南蛇藤总萜提取物对肝癌7721细胞侵袭转移能力的影响

目的 研究南蛇藤总萜提取物对肝癌7721细胞侵袭和黏附能力的影响.方法 南蛇藤总萜提取物作用肝癌7721细胞后,MTT法及细胞黏附法检测细胞毒作用及对黏附能力的影响;流式细胞仪检测基质金属蛋白酶-2(MMF-2)表达的变化;ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)分泌量的变化.结果 10、20、40、80μg/mL南蛇藤总萜提取物作用肝癌7721细胞后,其生长抑制率分别为(8.62±0.87)%、(13.42±1.07)%、(27.64±2.13)%、(47.16±3.08)%,呈剂量依赖性.南蛇藤总萜提取物可以抑制肝癌7721细胞与人脐静脉内皮细胞和基底膜成分Matrigel的侵袭、黏附能力,能明显下调MMP-2和VEGF的表达,且呈一定的量效关系.结论 南蛇藤总萜提取物可以抑制肝癌7721细胞增殖,降低细胞的侵袭、黏附能力,其机制可能与下凋VEGF和MMP-2的表达有关.     

黄芪对晚期糖基化终末产物作用下人脐静脉内皮细胞的影响

目的:研究黄芪对晚期糖基化终末产物(AGEs)作用下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和损伤的影响。方法:采用MTT比色法,观察黄芪对体外AGEs培养的人脐静脉内皮细胞增殖的影响;以内皮细胞膜与Alcain Blue(AB,阿利新蓝)结合量为指标,观察黄芪对AGEs导致的人脐静脉内皮细胞损伤的影响;利用AO/EB染料诱导AGEs作用下的人脐静脉内皮细胞,并利用荧光显微镜观察黄芪的抑制作用。结果:黄芪对人脐静脉内皮细胞增殖有抑制作用,可对抗AGEs导致的内皮细胞膜负电荷减少,并且对抗AGEs诱导凋亡的作用,对内皮细胞有保护作用。结论:黄芪是晚期糖基化终末产物的拮抗剂,可有效抑制人脐静脉内皮细胞增殖并有细胞保护作用。     

川芎嗪诱导血管内皮细胞的凋亡及对VEGF表达的影响

目的：研究川芎嗪对血管内皮细胞生长的影响及分子机制。方法：不同浓度的川芎嗪作用体外人体脐静脉内皮细胞，MTT法检查血管内皮细胞的生长、细胞周期检查其凋亡和Western blot检测VEGF的表达。结果：不同浓度的川芎嗪作用VEC-30424h后，可显著抑制VEC-304的生长；诱导细胞发生凋亡，凋亡单20．97—81．83％，与对照组比较P〈0．01。Westorn blot结果提示川芎嗪能使血管内皮细胞的VEGF的表达下调。结论：川芎嗪抑制血管内皮细胞生长并诱导其凋亡及VEGF表达下调是川芎嗪抗肿瘤的机制之一。     

南蛇藤提取物对高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响

目的:利用高表达抑癌基因maspin的人胃癌MGC-803细胞探讨南蛇藤提取物对其凋亡的影响。方法:以人胃癌MGC-803细胞为研究对象,不同质量浓度20,40,80,160,320 mg·L-1南蛇藤提取物作用于MGC-803细胞24,48 h后,MTT法检测南蛇藤提取物对高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞增殖的影响;以不同质量浓度COE组(0,20,40,80 mg·L-1)及32 mg·L-1的5-FU阳性对照处理24 h后,TUNEL法检测南蛇藤提取物对细胞凋亡的影响,Western blot检测对maspin,Bcl-2,Bcl-2L12及Bax蛋白表达的影响。结果:南蛇藤提取物(20,40,80,160,320 mg·L-1)能明显抑制高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞的增殖,呈现时间及浓度依赖性;与空白组比较,不同质量浓度的南蛇藤提取物(20,40,80 mg·L-1)作用24 h后,镜下显示,随着药物浓度升高,细胞数目减少,形态变圆,胞浆浓缩,出现凋亡小体,TUNEL结果表明南蛇藤提取物(20,40,80 mg·L-1)能促进细胞凋亡,Western blot结果显示南蛇藤提取物(20,40,80,160 mg·L-1)可呈浓度依赖性地增加抑癌基因maspin蛋白的表达,降低Bcl-2,Bcl-2L12的表达,均具有明显的统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:南蛇藤提取物能够抑制高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与南蛇藤提取物促进抑癌基因maspin的表达以及抑制Bcl-2,Bcl-2L12的表达有关。     

梓醇对高糖所致HUVECs细胞损伤的保护作用

目的:探讨梓醇对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用及其机制。方法:用33 mmol/L葡萄糖作用于人脐静脉内皮细胞24 h建立凋亡模型,分别以终浓度为20、100、500μg/ml的梓醇进行保护,MTT比色法检测细胞存活率;硫代巴比妥酸法检测细胞上清液中MDA的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测ET-1基因的表达情况;Western Blot法检测NF-κB信号通路相关蛋白的表达情况。结果:与正常组相比,33 mmol/L葡萄糖作用人血管内皮细胞24 h后细胞存活率明显降低;细胞上清液中MDA水平、细胞凋亡率明显升高;ET-1基因、p65蛋白的表达明显上调;IκB-α蛋白的表达则明显下调。与凋亡组相比,20、100、500μg/ml的梓醇保护组细胞存活率明显升高,细胞上清液中的MDA水平、细胞凋亡率均明显降低;ET-1基因、p65蛋白的表达明显下调;IκB-α蛋白的表达则明显上调,并且呈浓度依赖性。结论:梓醇对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与梓醇降低了血管内皮细胞的IκB-α的磷酸化水平,从而抑制了NF-κB信号通路的激活有关。     

双氢青蒿素含药血清抗血管生成活性的研究

目的:研究不同剂量组双氢青蒿素对人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移抑制作用和作用机制。方法:制备空白对照组、双氢青蒿素15 mg/kg组、30 mg/kg组和60 mg/kg组4个剂量组含药血清,以贝伐单抗为对照药作用于人脐静脉内皮细胞,噻唑蓝法检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移能力,RT-q PCR法检测细胞VEGF表达,放射配体受体结合分析法检测细胞VEGFR最大结合容量和解离常数。结果:相对于空白对照组,双氢青蒿素30 mg/kg组和60 mg/kg组可明显抑制人脐静脉内皮细胞增殖且能降低细胞的迁移能力;RT-q PCR结果显示,这2个剂量组的VEGF表达出现明显降低;VEGFR最大结合容量出现明显降低,解离常数明显升高,结果均具有显著性意义。结论:30 mg/kg剂量以上的双氢青蒿素含药血清可显著抑制人脐静脉内皮细胞增殖和迁移,作用机制可能与抑制血管内皮生长因子表达并阻断其与受体的结合相关。     

复方薤白胶囊对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的研究

目的:研究复方薤白胶囊对过氧化氢(H2O2)诱导的凋亡内皮细胞的保护作用,及相关凋亡基因表达的影响,以明确其作用机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),以H2O2行内皮细胞凋亡造模后,再加入不同浓度的复方薤白胶囊提取液作用24h。以MTT法检测细胞增殖率,Hoechst染色观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,Western Blot检测抗凋亡基因Bcl-2含量变化。结果:H2O2造模后,细胞增殖明显受抑,Hoechst染色见大量凋亡细胞,流式细胞检测出明显凋亡峰,抗凋亡基因Bcl-2含量降低,与正常组相比P<0.01,具有明显的统计学意义。而各中药组提高了造模后细胞增殖率,降低了凋亡细胞及凋亡峰,提高了Bcl-2含量表达,且与浓度呈正相关,具有明显的统计学意义。结论:复方薤白胶囊能上调抗凋亡基因Bcl-2的表达,保护内皮细胞,抗内皮细胞凋亡。     

虎眼万年青总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨虎眼万年青总皂苷(Ornithogalum caudatum AIT saponins)诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡的机制,为开发应用于治疗乳腺癌的药物提供实验依据。方法用MTT比色法检测虎眼万年青总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡;Western Blotting法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax与Bad表达的变化。结果虎眼万年青总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;能诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞发生凋亡,且凋亡率呈浓度依赖性;能下调Bcl-2蛋白的表达,升高Bax/Bcl-2的比值,其高剂量组具有显著统计学差异(P<0.01),能上调Bad蛋白的表达,其低、中、高剂量组具有显著统计学差异(P<0.01)。结论虎眼万年青总皂苷可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并可诱导细胞凋亡,其机制可能与升高Bax/Bcl-2的比值,上调Bad蛋白的表达相关。     

重楼总皂苷对A549细胞凋亡及Caspase3、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨重楼总皂苷诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用及对Caspase3、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:CCK-8法检测重楼总皂苷对细胞增殖的抑制作用;Hoechst染色后激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态的变化;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测重楼总皂苷对细胞凋亡的影响;Western blotting检测重楼总皂苷对细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2表达的影响。结果:重楼总皂苷对A549细胞的生长有显著抑制作用,可引起细胞形态发生明显改变,诱导细胞发生凋亡,显著上调促凋亡蛋白Caspase3的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达,且与浓度成依赖关系。结论:重楼总皂苷可显著诱导A549细胞凋亡,其机制与上调促凋亡蛋白Caspase3的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达相关。     

苦参碱抑制胶质瘤U251细胞增殖作用及其凋亡机制研究

目的:研究苦参碱对胶质瘤U251细胞增殖影响,并进一步探讨其作用潜在的分子机制。方法:MTT法检测苦参碱对U251细胞增殖抑制作用;TUNEL方法及流式细胞术检测苦参碱诱导U251细胞凋亡情况;采用Western blot方法检测U251细胞上凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果:苦参碱可以抑制U251细胞增殖,差异有显著性(P0.05),呈时间和浓度依赖性;而在同条件下对人正常视网膜色素上皮RPE细胞无抑制作用,差异无显著性(P0.05);其次苦参碱能诱导U251细胞凋亡,进一步研究发现苦参碱可以影响蛋白Bcl-2、Bax表达。结论:苦参碱能抑制U251细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与下调U251细胞上抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达,同时上调促细胞凋亡Bax蛋白表达有关。     

灵芝孢子油对MCF-7细胞凋亡及迁移的影响

目的：观察灵芝孢子油对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：CCK-8法检测灵芝孢子油对MCF-7增殖的影响;伤口愈合实验观察灵芝孢子油对MCF-7细胞迁移的作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT—PCR法检测抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Bax及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达水平。结果：不同浓度的灵芝孢子油对MCF-7的增殖和迁移均有一定程度的抑制作用,且呈时间、剂量依赖性;灵芝孢子油能显著诱导MCF-7细胞凋亡;RT—PCR结果显示,灵芝孢子油能上调Bax同时下调Bcl-2和VEGF的mRNA表达水平。结论：灵芝孢子油能抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调VEGF和Bcl-2／Bax的比值有关。     

蓖麻毒素的纯化及其对血管内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的:对蓖麻毒素纯化方法进行改良并探讨其体外抗血管生成的药理作用.方法:通过磷酸盐缓冲液抽提、Sepharose 4B亲和层析与Sephacryl S-100分子筛层析纯化蓖麻毒素,反相疏水高效液相色谱法测定蛋白纯度,免疫印迹法进行鉴定;原代培养人脐静脉内皮细胞,免疫细胞化学法鉴定,MTT法检测蓖麻毒素对细胞增殖的抑制作用,流式细胞术定量分析细胞凋亡率.结果:采用改良法纯化蓖麻毒素明显缩短了纯化周期,纯化的蛋白经免疫印迹技术证实为蓖麻毒素,蛋白纯度高达95.3%;纯化的蓖麻毒素抑制体外培养人脐静脉内皮细胞增殖作用具有明显的时间及剂量依赖效应,并且可明显诱导细胞凋亡,随着药物浓度增加,细胞凋亡率,尤其是晚期凋亡率上升更明显.结论:采用改良方法纯化可获得高纯度的蓖麻毒素,纯化的蓖麻毒素具有明显的抑制血管内皮细胞增殖,诱导细胞凋亡作用.     

黄芪提取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制研究

目的:研究黄芪提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度的黄芪提取物干预人胃癌SGC-7901细胞。MTT比色法观察黄芪提取物对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位;分光光度法检测细胞Caspase-3和Caspase-9活性;电泳法检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果:黄芪提取物(25、50、100 mg/L)以剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖,诱导其凋亡,并且降低线粒体膜电位;增加Caspase-3和Caspase-9活性,上调Bax蛋白表达的同时下调Bcl-2蛋白表达。结论:黄芪提取物可抑制人胃癌SGC-7901细胞体外增殖且通过线粒体途径诱导其凋亡。     

复方薤白胶囊对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的研究

目的：研究复方薤白胶囊对过氧化氢（H2O2）诱导的凋亡内皮细胞的保护作用,及相关凋亡基因表达的影响,以明确其作用机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,以H2O2行内皮细胞凋亡造模后,再加入不同浓度的复方薤白胶囊提取液作用24h。以MTT法检测细胞增殖率,Hoechst染色观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,Western Blot检测抗凋亡基因Bcl-2含量变化。结果：H2O2造模后,细胞增殖明显受抑,Hoechst染色见大量凋亡细胞,流式细胞检测出明显凋亡峰,抗凋亡基因Bcl-2含量降低,与正常组相比P〈0.01,具有明显的统计学意义。而各中药组提高了造模后细胞增殖率,降低了凋亡细胞及凋亡峰,提高了Bcl-2含量表达,且与浓度呈正相关,具有明显的统计学意义。结论：复方薤白胶囊能上调抗凋亡基因Bcl-2的表达,保护内皮细胞,抗内皮细胞凋亡。     

启膈散对食管癌Eca-9706细胞株诱导血管生成的影响

目的:研究启膈散对食管癌血管生成的影响。方法:MTT法检测启膈散醇提物对人食管鳞癌Eca-9706细胞株生长抑制作用,收集其IC50浓度的Eca-9706细胞条件培养基,以鸡胚绒毛尿囊膜模型、MTT法、迁移试验和小管形成试验观察条件培养基对血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成的影响,ELISA法检测Eca-9706细胞和人脐静脉内皮细胞培养基上清VEGF、IL-6含量。结果:启膈散醇提物可明显抑制Eca-9706细胞增殖,具一定量效关系,IC50为96μg/m L。Eca-9706细胞条件培养基显著增加CAM生成的血管总面积,促进人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成;启膈散醇提物可减少Eca-9706细胞条件培养下CAM血管生成,人脐静脉内皮细胞增殖和小管形成,但增加内皮细胞迁移。启膈散醇提物可减少内皮细胞分泌IL-6和VEGF,但在Eca-9706细胞却使之增加。结论:启膈散醇提物可抑制Eca-9706细胞所致血管生成、内皮细胞增殖和小管形成,增加内皮细胞迁移,减少内皮细胞分泌VEGF和IL-6。     

木贼有效部位抑制氧化低密度脂蛋白致内皮细胞凋亡及Caspase-3的表达

目的探讨木贼有效部位抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC-ECV304)凋亡的可能机制。方法体外ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤,用木贼有效部位进行干预;采用流式细胞术检测细胞凋亡率及Caspase-3蛋白;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮细胞Caspase-3mRNA表达。结果 ox-LDL可明显诱导内皮细胞凋亡,上调Caspase-3mRNA及Caspase-3蛋白表达,木贼有效部位干预后细胞凋亡率明显下降(P0.05),Caspase-3mRNA及Caspase-3蛋白表达明显下调(P0.01)。结论木贼有效部位通过对凋亡相关基因的调控最终抑制Caspase-3蛋白的表达来减少内皮细胞的凋亡。     

启膈散对食管癌Eca-9706细胞株诱导血管生成的影响北大核心CSCD

目的:研究启膈散对食管癌血管生成的影响。方法:MTT法检测启膈散醇提物对人食管鳞癌Eca-9706细胞株生长抑制作用,收集其IC50浓度的Eca-9706细胞条件培养基,以鸡胚绒毛尿囊膜模型、MTT法、迁移试验和小管形成试验观察条件培养基对血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成的影响,ELISA法检测Eca-9706细胞和人脐静脉内皮细胞培养基上清VEGF、IL-6含量。结果:启膈散醇提物可明显抑制Eca-9706细胞增殖,具一定量效关系,IC50为96μg/m L。Eca-9706细胞条件培养基显著增加CAM生成的血管总面积,促进人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成;启膈散醇提物可减少Eca-9706细胞条件培养下CAM血管生成,人脐静脉内皮细胞增殖和小管形成,但增加内皮细胞迁移。启膈散醇提物可减少内皮细胞分泌IL-6和VEGF,但在Eca-9706细胞却使之增加。结论:启膈散醇提物可抑制Eca-9706细胞所致血管生成、内皮细胞增殖和小管形成,增加内皮细胞迁移,减少内皮细胞分泌VEGF和IL-6。     

蓬子菜含药血清对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察蓬子菜含药血清对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型细胞增殖与凋亡的影响,从分子生物学水平阐明蓬子菜保护血管内皮细胞的部分机制。方法:用不同浓度(0%,2%,5%,10%)的蓬子菜含药血清及通塞脉片含药血清与体外培养的经H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型共同孵育,以CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞内活性氧(ROS)含量。结果:与对照组比较,蓬子菜含药血清能够明显减轻H2O2对人脐静脉内皮细胞的增殖抑制作用,促进HUVECs的增殖,并与浓度呈正相关;能显著降低细胞内活性氧的含量,减少H2O2诱导的HUVECs凋亡;且优于正常血清组及通塞脉片血清组(P0.05)。结论:蓬子菜能促进内皮细胞增殖,降低细胞内活性氧的含量,减少细胞凋亡,从而阻止ASO的发生,达到预防和治疗ASO的作用。     

构树叶总黄酮调控Bcl-2与Bax蛋白表达及caspase-3活性诱导HepG-2细胞凋亡的研究

目的:研究构树叶总黄酮(total flavonoids of Broussonetia papyrifera,TFBP)诱导HepG-2细胞凋亡的机制。方法:采用体外细胞培养方法,取对数生长期人肝癌HepG-2细胞,随机分为药物组和对照组,药物组用3,6,9,12 g·L-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细胞24,48,72 h后,应用MTT法检测TFBP对人肝癌细胞HepG-2生长抑制作用;Hoechst 33342荧光染色法荧光显微镜观察各浓度TFBP作用细胞48 h后的细胞的形态变化;通过免疫细胞化学SP法检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;比色法检测半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性。结果:TFBP在体外对人肝癌细胞HepG-2有较强的浓度依赖性和时间依赖性抑制作用,9,12 g·L-1的TFBP作用HepG-2细胞72 h后,细胞增殖抑制率可分别达52.46%,64.72%,与对照组具有显著性差异(P<0.01),可诱导细胞凋亡,质量浓度9,12 g·L-1的TFBP作用HepG-2细胞48 h后就可出现典型的凋亡小体,TFBP可升高caspase-3活性,并具有浓度效应,同时还可下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2/Bax。结论:TFBP在体外对肝癌细胞HepG-2有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用。其诱导凋亡的机制可能与其下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2/Bax以及增强caspase-3的活性有关。     

痰瘀通胶囊含药血清对HUVEC增殖及eNOS蛋白表达的影响

目的观察痰瘀通胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达的影响,探讨其抗动脉粥样硬化及调脂的可能机制。方法用SRB法检测痰瘀通胶囊含药血清对内皮细胞增殖的变化;用Western Blot法检测其对内皮细胞eNOS蛋白表达的变化。结果痰瘀通胶囊含药血清能促进人脐静脉内皮细胞增殖,上调eNOS的蛋白表达水平。结论痰瘀通胶囊含药血清通过上调eNOS的蛋白表达水平,促进内皮细胞增殖,具有保护血管内皮细胞的功能,从而达到抗动脉粥样硬化和防治高脂血症的作用。