13-甲基十四烷酸诱导膀胱癌细胞株T24 凋亡的机制研究

目的： 研究13-甲基十四烷酸诱导膀胱癌T24细胞凋亡的作用,探讨其可能的机制。方法：将不同浓度的13-甲基十四烷酸作用于膀胱癌T24细胞,用MTT法检测细胞增殖, 流式细胞仪（FCM）检测细胞周期,TUNEL法检测细胞凋亡指数,蛋白免疫印迹法分析参与凋亡的蛋白。结果：药物处理2 h后p38、JNK磷酸化增强,AKT磷酸化减弱,8 h后线粒体中细胞色素C释放,FADD及磷酸化FADD没有明显变化,caspase酶底物 PARP、lamin B、RB在12 h出现明显的裂解片段,且药物诱导T24细胞凋亡的过程有时间浓度依赖效应。结论：在13-MTD诱导T24细胞凋亡的过程中p38MAPK和JNK/SAPK信号通路被激活,PI3K/AKT信号通路被抑制,进而激活线粒体凋亡途径,使线粒体内的细胞色素C释放到胞浆,激活caspase酶,裂解相应的凋亡底物lamin B、Rb、PARP,促进T24细胞凋亡。     

靶向TRIM29基因的siRNA通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的:探讨沉默TRIM29基因表达对鼻咽癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:将人鼻咽癌5-8F细胞分为空白组、阴性对照(NC)组(转染阴性对照siRNA)和si-TRIM29组(转染TRIM29的特异性siRNA),通过CCK-8法检测si-TRIM29转染5-8F细胞0～96 h的细胞活力。通过流式细胞术及Western blot分别检测si-TRIM29转染5-8F细胞48 h的细胞凋亡率及TRIM29、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bcl-2、Bax、t-AKT和p-AKT的蛋白水平。10μmol/L的PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002及si-TRIM29单独或联用处理细胞,细胞分为空白组、LY294002组和LY294002+si-TRIM29组,流式细胞术检测3组细胞凋亡率。结果:转染TRIM29 siRNA的5-8F细胞TRIM29蛋白表达明显低于空白组(P0.05)。和空白组比较,si-TRIM29组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白的水平明显升高,Bcl-2和p-AKT蛋白的水平明显降低(P0.05)。LY294002组的细胞凋亡率高于空白组,而LY294002+si-TRIM29组的细胞凋亡率高于LY294002组(P0.05)。结论:沉默TRIM29基因表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导鼻咽癌细胞凋亡。     

PI3K和MAPK信号通路对A549细胞FOXO1蛋白表达及其亚细胞定位的调节

目的探讨非小细胞肺癌中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/AKT和丝裂原活化蛋白激酶MAPK/ERK信号通路对Forkhead转录因子(Fox蛋白家族)FOXO1活性的影响及分子机制。方法体外培养人非小细胞肺癌系A549,分别选用PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002和MAPK/ERK信号通路特异性抑制剂UO126及两种抑制剂联合处理细胞之后,MTT比色法检测其对细胞增殖的影响;Western blot检测蛋白FOXO1、p-FOXO1及信号下游蛋白Bim表达的变化;免疫荧光法检测FOXO1蛋白在A549细胞中亚细胞的定位的变化。结果与对照组相比,LY294002和UO126都能明显地抑制A549细胞的增殖,且具有时间依赖性。Western blot结果显示,FOXO1的蛋白水平未见显著性变化,而FOXO1的磷酸化水平明显下降,Bim的表达相应增加。免疫荧光结果显示,FOXO1在A549细胞中的核转位增多。LY294002和UO126联合处理A549细胞时,较药物单独作用效果明显增加。结论 PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路能调节FOXO1磷酸化水平,且具有协同作用,抑制其转录活性。FOXO1通过激活Bim蛋白,促进细胞凋亡,抑制细胞的增殖。     

姜黄素下调PI3K/AKT/mTOR通路抑制人肝癌细胞系增殖

目的观察姜黄素对体外培养人肝癌细胞系HL-7702增殖的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养HL-7702细胞,不同浓度的姜黄素(0、10、20、40和80μmol/L)处理48 h。PI3K/AKT抑制剂LY294002联合姜黄素处理细胞。分别用MTT法检测细胞增殖,用Western blot法检测细胞内PI3K、AKT、m TOR、Bax、Bcl-2及活化的caspase-3的蛋白含量。结果姜黄素可以浓度依赖性的抑制HL-7702细胞增殖,增加细胞中PI3K、AKT和m TOR的磷酸化水平(P0.05)。姜黄素可诱导HL-7702细胞凋亡,增加Bax和活化的caspase-3的含量(P0.05),减少Bcl-2的含量(P0.05)。LY294002与姜黄素联用后,姜黄素对细胞增殖及凋亡无明显作用。结论姜黄素可抑制人肝癌细胞系HL-7702增殖,诱导细胞凋亡,作用机制可能与其下调PIK/AKT/m TOR信号通路的活性有关。     

白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的:探索白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其调控机制。方法:实时定量PCR (qRT-PCR)检测血清中单核细胞趋化蛋白鄄1 (MCP1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和白细胞介素18(IL-18)的mRNA 水平;HE 染 色和Masson 染色评价心肌纤维化水平;流式细胞术分析细胞凋亡;蛋白印迹检测Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、B 淋巴 瘤2 蛋白(Bcl-2)、Bcl-2 相关蛋白X(Bax)、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT 蛋白表达。结果:白藜芦醇可降低STZ 诱导的糖尿病大 鼠血清MCP-1、MIF 和IL-18 的mRNA 水平并改善心肌纤维化加剧。STZ 诱导糖尿病组血管平滑肌细胞凋亡率明显高于对照 组(P<0.05)。与STZ 诱导糖尿病组相比,STZ+白藜芦醇组血管平滑肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。而且,白藜芦醇可抑 制STZ 诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9 和Bax 蛋白表达,提高Bcl-2 表达(P<0.05)。 与对照组相比,STZ 诱导糖尿病组血管平滑肌细胞中p-PI3K/ PI3K 和p-AKT/ AKT 比率明显降低(P<0.05)。STZ+白藜芦醇组 血管平滑肌细胞p-PI3K/ PI3K 和p-AKT/ AKT 比率明显高于STZ 诱导糖尿病组(P<0.05)。结论:白藜芦醇可通过激活PI3K/ AKT 信号通路抑制STZ 诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡。     

人参皂苷Rg1介导PI3K/AKT/FOXO3通路缓解高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激反应

目的 探究人参皂苷Rg1通过PI3K/AKT/FOXO3通路对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激反应的调控作用。方法 首先将细胞分为对照组、HG组、低浓度Rg1组(HG+20 ng/ml Rg1)、中浓度Rg1组(HG+50 ng/ml Rg1)、高浓度Rg1组(HG+100 ng/ml Rg1),通过MTT法、Hoechst 33258染色和Western blot分别检测Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞存活率、凋亡率和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9表达的调控作用。其次,通过试剂盒检测Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞中氧化应激标志物ROS、MDA、SOD、Gpx浓度的影响。并通过Western blot检测在Rg1作用下,PI3K/AKT/FOXO3通路中各蛋白的磷酸化及表达情况。最后,验证在AKT被抑制的情况下Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞的调控作用。结果 与对照组相比,HG组中细胞存活率、Bcl-2表达量、SOD、Gpx含量显著下降(P0.05),而凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9的表达量、ROS、MDA含量显著上升(P0.05);与HG组相比,低、中、高浓度Rg1组中细胞存活率、Bcl-2表达量、SOD、Gpx含量显著上升(P0.05),而凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9的表达量、ROS、MDA含量显著下降(P0.05)。其次,与HG组相比,低、中、高浓度Rg1组细胞中抑制剂之后,与HG组相比,HG+MK-2206组中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值显著下降(P0.05),而FOXO3蛋白表达量显著升高(P0.05)。最后,与HG+MK-2206组相比,HG+Rg1+MK-2206组中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值显著升高(P0.05),而FOXO3蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论 人参皂苷Rg1可以通过活化PI3K/AKT/FOXO3通路缓解高糖对HBZY-1细胞的诱导作用,减少HBZY-1细胞的凋亡,并缓解氧化应激反应。     

氯喹对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响

目的 探讨氯喹(CQ)对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法 将HeLa细胞分为对照组(不加药物)和实验组(氯喹-1组至氯喹-5组,分别用25、50、75、100、150μmol/L CQ处理)。细胞均培养24和48 h; CCK-8法和集落形成实验检测细胞增殖;活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS产生;流式细胞测量术检测细胞凋亡率。蛋白免疫印迹检测自噬蛋白p62、LC3和Beclin1,凋亡蛋白Bax、Bcl-2和PARP以及PI3K/AKT/MDM2通路蛋白的表达水平。结果 CQ呈时间和浓度依赖性抑制细胞增殖(P<0.05);CQ显著抑制细胞自噬活性,诱导胞内ROS的产生,诱导细胞凋亡(P<0.05)。与对照组相比,CQ可明显抑制PI3K/AKT/MDM2信号通路的激活(P<0.05)。结论 氯喹可能通过PI3K/AKT/MDM2通路抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

低氧预处理通过激活AKT通路提高老年hBM-MSCs对氧化应激损伤的耐受能力

 目的:探讨低氧预处理对老年人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)的保护作用,为提高老年自体干细胞移植治疗效果提供实验支持。方法:老年hBM-MSCs于低氧培养箱中培养24 h进行低氧预处理,实验分为年轻hBM-MSCs组(young组),老年hBM-MSCs组(old组)及低氧预处理老年hBM-MSCs组(old+hypoxia组)。300 μmol/L H₂O₂作用30 min建立细胞氧化应激模型,50 μmol/L LY294002作用2 h阻断PI3K/AKT信号通路,BrdU掺入实验检测细胞增殖能力; CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平和AKT磷酸化水平。结果:BrdU掺入实验显示低氧预处理的老年hBM-MSCs细胞阳性率为39.85%±3.45%,与old组相比增殖能力显著提高(P<0.05)。300 μmol/L H₂O₂作用30 min诱导细胞氧化应激后,old+hypoxia组与old组比较,细胞活力显著提高(P<0.05),凋亡相关蛋白Bax表达量显著降低(P<0.05),抑制凋亡的Bcl-2蛋白表达量显著增高(P<0.05),且AKT磷酸化水平显著增高,差异有统计学显著性(P<0.05);应用LY294002抑制PI3K/AKT信号通路后,细胞活力下降(P<0.05)。结论:低氧预处理可以通过激活AKT信号通路提高老年人骨髓间充质干细胞活力及增殖能力。     

阿司匹林对同源不同辐射抗拒能力鼻咽癌细胞的凋亡诱导作用

目的:探讨阿司匹林诱导同源不同辐射抗拒能力鼻咽癌细胞株CNE2R/CNE2凋亡的作用及其机制。方法:采用MTT法、流式细胞术和Western blot法检测并比较阿司匹林对CNE2R和CNE2细胞活力、细胞凋亡及凋亡相关蛋白procaspase-3、cleaved caspase-3、procaspase-9、procaspase-12、PARP、cleaved PARP、Bcl-2和Bax,以及PI3K p110α、Akt和p27蛋白水平的影响。结果:阿司匹林抑制同源不同辐射抗拒能力细胞CNE2R/CNE2的活力(阿司匹林对CNE2细胞作用24、48和72 h的IC50分别为6.18、3.92和3.06 mmol/L,对CNE2R细胞作用24、48和72 h的IC50分别为7.05、3.90和2.20 mmol/L,两者差异无统计学显著性)。阿司匹林作用48 h后,CNE2R细胞凋亡率升高,明显高于CNE2细胞(P0.05)。阿司匹林作用48 h后,CNE2和CNE2R细胞中procaspase-3、procaspase-9、procaspase-12和PARP的蛋白水平降低,cleaved caspase-3和cleaved PARP的蛋白水平升高(P0.05);PI3K p110α和Akt蛋白水平下降,Bcl-2水平降低,Bax水平升高,Bcl-2/Bax比值降低,p27水平升高(P0.05)。结论:阿司匹林对同源不同辐射抗拒能力鼻咽癌细胞株CNE2R和CNE2具有同等细胞活力抑制作用;并且可以诱导细胞凋亡,且对抗辐射细胞株CNE2R的凋亡诱导作用更明显。阿司匹林的抗癌作用可能与其影响PI3K/Akt信号通路及其下游蛋白的水平有关。     

吲哚美辛通过Akt/GSK3β/NAG-1信号通路诱导胃癌细胞的凋亡

目的: 探讨非选择性环氧合酶抑制剂吲哚美辛诱导胃癌细胞凋亡作用与Akt/GSK3β/NAG-1信号通路的关系。方法: MTT法测定胃癌细胞的活力;Hoechst 33258 染色检测细胞形态学改变,流式细胞术检测DNA 含量的变化,Western blotting检测蛋白表达的变化。结果: 吲哚美辛通过caspase通路诱导胃癌细胞MGC-803的凋亡,明显降低Akt和GSK3β的磷酸化水平,同时上调NAG-1的表达。单独抑制PI3K或Akt的活性亦可上调NAG-1的表达,而GSK3β抑制剂预处理后则取消吲哚美辛上调NAG-1表达的作用。结论: 吲哚美辛可通过Akt/GSK3β/NAG-1信号通路诱导胃癌细胞MGC-803的凋亡。     

牛蒡子苷元诱导人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡及其作用机制

 目的: 探讨牛蒡子苷元(arctigenin,ARG)对人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的影响及其分子作用机制。方法: 经不同浓度的ARG处理CNE-1细胞后,采用CCK-8法检测ARG对CNE-1细胞活力的影响;caspase-3及caspase-9活性检测法检测CNE-1细胞caspase-3及caspase-9活性的变化;流式细胞术分析CNE-1细胞凋亡率的变化; real-time PCR法检测PI3K/AKT/XIAP信号通路相关分子mRNA表达水平的变化;Western blot法检测PI3K/AKT/XIAP通路蛋白水平的变化。结果: 随浓度和时间的增加,ARG可抑制鼻咽癌CNE-1细胞的活力(P<0.01);caspase-3及caspase-9活性的增加及细胞凋亡率的升高表明ARG可显著促进CNE-1细胞的凋亡;与对照组相比,PI3K/AKT/XIAP信号通路相关分子对mRNA表达均明显下调(P<0.01);ARG可明显下调PI3K/AKT/XIAP各蛋白水平(P<0.05)。结论: ARG可诱导鼻咽癌细胞凋亡,降低PI3K/AKT/XIAP相关分子水平可能是其促进细胞凋亡的机制。     

Ghrelin 通过AKT/ ERK 信号通路对LPS 诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的:研究Ghrelin 对内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)所致的肺泡域型上皮细胞(A549)凋亡的影响及其机制。方法:CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测LPS 刺激对A549 的细胞毒性;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞内一氧化氮(NO)的产生;Western blot 检测诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、AKT、ERK、p-AKT、p鄄ERK 信号通路蛋白以及cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2 凋亡相关蛋白的表达。结果:CCK-8 检测结果显示LPS 可显著抑制A549 细胞的增殖,降低细胞活力;TUNEL 检测发现Ghrelin 可显著抑制LPS 导致的A549 细胞的凋亡(P<0.05);LPS 可以促进iNOS 的表达,增加细胞内NO 的产生,并同时抑制AKT、ERK 通路的活性,上调下游促凋亡蛋白Bax 以及终末凋亡蛋白cleaved caspase-3 的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2 的表达,而应用Ghrelin 预处理后可以逆转LPS 对AKT、ERK 通路活性的抑制,继而下调Bax 以及cleaved caspase-3 的表达,上调Bcl-2 的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05),但Ghrelin 对细胞内NO 的产生无明显影响。结论:Ghrelin 可以通过上调AKT 及ERK 通路的活性抑制LPS 诱导的肺泡上皮细胞凋亡,但不能降低iNOS 诱导产生NO 的水平。     

香菇多糖在体外对白血病HL-60细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响

目的:研究香菇多糖在体外对人白血病HL-60细胞凋亡的调节作用及其对PI3K/AKT信号通路的影响。方法:分别用浓度为0 mg/L、15 mg/L、30 mg/L和45 mg/L的香菇多糖作用于体外培养至对数期的HL-60细胞,24 h、48 h和72 h后用MTT法检测香菇多糖对HL-60细胞活力的抑制作用。用流式细胞术检测香菇多糖对HL-60细胞凋亡的影响,Western blot检测cleaved PARP、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8、cytochrome C、PI3K、AKT和p-AKT的蛋白水平。用浓度为5 mg/L的PI3K抑制剂LY294002处理HL-60细胞72 h后,检测细胞的凋亡情况。结果:香菇多糖(15 mg/L、30 mg/L和45 mg/L)作用24 h、48 h和72 h后,HL-60细胞的活力受到抑制(P0.05),且具有浓度依赖性和时间依赖性。香菇多糖(15 mg/L、30 mg/L和45 mg/L)作用72 h后,以浓度依赖性的方式促进HL-60细胞的凋亡(P0.05)。30 mg/L香菇多糖诱导HL-60细胞凋亡过程中,cleaved PARP、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3及胞浆cytochrome C的蛋白水平随着处理时间的延长而明显升高,而caspase-8没有变化(P0.05);PI3K、AKT和p-AKT的蛋白水平随着香菇多糖浓度的增加而明显降低(P0.05)。PI3K通路抑制剂LY294002处理HL-60细胞与香菇多糖处理产生类似的凋亡效果(P0.05)。结论:香菇多糖可通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导白血病HL-60细胞凋亡。     

沉默FOXO1抑制H2O2诱导的大鼠肺泡2型上皮细胞凋亡

目的探讨沉默叉头蛋白O1(FOXO1)基因表达对H_2O_2诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞系(RLE-6TN)活力、凋亡的影响及机制。方法随机将RLE-6TN细胞分为对照组、H_2O_2组、si-FOXO1组和NC组。CCK8法及膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)细胞凋亡试剂盒分别检测细胞活力和凋亡率;Western blot检测FOXO1、p53、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)蛋白表达。结果 H_2O_2可明显上调RLE-6TN细胞FOXO1、p53、Bax和p-p38蛋白表达,抑制细胞活力,诱导细胞凋亡(P0.05),而转染FOXO1 siRNA后可明显降低H_2O_2对FOXO1、p53、Bax和p-p38蛋白表达上调、细胞活力抑制及凋亡诱导作用(P0.05)。结论沉默FOXO1基因表达可抑制H_2O_2诱导的RLE-6TN凋亡,其机制可能与下调p38MAPK信号通路有关。     

抑制miR-421表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性

目的:研究抑制miR-421表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性的分子机制。方法:运用脂质体2000将miR-421 inhibitor转染4株宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A和CaSki,以转染阴性核苷酸为对照,real-time PCR检测子宫内膜上皮细胞ESC细胞和4株宫颈癌细胞中miR-421的表达水平;转染的细胞经不同剂量电离辐射(0、2、4、6和8 Gy)处理48 h后运用MTT法、ELISA和Annexin V-FITC/PI染色法联合流式细胞术分别测定细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率和细胞凋亡率;运用Western blot检测细胞中cleaved caspase-9、caspase-9、cleaved PARP、PARP、Bcl-2和Bax蛋白的水平。结果:miR421在ESC细胞中低表达,而在4株宫颈癌细胞中高表达,转染miR-421 inhibitor后miR-421显著低于阴性对照组(P0.05)。相同条件下,辐照后低表达miR-421的宫颈癌细胞活力和LDH漏出率显著低于阴性对照组,72 h的细胞凋亡率明显增加(P0.05)。Western blot结果显示,电离辐射后与阴性对照组比较,低表达miR-421的宫颈癌细胞中cleaved caspase-9、cleaved PARP和Bcl-2的蛋白水平明显增高,而Bax蛋白水平显著降低(P0.05)。结论:miR-421在正常子宫内膜上皮ESC细胞中低表达,而在宫颈癌细胞系中高表达;下调miR-421表达能抑制宫颈癌细胞的活力,显著增强宫颈癌细胞的辐射敏感性,其机制至少部分通过激活caspase-9细胞凋亡通路进而促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达和抑制促凋亡蛋白Bax表达而实现。     

天麻素保护过氧化氢诱导的神经元氧化损伤的研究

目的:探究天麻素对过氧化氢引起的神经细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。方法:培养SH-SY5Y细胞,并分为3组:对照组、氧化损伤组和天麻素处理组。用流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞活性氧(ROS)水平,用ELISA检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)表达水平,用蛋白质免疫印迹实验检测细胞内PI3K、AKT磷酸化水平。结果:过氧化氢处理引起细胞凋亡率升高,胞内ROS平上升,SOD表达下调以及PI3K、AKT磷酸化水平下降;天麻素处理后可以显著抑制过氧化氢引起的细胞凋亡、ROS水平上升及SOD表达下调,并缓解氧化损伤对PI3K/AKT磷酸化的抑制作用。结论:天麻素通过激活PI3K/AKT信号通路保护过氧化氢诱导的神经细胞氧化损伤。     

FOXO3a通过PI3K/AKT信号通路介导炎症因子TNF-α抑制滋养细胞的增殖、侵袭及促进细胞发生凋亡

目的探讨炎症因子TNF-α对滋养细胞中FOXO3a表达的影响及FOXO3a在TNF-α对滋养细胞的生物学功能影响中的作用及相关机制的研究。方法 RT-PCR及Western blot实验检测TNF-α是否影响滋养细胞HTR-8/SVneo中FOXO3a的mRNA及蛋白表达;应用siRNA抑制滋养细胞FOXO3a表达,采用CCK-8、Transwell和流式细胞术分别检测滋养细胞的增殖、侵袭和凋亡方面的影响,最后利用Western blot实验检测TNF-α对转染si-FOXO3a的滋养细胞中PI3K/AKT信号通路的影响。结果 TNF-α能够显著促进滋养细胞中FOXO3a的表达;细胞生物学行为实验结果表明TNF-α能够明显抑制滋养细胞的增殖、侵袭能力并促进其发生凋亡,而抑制细胞内FOXO3a的表达可显著削弱上述现象;Western blot实验结果表明TNF-α可明显促进滋养细胞内PI3K/AKT信号通路中p-PI3K、p-AKT蛋白的表达,而抑制细胞内FOXO3a的表达后,TNF-α对PI3K、p-AKT蛋白的促进作用明显被削弱。结论 FOXO3a可以通过PI3K/AKT信号通路介导TNF-α对滋养细胞增殖、侵袭能力抑制并促进其发生凋亡。     

高三尖杉酯碱阻断mTOR信号通路抑制HT29人结直肠肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡

目的探讨高三尖杉酯碱(HHT)对HT29人结直肠肿瘤细胞增殖和凋亡调控的分子机制。方法用(0、0.0078125、0.015625、0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8)μg/m L HHT分别处理HT29细胞24、48、72 h。CCK-8法检测HT29细胞的增殖,集落形成实验检测细胞的集落形成能力;Hoechst33258染色观察染色质凝集情况,流式细胞术检测细胞凋亡;实时定量PCR检测BAX、Bcl2、胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丙酮酸脱氢酶激酶(PDK1)、蛋白激酶B(AKT)、雷帕霉素靶蛋白调节相关蛋白(raptor)、雷帕霉素不敏感的伴侣蛋白(rictor)的mRNA水平;Western blot法检测BAX、Bcl2、胱天蛋白酶3前体(pro-caspase-3)、裂解型caspase-3(c-caspase-3)、pro-caspase-9、裂解型caspase-9(c-caspase-9)、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、裂解型PARP(c-PARP)、mTOR、raptor、rictor、PI3K、PDK1、AKT、p-AKT的蛋白水平。结果与对照组相比,HHT能抑制HT29细胞增殖,诱导细胞核破裂,染色质凝聚,凋亡小体形成;同时,HHT处理能够提高HT29细胞中BAX/Bcl2比值、caspase-3、caspase-9、raptor的mRNA水平,降低PI3K、AKT、rictor的mRNA水平;并上调HT29细胞中c-caspase-3、c-caspase-9、c-PARP、BAX、raptor蛋白水平,下调pro-caspase-3、pro-caspase-9、PARP、PI3K、PDK1、AKT、mTOR、rictor蛋白水平。结论 HHT能够通过阻断mTOR信号通路,进而抑制HT29人结直肠肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡。     

人白细胞介素1β通过线粒体途径激活caspase-3诱导A375-S2细胞凋亡

目的研究人白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)体外诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的机制。方法通过Hoechst33258荧光染色,观察A375-S2细胞在IL-1β作用下的形态学变化。使用琼脂糖凝胶电泳法检测IL-1β对细胞DNA降解的影响。应用caspase活力测定法检测IL-1β对caspase-3活力的影响。利用Westernblot方法检测IL-1β对caspase-3底物的降解以及对细胞内Bcl-2家族和AIF蛋白表达的调节作用。结果IL-1β(1nmol/L)能够诱导A375-S2细胞凋亡,72h时细胞体变小,细胞核呈现固缩、断裂,并出现因凋亡引起的DNA梯状条带。IL-1β诱导细胞凋亡过程中,caspase-3的活力升高,其两种底物PARP和ICAD均发生降解,线粒体中抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表达减少,促凋亡蛋白Bax的表达增加。凋亡诱导因子AIF蛋白的表达也有所增加。结论IL-1β通过激活caspase-3降解其底物,激活AIF,并上调线粒体内Bax/Bcl-2和Bax/Bcl-xL的表达比例诱导A375-S2细胞凋亡。     

KLF6基因对THP-1细胞诱导分化的巨噬细胞凋亡的影响

目的:探讨过表达Kruppel样因子6(KLF6)基因对THP-1细胞诱导分化的巨噬细胞活力、凋亡、活性氧簇(ROS)水平及AKT信号通路的影响。方法:使用佛波酯(PMA)将人单核细胞株THP-1诱导分化为巨噬细胞,将巨噬细胞随机分为pcDNA3.1组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、ox-LDL+pcDNA3.1组和ox-LDL+pcDNA3.1-KLF6组,其中pcDNA3.1转染参照Lipofectamine~(TM) 2000试剂盒说明。细胞处理24 h,通过MTT实验、Annexin V-FITC/PI双标细胞凋亡试剂盒和H_2DCF-DA探针分别检测细胞活力、凋亡率和ROS水平的变化;Western blot检测Bcl-2、Bax和p-AKT的蛋白水平。结果:pcDNA3.1-KLF6转染巨噬细胞后,KLF6表达明显升高(P0.05)。ox-LDL可明显抑制巨噬细胞的活力,诱导细胞凋亡,诱导细胞ROS的产生,上调Bax表达,下调Bcl-2和p-AKT的蛋白水平;而过表达KLF6可明显减弱ox-LDL对细胞活力、凋亡、ROS水平及Bcl-2、Bax和p-AKT蛋白水平的影响(P0.05)。结论:KLF6基因可明显降低ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡,机制可能与降低细胞ROS水平及激活AKT信号通路有关。