted mesangial proteins, the antibodies reacted with a 56-kD protein. Monoclonal and polyclonal antibodies identified the 56-kD mesangial protein as vimentin. Two synthetic peptides of human vimentin containing the sequence Arg-Leu-Arg reacted with the autoimmune antibodies raised against a streptococcal M protein peptide. These results provide evidence that the intermediate filament protein vimentin shares autoimmune epitopes with streptococcal M protein.