厄贝沙坦通过诱导自噬减轻db/db小鼠肝脏脂肪变

目的:探讨厄贝沙坦对db/db小鼠脂肪肝的影响及自噬在这一过程中的作用。方法:雄性db/db小鼠24只随机分为模型组和厄贝沙坦组,另选取12只db/m小鼠作为正常对照组。各组分别干预16周后,观察体重、肝指数、血脂、肝功能以及肝脏病理的变化,检测肝组织PI3K/Akt/m TOR信号通路及自噬相关蛋白Atg-7、beclin-1和LC3B的表达情况,并利用电镜观察肝脏自噬小体的变化。结果:与模型组相比,应用厄贝沙坦干预后,db/db小鼠的体重、肝指数、血脂、丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶与模型组相比显著降低(P0.05),肝脏病理改变明显减轻;肝组织p-PI3K、p-Akt和p-m TOR的表达明显减少,Atg-7、beclin-1和LC3B-Ⅱ的表达明显增加,肝脏自噬小体显著增多(P0.05)。结论:厄贝沙坦可能通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路,上调自噬相关蛋白Atg-7、beclin-1和LC3B-Ⅱ表达,进而促进肝细胞自噬,减轻db/db小鼠肝脏脂肪变。     

生长激素释放激素受体激动剂MR409对db/db小鼠糖尿病肾病作用的研究

目的:探讨人工合成的生长激素释放激素受体激动剂MR409对db/db小鼠糖尿病肾病和肾脏纤维化的影响。方法:将db/db小鼠随机分为模型组和MR409治疗组,野生型小鼠为对照组,每组10只。MR409治疗组小鼠隔天皮下给予MR409(每只15μg),对照组和模型组小鼠隔天皮下给予等量溶剂对照,干预8周。取第8周末小鼠血清和尿液进行生化指标检测,HE、PAS、Masson和天狼星红染色用于评价肾损伤和肾纤维化程度,二氢乙啶(DHE)荧光染色检测评价肾脏中活性氧的含量,Western blot检测肾脏纤维化以及氧化应激相关蛋白的表达。结果:与db/db小鼠相比,MR409治疗可显著降低db/db小鼠尿蛋白/肌酐比、血清中胆固醇和甘油三脂含量以及肾间质纤维化和肾小球硬化面积(P0.05),MR409还可显著降低肾脏中活性氧水平及NADPH氧化酶亚基p22~(phox)和gp91~(phox)、纤连蛋白(FN)和转化生长因子β1(TGFβ1)蛋白的表达量(P0.05)。结论:生长激素释放激素受体激动剂MR409能有效减轻db/db小鼠糖尿病肾损伤,其机制可能与降低氧化应激和肾纤维化有关。     

胰岛素处理促进糖尿病大鼠肾皮质骨形成蛋白和激活蛋白膜结合抑制物(BAMBI)表达并抑制炎症反应

目的研究胰岛素控制糖尿病(DM)大鼠血糖后, DM大鼠肾皮质骨形成蛋白和激活蛋白膜结合抑制物(BAMBI)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、凋亡相关的斑点样蛋白2(ASC-2)、胱天蛋白酶1(caspase-1)及炎性介质和相关纤维化指标的表达情况。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、 DM组及胰岛素处理组。链脲佐菌素(STZ)复制DM大鼠模型,每组8只, DM成模4周后,胰岛素处理组予以皮下注射胰岛素[8 U/(kg·次)],每天3次,连续注射6周后处死大鼠。免疫组织化学染色检测肾皮质BAMBI、 NLRP3、上皮钙黏素(E-cadherin)的表达, Western blot法检测肾皮质BAMBI、 NLRP3、 ASC-2、 caspase-1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(Col4)蛋白的表达,实时定量PCR检测肾皮质中BAMBI、 NLRP3的mRNA水平, ELISA检测肾皮质中白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-18的水平。采用Spearman秩相关检验对BAMBI和NLRP3蛋白表达进行相关性分析。结果与正常对照组相比, DM组肾皮质NLRP3的mRNA和蛋白水平及ASC-2、 caspase-1的蛋白水平升高,α-SMA、 FN、 Col4蛋白表达也升高,而BAMBI的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白表达降低,胰岛素处理组NLRP3的蛋白和mRNA水平及ASC-2、 caspase-1的蛋白水平低于DM组,α-SMA、 FN、 Col4蛋白表达也低于DM组,而BAMBI的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白表达高于DM组;胰岛素处理组IL-1β、 IL-18的水平较DM组降低,相关性分析显示在DM组以及胰岛素处理组中BAMBI和NLRP3的表达呈负相关。结论胰岛素处理可恢复DM大鼠肾皮质中BAMBI的表达,进而抑制NLRP3炎性体激活,减轻DM大鼠肾脏的炎症反应,阻止或延缓糖尿病肾病的病程进展。     

小热休克蛋白家族和自噬相关蛋白 在自发性2型糖尿病db/db小鼠海马组织中的表达

目的观察自发性2型糖尿病db/db小鼠海马组织中小热休克蛋白家族(sHSPs)及自噬相关蛋白表达情况。方法正常db/m小鼠作为对照组,糖尿病db/db小鼠作为模型组,各10只。观察其体质量,空腹血糖(FBG);real-time PCR检测海马组织中小热休克蛋白家族、自噬相关基因mRNA的表达;Western blot检测HSPB8、BAG3、LC3、P62蛋白表达。结果 1)db/db小鼠体质量、空腹血糖均明显高于db/m小鼠(P0.01)。2)小热休克蛋白1-10(heat shock protein family B [small] member 1-10,HSPB 1-10)基因mRNA在小鼠海马组织中均有表达;其中HSPB1、HSPB3、HSPB5、HSPB6和HSPB8 db/db组明显低于db/m组(P0.05);HSPB2、HSPB9和HSPB10 db/db组高于db/m组(P0.05);而在db/db小鼠中LC3表达高于db/m组(P0.01),而P62反之(P0.01)。3)较db/m组,db/db组HSPB8、BAG3、LC3-Ⅱ蛋白表达均增高(P0.01),相反P62蛋白表达减低(P0.05)。结论 1)10种sHSPs均在小鼠海马组织中表达,但表达特点有所不同。2)8周龄糖尿病小鼠海马组织中存在HSPB8蛋白表达增强,且自噬激活。     

甜菜碱对老龄db/db小鼠脂肪性肝损害的影响

 目的：通过高脂饮食诱发db/db小鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）模型,探索甜菜碱对遗传性小鼠脂肪肝脂质代谢的影响。方法：50只7月龄db/db鼠随机分为低、中、高剂量组、生理盐水对照组和阳性药物组。所有小鼠均饲以高脂饲料, 以诱发NAFLD 模型。 小鼠分别以200 mg/kg(低剂量组)、400 mg/kg(中剂量组)和800 mg/kg(高剂量组)甜菜碱溶液灌胃,连续6周。测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白(LDL)水平,并行葡萄糖耐量测定和肝组织病理学观察。结果：甜菜碱可显著降低血清ALT、TC和LDL的水平(P<0.05或P<0.01)。组织学结果表明甜菜碱可显著减少小鼠肝细胞的脂肪样变性。结论: 甜菜碱可以显著改善老龄db/db小鼠的脂类代谢紊乱和肝功能,明显降低脂肪在肝细胞中的积蓄。     

姜黄素对糖尿病肾病NLRP3炎性体活化的影响及机制研究

目的观察姜黄素对糖尿病肾病(db/db)小鼠肾组织及人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中NLRP3炎性体活化的影响,并探讨其作用机制。方法 12只db/db小鼠,分为模型组和姜黄素治疗组,6只db/m小鼠为对照组。HK-2细胞分为对照组,高糖模型组,姜黄素处理组。ELISA法检测db/db小鼠尿蛋白,计算尿蛋白/尿肌酐比值;PAS染色行肾小球硬化指数评分;Western blot方法检测NLRP3、caspase-1和IL-1β在db/db小鼠肾组织和HK-2细胞中的表达;流式细胞仪检测HK-2细胞中线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平。结果 db/db小鼠血糖明显升高,伴有大量蛋白尿,肾小球硬化;db/db小鼠肾组织和高糖处理的HK-2细胞中NLRP3、caspase-1和IL-1β的表达增加;姜黄素治疗显著降低了db/db小鼠尿蛋白,减轻了肾小球硬化,抑制了db/db小鼠肾组织和高糖处理的HK-2细胞中NLRP3炎性体的活化;同时发现,高糖处理的HK-2细胞中线粒体ROS的水平明显增加,经过姜黄素处理后,ROS的水平明显减少。结论姜黄素可以抑制db/db小鼠肾组织和高糖处理的HK-2细胞中NLRP3炎性体的活化,其作用机制可能与抑制线粒体ROS的产生有关。     

NLRP3炎症小体及其下游分子在幽门螺杆菌感染小鼠的表达

目的 研究NLRP3炎症小体信号通路相关分子在幽门螺杆菌(H.pylori)感染C57BL/6小鼠胃组织和血清中的表达情况,初步探讨NLRP3炎症小体信号通路在H.pylori致病中的作用.方法 将C57BL/6小鼠分为H.pylori感染组和PBS对照组,于感染后不同时间点处死小鼠,RT-PCR检测小鼠胃组织中NLRP3炎症小体和下游信号通路分子mRNA表达,Western blot法检测小鼠胃组织中caspase-1蛋白表达,ELISA测定小鼠血清中IL-1β、IL-18和IL-33含量.结果 与对照组相比,H.pylori感染组小鼠胃黏膜均呈慢性炎症改变,且随时间延长,炎症程度逐渐加重.NLRP3炎症小体信号通路相关分子mRNA及caspase-1蛋白表达水平显著升高,血清中IL-1β、IL-18、IL-33的含量均显著增高.结论 H.pyori感染可以激活NLRP3炎症小体信号通路.     

大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应

目的探讨大黄素对哮喘小鼠炎症反应及对肺组织中NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3(NODlike receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)和胱冬肽-1(caspase-1)表达的影响。方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组和大黄素组。以卵蛋白为致敏原制备哮喘小鼠模型。收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数和分类计数,ELISA方法检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)与白介素-4(IL-4)水平。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变。Western-blot检测各组小鼠肺组织中NLRP3、ASC和caspase-1的表达。结果大黄素能减少BALF中炎性细胞总数和嗜酸性粒细胞,降低BALF中TNF-α、IL-1β与IL-4含量,减轻肺组织炎性反应。Western-blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著高于对照组(P0.01);与哮喘组比较,大黄素组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著降低(P0.01)。结论大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应。     

熊果酸对肝纤维化大鼠NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化的影响

目的观察熊果酸(UA)对肝纤维化模型大鼠肝内胶原沉积的改善作用及其对NADPH氧化酶2(NOX2)/活性氧簇(ROS)/NLRP3炎性小体活化的影响。方法将大鼠随机分为对照组、CCl4模型组及UA治疗组。用CCl4诱导构建SD大鼠肝纤维化模型,一半用作UA治疗组。用试剂盒检测血清ALT含量;HE染色观察肝脏病理;天狼星红染色观察肝内胶原沉积;RT-q PCR法检测Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA表达量;Western blot及免疫组化检测肝脏中NOX2、NLRP3、casepase-1 p45、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达;DCFH-DA荧光探针法检测肝脏组织内ROS水平。结果与对照组相比,CCl4模型组血清ALT水平升高(P0.05),Ishak's肝纤维化评分明显上升,胶原沉积明显增多(P0.05),Nox2、Nlrp3、Caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显上升(P0.05);NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白的表达均出现明显增加,肝组织内ROS含量增加(P0.05);与CCl4模型组相比,UA治疗组血清ALT含量下降(P0.05),肝脏Ishak's肝纤维化评分及胶原沉积减少(P0.05),Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显下降(P0.05),NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达明显下降,肝脏组织内ROS水平显著改善(P0.05)。结论 UA减轻肝脏炎性反应并减少肝内胶原沉积,其机制可能与其抑制肝纤维化大鼠肝内NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化及IL-1β的释放减少有关。     

异基因骨髓移植小鼠肠道菌群和NLRP3炎症小体改变与急性移植物抗宿主病发生发展的关系

目的:探讨异基因骨髓移植小鼠肠道菌群和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体改变与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系。方法:建立C57BL/6雄性小鼠致BALB/c雌性小鼠异基因骨髓移植模型,诱导aGVHD为aGVHD组,以BALB/c雌性小鼠为对照,ELISA方法检测模型组小鼠血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-4、IL-10和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,免疫组化检测肠闭合蛋白(occludin)的表达,检测16S rDNA以评估肠道菌群改变,HE染色观察aGVHD靶器官(肺、肝、脾和回肠)的病理变化,Western blot分析肠组织NLRP3炎症小体的表达。结果:与正常小鼠相比,aGVHD小鼠血清IL-1β和TNF-α水平明显上升,而IL-4和IL-10水平下降(P0.01);aGVHD小鼠肠紧密连接蛋白occludin表达下降,其肠道菌群也发生改变,表现为疣微菌门(Verrucomicrobia)等微生物物种富集,而红蝽杆菌目(Coriobacteriales)等多个微生物种类下调;aGVHD组靶器官病理损伤明显,NLRP3炎症小体表达显著增加。结论:aGVHD可能通过炎症因子影响小鼠肠道屏障功能,改变肠道菌群,进而激活NLRP3炎症小体,导致恶性循环。     

抗肝纤冲剂抑制免疫型肝纤维化小鼠Ⅳ型胶原蛋白的表达

目的:以猪血清所致的免疫损伤肝纤维化小鼠模型探讨抗肝纤冲剂对肝组织Ⅳ型胶原蛋白表达的影响及其对纤维化小鼠的治疗作用.方法:雌性Balb/c小鼠分为5组:正常对照组、肝纤维化模型组、秋水仙碱组、抗肝纤冲剂低剂量组、抗肝纤冲剂高剂量组.除正常组外,其余各组均采用腹腔注射猪血清的方法制备肝纤维化小鼠模型.造模的同时分别用药物对小鼠进行干预治疗7周.7周末处死小鼠,取肝组织,经固定、切片、Masson特殊胶原染色,光镜观察.其他肝组织用于实时荧光定量PCR检测.结果:胶原特殊染色显示,抗肝纤冲剂治疗组与模型组相比,胶原纤维增生程度减轻;实时荧光定量PCR检测显示,各实验组小鼠的肝组织中col4α2基因的表达量,模型组是正常对照组的9.44±2.81倍,抗纤冲剂低剂量组是正常对照组的2.04±0.27倍;模型组是抗纤冲剂低剂量组的4.63±0.45倍,抗肝纤冲剂低剂量组与肝纤维化模型组之间差异具有统计学意义,肝组织中的Ⅳα2型胶原蛋白在mRNA表达水平降低.结论:抗肝纤冲剂可以抑制免疫损伤肝纤维化小鼠肝组织的胶原蛋白增生,减少Ⅳα2型胶原蛋白的表达,提示抗肝纤冲剂对肝纤维化小鼠具有较明显的治疗作用.     

低温等离子体对胫骨骨折大鼠骨折愈合的作用及机制

目的 探究低温等离子体对胫骨骨折大鼠骨折愈合的作用及可能机制。方法 30只SD大鼠分为假手术组、模型组和低温等离子体照射组，每组10只。HE染色检测大鼠骨折处病理形态改变；ELISA检测大鼠血清ALP水平及骨组织IL-1β和IL-18水平；qRT-PCR和Western blot检测大鼠骨组织成骨相关基因RUNX2、OCN和COL1A1 mRNA和蛋白表达水平；Western blot检测大鼠骨组织NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、cleaved-caspase1和GSDMD表达水平。结果 低温等离子体照射促进胫骨骨折大鼠骨折愈合，增加大鼠血清ALP水平及骨组织成骨相关基因RUNX2、OCN和COL1A1 mRNA和蛋白表达水平，降低大鼠骨组织IL-1β和IL-18水平及NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、cleaved-caspase1和GSDMD表达水平。结论 低温等离子体照射通过抑制NLRP3炎症小体激活促进胫骨骨折大鼠骨折愈合。     

阻断NLRP3介导的细胞焦亡对创伤性脑损伤小鼠的保护作用

目的探讨抑制NLRP3炎症小体、减少细胞焦亡对创伤性脑损伤(TBI)小鼠的保护作用。方法将36只BALB/c小鼠随机均分为假损伤组、TBI模型组、MCC950(CP-456773)治疗组。采用自由落体法构建小鼠TBI模型,造模后按时腹腔注射MCC950或生理盐水适量。通过HE染色、尼氏染色评价各组小鼠脑组织损伤情况,免疫荧光法检测其脑组织中NLRP3、Caspase1及GSDMD的表达。结果HE染色显示,与假损伤组比较,TBI组小鼠脑损伤区域神经元数量减少,神经元胞核固缩、深染,胞核周围出现大量空泡;MCC950治疗组神经元状态明显优于TBI组。尼氏染色,MCC950治疗组脑组织神经元缺失及损伤情况较TBI组均明显改善。免疫荧光显示,与TBI组比较,MCC950治疗组的脑组织冰冻切片NLRP3、Caspase1及GSDMD表达量均较TBI组明显降低。结论 MCC950可能通过抑制NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡,减轻TBI小鼠脑组织的创伤及细胞结构损伤。     

黄连解毒汤调控NLRP3 炎症小体改善动脉粥样硬化的机制研究

目的:探讨黄连解毒汤对小鼠动脉粥样硬化(AS)模型NLRP3炎症小体的调控作用。方法:将ApoE~(-/-)小鼠随机分成空白组、模型组、治疗大剂量组(20 g/kg)、中剂量组(10 g/kg)、小剂量组(5 g/kg)和阳性组(20 mg/kg吡格列酮),每组6只。除空白组外,其他各组均构建AS模型,造模后连续给药6周,检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量;HE染色观察主动脉形态学变化;油红O染色评估AS斑块的形态和大小;免疫组织化学技术检测主动脉中NLRP3的含量;ELISA检测血清中TNF-α、IL-18和IL-1β的表达;RT-qPCR检测主动脉组织中IL-1β、Caspase-1、NLRP3、TNF-αmRNA的表达。结果:与模型组比较,用药组小鼠体重明显下降(P0.05);黄连解毒汤小剂量组和中剂量组主动脉斑块面积显著减少(P0.05);各剂量组小鼠血清LDL-C、TC、TG和TNF-α、IL-18、IL-1β水平均降低(P0.05);中剂量组HDL-C含量上调(P0.05);黄连解毒汤中、大剂量干预后,小鼠主动脉组织中IL-1β、Caspase-1、NLRP3、TNF-αmRNA表达明显下降(P0.05)。结论:黄连解毒汤可通过调控NLRP3炎症小体的表达,降低小鼠AS模型炎症因子水平,从而发挥抗AS作用。     

右美托咪定通过Toll样受体4减轻小鼠肺缺血/再灌注损伤

目的探讨盐酸右美托咪定(Dex)对小鼠肺缺血/再灌注损伤(LIRI)的保护作用机制。方法将野生型(WT)和Toll样受体4敲除(TLR4-/-)C57BL/6雌鼠,随机分为:假手术组(S组)、LIRI组(I/R组)、0.9%Na Cl组(NS组)和Dex干预组(D组)。肺组织HE染色;RT-q PCR检测肺组织TLR4 mRNA的表达;ELISA检测肺组织中TNF-ɑ、IL-6和IL-1β(WT和TLR4-/-)水平;Western blot检测肺组织Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体表达量。结果 Dex明显改善WT小鼠肺缺血/再灌注病理损伤,显著降低其肺组织中TLR4表达和多种前炎性因子的产生(P0.01),抑制NLRP3炎性小体的产生和活化(P0.01)。但是在TLR4-/-小鼠中未观察到对各种炎性因子的抑制作用。结论 Dex可通过抑制TLR4的表达,减少前炎性因子释放和NLRP3炎性小体的形成与活化,达到保护LIRI的作用。     

富氢盐水抑制NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路改善溃疡性结肠炎小鼠炎症反应

目的 探讨富氢盐水对溃疡性结肠炎（UC）小鼠炎症反应及对NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法 30只SPF级C57BL/6小鼠随机分为正常组（Control）、溃疡性结肠炎小鼠模型组（Model）及富氢盐水组（HS）,每组10只。检测各组小鼠体重以及疾病活动指数变化;检测各组小鼠结肠长度和脾脏指数;HE染色检测各组小鼠结肠组织病理改变;ELISA检测结肠组织中白介素-1β(IL-1β)、IL-6及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;TUNEL检测结肠组织中细胞凋亡情况;Western blot检测各组小鼠结肠组织中NLRP3、TLR4、p-NF-κB及NF-κB蛋白的表达。结果 富氢盐水可缓解溃疡性结肠炎小鼠炎症反应,降低IL-1β、IL-6及TNF-α表达水平,减少结肠细胞的凋亡数,改善结肠长度及病理改变,降低疾病活动指数和脾脏指数,同时下调NLRP3和TLR4蛋白,抑制NF-κB磷酸化。结论 富氢盐水抑制溃疡性结肠炎小鼠炎症反应,与抑制NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路相关。     

排毒保肾丸对糖尿病肾病大鼠炎症小体NLRP3表达及NF-κB信号通路的影响北大核心CSCD

目的:探究排毒保肾丸对糖尿病肾病(DKD)大鼠炎症小体核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:48只大鼠随机分为4组:对照组、模型组、排毒保肾丸组、阳性对照组(氯沙坦组)。模型组、排毒保肾丸组和氯沙坦组建立DKD大鼠模型,饲以高脂高糖饲料并腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)。排毒保肾丸组、氯沙坦组分别灌胃排毒保肾丸、氯沙坦,对照组、模型组灌胃给予等量生理盐水,连续8周。8周后测定尿蛋白、血肌酸酐、血尿素氮含量,处死大鼠并留取肾脏组织。ELISA检测血清IL-6、IL-1β及TNF-α含量;HE染色观察肾脏组织形态学改变;Masson染色观察肾脏组织纤维化改变;免疫组化染色及Western blot检测NLRP3、NF-κB p65、天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠肾脏组织损伤严重,尿蛋白、血肌酐、尿素氮含量、炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量、NLRP3、NF-κB p65、Caspase-1蛋白表达显著增加(均P<0.05);与模型组相比,排毒保肾丸组和氯沙坦组肾脏组织损伤减轻,尿蛋白、血肌酐、尿素氮含量、炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量、NLRP3、NF-κB p65、Caspase-1蛋白表达显著减少(均P<0.05)。结论:排毒保肾丸能够有效改善DKD损伤,抑制机体炎症反应,可能通过抑制炎症小体NLRP3表达和NF-κB信号通路发挥保护作用。     

NLRP3炎性小体与小鼠间质性膀胱炎的相关性研究

目的通过建立小鼠间质性膀胱炎(IC)模型,探讨Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性体在IC中的作用和机制,进而为IC的治疗寻求新靶点。方法 C57BL/6J小鼠40只,随机分成4组:空白对照组(生理盐水注射)10只,IC模型组(腹腔注射环磷酰胺,150mg/kg,24h后观察各项指标)10只,BHB对照组(每12h注射NLRP3炎性小体抑制剂BHB,125mg/kg,3次,第3次注射BHB2h后腹腔注射环磷酰胺150mg/kg)10只,IC治疗组(IC+NLRP3抑制剂处理)10只。HE染色观察病理学特征,RT-PCR和Western blot检测间质性膀胱炎小鼠膀胱中NLRP3,caspase-1和IL-1β表达及其激活情况。结果环磷酰胺注射诱导NLRP3,caspase-1和IL-1β表达增加和活化。间质性膀胱炎小鼠膀胱体积增大、充血水肿,膀胱湿重显著增加,粘膜层细胞破坏,粘膜下层明显增厚,炎症细胞浸润增多,而BHB预处理的小鼠上述情况明显好转。结论 NLRP3炎症小体与间质性膀胱炎密切相关,可能为IC临床治疗的重要干预靶点。     

利拉鲁肽通过调控HSP70-TLR4轴抑制db/db小鼠肾脏的炎症性损伤

目的探讨胰高血糖素样肽(GLP-1)类似物利拉鲁肽对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)炎症性损伤及高糖刺激下肾小管上皮细胞的作用及其可能机制。方法将实验小鼠随机分为对照组(db/m组)、糖尿病肾病模型组(db/db组)和利拉鲁肽治疗组(db/db+Li组),分别给予生理盐水或利拉鲁肽(1 mg·kg~(-1)·d~(-1))腹腔注射,持续给药8周。实验结束时,检测各组小鼠体质量、血糖、24 h尿白蛋白以及血肌酐水平。体外培养TCMK-1细胞,无血清DMEM培养基同步培养24 h,分为对照组(control)、高糖组(high glucose,HG)、HG+Li组、HG+VER、HG+HSP70组、HG+HSP70+NC si RNA(negative control si RNA,NC si RNA)组及HG+HSP70+TLR4 si RNA组,TLR4的小干扰RNA(si RNA)转染TCMK-1细胞后采用Western blot法检测TLR4蛋白表达。Real-time PCR检测肾组织及细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β和CCL2 m RNA表达,Western blot分析TLR4及HSP70蛋白表达。结果实验结束时,各组小鼠均存活。与db/m组相比,db/db组小鼠体质量、空腹血糖、24 h尿白蛋白及血肌酐水平均显著升高(P0.05),利拉鲁肽治疗能显著逆转db/db小鼠上述指标的升高(P0.05)。db/db小鼠及高糖刺激下TCMK-1细胞炎症相关因子TNF-α、IL-6、IL-1β及CCL2 m RNA相对表达显著增加(P0.05),TLR4及HSP70蛋白表达显著升高(P0.05),利拉鲁肽治疗能显著降低db/db小鼠及高糖刺激下TCMK-1细胞炎症因子TNF-α、IL-1β及CCL2表达,TLR4 si RNA干扰TLR4蛋白表达能显著降低高糖刺激下TCMK-1细胞炎症相关因子TNF-α、IL-1β及CCL2 m RNA相对表达量(P0.05)。结论利拉鲁肽通过调控HSP70-TLR4轴活性抑制DN肾小管炎症性损伤,继而抑制DN病程进展。     

亚麻木酚素通过抑制TXNIP和激活NLRP3炎症小体减轻慢性间歇性低氧小鼠肾脏炎症损伤

目的:探讨亚麻木酚素/开环异落叶松脂素二葡萄糖苷(SDG)对慢性间歇性低氧(CIH)小鼠肾脏炎症损伤的改善作用及潜在机制。方法:将SPF及雄性C57BL/6N小鼠分为正常组、CIH组和SDG治疗组。记录小鼠体重变化;HE染色观察肾脏组织形态;生化检测血清肌酐和血尿素氮的含量;羟胺法和硫代巴比妥酸比色法测定肾脏组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量;免疫组织化学检测硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的蛋白表达情况;ELISA法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β等促炎因子的含量;Western blot检测TXNIP、NLRP3炎症小体相关蛋白[NLRP3、含CARD的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和caspase-1]、IL-1β和IL-18的蛋白表达情况。结果:3组小鼠的体重和肾脏指数无显著差异(P0.05)。HE染色显示,CIH组肾小球形态不规则,肾小管上皮细胞肿胀,胞浆模糊,出现轻微的水泡变性,经SDG治疗后有所改善。与正常组相比,CIH组小鼠血清肌酐及炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的含量显著升高(P0.05),免疫组织化学染色显示,CIH组肾小管上皮细胞胞浆内NLRP3和TXNIP的表达显著升高(P0.05),SDG治疗后均显著下降(P0.05)。与正常组相比,CIH组肾脏组织的SOD活性降低,MDA含量增多(P0.05),TXNIP、NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白水平上调,且经过SDG治疗后均显著下降(P0.05)。结论:亚麻木酚素可减轻CIH小鼠的肾脏炎症损伤,其机制可能与抑制氧化应激和NLRP3炎症小体的激活有关。