马钱子碱通过抑制IL-6/STAT3信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的:探讨马钱子碱(brucine)在体外对人结肠癌SW480细胞生长和凋亡的影响及可能的分子机制。方法:实验以人结肠癌细胞系SW480细胞为研究对象,分为空白对照组、brucine(1μmol/L)处理组、IL-6(100μg/L)处理组和brucine(1μmol/L)与IL-6(100μg/L)联用组,用CCK-8法检测细胞活力抑制率;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。细胞免疫荧光检测相关蛋白表达定位和强度。结果:Brucine处理组和brucine与IL-6联用组都能抑制结肠癌细胞的活力,brucine浓度相同时,联用组抑制率小于brucine处理组(P0.05)。与空白对照组相比,单用brucine处理组凋亡细胞明显增多(P0.05)。与单用brucine相比,brucine与IL-6联用组凋亡细胞明显减少(P0.05)。与对照组相比,brucine能降低p-STAT3蛋白水平。与空白对照组相比,单用brucine组p-STAT3的蛋白减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bax和执行凋亡的cleaved PARP明显增多;与空白对照组相比,单用IL-6处理组的p-STAT3明显增多(P0.05);而与单用brucine相比,brucine与IL-6联合应用组的p-STAT3蛋白增多,抗凋亡蛋白Bcl-2表达增多,促凋亡蛋白Bax和执行凋亡的cleaved PARP均相对减少(P0.05)。结论:体外细胞实验中brucine可能通过调节IL-6/STAT3通路,抑制结肠癌SW480细胞中STAT3的磷酸化激活,从而发挥抗肿瘤作用。     

circRNA_103809对结肠癌SW480细胞线粒体功能和炎症因子水平的调节作用北大核心CSCD

目的:探究环状RNA(circRNA)_103809对结肠癌SW480细胞作用。方法:qRT-PCR检测结肠癌组织及细胞、正常组织及细胞中circRNA_103809表达。将SW480细胞分为对照组(Control),过表达circRNA_103809组(LV-circRNA_103809)及其阴性对照组(LV-scramble)。除对照组外,按分组分别转染LV-circRNA_103809和LV-scramble质粒。qRT-PCR检测各转染组SW480细胞中circRNA_103809、Ki67和p21表达;CCK8检测各组细胞增殖倍数;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;线粒体膜电位的变化;试剂盒检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;ELISA检测各组细胞上清液中IL-1β、IL-6和IL-4炎症因子水平,免疫荧光检测p65的核转移;Western blot检测Bax/Bcl-2,活化胱天蛋白酶(cleaved cas)-9/cas-9,cleaved cas-3/cas-3相对表达量及细胞核中p65蛋白的表达。结果:结肠癌组织及细胞中circRNA_103809表达显著下调,p21的表达显著上调(P<0.05)。与对照组相比,过表达circRNA_103809组SW480细胞中circRNA_103809的表达显著上调,Ki67的表达显著下调(P<0.05),细胞增殖倍数显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),线粒体膜电位降低,Bax/Bcl-2、cleaved cas-9/cas-9和cleaved cas-3/cas-3显著升高(P<0.05),SOD含量减少,MDA含量增加(P<0.05),促炎因子IL-1β和IL-6水平显著降低,抗炎因子IL-4水平显著升高(P<0.05),细胞核中p65蛋白表达显著下调,核定位显著减少(P<0.05)。结论:circRNA_103809在结肠癌SW480细胞中发挥抑癌作用,抑制细胞增殖,通过增强氧化应激促进细胞凋亡,抑制炎症反应阻止癌细胞发展进程。     

甘草查尔酮A 调控人结肠癌细胞增殖与凋亡的分子机制研究

目的:探讨甘草查尔酮A(LCA)对人结肠癌细胞增殖与凋亡的影响,并分析相关分子机制。方法:通过体外培养人结肠癌HCT116和SW480细胞,MTT实验检测不同浓度(0、1、2. 5、5、10、25、50μmol/L)的LCA对细胞增殖的影响,测定12 h,24 h和48 h的细胞增殖抑制率,并计算两组细胞的IC50。随后选择HCT116细胞为研究对象,并将细胞分为4组:对照组,50μmol/L的LCA组,5 mmol/L的ROS抑制剂(NAC)组以及50μmol/L LCA+5 mmol/L NAC组。流式细胞仪检测各组细胞的ROS水平及凋亡状况; Western blot检测内质网应激(ERS)相关蛋白ATF6、XBP-1、ATF4和CHOP以及凋亡相关蛋白Bcl2、Bax和Cleaved-caspase3的表达。结果:随着LCA作用浓度的增大和时间的延长,人结肠癌HCT116和SW480细胞的增殖抑制率增大,具有显著的浓度和时间依赖性; LCA对HCT116和SW480细胞作用48 h的IC50分别为21. 94μmol/L和29. 38μmol/L。与对照组比较,NAC能显著降低细胞ROS及凋亡水平(均P0. 01),而LCA能显著促进细胞ROS的释放及凋亡(均P0. 01)。与对照组比较,NAC组细胞内质网应激相关蛋白ATF6、XBP-1、ATF4、CHOP和促凋亡蛋白Bax、Cleavedcaspase3的表达水平均显著降低(P0. 05,P0. 01),抗凋亡蛋白Bcl2的表达水平显著增加(P0. 01);而LCA组细胞ATF6、XBP-1、ATF4、CHOP、Bax和Cleaved-caspase3蛋白表达水平均显著增加(均P0. 01),Bcl2的表达水平显著降低(P0. 01)。结论:甘草查尔酮A能显著抑制人结肠癌HCT116细胞增殖,促进细胞的凋亡,其作用机制可能与激活氧化应激及调控Bcl2/Bax/Cleaved-caspase3信号通路相关。     

miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及可能机制

目的 探讨miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及可能机制。方法 qRT-PCR方法检测人结肠癌细胞株SW480与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460中miR-27a的表达水平。体外培养SW480细胞,将SW480细胞随机分为空白对照组(不进行任何处理)、miR-27a抑制剂组（转染miR-27a inhibitor）与阴性对照组（转染miR-27a inhibitor NC）,采用脂质体法进行转染,实时荧光定量PCR方法验证转染效率。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测SW480细胞增殖;Transwell实验检测SW480细胞侵袭与迁移;流式细胞术检测SW480细胞凋亡;Western blot法检测转染后叉头框蛋白O1(FOXO1)、组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)、泛素连接酶FBW7的表达。结果 miR-27a在SW480细胞中的表达水平显著高于NCM460细胞（P<0.01）。转染miR-27a抑制剂后,SW480细胞中miR-27a的表达水平明显降低,转染成功。抑制miR-27a表达后,SW480细胞的增殖、迁移与侵袭能力显著降低,凋亡率显...     

6-姜酮酚对结直肠癌细胞增殖、凋亡和糖酵解的影响及机制研究

目的研究6-姜酮酚对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡、糖酵解的影响及其可能的作用机制。方法采用CCK8法观察6-姜酮酚对人结肠癌细胞HCT116和人正常结肠上皮细胞NCM460细胞增殖的影响,采用平板克隆形成实验观察6-姜酮酚对HCT116细胞克隆形成的影响,流式细胞术检测HCT116凋亡细胞比率,试剂盒检测HCT116细胞葡萄糖消耗和乳酸分泌的含量,Western blot检测己糖激酶2以及STAT3和p-STAT3的表达水平。结果 6-姜酮酚可以显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖能力,呈现剂量和时间依赖性;然而6-姜酮酚并没有引起NCM460细胞增殖的显著改变。6-姜酮酚能显著降低HCT116细胞的克隆形成能力,且可明显诱导HCT116细胞的凋亡。同时6-姜酮酚可降低HCT116细胞的葡萄糖消耗能力,并显著减少HCT116细胞乳酸分泌量。此外6-姜酮酚显著下调HCT116细胞中己糖激酶2的表达,也能下调p-STAT3水平。结论 6-姜酮酚能够有效抑制结肠癌HCT116细胞的增殖,诱导细胞凋亡,抑制糖酵解水平,其机制可能与下调STAT3信号通路及其下游己糖激酶2的表达有关。     

RNAi双沉默Survivin和hTERT基因抑制人结肠癌SW480细胞增殖促进凋亡

目的探讨双向沉默Survivin和h TERT基因对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响,为结肠癌的基因治疗提供实验依据。方法设计并构建能够稳定转录shRNA并可分别及联合干扰Survivin和h TERT分子表达的质粒,将其转染结肠癌SW480细胞后,分阴性对照组、空白质粒对照组、Survivin RNAi组、h TERT RNAi组和Survivinh TERT RNAi组。转染48h后TRAP-PCR-ELISA法检测端粒酶活性,RT-PCR法检测Survivin和h TERT mRNA的表达,Western blot检测Survivin和h TERT蛋白的表达,流式细胞仪及cck-8法分别检测细胞凋亡和细胞增殖的变化。结果 Survivin-h TERT RNAi组SW480细胞端粒酶活性明显下降(P0.01),Survivin-h TERT RNAi组Survivin及h TERT的mRNA水平较正常对照组分别减低82.8%和73.6%(P0.01),蛋白表达抑制率分别为79.2%和66.7%(P0.01)。实验各组中Survivin-h TERT RNAi组细胞增殖抑制率和凋亡率最高,分别为43.6%±0.1%和39.2%±2.3%(P0.01)。结论 Survivin和h TERT双干扰质粒可明显下调Survivin和h TERT蛋白的表达,抑制结肠癌SW480细胞的增殖,促进其凋亡。     

STIL基因通过调控IL-6/STAT3通路影响宫颈癌细胞增殖和凋亡

目的：探讨STIL基因对宫颈癌增殖和凋亡的影响并研究其机制。方法：RT-qPCR和Western blot检测STIL mRNA和蛋白在宫颈癌组织、癌旁组织、宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、caski、人正常宫颈上皮细胞HUCEC中的表达。将HeLa细胞分为对照（NC）组、si-NC组、si-STIL组、si-STIL+IL-6组。CCK-8和平板克隆实验检测各组细胞增殖和克隆能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。Western blot检测各组细胞IL-6、IL-6R和p-STAT3蛋白表达。将稳定转染sh-STIL的HeLa细胞注射到裸鼠背部,研究抑制STIL表达对肿瘤形成的影响。结果：宫颈癌组织中STIL mRNA和蛋白表达显著高于癌旁组织（P<0.05）。HeLa、SiHa、caski细胞中STIL mRNA和蛋白表达显著高于HUCEC细胞（P<0.05）。与si-NC组比较,si-STIL组细胞吸光度、克隆数及IL-6、IL-6R和p-STAT3蛋白水平显著降低（P<0.05）,凋亡率显著升高（P<0.05）。与si-STIL组比较,si-STIL+IL...     

circ＿0000376靶向miR-876-3p调控结肠癌细胞进程

目的 探讨circ＿0000376对结肠癌细胞SW480迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制。方法 选取30例结肠癌组织及其相应的癌旁组织；体外培养SW480细胞，根据实际转染蛋白情况分别设si-NC组、si-circ＿0000376组、miR-NC组、miR-876-3p组、si-circ＿0000376和anti-miR-876-3p共转染组以及sicirc＿0000376和anti-miR-NC共转染组。采取RT-qPCR检测circ＿0000376和miR-876-3p的表达水平、Transwell检测细胞迁移和侵袭、流式细胞术检测细胞凋亡、Western blot检测相关蛋白的表达、双荧光素酶报告基因实验检测circ＿0000376和miR-876-3p的靶向关系。结果 结肠癌组织中circ＿0000376较癌旁组织呈高表达（P<0.05）,miR-876-3p较癌旁组织呈低表达（P<0.05）；沉默circ＿0000376或过表达miR-876-3p可有效降低癌细胞恶性行为活性，MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白也呈更低表达，细胞凋亡活性Bax蛋白呈明显高表达...     

miR-126 对结肠癌细胞生物学行为的影响及其在调控结肠癌EMT 转化中的作用

目的:观察miR-126 在不同转移潜能的人结肠癌细胞系中的表达情况及其对结肠癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响并探讨可能的作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR 检测结肠癌细胞系(SW480、SW620 及HCT116)中miR-126 的表达量。通过脂质体瞬时转染法将miR-126 过表达(miR-126 mimics),并设置阴性对照组,然后采用CCK8 法检测细胞的增殖能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell 侵袭小室实验检测细胞的侵袭能力,Western blot 实验检测E-cadherin 和Vimentin 蛋白表达量的变化。结果:相对于低转移潜能的结肠癌细胞株SW480,miR-126 在高转移潜能的SW620 和HCT116细胞中的表达降低。过表达miR-126 可使SW620 细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,E-cadherin 蛋白表达增加,Vimentin 蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:低表达的miR-126 与结肠癌的转移密切相关,miR-126 影响结肠癌细胞生物学行为的作用可能是通过调控EMT 进程实现的。     

lincRNA-p21通过STAT3信号抑制结直肠癌HCT116细胞增殖

目的:研究基因间区长链非编码RNA-p21(lincRNA-p21)通过STAT3信号通路对结直肠癌HCT116细胞生长抑制的影响。方法:通过细胞转染法构建lincRNA-p21过表达的人结直肠癌细胞株HCT116,转染空载体pcDNA3.1作为阴性对照组。转染后采用RT-qPCR法检测细胞中lincRNA-p21的水平,分别采用MTT法和平板集落形成实验检测细胞的活力和增殖情况,采用Western blot法测定细胞中STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)的蛋白水平。用STAT3信号通路激活剂SD19处理lincRNA-p21过表达的HCT116细胞,Western blot检测STAT3和p-STAT3的蛋白水平,MTT法检测细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与control组和pcDNA组相比,pcDNA-lincRNA-p21组细胞中lincRNA-p21的表达明显上调,细胞生长受到抑制,STAT3和p-STAT3的蛋白水平降低(P0.05)。STAT3激活剂SD19处理过表达lincRNA-p21的HCT116细胞后,与pcDNA-lincRNA-p21组相比,pcDNA-lincRNA-p21+SD19组细胞中STAT3和p-STAT3的蛋白水平升高,细胞活力升高,细胞凋亡率降低(P0.05)。结论:lincRNA-p21过表达可以抑制结直肠癌HCT116细胞的生长;激活STAT3信号通路可促进HCT116细胞的生长;lincRNA-p21可通过抑制STAT3信号激活而抑制HCT116细胞的增殖。     

敲减NOB1基因表达对人结肠癌SW480细胞药物敏感性及侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨通过小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)技术敲减NOB1基因表达对人结肠癌SW480细胞活力、药物敏感性、凋亡、细胞周期及侵袭和迁移能力的影响。方法:利用脂质体Lipofectamine 3000将NOB1 siRNA转染至SW480细胞,采用real-time PCR和Western blot检测转染后SW480细胞中NOB1 mRNA和蛋白表达的变化;采用MTT法检测敲减NOB1基因表达后SW480细胞活力及其对不同化疗药物(顺铂、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂和卡培他滨)敏感性的变化;流式细胞术检测敲减NOB1基因表达对SW480细胞凋亡和周期的影响;Transwell方法检测敲减NOB1基因表达对结肠癌SW480细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:转染NOB1 siRNA后,SW480细胞中NOB1的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05);与对照组和阴性对照siRNA组相比,NOB1 siRNA转染组的SW480细胞在24～72 h的细胞活力显著降低,顺铂、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂和卡培他滨对该细胞的半数抑制浓度均显著降低,细胞凋亡率显著增加,细胞周期受到阻滞,细胞侵袭和迁移能力显著降低(P0.05)。结论:NOB1 siRNA转染能够抑制结肠癌SW480细胞活力及侵袭和转移能力,并增强细胞对药物的敏感性,促进细胞凋亡。NOB1能够成为结肠癌诊断和治疗的新靶点。     

GSK-3β抑制剂对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的: 探讨糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)抑制剂(2'Z,3'E)-6-溴靛'-3'-肟(BIO)对结肠癌SW480细胞β-catenin 、Bcl-2蛋白表达及细胞周期、凋亡的影响。方法: 应用不同浓度BIO作用于结肠癌SW480细胞,采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡,Western blotting检测β-catenin 和Bcl-2蛋白表达,免疫细胞化学检测β-catenin 及cyclin D1的表达,HE染色观察细胞形态。结果: 与BIO处理前SW480细胞相比,BIO处理组SW480细胞β-catenin蛋白表达明显上调并出现部分细胞核移位,cyclin D1蛋白表达及S期和G₂/M期细胞不同程度增多,Bcl-2蛋白表达有所下调,细胞凋亡率明显下降,并出现细胞形态改变。结论: GSK-3β抑制剂BIO作用于结肠癌SW480细胞呈现促增殖及抑凋亡作用,其机制主要与β-catenin信号转导通路激活以及与Bcl-2调控通路的平衡有关,其中β-catenin上调可能是影响结肠癌SW480细胞转归的主要因素。     

RNA干扰沉默增殖诱导配体基因对结肠癌细胞周期的影响

目的 探讨沉默增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)基因对人结肠癌SW480细胞增殖及细胞周期的影响.方法 将APRIL基因的小干扰RNA质粒载体(siRNA-APRIL)转染结肠癌SW480细胞株,以非特异性序列载体转染组(nontargeting control)及未转染组(nontransfected control)作为对照.Real-time PCR和Western blot评价APRIL沉默效率;CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期变化;RT-PCR检测细胞周期调控基因p21及p27的表达.结果 与非特异性序列载体转染组及未转染组相比,siRNA-APRIL显著抑制APRIL mRNA及蛋白的表达(P＜0.05);siRNA-APRIL转染SW480细胞48 h、72 h和96 h后细胞增殖能力明显下降(P＜0.05);转染48 h,siRNA-APRIL组G0/G1期细胞比例增高,S期及G2/M期细胞比例减少,细胞凋亡的数量增加,同时p21及p27 mRNA的表达上调(P＜0.05);而上述指标两对照组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 siRNA-APRIL能特异性抑制结肠癌SW480细胞APRIL的表达,并抑制细胞增殖,使细胞周期出现G0/G1期阻滞,其机制可能与上调p21和p27的表达有关.     

miRNA-224-3p对人结肠癌细胞株SW480的增殖及侵袭的作用

目的探讨低表达miRNA-224-3p对结肠癌细胞株SW480增殖及侵袭的作用机制。方法采用siRNA技术沉默miRNA-224-3p在结肠癌细胞株SW480中的表达,实验分为si RNA组和NC组;采用CCK8法检测细胞增殖率;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用Western blot检测细胞中miRNA-224-3p、Cyclin D1以及CDK4蛋白的表达;采用Transwell小室检测细胞侵袭力。结果转染si RNA后,siRNA组中miRNA-224-3p蛋白表达明显低于NC组(P0.05);CCK8结果表明在结肠癌细胞株在转染24 h、48 h和72 h时的细胞增殖率分别明显低于NC组(P0.05);流式检测结果表明在siRNA组中,处于G0～G1期的SW480的细胞数量显著高于NC组(P0.05),处于S期的SW480细胞数量显著低于NC组(P0.05);Western blot结果表明siRNA组中的Cyclin D1和CDK4蛋白表达明显高于NC组(均P0.05);Transwell小室检测表明siRNA组细胞的侵袭力明显低于NC组(P0.05)。结论低表达miRNA-224-3p可显著抑制结肠癌细胞株SW480增殖和侵袭,其机制可能与阻滞细胞周期进程有关。     

多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制的探讨

目的:观察多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制探讨。方法:用不同浓度(5、10、20nmol·L-1)多烯紫杉醇处理人结肠癌SW480细胞后,采用MTT法观察多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响,并使用流式细胞术及Hoechst33258染色检测多烯紫杉醇对SW480细胞的凋亡影响,采用RT-PCR检测SW480细胞Bcl-2mRNA表达。结果:经不同浓度(5、10、20nmol·L-1)多烯紫杉醇处理后,MTT结果显示SW480细胞生长抑制率显著上升,流式细胞术检测显示SW480细胞凋亡发生显著升高,并且Hoechst33258染色检测SW480细胞呈凋亡状态。此外,RT-PCR检测T-24细胞Bcl-2mRNA表达水平降低。结论:多烯紫杉醇通过诱导凋亡能抑制人结肠癌SW480细胞的生长,这可能与其下调Bcl-2mRNA表达有关。     

lncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响

目的探讨lncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及可能机制。方法 qRT-PCR方法检测34例结直肠癌组织及相应的癌旁组织、人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460与人结直肠癌细胞株SW480中lncRNA RAB11B-AS1的表达水平。构建稳定过表达RAB11B-AS1的SW480细胞系,MTT方法检测SW480细胞的增殖能力变化;流式细胞术检测SW480细胞凋亡率;Transwell检测SW480细胞侵袭能力变化,划痕实验检测SW480细胞迁移能力变化;Western blot检测SW480细胞中细胞周期蛋白1(cyclin D1)和CDK6的表达水平。结果 RAB11B-AS1在结直肠癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P0.01);在SW480中的表达显著低于NCM460细胞(P0.01)。RAB11B-AS1过表达后,SW480细胞的增殖、侵袭与迁移能力显著降低,凋亡率显著升高,cyclin D1与CDK6的蛋白表达降低(P0.01)。结论 lncRNA RAB11B-AS1在结直肠癌组织中表达降低,过表达RAB11B-AS1能够抑制SW480细胞的增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡。     

IL-8通过激活PI3K/AKT通路促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

为研究IL-8对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探讨其作用机制,应用免疫组织化学法检测结肠癌组织和正常癌旁组织中IL-8的表达;MTT法检测不同浓度IL-8处理或抑制PI3K/AKT信号通路后结肠癌细胞SW480的增殖情况;Western blotting检测IL-8处理后SW480细胞中p-AKT、t-AKT蛋白的表达;Transwell法检测抑制PI3K/AKT通路或IL-8处理后SW480细胞的迁移和侵袭能力。结果显示,与癌旁组织相比,结肠癌组织中IL-8的表达水平明显提高;IL-8处理后SW480细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显增加,且PI3K/AKT通路异常激活;抑制PI3K/AKT通路可逆转IL-8对SW480细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。由此IL-8可促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与激活PI3K/AKT通路有关,可为IL-8在结肠癌中的治疗提供参考。     

VEGF-DsiRNA干扰对人结肠癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的利用人血管内皮生长因子-D(vascular endothelial growth factor-D,VEGF-D)小RNA干扰(siRNA),研究VEGF-D表达下调对人结肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法设立3个细胞组:未处理的人结肠癌SW480细胞作为空白对照组,转染阴性对照siRNA的SW480细胞作为阴性对照组,转染VEGF-D siRNA的SW480细胞作为实验组。RT-PCR和Western-blot检测转染后SW480细胞VEGF-D基因和蛋白的表达,MTT法检测VEGF-D RNA干扰对结肠癌细胞增殖的影响,Transwell小室实验检测VEGF-D RNA干扰对结肠癌细胞侵袭的影响。结果 VEGF-D siRNA转染人结肠癌细胞SW480,VEGF-D基因和蛋白水平表达量明显低于对照组,MTT实验显示体外细胞存活率下降,Transwell小室中穿膜细胞数减少。结论 VEGF-D siRNA显著抑制结肠癌细胞SW480中VEGFD的基因和蛋白表达,明显抑制SW480细胞的体外增殖和侵袭能力。     

miR-496过表达抑制结肠癌细胞生长和转移

目的:研究miR-496过表达对结肠癌细胞生长和转移的影响及其分子机制。方法:运用生物信息学软件筛选miR-496靶向相互作用蛋白;real-time PCR和Western blot法测定结肠癌细胞系HT29、HCT116、SW480以及正常结肠上皮细胞NCM460中miR-496、CTNNB1 mRNA和β-catenin蛋白的表达;运用Lipofectamine 2000将miR-496 mimics转染HT29、HCT116和SW480细胞,分别命名为HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞,转染scramble为阴性对照;运用MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒法、克隆形成实验和Transwell分别测定细胞活力、LDH漏出率、克隆形成能力和转移能力;萤光素酶报告基因实验测定miR-496启动子活性;Western blot法测定β-catenin、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)、p-4E-BP1、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)、p-LRP6、MMP-7、MMP-9、MMP-13以及TIMP-2的蛋白水平。结果:miR-496与β-catenin内源性相互作用;miR-496在HT29、HCT116和SW480细胞中低表达,而在NCM460高表达;β-catenin在HT29、HCT116和SW480细胞中高表达,而在NCM460低表达;培养24 h、48 h、72 h、96 h的HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞活力、LDH漏出率、克隆形成率和转移的细胞数均显著低于对照组(P0.05);萤光素酶报告基因实验结果显示转染miR-496 mimics细胞中的miR-496启动子活性明显增加(P0.05),分别是对照组的1.75倍、2.04倍和1.61倍。Western blot实验结果显示miR-496过表达抑制β-catenin蛋白表达,p-4E-BP1和p-LRP6的蛋白水平降低;siRNA或miR-496过表达介导的β-catenin表达下调能显著抑制MMP-7和MMP-9的表达,促进TIMP-2的表达。结论:miR-496在结肠癌细胞中低表达,在正常结肠上皮细胞中高表达;miR-496过表达抑制结肠癌细胞的生长和转移,其机制是通过抑制Wnt/β-catenin通路进一步抑制MMP-7和MMP-9表达,促进TIMP-2表达,从而抑制结肠癌细胞的恶性表型。     

苦参碱对oxLDL诱导的血管平滑肌细胞炎症反应及增殖凋亡的影响及分子机制研究

目的:探讨苦参碱对氧化型低密度脂蛋白(ox LDL)诱导的血管平滑肌细胞炎症反应及增殖凋亡的影响及分子机制。方法:ox LDL处理人主动脉血管平滑肌细胞建立动脉粥样硬化模型。CCK-8实验分析细胞活力和增殖。实时定量PCR(qRT-PCR)检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10和IL-13的mRNA水平。流式细胞术分析细胞凋亡。蛋白印迹检测增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki-67)和增殖细胞核抗原(PCNA),细胞凋亡标记蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白X(Bax),信号转导及转录激活子3(STAT3)和信号转导及转录激活子5(STAT5)的表达。结果:与对照组相比,造模组促炎因子IL-1β和TNF-α的mRNA水平大大提高,抗炎因子IL-10和IL-13的mRNA水平则显著降低(P0.01)。与造模组相比,模型加药组促炎因子IL-1β和TNF-α的mRNA水平显著降低,抗炎因子IL-10和IL-13的mRNA水平明显升高(P0.05)。造模组细胞增殖倍数和细胞凋亡率明显高于对照组,模型加药组细胞增殖倍数和细胞凋亡率明显低于造模组(P0.05)。与对照组相比,造模组Ki-67、PCNA和Bax的表达显著升高,Bcl-2显著降低(P0.01)。与造模组相比,模型加药组Ki-67、PCNA和Bax的表达明显减少,Bcl-2表达明显增多(P0.05)。造模组p-STAT3和p-STAT5相对蛋白表达量显著高于对照组(P0.01)。模型加药组p-STAT3和p-STAT5相对蛋白表达量明显低于造模组(P0.05)。与造模组相比,模型加药组和模型+Ruxolitinib组Ki-67、PCNA和Bax的表达明显减少,Bcl-2表达明显增多(P0.05);模型加药+Ruxolitinib组Ki-67、PCNA和Bax的表达显著减少,Bcl-2表达显著增多(P0.01)。与造模组相比,模型加药组和模型+Ruxolitinib组及模型加药+Ruxolitinib组IL-1β和TNF-α的mRNA水平都明显降低,IL-10和IL-13的mRNA水平都明显升高(P0.05)。结论:苦参碱可通过抑制JAK/STAT3通路的活化起到抗炎和抑制血管平滑肌细胞增殖和凋亡的作用。