TAX1BP1调控B细胞自噬和凋亡的研究

目的 探究TAX1BP1在B细胞自噬与凋亡中的作用。方法 慢病毒感染B淋巴瘤细胞（Raji细胞）,敲低TAX1BP1表达。利用雷帕霉素处理Raji细胞,通过Western blot、细胞免疫荧光染色和流式细胞术,观察自噬流强弱以及细胞凋亡情况。通过检测自噬相关通路P53蛋白表达变化,初步探索调控机制。结果 荧光显微镜观察慢病毒感染阳性率在90%以上。与阴性组比较,shTAX1BP1组细胞中TAX1BP1的m RNA表达水平降低80%、蛋白表达水平降低90%。经10 nmol/L雷帕霉素处理后,与阴性组相比较,shTAX1BP1组LC3II/I比值显著下降（P<0.01）,凋亡相关蛋白Bcl-2表达显著升高,Bax、Caspase-3表达显著下降。敲低TAX1BP1降低Raji细胞自噬水平,减少Raji细胞凋亡。敲低TAX1BP1增加P53蛋白表达,推测TAX1BP1可能通过P53相关通路调控Raji细胞的自噬与凋亡。结论 敲低TAX1BP1可抑制Raji细胞自噬与凋亡,初步预测这一生物学作用可能与P53信号通路有关。本研究为进一步探讨SLE的发病机制奠定了一定的实验基础。     

MIMF—1对B细胞功能的抑制效应

人精浆含有男性抑制物质(MIM)及其他抑制因子,它们可防止对精子及精浆产生免疫应答。本文报告,用Sephadex G-100过滤法从液化的正常人精液中制备MIM。犹如以往报道,从凝胶过滤中可分离出五个峰;而第一峰(称为MIMF-1)在SDS-PAGE上呈现一个区带。MIMF-1不仅能抑制SRBC进入小鼠体内所引起的免疫应答(以溶血空斑多少表示);亦能降低小鼠血清中SRBC抗体滴度(表1)。MIMF-1所致的免疫抑制作用或许与精液过敏或不育有关。     

HMGB1对HTLV-1病毒Tax蛋白表达的T细胞中NF-κB活性的影响

目的:构建人高迁移率组蛋白1(high mobility group box-1,HMGB1)的真核表达载体,转入TaxP及TaxN细胞进行表达,并研究其对Tax蛋白表达的T细胞中NF-κB活性的影响。方法:用RT-PCR方法扩增人T淋巴细胞系Jurkat细胞中HMGB1的cDNA,连接于真核表达载体pcDNA3.0;将pcDNA3.0-HMGB1转染TaxP及TaxN细胞,48小时后检测RT-PCR检测HMGB1和Tax mRNA的表达,HMGB1及p65蛋白的表达;将pcDNA3.0-HMGB1和NF-κB报告基因共转染TaxP及TaxN细胞48小时后检测荧光素酶活性。结果:成功构建了重组表达质粒pcDNA3.0-HMGB1;Tax可以促进HMGB1mRNA和蛋白的表达,HMGB1可以促进p65mRNA和蛋白的表达,并能上调NF-κB活性。结论:HMGB1能协同Tax蛋白激活NF-kB。     

MUM1蛋白在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中活化的B细胞相关蛋白MUM1的表达与临床病理特征之间的关系.方法 利用组织微阵列免疫组化检测60例DLBCL石蜡包埋组织中MUM1、bcl-6和CD10的表达.结果 60例DLBCL被分为两种抗原表达表型:一种为活化的B细胞表型(A型)表达MUM1;另一种为生发中心B细胞表型(B型),表达CD10和(或)bcl-6但不表达MUM1.60例DLBCL中61.67%为A型,31.67%为B型,其中59.25%中心母细胞型,3/4免疫母细胞型,2/2间变性大B细胞型均为A型.A型在结外和结内DLBCL中分别占61.76%和61.54%,而在胃肠道DLBCL中的比例(47%)显著低于在其他结外DLBCL中的比例(80%,P=0.079).在MUM-1( )/bcl-6( )/CD10( /-)的病例中,75.00%(12/16)为结外DLBCL,高于在MUM-1( )/bcl-6(-)/CD10(-)病例中的比例43.75%(7/16),但差异没有显著性(P=0.149).结论 A型(表达MUM1)在DLBCL中的比例较高,提示MUM1表达很可能与DLBCL组织学变异有关,联合检测CD10和bcl-6,可协助DLBCL分型诊断.     

B—1细胞研究进展

Ｂ－１细胞是近年来在小鼠及人体内发现的、与传统的Ｂ细胞来源及功能不同的另一种Ｂ细胞亚群，与传统Ｂ细胞相比，来源不是骨髓，其细胞表面主要特征为Ｌｙｔ－１／ＣＤ５抗原阳性；并且ｍＩｇ为ＩｍＧ＾＋＋，ＩｇＤ±。Ｂ－１细胞主要分布于腹腔、胸腔、肠粘膜，能产生自然抗体及某些自身抗体，故而与自身免疫病的发生有密切关系。     

静脉免疫球蛋白对体外淋巴细胞若干功能的调节

静脉免疫球蛋白（ＩＶＩＧ）治疗多种免疫相关性疾病的机制仍不清楚。体外研究表明，ＩＶＩＧ可以抑制不同刺激原激活的Ｔ细胞活化增殖及Ｂ细胞抗体的释放。有关ＩＶＩＧ影响Ｔ细胞Ｂ细胞及相关的细胞因子功能发挥的机理仍无定论。     

重组EB病毒BHRF1蛋白对裸鼠脾细胞程序性死亡的抑制作用

目的：观察适当浓度的ＥＢＶ－ＢＨＲＦ１重组蛋白（ｒＢＨＲＦ１）抽提液有无拮抗裸鼠脾细胞程序性死亡（ＰＣＤ）作用。方法：用１×１０６ｍｏｌ／Ｌ地塞米松作用１８ｈ、４３℃加热１０ｍｉｎ及无血清培养４８ｈ等方法诱导脾细胞发生ＰＣＤ,预先加入终浓度为２ｍｇ／Ｌ的ｒＢＨＲＦ１蛋白起拮抗作用。结果：未加ｒＢＨＲＦ１的对照组细胞发生典型的ＰＣＤ,即细胞ＤＮＡ的电泳出现ＰＣＤ特征性的梯形（ｌａｄｅｒ）ＤＮＡ降解片段;电镜观察显示核凝缩,但细胞膜及细胞器结构基本保持正常。若与适当浓度的ｒＢＨＲＦ１预培养８ｈ,再用上述方法处理,则因有重组蛋白的保护而未出现ＤＮＡ降解片段及ＰＣＤ的形态学变化。结论：初步显示ｒＢＨＲＦ１具有抑制脾细胞发生ＰＣＤ的功能。     

B7-H1阻断对未成熟树突状细胞免疫功能的影响

目的：探讨B7-H1阻断对未成熟树突状细胞(DCs)的免疫刺激活性的影响。 方法： 以细胞因子GM-CSF和IL-4体外诱导人单核细胞来源的树突状细胞，流式细胞仪检测在诱导过程中B7-H1的表达，并以B7-H1单抗阻断处理，分别以流式细胞仪、MTT法、ELISA、ELISPOT法检测B7-H1阻断对DCs的成熟和内吞能力、刺激淋巴细胞增殖、IL-12的分泌、诱导淋巴细胞分化的影响。 结果： DCs在诱导过程中B7-H1表达逐渐增强，第7 d时的阳性表达率为54.12％，以TNF-α诱导成熟后阳性表达率为83.64％；B7-H1阻断对DCs成熟和内吞能力无影响，但可使未成熟DCs刺激淋巴细胞增殖的能力和IL-12的分泌明显增强，并诱导淋巴细胞向分泌IFN-γ的Th1/Tc1的分化。 结论： B7-H1阻断可增强未成熟DCs的免疫刺激活性，利用B7-H1阻断的DCs瘤苗激发抗肿瘤免疫的方案值得进一步探讨。     

线粒体功能在B细胞发育分化及活化中的作用

B细胞从骨髓起始发育,到外周器官成熟,是介导体液免疫的重要细胞。在抗原的刺激下,B细胞分化为浆细胞产生特异性抗体或分化为记忆B细胞。线粒体是细胞的能量产生及代谢中心,负责为细胞提供充足的能量。当线粒体功能受损时,会影响其能量供应,从而改变细胞的命运;而细胞的不同状态也会影响线粒体的功能。近年研究显示,线粒体功能在B细胞的发育和活化中起着重要作用,以适应细胞整个周期中遇到的表型和环境变化。本文主要综述了线粒体功能在B细胞发育、分化及活化过程中的作用,以及在B细胞的不同阶段、不同状态下发生的改变,为探究线粒体相关疾病的机制研究提供新思路,为B细胞相关疾病的治疗提供新的理论依据。     

HTLV-1 Tax 蛋白对T细胞中HMGB1调控的影响

目的探讨人T淋巴细胞白血病1型病毒（human T-cell leukemia virus 1,HTLV-1）Tax蛋白对人高迁移率族蛋白1（ high mobility group box 1,HMGB1）基因转录调控的影响。方法提取TaxN和TaxP细胞总RNA和蛋白质,通过real-time PCR和Western blot分析HMGB1 mRNA和蛋白质的表达情况;利用脂质体介导方法,将6个含有不同长度HMGB1调控序列的pGL3-HMGB1-luc瞬时转染至TaxN 和 TaxP 细胞,观察 HMGB1基因在不同 T 细胞中的转录活性;pCMV-Tax 与 pGL3-HMGB1-luc瞬时共转染至Jurkat细胞,观察Tax蛋白对HMGB1基因的转录调控影响;染色体免疫共沉淀（ ChIP）找寻Tax蛋白影响HMGB1基因转录调控的区段。结果 TaxP细胞中HMGB1 mRNA和蛋白质表达水平高于TaxN细胞。 TaxN和TaxP细胞中HMGB1调控趋势基本相似,均表现出3号质粒（pHLuc3,含有-504～＋83 HMGB1区段）的相对荧光素酶活性（HMGB1/neo）最高,但是6号质粒（含有-1163～＋83 HMGB1区段）却表现出 TaxP 细胞 HMGB1的转录活性明显高于 TaxN 细胞。pCMV-Tax与pGL3-HMGB1-Luc报告基因共转染到Jurkat细胞也显示,6号质粒（pHLuc6）中Tax促进HMGB1基因的转录。 ChIP分析证实了Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段。结论-504～-383可能是HMGB1基因转录激活的关键启动子区,Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段促进HMGB1基因转录。     

167B细胞在胸腺依赖抗原免疫应答中的活化,增殖和分化

Ｂ细胞在胸腺依赖抗原免疫应答中所经历的活化、增殖和分化是一个级为复杂的生物学过程。本文在总结近年来该领域进展和假说的基础上，对这一过程中包括Ｂ细胞的活化部位、机制和途径，Ｂ细胞的增殖、生发中心的形成、免疫球蛋白编码基因的超突变和抗体亲和力的筛选、免疫球蛋白重链转型，浆细胞和记忆Ｂ细胞的分化形成以及免疫记忆的维持等方面作了较为系统全面的介绍。     

miR-570对胃癌细胞B7-H1蛋白表达的抑制作用

B7-H1是一种重要的负性共刺激分子,在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用,而微小RNA具有直接的转录后调控作用。本文研究miR-570对B7-H1表达的调控作用。首先将miR-570及其抑制剂anti-miR-570分别转染B7-H1表达阳性的人胃癌细胞SGC-7901和B7-H1表达阴性的人乳腺癌细胞MDA-MB-435,以流式细胞术检测B7-H1分子表达情况;然后构建pcDNA/B7-H1表达质粒与miR-570共转染CHO细胞,以流式细胞术检测CHO细胞上B7-H1分子的表达情况;最后分别构建含B7-H1基因3-UTR片段和含miR-570作用靶点序列的荧光素酶表达载体与miR-570共转染CHO细胞,用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性。结果显示miR-570能显著抑制SGC-7901细胞和B7-H1基因转染细胞膜上B7-H1蛋白的表达,并能显著抑制荧光素酶表达载体表达的荧光素酶蛋白,而且anti-miR-570能上调MDA-MB-435细胞上B7-H1表达。本研究证明miR-570能显著抑制B7-H1蛋白表达,为通过抑制B7-H1信号通路以增强机体抗肿瘤免疫力的治疗途径奠定了基础。     

人Blys转染细胞对B细胞功能的影响

利用RT-PCR方法从经IFN-γ激发的正常人外周血单核细胞总RNA中扩增出全长BlyscDNA,继而将BlyscDNA插入真核表达载体逆转录病毒载体pSIV1中。以脂质体转染法将重组逆转录病毒载体与两个辅病毒载体共转染包装细胞293T,将含完整病毒颗粒的上清转染小鼠成纤维细胞L929,经G418筛选获得稳定表达Blys分子的L929细胞;RT-PCR和流式细胞术检测证实Blys分子在L929的稳定和高水平表达。继而以该转染细胞与PWM驱动的人扁桃体B细胞共培养,体外实验表明Blys介导的共刺激信号能促进该培养体系B淋巴细胞增殖,与抗μ抗体信号协同能刺激B细胞分泌IgG。     

B－1细胞研究进展

Ｂ－１细胞是近年来在小鼠及人体内发现的、与传统的Ｂ细胞来源及功能不同的另一种Ｂ细胞亚群，与传统Ｂ细胞相比，来源不是骨髓，其细胞表面主要特征为Ｌｙｔ－１／ＣＤ５抗原阳性；并且ｍＩｇ为ＩｇＭ，ＩｇＤ￣（±）。Ｂ－ｌ细胞主要分布于腹腔、胸腔、肠粘膜，能产生自然抗体及某些自身抗体，故而与自身免疫病的发生有密切关系。     

PLK1和DNAPKcs在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的探讨PLK1和DNAPKcs在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的临床意义及对DLBCL细胞增殖的影响。方法收集50例DLBCL患者的临床资料,并通过对其病理组织标本进行免疫组化检测PLK1和DNAPKcs的表达水平,分析它们的表达相关性及与DLBCL临床病理特征之间的关系。通过siRNA干扰PLK1和DNAPKcs,采用EdU实验观察DLBCL细胞增殖能力的变化。敲减PLK1的表达,Western blot实验检测DLBCL细胞DNAPKcs的表达变化。结果 PLK1和DNAPKcs表达水平在DLBCL病人和两种细胞系FARAGE和OCI-Ly3中显著高于正常人外周血单核细胞(P0.05),促进DLBCL肿瘤细胞的增殖,与Ann Arbor分期、患者是否出现B症状、IPI评分正相关(P0.05),与DLBCL患者年龄、性别无相关性;敲减PLK1后DNAPKcs的表达水平显著降低。结论 PLK1和DNAPKcs可作为DLBCL诊断和预后判断的重要指标。     

自身免疫性甲状腺疾病患者B细胞数目及增殖功能异常

<正> 自身免疫性甲状腺疾病(AITD)主要是指弥漫性甲状腺肿伴甲亢(Graves disease,GD)和桥本氏甲状腺炎(Hashimoto thyroi-ditis,HT)。近来研究表明其不但有体液免疫的异常,而且存在有细胞免疫的紊乱。本文检测了AITD患者外周血T、B细胞数目及B细胞的增殖功能,并就其异常的机制及临床意义进行了探讨。     

霉酚酸衍生物对小鼠T细胞免疫功能的抑制作用

目的研究2种新型霉酚酸衍生物(代号JU95-07B、JU100-07E)在体外对小鼠T细胞免疫功能的影响。方法小鼠脾细胞用抗CD3单克隆抗体(mAb)刺激,同时加入不同浓度(10-4、10-5、10-6、10-7、10-8mol/L)及在不同时间点(刺激细胞后第0、6、12 h)加入同一浓度(10-5mol/L)的霉酚酸衍生物后,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中IFN-γ和IL-2的水平。同时利用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测霉酚酸衍生物对T细胞IFN-γ和IL-2的分泌、表面分子CD25的表达以及增殖的影响。结果 2种霉酚酸衍生物对抗CD3刺激条件下诱导的小鼠脾细胞产生的IFN-γ和IL-2均具有浓度依赖性抑制作用,并且在抗CD3刺激的不同时间点分别加入2种霉酚酸衍生物均能不同程度地抑制小鼠脾细胞产生IFN-γ和IL-2;同时,与单独使用抗CD3刺激相比,分别加入10-5mol/L浓度的2种霉酚酸衍生物后,均能抑制小鼠T细胞表面分子CD25的表达以及增殖。结论体外实验表明2种霉酚酸衍生物均对小鼠T细胞免疫功能具有明显抑制作用,该研究提示这2种霉酚酸衍生物可以抑制自身免疫性疾病和移植排斥反应。     

CD5阳性B1细胞增殖易感基因的定位

目的 :定位NZB、NZW及NZB WF1小鼠外周血B1细胞增殖的易感基因。方法 :建立 (NZB×NZW )F1×NZB回交小鼠模型 ,用覆盖小鼠全部常染色体的多态性微卫星遗传标记数量性状位点 (QTL)分析进行基因定位。结果 :B1细胞增殖的易感基因与小鼠的第 2、4、17号染色体上的微卫星遗传标记D2Mit 10 1、D4Mit 11及D17Mit 6 1肯定连锁 (Lods值 >3) ,其中D2Mit10 1、D4Mit11位点来源于NZB ,D17Mit 6 1位点来源于NZW。在D2Mit10 1位点附近存在Ltk、Rag1、2基因 ,在D4Mit 11位点附近存在Lck基因 ,在D17Mit6 1位点附近存在H 2及TNF α基因。结论 :NZB、NZW及NZB WF1小鼠外周血B1细胞增殖受多基因调控 ,易感基因分别位于NZB的Ltk、Rag1、2及Lck基因编码区和位于NZW的H 2、TNF α基因编码区 ,这些易感基因之间有相互促进的叠加效应。