肺炎链球菌溶血素黏膜免疫抗定植保护作用的研究

目的 原核表达ΔA146 Ply蛋白,评价ΔA146 Ply黏膜免疫对肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)在宿主鼻咽部定植的保护作用.方法 IPTG诱导、Ni-NTA树脂纯化获得纯化的ΔA146 Ply蛋白,经黏膜免疫BALB/C小鼠,制备其特异性抗血清;进行体内抗定植实验,观察小鼠...     

肺炎链球菌溶血素减毒突变体免疫小鼠可诱导抗体依赖的保护效应

目的 优化肺炎链球菌溶血素减毒突变体(△A146 Ply)蛋白小鼠免疫方案,评价其保护效果,并揭示△A146 Ply特异性抗体在保护中的作用.方法 分别使用△A146 Ply免疫小鼠1、2、3次,利用ELISA分析血清内特异性IgG滴度,效价测定1周后,使用肺炎链球菌D39菌株鼻腔攻毒评价3种免疫方式保护效力.通过肺内定植模型和败血症模型分析△A146 Ply对肺炎链球菌感染的保护效果.利用抗体吸附试验和模拟被动保护试验分析Ply特异性抗体的保护作用.结果 随着免疫次数的增加,小鼠血清内的IgG滴度显著升高.相比免疫两次的小鼠,3次免疫后的小鼠其体内的IgG升高超过20倍.在攻毒试验中,免疫3次后的小组接受同等剂量的D39攻毒,存活率最高,保护效率为50%.在定植模型中,△A146 Ply免疫后的小鼠,其肺内肺炎链球菌血清型19F的细菌量减少约50倍,14血清型菌减少超过20倍.在败血症模型中,使用1200 CFU的D39腹腔注射到免疫组及对照组小鼠体内,△A146 Ply免疫组有60%的小鼠能够抵抗这种致命剂量的D39感染,对照组小鼠全部死亡(P=0.0018).在被动保护试验中,Ply特异性抗体被吸附完全后的抗血清完全不能保护小鼠抵抗致死剂量的D39感染,60%的小鼠在接受抗体特异的抗血清后存活,两组存活率差异有统计学意义.结论 △A146 Ply能有效抵抗肺炎链球菌的感染,证实保护作用与其特异性抗体密切相关.     

一种减毒肺炎链球菌溶血素突变体的构建与表达

目的 使用重叠PCR方法构建构建△A146Ply突变体,原核可溶性表达△A146Ply蛋白,并明确其毒力变化情况;分析肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)在不同血清型肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae,SPN)中的表达情况.方法 以SPN D39型基因组DNA为模板设计合成构建突变体ply基因所需引物;利用重叠PCR方法扩增合成△A146ply突变体.通过溶血实验分析其溶血活性,利用中和试验验证△A146Ply诱导产生的特异性抗体中和野生Ply毒素溶血能力,并利用Western印迹检测5株不同血清型肺炎链球菌流行菌株中Ply蛋白表达情况.结果 突变体基因测序结果显示,Ply146位密码子GCT 3个碱基被缺失,△A146ply突变体构建成功,并实现了△A146Ply的可溶性表达,得到纯度＞90 %的重组蛋白.△A146Ply蛋白浓度为100 000 ng/ml亦未表现出溶血活性.△A146Ply蛋白诱导产生的特异性抗体能够中和野生Ply毒素的溶血活性.Western印迹结果显示,△A146Ply诱导产生的多克隆抗体可与国内临床常见4株肺炎链球菌有交叉反应.结论 △A146Ply蛋白是一种安全的肺炎链球菌疫苗候选分子,可刺激机体产生具有中和作用的特异性抗体.     

黏膜免疫壳聚糖-多胺转运蛋白D(PotD)DNA纳米微粒对小鼠鼻咽部肺炎链球菌定植的保护作用研究

目的 探讨以壳聚糖包裹的PotD DNA(Chitosan-potD)纳米微粒经鼻黏膜免疫小鼠对肺炎链球菌鼻咽部定植的保护作用.方法 将制备的Chitosan-potD微粒、裸pVAX1-potD重组质粒(裸potD)及pVAX1分别鼻腔免疫小鼠,收集黏膜和血清标本用以检测特异性抗体水平;分离并培养脾淋巴细胞,检测IL-17A、IL-4及IFN-γ的分泌水平;于免疫小鼠鼻腔进行肺炎链球菌攻击,通过菌落计数评估各免疫组对小鼠肺炎链球菌鼻咽部定植的保护作用.结果 Chilosan-potD纳米微粒在小鼠体内诱导产生的抗PotD特异性血清IgG、IgG1、IgG2a、黏膜IgA抗体水平及IL-17A、IL-4、IFN-γ水平与裸potD组及pVAX1组相比均明显升高,且差异具有统计学意义(P<0.05);菌落计数结果 显示,Chitosan-potD微粒组在鼻咽部定植的肺炎链球菌数量显著减少(P<0.05).结论 壳聚糖包裹PotD DNA微粒对肺炎链球菌鼻咽部定植具有免疫保护作用.     

肺炎链球菌毒力蛋白在侵入性感染中的免疫原性评价

目的观察肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎链球菌表面黏附素A(PsaA)及肺炎链球菌溶菌素(Ply)激发自然途径感染肺炎链球菌机体保护性体液免疫应答的情况,评价这三种毒力蛋白作为治疗性肺炎链球菌疫苗候选抗原的免疫原性。方法采集侵入性肺炎链球菌感染患者(实验组)及同期确诊为侵入性其它细菌感染患者(对照第一组)和同期确诊为非感染性疾病患者(对照第二组)各36例急性期(第0+3天)及恢复期(第21±3天)血清样本,酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者血清中肺炎链球菌3种毒力蛋白抗原特异性抗体IgG水平变化。结果实验组与两组对照组间第(0+3)天血清的3种肺炎链球菌毒力蛋白特异性抗体水平无显著性差异(P>0.05)。第一组对照组恢复期较急性期血清中3种毒力蛋白特异性抗体水平无显著变化(P>0.05),而实验组恢复期血清3种肺炎链球菌毒力蛋白特异性抗体水平明显高于急性期血清抗体水平8～30倍(P<0.01),其中PspA和Ply蛋白抗原特异性抗体水平升高更明显,血清中针对PspA家族1(PspA-Faml)特异性抗体水平高于针对PspA家族2(PspA-Fam2)的特异性抗体水平(P<0.01)。结论 PsaA,P...     

ClpP免疫小鼠可抵抗TIGR4型肺炎链球菌的侵袭性感染

目的 原核表达肺炎链球菌毒力因子ClpP,探讨其作为肺炎链球菌候选蛋白疫苗的价值.方法 分离培养TIGR4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将完整的ClpP开放读码框架克隆到pET-32a原核表达载体内,经测序鉴定、原核表达及纯化,ClpP主动和阳性抗体血清被动免疫小鼠,TIGR4型肺炎链球菌攻击后,监测其生存时间.结果 获得了高表达的重组抗原蛋白,表达的抗原蛋白用Western blot鉴定,镍柱纯化并透析复性可得到纯度达90%以上的重组蛋白.主动和被动免疫BALB/c小鼠,与未免疫组相比,产生的保护性作用具有统计学意义.结论 ClpP蛋白免疫小鼠可抵抗肺炎链球菌侵袭性感染,ClpP蛋白可作为肺炎链球菌的候选蛋白疫苗.     

肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2的免疫原性和保护效果评价及保护机制初步研究

目的采用肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2为抗原制备重组蛋白疫苗, 在小鼠肺炎模型中评价疫苗的免疫原性、保护效果和保护机制。方法利用大肠埃希菌原核表达系统表达肺炎克雷伯菌KPC-2蛋白, 经GST亲和层析对目的蛋白进行纯化;采用KPC-2蛋白制备疫苗, 经皮下注射免疫新西兰兔, 心脏采血分离血清, 用Protein G亲和层析纯化多克隆抗体, 同时运用调理吞噬杀菌试验检测抗体的体外杀菌活性。采用KPC-2疫苗免疫雌性BALB/c小鼠3次, 间接ELISA检测血清中特异性IgG抗体滴度。末次免疫后7 d, 通过气管插管构建小鼠肺炎克雷伯菌肺部感染模型, 感染1 h后尾静脉给予0.1 mg美罗培南治疗, 通过比较免疫组与佐剂组的生存率、细菌定植量和组织病理学差异, 以及给药组与生理盐水组生存率的差异评价疫苗的保护效果。采用KPC-2多克隆抗体被动免疫评价抗体的保护效果。结果 KPC-2免疫组小鼠血清特异性IgG水平显著高于对照组(t=4.325,P<0.05), 免疫组生存率显著高于对照组[70% (7/10)vs 10% (1/10), P<0.05];免疫组小鼠肺组织炎性程度及...     

毒力蛋白CbpA抗肺炎链球菌侵袭性感染的实验研究

目的：原核表达肺炎链球菌毒力蛋白CbpA,探讨其作为肺炎链球菌候选蛋白疫苗的价值。方法：分离培养TIGE4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将CbpA片段克隆到PET-32（a）原核表达载体内,测序鉴定后,原核表达及纯化CbpA;CbpA蛋白抗原主动和抗体被动免疫BALB/c小鼠,TIGR4型肺炎链球菌攻击,监测其生存时间。结果：获得了原核表达的重组抗原蛋白,Western blot鉴定证实为目的蛋白,镍柱纯化并透析复性可得到纯度达90%以上的重组蛋白。主动和被动免疫BALB/c小鼠后,TIGR4型肺炎链球菌攻击,与未免疫组相比,产生的保护性作用具有统计学意义。结论：CbpA蛋白免疫小鼠后可抵抗肺炎链球菌侵袭性感染,CbpA蛋白可作为肺炎链球菌的候选蛋白疫苗。     

ClpP融合蛋白诱导的免疫反应可抵抗不同型别肺炎链球菌的侵袭性感染

目的 ClpP融合蛋白在调节肺炎链球菌其他毒力因子表达和入血过程中起重要作用,评价Trx-ClpP融合蛋白对不同型别肺炎链球菌的侵袭性感染的免疫保护效果,为后续蛋白疫苗的开发提供依据.方法 含有重组质粒pET-32a(+)/ClpP工程菌BL21(DE3)经IPTG诱导后表达Trx-ClpP融合蛋白,纯化后与铝佐剂混合经腹腔注射免疫小鼠,而对照小鼠则用PBS与铝佐剂混合免疫.免疫程序:初次免疫5周后用ELISA法测小鼠针对ClpP融合蛋白的抗体免疫应答水平,末次免疫2周后用12个型别肺炎链球菌攻击,监测其生存时间.结果 重组ClpP融合蛋白主动免疫BALB/c小鼠后,产生了高滴度的anti-ClpP融合蛋白抗体,对多个血清型的肺炎链球菌菌血症小鼠模型的保护效果较对照组具有统计学意义.结论 ClpP融合蛋白免疫小鼠后可抵抗1、2、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、23F等12个型别的肺炎链球菌侵袭性感染,提示以ClpP融合蛋白为活性成分的疫苗具有较高的开发价值.     

应用被动免疫的方法研制抗胸膜肺炎放线菌1,6,12型特异性的单克隆抗体(文摘)

胸膜肺炎放线菌属G-茵,有12个血清型。可引起猪的致死性肺炎造成严重经济损失。由于某些血清型的碳水化合物组成差异甚小,各型间的蛋白质组成无明显差别,因此很难获得型特异性的McAb。尤其是对免疫原性不太强的表位更加困难。为了解决这一问题,作者参照前人应用被动免疫的方法以粗制细菌性抗原制备多克隆抗体的成功思路,采用被动免疫方法研制出扰App-1,6,12型特异性的McAb。方法大致如下。 先以2型App(App-2)4226菌株的冷冻菌体(AgⅡ)和该菌的培养物(Ag Ⅰ)加FIA腹腔注射免疫BALB/c小鼠(AgⅡ2次,Ag Ⅰ 1次),制备被动免疫用的抗App-2鼠血清。然后,以抗App-2血清腹     

免疫低下小鼠肺部肺炎链球菌感染模型的制备

目的建立免疫低下肺部肺炎链球菌感染小鼠模型。方法将配比好的FLV病毒悬浊液腹腔注射模型组小鼠,21 d后,采用滴鼻法对小鼠进行Ⅲ型肺炎链球菌接种;正常对照组给予与药液同体积的生理盐水。结果与正常对照组比较模型组小鼠毛发光泽度欠佳,竖毛现象严重,活动度逐渐减少,饮食明显减少,体质量减轻;模型组小鼠各脏器指数比正常对照组均升高,差异有显著统计学意义(P0.05),免疫低下肺部肺炎链球菌感染模型小鼠血清中IL-6、PCT表达水平均比正常对照组增高(P0.05)。结论采用FLV病毒悬浊液结合滴鼻法滴注肺炎链球菌建立的免疫低下肺部肺炎链球菌感染小鼠模型,为研究免疫低下肺部肺炎链球菌感染药物干预提供了较理想的实验模型。     

流感嗜血杆菌D蛋白黏膜免疫保护效果研究

目的评估D蛋白(protein D,PD)黏膜免疫对流感嗜血杆菌感染的保护效果,研究其免疫应答机制,为发展新疫苗提供依据。方法运用分子克隆技术构建PD蛋白表达质粒;用含有或无霍乱毒素(cholera toxin,CT)的PD蛋白黏膜免疫C57BL/6小鼠,ELISA方法检测血清Ig G、唾液Ig A及脾细胞的细胞因子分泌水平;建立定植和致死性感染模型,观察细菌清除及小鼠生存情况;以裸鼠和μMT小鼠来研究细胞和体液免疫应答在PD免疫保护效果中的作用。结果单独PD蛋白黏膜免疫野生鼠能诱导高滴度的抗PD Ig G和s Ig A,血清中Ig G1、Ig G2a和Ig G2b亚型水平相当,脾细胞分泌IL-17A增加,小鼠鼻咽部流感嗜血杆菌清除增加,致死性感染生存率为82%;裸鼠和μMT小鼠免疫PD后对流感嗜血杆菌的清除效应和致死性感染保护作用受损,PD抗血清被动免疫μMT小鼠后其抗感染能力恢复;PD+CT组抗体滴度及脾细胞分泌IL-4和IL-17A水平均高于PD组,细菌清除效应与PD组相似,但无致死性感染保护能力。结论无佐剂PD蛋白黏膜免疫能有效诱导黏膜应答,抵抗流感嗜血杆菌的定植与致死性感染,为黏膜疫苗的发展提供了可能的选择。     

新生期肺炎链球菌肺炎对VA的影响及其与肺部免疫及气道反应性的关系研究

目的研究新生期肺炎链球菌肺炎(Streptococcus pneumoniaepneumonia,S.pp)对维生素A(VA)水平的影响及其与肺部免疫及气道反应性的关系。方法 Balb/c小鼠出生后第7天鼻腔滴注2×10~7CFU肺炎链球菌5μl建立新生期S.pp模型,对照组滴注等量PBS,新生期肺炎链球菌肺炎补充VA组(S.pp+VA)感染后口饲补充VA,每天1次,连续4天,对照组给予等量VA溶解溶质菜籽油。收集感染后第7、14、21、28天肺组织、血清、肝脏组织标本,高效液相色谱仪(HPLC)监测组织中VA水平。小鼠成年后肺组织病理切片HE染色观察肺组织病理改变,体积描记法检测小鼠肺功能,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)上清IL-4、IL-5、IL-13、IL-17A、INF-γ水平,流式细胞术检测肺组织中的CD4+T细胞亚群Th1、Th2及Foxp3~+Treg。结果 S.pp组小鼠肺组织VA持续降低至感染后4周,血清VA降低直至感染后2周恢复正常,而肝脏中VA水平无统计学差异。S.pp+VA组肺组织炎性细胞浸润较S.pp组显著减轻,S.pp+VA组BALF中IL-4、IL-5、IL-13及IL-17A水平显著低于S.pp组(P0.05),IFN-γ则显著增高(P0.01),肺组织Th1、Foxp3~+Treg显著高于S.pp组(P0.01),Th2水平明显降低(P0.01),且Th1/Th2比值显著增高(5.7 vs 1.7,P0.001))。S.pp+VA组小鼠气道反应性显著低于S.pp组(P0.001)。结论新生期肺炎链球菌肺炎致肺部VA水平持续降低至成年期,肺炎后补充VA能减轻新生期肺炎链球菌肺炎后肺组织炎性细胞浸润,促进Foxp3~+Treg表达、纠正Th1/Th2失衡,抑制成年期气道高反应性形成。     

新生期肺炎链球菌肺炎对成年期肺组织免疫状态及气道高反应的影响

目的研究新生期肺炎链球菌(S.pneumoniae)肺炎对成年期肺组织免疫状态及气道高反应的影响。方法 Balb/c小鼠出生后第7天鼻腔滴注2×107CFU S.pneumoniae 5μl(肺炎链球菌肺炎组)或等量PBS(对照组),5周后用体积描计法检测小鼠肺功能,收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),进行白细胞数及分类计数,ELISA法检测BALF中IL-4、IL-5、IL-10、IL-17A、IFN-γ及TGF-β水平,流式细胞术检测肺组织中的CD4+T细胞亚群Th1、Th2及Foxp3+Treg。结果新生期肺炎链球菌肺炎组小鼠成年后BALF中细胞总数、中性粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞水平显著高于对照组(P0.01)。BALF中IFN-γ、IL-10及TGF-β均显著低于对照组(P0.01),而IL-5、IL-17A显著高于对照组(P0.01);肺组织Th1、Foxp3+Treg显著低于对照组(P0.01);而Th2显著高于对照组(P0.05);Th1/Th2显著低于对照组(P0.01)。新生期肺炎链球菌肺炎小鼠成年后气道高反应显著高于对照组(P0.01)。结论新生期肺炎链球菌肺炎能影响肺组织免疫分化方向,促进成年后气道高反应的形成。     

LC3-LpqH增强Ag85B抗结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫保护作用

目的探讨微管相关蛋白轻链3-脂蛋白前体-LpqH(LC3-LpqH)DNA佐剂对Ag85B抗结核分枝杆菌(MTB)DNA疫苗免疫保护作用的影响。方法分别用纯化的pCMV-Ag85B、pCMV-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV质粒DNA对BALB/c小鼠进行3次肌肉注射免疫。末次免疫2周后,ELISA检测血清中抗Ag85B IgG亚型及滴度。Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测血清白细胞介素2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用MTB标准毒株H37Rv尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏MTB载量并观察肺组织病理变化。结果与Ag85B免疫组相比,LC3-LpqH/Ag85B免疫组抗Ag85B的IgG2a水平显著提高,而IgG1水平显著降低,并伴随IL-2、IFN-γ分泌增加及IL-4、IL-10减少,肺和脾脏内MTB载量降低,肺组织病变程度减轻。结论 LC3-LpqH可显著增强Ag85B抗MTB疫苗的Th1型免疫应答,并显示较好的免疫保护效应。     

B群链球菌42KD蛋白提取及免疫学效果初步探讨

目的 寻求一种以B群链球菌(group B Streptococcus,GBS)菌体免疫原性蛋白为基础的疫苗.方法 以一步层析法从GBSⅢ型菌32325株中获得42KD菌体蛋白,以42KD蛋白不同剂量和针次免疫NIH成年小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清IgG抗体滴度.选择最佳免疫条件免疫小鼠,然后腹腔攻击GBSⅢ型32325菌株,观察主动免疫和被动免疫保护效果.结果 目的 蛋白的相对分子质量(Mr)为42.33×103,等电点为6.6,并初步鉴定为糖蛋白且为分泌性蛋白质.不同剂量免疫均能诱导小鼠产生相应IgG抗体,其效价最高可达1:24576,说明42KD蛋白具有很好的免疫原性.试验组成年小鼠的免疫保护指数为100,乳鼠的免疫保护指数为40.结论 42KD蛋白对成年小鼠和乳鼠均诱导保护免疫.不同剂量免疫保护试验结果说明:在一定范围内,免疫剂量与血清IgG抗体应答水平呈正相关;小鼠血清IgG抗体滴度与保护力正相关.     

氯喹可加重Con A诱导的自身免疫性肝损伤

氯喹(chloroquine,CQ)可抑制免疫反应,偶用于类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的治疗,但氯喹对自身免疫性肝炎的影响目前尚不明确。本研究拟探讨CQ对小鼠自身免疫性肝损伤的影响及可能机制。小鼠尾静脉注射Con A建立小鼠肝损伤模型,1h后,腹腔注射CQ或等体积PBS。观察小鼠生存状况,在不同时间点收集血清和肝组织,采用赖氏法检测血清谷丙转氨酶(GPT)水平;ELISA方法检测血清细胞因子IFN-γ及TNF-α含量;HE染色观察肝脏病理损伤情况;免疫印迹检测小鼠肝脏自噬水平指标LC3-Ⅱ和P62。结果显示,Con A+CQ组小鼠血清中GPT水平显著高于Con A组,且病理切片染色显示Con A+CQ组肝脏损伤较Con A组更严重;Con A+CQ注射组小鼠的存活率明显低于仅注射Con A组(P0.0001);Con A+CQ组小鼠血清中炎性细胞因子IFN-γ和TNF-α的分泌高于Con A组;CQ可抑制Con A刺激诱导的小鼠肝脏自噬水平升高。氯喹可加重Con A诱导的自身免疫性肝损伤,其机制可能是通过抑制肝脏自噬水平从而加剧小鼠肝脏损伤。     

A、C群脑膜炎球菌结合疫苗免疫原性研究

目的 研究A、C群脑膜炎球菌结合疫苗的免疫原性,包括剂量、免疫记忆及抗原相容性.方法 将不同剂量的A、C群脑膜炎球菌结合疫苗分别免疫小鼠,末次免疫后14 d采集血清测定血清抗体滴度,确定最佳免疫剂量后,再分别以单价A群和C群脑膜炎球菌结合疫苗及二价A、C群脑膜炎球菌结合疫苗同时对小鼠分别进行1、2、3针免疫,考察其针次效应和抗原相容性.结果 A、C群脑膜炎球菌结合疫苗中的A抗原和C抗原均以1.25 μg剂量免疫小鼠时,其免疫原性较好.A、C群脑膜炎球菌结合疫苗能够诱导小鼠产生免疫回忆应答,且在二价结合疫苗中的A群耦联物和C群耦联物配伍后无干扰作用,抗原相容性良好.结论 A、C群脑膜炎球菌结合疫苗具有较好的免疫原性和明显的免疫回忆应答,抗原相容性良好.     

pIHsp65GM的构建及其对结核杆菌感染小鼠的保护

目的构建pIHsp65GM双顺反子真核表达质粒,并在真核细胞中表达,研究该基因疫苗的免疫原性及其对小鼠感染结核杆菌后的免疫保护效果。方法制备基因疫苗,将C57BL/6小鼠于胫前肌注射质粒DNA免疫,末次免疫后用h37rv强毒株经尾静脉攻击小鼠,计数肺和脾组织中结核杆菌的菌落数,对小鼠的部分肺和脾组织作病理切片,经HE染色观察组织病变的程度,测血清特异性IgG,MTT测定脾淋巴细胞特异性增殖指数,测小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ的水平,乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定免疫小鼠特异性细胞毒性T细胞(CTL)活性。结果 pIHsp65GM基因疫苗构建成功并且诱导小鼠特异性IgG的产生、脾淋巴细胞增殖以及IFN-γ的分泌(平均含量显著高于2个阴性对照组(P<0.001))。pIHsp65GM免疫组小鼠的脾和肺的平均结核菌载量分别低于两个阴性对照组的相应器官的结核菌载量(P<0.001),同时也显著高于BCG免疫对照组。结论成功构建和表达pIHsp65GM质粒,该基因疫苗对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护效果,能够诱导较强的抗原特异性Th1型细胞     

重组白细胞介素-17A鼻黏膜免疫抗肺炎链球菌感染的实验研究

目的 观察小鼠重组白细胞介素-17A (rIL-17A)鼻腔黏膜免疫对感染肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)小鼠防御素β-2(Defb2)、巨噬细胞炎症蛋白(MIP)等表达的影响,探讨rIL-17A抗肺炎链球菌感染的机制.方法 SPF级BALB/c小鼠随机分为3组:肺炎组、干预组、对照组,以鼻腔接种的方法建立肺炎模型,采用鼻黏膜免疫的方法进行rIL-17A干预.以real-time荧光定量PCR法检测肺组织Defb2、MIP-1α、MIP-2β mRNA的表达,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)、脾细胞以及纵膈淋巴结细胞培养上清中MIP-1α、MIP-2β、IFN-γ、IL-4的浓度,并对BALF进行白细胞分类计数和Sp菌落计数,对肺组织进行病理分析.结果 rIL-17A干预组BALF中Sp菌落数较肺炎组明显降低(2.18±0.94 vs 4.37+0.57,P＜0.01),中性粒细胞及巨噬细胞数量显著高于肺炎组(P＜0.01);干预组肺组织Defb2、MIP-1α mRNA表达上调,其中Defb2 mRNA表达量为对照组的53.93倍,与肺炎组比较差异有统计学意义(53.93±4.80 vs 14.49±5.84,P＜0.01);rILL-17A干预组与肺炎组比较,淋巴结细胞培养上清中MIP-1α浓度增高明显(431.80±31.57 vs 291.10±5.62,P＜0.01);MIP-2β浓度在脾细胞和淋巴结细胞培养上清中较肺炎组显著增高(246.20±11.50 vs 183.70±10.64,508.50+20.26 vs 290.90+15.20,P＜0.01),而肺泡灌洗液中浓度变化不显著(P＞0.05);IFN-γ浓度在BALF和细胞培养上清中均较肺炎组显著升高;ILM除淋巴结细胞培养上清中外,BALF和脾细胞培养上清中均较肺炎组显著升高(92.42±3.82 vs 80.68±4.83,106.80±8.07 vs 73.57+7.43,P＜0.01);干预组与肺炎组小鼠支气管及血管周围炎症细胞浸润无显著差异,但干预组组织损伤较轻.结论rIL-17A可通过促进Ddb2以及MIP、IFN-y、IL-4等炎症因子的表达,增加炎症部位白细胞募集,提高Sp清除率来增强肺炎小鼠的抗感染能力.