IL-35对慢性阻塞性肺疾病患者Treg/Th17平衡的影响北大核心CSCD

目的:观察IL-35在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血中的表达及其对CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg和辅助性T细胞17(Th17)的调控作用。方法:选取44例COPD患者和25例健康对照者,分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC),ELISA检测血浆IL-35水平,流式细胞术检测PBMC中CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg和Th17水平,计算Treg/Th17。重组人IL-35刺激COPD患者PBMC,流式细胞术检测CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg和Th17比例,ELISA检测培养上清中IL-10、IL-17和IL-22水平,RT-PCR检测FoxP3和RORγt mRNA表达。磁力分选COPD患者PBMC中的CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg,重组人IL-35刺激后与自体PBMC共培养,CCK-8检测细胞增殖。结果:与对照组相比,COPD组血浆IL-35水平降低[(108.20±12.13)pg/ml vs(133.30±22.91)pg/ml,t=5.980,P<0.000 1],CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg比例降低[(4.71±1.00)%vs(6.07±1.03)%,t=5.362,P<0.000 1],Th17比例升高[(2.97±0.72)%vs(2.28±0.61)%,t=4.060,P=0.000 1],Treg/Th17降低(1.69±0.60 vs 2.86±0.91,t=6.279,P<0.000 1)。重组人IL-35刺激后,CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg比例升高(P=0.000 2),Treg/Th17升高(P=0.015 0),而Th17比例无明显变化(P=0.391 0),培养上清中IL-10水平升高[(145.10±24.40)pg/ml vs(123.50±24.11)pg/ml,t=4.520,P<0.000 1],而IL-17和IL-22水平均无明显变化(P>0.05),FoxP3 mRNA表达显著升高(1.27±0.19 vs 0.96±0.10,t=7.600,P<0.000 1),而RORγt mRNA表达无明显变化(P=0.447 0)。重组人IL-35刺激COPD患者分选的CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg免疫抑制活性增强。结论:IL-35主要通过提高CD4^(+)CD25^(+)CD127^(dim/-)Treg比例和活性影响Treg/Th17平衡,在COPD过程中可能发挥免疫保护作用。     

强直性脊柱炎患者外周血CD4+ CD25high CD127low 、CD8+ CD28- 调节性 T 细胞水平变化及临床意义

目的:探讨CD4~+CD25~(high)CD127~(low)、CD8~+CD28~-调节性T细胞(Treg)在强直性脊柱炎(AS)患者外周血中的表达及临床意义。方法:选取2017年9月～2019年3月于我院初次就诊的AS患者77例(非活动期47例、活动期30例)及健康对照者59例。流式细胞术(FCM)检测外周血CD4~+CD25~(high)CD127~(low)、CD8~+CD28~-Treg比例,流式细胞微球芯片捕获技术(CBA)检测血清IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-17A水平,分析Treg细胞与AS疾病活动度和临床炎症活动指标的相关性。结果:AS活动组CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg细胞比例低于AS非活动组和正常对照组(P0.05,P0.01);AS活动组和非活动组CD8~+CD28~-Treg细胞比例较健康对照组显著降低(P0.01)。AS活动组CD8~+CD28~+Tc细胞比例和CD8~+CD28~+/CD8~+CD28~-明显高于AS非活动组和健康对照组,且AS非活动组CD8~+CD28~+/CD8~+CD28~-高于健康对照组(P0.05)。与健康对照组相比,AS活动组和AS非活动组血清IL-6、TNF-α、IL-17A水平显著升高,且AS活动组血清IL-6、IL-17A水平显著高于AS非活动组(P0.05);3组志愿者IL-2水平差异无统计学意义(P0.05)。AS活动组血清IFN-γ水平显著高于AS非活动组和健康对照组(P0.05,P0.01),但AS非活动组与健康对照组差异无统计学意义(P0.05)。AS患者CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg细胞比例与BASDAI、ESR、Hs-CRP呈负相关(r=0.654、0.517、0.577,P0.01)。CD8~+CD28~+Tc细胞比例及CD8~+CD28~+/CD8~+CD28~-与BASDAI呈正相关(r=0.276、0.246,P0.05)。结论:降低AS患者外周血CD4~+CD25~(high)CD127~(low)和CD8~+CD28~-Treg细胞比例、提高炎症细胞因子水平可能在AS疾病发生发展中起重要作用。     

2型糖尿病患者外周血CD8+CD25+Foxp3+Treg细胞检测及意义

目的探讨外周血CD8~+CD25~+Foxp3~+Treg(CD8~+Treg)细胞比例在2型糖尿病(T2DM)疾病过程中的作用。方法选取T2DM患者90例。根据尿微量白蛋白(MAL),分为45例T2DM伴正常蛋白尿患者(NMAU,MAL30 mg/24 h),45例T2DM伴微量蛋白尿患者(MAU,MAL 30～300 mg/24 h),同时选择门诊体检健康人员45名作为对照组(HC)。通过特定蛋白仪检测患者mAlb浓度;流式细胞仪检测CD8~+Treg细胞比例;Luminex200检测血浆白细胞介素(IL)-8、1β、6和肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度。结果与HC组[4.43(3.26～5.75)%]相比,NMAU组[4.06(3.15～5.43)%]和MAU组[3.52(2.30～4.87)%]患者CD8~+Treg细胞比例降低,且MAU组降低更明显(P0.05);与HC组相比,MAU组和NMAU组患者血浆细胞因子TNF-α、IL-8、IL-6和IL-1β浓度均升高(P0.05);MAU组患者CD8~+Treg比例与血清细胞因子TNF-α(r=-0.444 8,P0.01)、IL-8(r=-0.341 2,P0.05)、IL-6(r=-0.365 3,P0.05)和IL-1β(r=-0.319 2,P0.05)呈负相关;Logistic回归分析显示CD8~+Treg对T2DM患者可能具有保护作用。结论通过调控T2DM患者外周血CD8~+Treg细胞比例,有可能减缓糖尿病的进程。     

浆细胞性乳腺炎患者外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞变化

目的:观察浆细胞性乳腺炎(Plasma cell mastitis,PCM)患者外周血CD4+ CD25+ CD127-调节性T细胞(CD4+CD25+ CD127-Treg)数量和功能变化,以探讨PCM免疫病理机制.方法:将58例浆细胞乳腺炎患者分成三组:其中急性组13例(22％)、亚急性组25例(43％)和慢性组20例(34％).并设正常对照组20例及乳腺癌对照组16例.以流式细胞术检测各型PCM患者外周血中CD4 +CD25+ CD127 Treg细胞百分率;实时荧光定量RT-PCR检测转录因子Foxp3表达及ELISA检测TGF-β水平.结果:三组PCM组与正常组相比,外周血CD4+ CD25+ CD127 Treg数量,外周血PBMC中Foxp3表达及血浆TGF-β水平均下降(P＜0.05),其中急性PCM组下降最为明显(P＜0.01),乳腺癌组三项指标均升高(P＜0.05).结论:浆细胞性乳腺炎患者的CD4+ CD25+ CD127-Treg数量及功能有所下降.     

强直性脊柱炎患者外周血CD4+调节性T细胞的变化及意义

目的 探讨强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者外周血中CD4+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的表达、功能及意义.方法 采用流式细胞术检测78例AS患者和50例健康志愿者外周血中CD4+CD25+CD127lo/- Treg、细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)和NK细胞,采用ELISA法检测血清中β型转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平.从患者外周血单个核细胞中磁珠分选出CD4+CD25+ Treg细胞,混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture, MLC)分析其免疫抑制功能.结果 AS活动期患者外周血中CD4+CD25+CD127lo/-Treg占CD4+ T淋巴细胞的百分比为(4.36±1.21)%,MLC中CD4+CD25+ Treg抑制同种异体T淋巴细胞增殖功能低下,与其Treg分泌TGF-β减少相关,CD4+ Treg含量及功能均低于健康志愿者(P<0.05).AS患者外周血中CD4+CD25+CD127lo/- Treg水平与TGF-β呈正相关,与TNF-α呈负相关.结论 AS患者外周血中Treg表达水平低,且存在功能缺陷,导致体内诱导免疫耐受机能不足,可能参与AS免疫发病.     

支气管哮喘患者外周血Th17、CD4~+CD25~+Treg细胞表达特征

目的:探讨外周血Th17和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在支气管哮喘患者中的表达特征。方法:41例慢性持续期哮喘患者,分为间歇-轻度组(n=23)和中重度组(n=18),行肺功能检查和哮喘控制问卷(ACQ)调查,20例正常人作为对照。通过流式细胞术检测外周血Th17和CD4+CD25+Treg细胞的比例。ELISA检测血浆以及植物血凝素刺激24小时后外周血单个核细胞(PBMC)上清液中的IL-17、IL-10、TGF-β水平。结果:中重度哮喘组外周血Th17细胞比例及血浆IL-17水平高于间歇-轻度哮喘和正常人组,而外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及血浆IL-10、TGF-β水平则降低。中重度哮喘组PBMC上清液中IL-17水平增高。哮喘患者FEV1(%预计值)与Th17细胞及血浆IL-17表达成负相关,与CD4+CD25+Treg表达成正相关。ACQ平均得分与Th17细胞和血浆IL-17表达成正相关,与外周血CD4+CD25+Treg表达成负相关。结论:中重度哮喘中外周血Th17细胞应答增强,而CD4+CD25+Treg细胞缺乏,哮喘的严重程度及症状控制与外周血Th17/Treg免疫应答失衡密切相关。     

卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的测定以及与细胞因子关系的研究

目的 探讨卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在CD4+T细胞的分布,分析CD4+CD25+Treg与卵巢癌患者临床病理与生理特征的关系;研究CD4+CD25+Treg与TH1、TH2类细胞因子的关系.方法 流式细胞仪测定53例卵巢癌患者、44例卵巢良性疾患、45例健康人外周血CD4+CD25+Treg比例,TH1类细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和TH2类细胞因子IL-4、IL-6、IL-10的水平.结果 (1)卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Treg(21.95%±6.80%)明显高于卵巢良性疾患(12.57%±5.12%)和健康对照组(10.77%±3.02%),P均＜0.001;良性疾患与健康对照组比较差异无统计学意义;手术前的卵巢癌患者CD4+CD25+Treg(21.95%±6.80%)明显高于手术后的患者(16.41%±5.84%),P＜0.001.(2)CD4+CD25+Treg与患者的年龄、职业没有关系;卵巢浆液性腺癌CD4+CD25+Treg为23.58%±7.08%,明显高于混合性瘤(18.30%±5.46%),差异有统计学意义(P＜0.05);与黏液性腺癌(22.06%±6.08%)差异无统计学意义;Ⅳ期卵巢癌患者CD4+CD25+Treg比值(28.79%±4.26%)明显高于Ⅲ期(20.01%±6.27%)和Ⅰ～Ⅱ期患者(17.97%±4.50%),P均＜0.001;CD4+CD25+Treg与肿瘤的远处转移(23.61%±6.52%)、淋巴结转移(24.05%±6.74%)、腹水的形成(24.06%±6.73%)有关(P＜0.05);低分化的卵巢癌患者CD4+CD25+Treg(25.05%±5.96%)与高分化患者(16.03%±0.80%)比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而与中分化(21.82%±6.53%)比较差异无统计学意义.(3)卵巢癌患者TH1类细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ的水平[(0.87±0.25)pg/ml、(1.09±0.34)pg/ml)、(7.56±2.25)pg/ml]明显低于健康对照[(2.38±1.09)pg/ml、(3.28±1.36)pg/ml、(19.04±4.59)pg/ml],P均＜0.001.而TH2类细胞因子IL-6的水平[(86.28±55.92)pg/ml]与对照组[(5.04±2.69)pg/ml)]比较显著升高(P＜0.001),而IL-4[(4.86±2.94)pg/ml]、IL-10[(1.07±2.30)pg/ml与健康人[(5.42±3.59)pg/ml、(4.46±2.31)pg/ml]之间差异无统计学意义.通过相关分析,卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Treg与TH1类细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ存在负相关,相关系数分别为r=-0.658,P＜0.05;r=-0.591,P＜0.05;r=-0.695,P＜0.05.与TH2类细胞因子IL-6存在正相关,相关系数r=0.784,P＜0.001.结论 (1)卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Treg数量显著增加,这可能是卵巢癌患者免疫功能下降的一个重要原因;(2)CD4+CD25+Treg数量与肿瘤的分期、组织学类型、分化程度、浸润、淋巴结转移、腹水的形成有关.(3)卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Treg与TH1类细胞因子之间存在着负相关,而与TH2类细胞因子IL-6之间存在正相关.CD4+CD25+Treg可能通过TH1、TH2类细胞因子的调节发挥对效应性T细胞的抑制作用.     

洛伐他汀对急性冠脉综合征患者CD4~+ CD25~+ CD127~- T细胞的影响

目的:探讨洛伐他汀治疗急性冠脉综合征(ACS)患者时外周血CD4+ CD25+ CD127-调节性T细胞(Treg)数量的变化及炎症反应状况。方法:将40例ACS患者随机分为常规治疗组(20例)和常规治疗加洛伐他汀治疗组(20例),分别于治疗前及治疗4周后取外周血,用流式细胞术检测各组CD4+ CD25+ CD127-细胞的百分率;并用ELISA测定循环血中细胞因子水平。结果:与正常对照组比较,ACS患者Treg百分比明显偏低(P<0.01),血清C反应蛋白(CRP)水平较高,转化生长因子-β(TGF-β)和白介素-10(IL-10)水平则偏低。治疗4周后,常规加洛伐他汀治疗组患者Treg百分比明显上升(P<0.01),血清TGF-β和IL-10水平升高,CRP明显下降;而常规治疗组无明显变化;Treg数量与TGF-β和IL-10水平呈正相关,而与CRP水平呈负相关。结论:Treg数量减少可能是ACS患者炎症反应增强和斑块失稳定的重要机制;他汀类药物的抗炎作用及稳定斑块作用可能通过影响Treg的途径实现。     

卵巢癌患者外周血CD4+CD25hiCD127lo调节性T细胞格局变化及临床意义

目的:观察卵巢癌患者外周血中CD4+CD25hiCD127lo调节性T细胞格局变化及其相关免疫细胞因子TGF-β1、IL-10的变化及与临床病理特征之间的关系,探讨其临床意义.方法:采用流式细胞术(FCM)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测70例卵巢癌患者、50例卵巢良性疾患及70例健康者外周血单个细胞中调节性T细胞的比率和血浆TGF-β1、IL-10的水平.结果:①卵巢癌患者外周血中CD4+CD25hiCD127loTreg调节性T细胞占CD4+细胞的比例为6.32%±1.46%(n=70),显著高于卵巢良性疾患4.03%±1.25%(n=50)和健康对照组3.21%±0.96%(n=70),均P＜0.01.术后患者CD4+CD25hiCD127loTreg比率与术前比较无明显差异.②卵巢癌患者血浆中TGF-β1、IL-10水平(256.68±56.34) pg /ml、(28.24±3.12) ng/ml,明显高于良性疾患(156.48±43.68) pg /ml、(20.58±2.39) ng/ml与健康对照组(130.24±35.60) pg/ml、(18.38±2.98) ng/ml,有统计学差异,分别P＜0.001,P＜0.01.③术前卵巢癌患者外周血CD4+CD25hiCD127loTreg比率、血浆中TGF-β1、IL-10水平与患者的临床分期、淋巴结转移以及远处转移有关,P＜0.05～P＜0.001.④相关分析显示,卵巢癌患者外周血 CD4+CD25hiCD127loTreg比率与血浆中TGF-β1水平、IL-10水平呈正相关,r=0.734,P＜0.01;r=0.665,P＜0.01.结论:①CD4+CD25hiCD127loTreg在卵巢癌患者外周血中表达显著增高,这可能是卵巢癌患者免疫功能下降的一个重要原因,并与临床病理特征存在显著相关性;②卵巢癌患者血浆中抑制性细胞因子TGF-β1、IL-10水平明显升高,并与临床病理特征存在显著相关性;③CD4+CD25hiCD127loTreg与TGF-β1、IL-10水平存在正相关,CD4+CD25hiCD127loTreg可能通过产生抑制性细胞因子TGF-β1、IL-10 对效应性T细胞发挥抑制作用.     

细粒棘球蚴感染者中Tim-3~+CD4~+CD25~+Treg细胞及相关因子的表达

目的通过检测细粒棘球蚴感染者外周血中Tim-3~+CD4~+CD25~+Treg细胞及相关因子的表达水平,探讨细粒棘球蚴感染者中Tim-3与CD4+CD25+Treg细胞的关系及Tim-3+CD4+CD25+Treg细胞对该疾病持续性发展的作用。方法选取30例细粒棘球蚴感染者和30例健康对照人群,用流式细胞术检测感染组和对照组外周血中Tim-3+CD4+CD25+Treg细胞的比例变化;实时荧光定量PCR法分别检测感染组和对照组外周血单个核细胞中Tim-3和Foxp3 mRNA的表达;ELISA法检测感染组和对照组血清中IL-10和TGF-β的水平;Pearson相关法分析感染者外周血中Tim-3 mRNA的表达与Foxp3 mRNA的相关性以及Tim-3+CD4+CD25+Treg细胞与IL-10和TGF-β的相关性。结果与对照组相比,细粒棘球蚴感染组外周血中Tim-3~+CD4~+CD25+Treg细胞的比例均显著升高(P0.001);外周血单个核细胞中Tim-3和Foxp3 mRNA水平显著升高(P0.001);血清中IL-10(P0.001)和TGF-β(P=0.046)水平显著升高;细粒棘球蚴患者外周血Tim-3 mRNA与Foxp3 mRNA表达水平呈正相关;Tim-3+CD4+CD25+Treg细胞与IL-10和TGF-β的水平均正相关。结论细粒棘球蚴感染者中Tim-3在CD4+CD25+Treg细胞上的过表达可能会促进CD4+CD25+Treg细胞的产生及其抑制功能的发挥,从而促使感染的持续性发展。     

结核性胸膜炎患者外周血及胸水中CD4~+ CD25~+ CD127~-调节性T细胞表达水平的临床意义

目的:探讨结核性胸膜炎外周血和胸水中CD4+ CD25+ CD127-调节性T细胞表达水平及其临床意义。方法:收集住院收治的初治结核性胸膜炎患者30例和非结核性胸膜炎患者20例,另选择健康体检人员20例为正常对照组。流式细胞术检测外周血及胸水中CD4+ CD25+ CD127-调节性T细胞的百分率。结果:结核性胸膜炎组外周血中CD4+ CD25+ CD127- Treg细胞占CD4+T细胞总数的百分比显著高于正常对照组和非结核性胸膜炎组(P<0.05)。结核性胸膜炎组胸水中CD4+ CD25+ CD127- Treg细胞占CD4+T细胞总数的百分比明显高于非结核性胸膜炎组(P<0.05)。结核性胸膜炎组患者在规则治疗1、3、7、14 d时,外周血和胸水中CD4+ CD25+ CD127- Treg细胞占CD4+T细胞总数的百分比均逐渐下降,外周血中CD4+ CD25+ CD127- Treg细胞占CD4+ T细胞总数的百分比于治疗3 d时显著低于入院时水平(P<0.05),胸水中CD4+ CD25+ CD127- Treg细胞占CD4+ T细胞总数的百分比于治疗7 d时显著低于入院时水平(P<0.05)。结论:CD4+ CD25+ CD127-调节性T细胞参与了结核性胸膜炎的发病机制,且可作为判断肺结核患者的免疫状态、指导用药、疗效观察的指标。     

肝脏泡型包虫病患者外周血中调节性T细胞及IL-35的表达水平

目的探讨肝脏泡型包虫病患者外周血中调节性T细胞(Treg)及相关细胞因子白介素-35(IL-35)的表达及意义。方法采用流式细胞技术、酶联免疫吸附法(ELISA)对2017年1月至2017年9月四川省人民医院的17例肝脏泡型包虫病患者和17例健康志愿者外周血中Treg细胞和IL-35表达进行检测。结果肝脏泡型包虫病患者外周血中Treg细胞占CD4+~T细胞的比例(CD4~+CD25~+CD127~(low)/CD4~+T cells)为4.68%~10.30%(7.97%±1.47%),对照组为5.09%~9.25%(6.65%±0.99%),2组差异有统计学意义(P0.05)。肝脏泡型包虫病患者外周血IL-35水平为66.24~101.23 pg/ml(81.26 pg/ml±10.42 pg/ml),对照组IL-35为19.59~79.64 pg/ml(42.61 pg/ml±17.80 pg/ml),差异有统计学意义(P0.05)。肝脏泡型包虫病患者外周血IL-35与Treg细胞同步升高,并且呈正相关(R=0.566 7,P=0.010 1)。结论肝脏泡型包虫病患者外周血中Treg细胞和IL-35表达水平上调,两者可能与泡型包虫病的发生发展有关。     

丙种球蛋白输注对川崎病患儿外周血CD4~+CD25~+调节T细胞与淋巴细胞亚群分布的影响

目的探讨丙种球蛋白输注对川崎病患儿外周血CD4~+CD25~+调节T细胞(Treg)与淋巴细胞亚群分布的影响及临床意义。方法流式细胞术检测40例川崎病患儿和30例体检健康儿童外周血中CD4~+CD25~+Treg细胞的表达水平以及108例川崎病患儿和41例体检健康儿童外周血中淋巴细胞亚群分布。ELISA法检测川崎病患儿血浆中TGF-β1浓度。108例川崎病患儿中有30例收集到对应的丙种球蛋白(IVIG)治疗后全血,流式细胞术检测CD4~+CD25~+Treg、TGF-β1及淋巴细胞亚群在川崎病患儿丙种球蛋白(IVIG)治疗前后表达水平的差异。结果与健康体检组相比,川崎病患儿CD4~+CD25~+Treg细胞及血浆TGF-β1的表达水平明显降低,外周血CD3+、CD8~+T细胞及NK细胞的表达水平明显降低,CD4~+T细胞、B细胞及CD4~+/CD8~+水平明显增高,差异均有统计学意义(均P0.01)。与IVIG治疗前相比,川崎病患儿IVIG治疗后外周血CD4~+CD25~+Treg细胞及血浆TGF-β1的表达水平明显增高(均P0.05),外周血CD3+、CD8~+T细胞及NK细胞的表达水平明显增高(均P0.05),CD4~+T细胞、B细胞及CD4~+/CD8~+水平明显降低(均P0.05)。治疗后患儿外周血CD4~+CD25~+Treg水平、血浆TGF-β1浓度及淋巴细胞亚群表达水平与健康对照相比无差异(P0.05)。结论 Treg细胞与淋巴细胞比例失常是导致儿童川崎病免疫紊乱的重要原因。检测CD4~+CD25~+调节T细胞及淋巴细胞亚群分布对评估川崎病患儿的细胞免疫状况,辅助诊断和指导治疗具有重要的临床价值。     

HIV感染者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+/CD127low/-调节性T细胞表达水平对疾病进展的影响

目的:探讨HIV感染者外周血中CD4+ CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)、CD4+ CD25+ CD127low/-Treg的水平及其与其他免疫指标的关系.方法:采集68例未经抗HIV治疗的HIV/AIDS患者(长期不进展组即LTNP组29例、典型进展的HIV感染组27例、AIDS组12例)及20例健康成人的外周抗凝全血,经免疫荧光染色,应用流式细胞仪分析CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞及CD4+CD25+Foxp3+/CD127low/-Treg的含量,并进行统计学分析.结果:除CD8+T细胞外,HIV/AIDS患者外周血中CD4+T细胞、NK细胞、CD4 +/CD8+结果均明显低于健康对照组(P＜0.05);随着疾病的进展,LTNP组、HIV组、AIDS组CD4+T细胞百分比、绝对值计数,CD8+T细胞绝对计数,NK细胞绝对计数,CD4 +/CD8+比值逐渐下降,而CD8+T细胞百分比逐渐上升.对CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg与CD4+ CD25+CD127low/-Treg百分含量、绝对计数进行多重比较发现,各组间CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg与CD4-CD25+ CD127low/-Treg所占CD4+T细胞百分含量的差异均有统计学意义(P＜0.05),并且随着疾病的发展,CD4+ CD25+ Foxp3+/CD127low/ Treg细胞百分含量逐渐上升,LTNP组与健康对照组之间、HIV组和AIDS组之间CD4+ CD25+Foxp3+/CD127low/ Treg绝对计数差异无统计学意义(P＞0.05),其余各组间的差异均有统计学意义(P＜0.05),并且随着疾病的发展,CD4+ CD25+ Foxp3-/CD127low/-Treg绝对计数逐渐下降.结论:CD4+ CD25+ Foxp3 +/CD127low/-Treg在HIV持续感染的免疫发病机制中有一定作用.     

慢性HBV 感染者IFN-γ+ NK 细胞与Treg 及IL-10 的关系研究

目的:探讨慢性HBV感染者外周血自然杀伤(NK)细胞分泌的IFN-γ与CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)及IL-10等细胞因子含量的关系。方法:收集119例慢性HBV感染肝病患者,其中CHB患者57例,LC患者40例,HCC患者22例,另收集同期健康志愿者(HC) 27例。流式细胞仪检测外周血Treg、NK细胞及IFN-γ~+NK细胞比例,CBA细胞因子(IL-10、IFN-γ、IL-2、IL-4、TNF及IL-5)含量,全自动生化分析仪检测血清ALT、AST水平。结果:CHB、LC、HCC患者外周血Treg百分比和血清中IL-10水平均显著高于HC组, CHB、HCC患者外周血Treg绝对数值显著高于HC组(P0.05),CHB、LC及HCC患者Treg与IL-10呈正相关(P0.01,r=0.564;P0.05,r=0.426;P0.05,r=0.476)。NK细胞绝对数、IFN-γ~+ NK细胞百分比及血清中IFN-γ含量在CHB、LC、HCC组中均显著低于HC组(P0.01)。同时CHB患者组IFN-γ~+NK细胞比例与Treg细胞比例、血清IL-10水平均负相关(P0.05,r=-0.618;P0.05,r=-0.635),血清IFN-γ水平亦与Treg负相关(P0.01,r=-0.342);LC患者中,外周血中NK细胞绝对数值与Treg细胞比例负相关(P0.05,r=-0.317),IFN-γ~+NK细胞比例与血清中IL-10水平负相关(P0.05,r=-0.514);HCC患者组IFN-γ~+NK细胞比例与Treg细胞比例、血清IL-10水平均负相关(P0.01,r=-0.676;P0.01,r=-0.615)。结论:CHB患者及其进展疾病如LC和HCC外周血IFN-γ~+NK细胞比例与Treg比例、血清IL-10水平负相关,提示Treg和IL-10参与抑制IFN-γ~+ NK细胞可能是慢性HBV感染及其进展的重要因素之一,因此逆转Treg及IL-10所致的免疫耐受,将会有力提高NK细胞抗HBV慢性感染及恶性进展。     

人CD4+ CD25- CD45RA+ T 细胞和CD4+ CD25- T 细胞诱导获得iTreg 细胞的方法学研究

目的:分析比较CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞和CD4~+CD25~-T细胞在普通/炎性(加入IL-1β和IL-6)条件下,由TGF-β、IL-2和CD3/CD28磁珠共刺激诱导生成i Treg细胞的效率,并对比各组i Treg细胞相关蛋白和细胞因子表达水平变化及其免疫抑制能力的差异。方法:通过Ficoll细胞分离液分离出淋巴细胞,利用MACS分选机,结合CD4阴选磁珠筛出CD4阳性的T细胞,最后再提取其中CD45RA~+和CD25~-T细胞。体外实验中,在普通/炎性条件下诱导i Treg生成,3、6 d通过流式观察各组i Treg细胞的诱导情况及相关分子的表达变化趋势。体内实验分为:CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞诱导的i Treg组、CD4~+CD25~-T细胞诱导的i Treg组和空白对照组,通过观察i Treg对GVHD小鼠模型的免疫调节,分析其免疫抑制能力的差异。结果:CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞组和CD4~+CD25~-T细胞组普通条件下i Treg产率分别为(96. 00±0. 21)%和(60. 23±0. 50)%,炎性环境下为(81. 97±1. 29)%和(56. 80±0. 43)%,前者都显著高于后者(P0. 001)。各组i Treg细胞中CTLA-4、TGF-β和IL-10的表达未见明显差异,而炎性因子IL-2、IL-17前者均低于后者(P0. 001),前者IFN-γ也低于后者(P0. 05)。体内实验表明i Treg均具有免疫调节能力,但CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞组诱导的i Treg能力强于后者。结论:CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞组和CD4~+CD25~-T细胞组都可以成功诱导i Treg细胞,但是前者在普通和炎性微环境下诱导效率高于后者,免疫调节能力也优于后者。     

血红素加氧酶-1上调CD4~+ CD25~+ Treg foxp3表达以增强Treg的免疫抑制功能

本研究探讨血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)诱导CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)foxp3表达,增加IL-10分泌,提高CD4+CD25+Treg的免疫抑制功能。选用磁珠分离正常BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+Treg,转染含HO-1质粒pcDNA3HO-1,或用血红素(hemin)、锡-原卟啉(Sn-protoporphyrin,SnPP)干预,培养48 h。用卵清蛋白致敏、激发BALB/c小鼠建立哮喘模型,并在致敏、激发阶段分别经血红素和SnPP干预。用Real-Time PCR和Western blot方法分别测定培养细胞内HO-1、foxp3 mRNA及蛋白量;ELISA方法分别测定细胞上清液和动物血清中IL-10、TGF-β水平;用磁珠分离哮喘动物脾脏CD4+CD25+Treg进行功能抑制试验。结果显示:经pcDNA3HO-1和血红素上调CD4+CD25+Treg HO-1表达,foxp3表达及蛋白水平相应增加,上清液IL-10水平明显升高。而OVA致敏、激发的哮喘小鼠模型,经血红素干预后,血清IL-10分泌亦增多,CD4+CD25+Treg功能抑制作用显著增强。该结果表明HO-1诱导CD4+CD25+Treg特异性转录因子foxp3表达,促进IL-10分泌,增强CD4+CD25+Treg的调节功能,具有显著的免疫抑制作用。     

颅内动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞检测及意义

目的探讨颅内动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞(Treg细胞)的变化及意义。方法入选50例颅内动脉粥样硬化性脑梗死患者,同时以正常人群(30例)为对照。用流式细胞分析法测定外周血中CD4+CD25+FOXP3+占CD4+细胞的比例,定量PCR检测转录因子FOXP3的mRNA水平,ELISA检测外周血血浆Treg相关细胞因子IL-10、IL-6和TGF-β的表达。结果颅内动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血Treg/CD4+T细胞比例和FOXP3的mRNA水平显著低于正常人群组。颅内动脉粥样硬化性脑梗死患者的IL-10和TGF-β水平低于正常人群组,IL-6水平高于正常人群组。结论颅内动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血Treg比例减少,对炎症反应的抑制作用减弱,由此可以推测Treg细胞参与了颅内动脉粥样硬化性脑梗死的发生发展。     

流式细胞术不同设门方法对CD4+CD25+调节性T细胞的检测方法比较

目的 比较CD4+CD25hi、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127-/low 3种设门方法对CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)的界定效果.方法 完全随机法选择33例本院健康体检者,分别采用CD4+CD25hi、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127-/low设门的方法进行检测.结果 (1)CD4+CD25hi、CD4+CD25+FoxP3+设门方法对CD4+CD25+Treg细胞的检测结果差异无统计学意义[(6.85±2.72)%,(6.69±2.30)%,t=0.270,P=0.788],相关性检验显示,两者呈正相关(r=0.866,P＜0.001);(2)CD4+CD25+CD127-/low设门方法的细胞检测结果[(8.07±2.18)%]高于CD4+CD25hi和CD4+CD25+FoxP3+设门方法(t=2.055,P=0.043;t=2.325,P=0.022),相关性检验显示,均呈正相关(r=0.615,P＜0.001;r=0.683,P＜0.001);(3)CD4+CD25hi细胞群中FoxP3+细胞占(57.11±12.42)%,CD4+CD25hi细胞群中FoxP3+细胞占所有FoxP3+细胞的比例为(54.4±9.0)%.结论 CD4+CD25hi设门方法可用于人外周血CD4+CD25+Treg细胞的检测,CD4+CD25+CD127-/low设门方法可应用于CD4+CD25+Treg细胞的纯化.     

RA患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比例及中性粒细胞表面CD200R1的分析

本研究探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的百分含量和中性粒细胞表面CD200R1的表达情况,并探讨其临床意义。采用流式细胞术分别检测RA患者和健康对照组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的百分含量和中性粒细胞表面CD200R1的阳性表达率。ELISA检测其血清中单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)和CCR2的表达水平。实验结果显示:RA患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞的比例明显低于健康对照组,中性粒细胞表面CD200R1的阳性表达率明显高于健康对照组,RA患者血清中MCP-1与CCR2的表达水平明显高于健康对照组。以上结果提示CD200/CD200R1信号异常,CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞数量减少可能为RA的发病机制之一,调控CD200/CD200R1信号和CCR2~+Treg细胞输注可能成为RA治疗的新靶点。