NLRP3炎症小体及其下游分子在幽门螺杆菌感染小鼠的表达

目的 研究NLRP3炎症小体信号通路相关分子在幽门螺杆菌(H.pylori)感染C57BL/6小鼠胃组织和血清中的表达情况,初步探讨NLRP3炎症小体信号通路在H.pylori致病中的作用.方法 将C57BL/6小鼠分为H.pylori感染组和PBS对照组,于感染后不同时间点处死小鼠,RT-PCR检测小鼠胃组织中NLRP3炎症小体和下游信号通路分子mRNA表达,Western blot法检测小鼠胃组织中caspase-1蛋白表达,ELISA测定小鼠血清中IL-1β、IL-18和IL-33含量.结果 与对照组相比,H.pylori感染组小鼠胃黏膜均呈慢性炎症改变,且随时间延长,炎症程度逐渐加重.NLRP3炎症小体信号通路相关分子mRNA及caspase-1蛋白表达水平显著升高,血清中IL-1β、IL-18、IL-33的含量均显著增高.结论 H.pyori感染可以激活NLRP3炎症小体信号通路.     

空肠弯曲菌血红素氧化酶ChuZ促进巨噬细胞NLRP3炎性小体激活

目的探究空肠弯曲菌血红素氧化酶ChuZ对巨噬细胞炎性小体激活的影响。方法分离野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞,诱导分化为骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage,BMM),分别用WT C.jejuni、△ChuZ C.jejuni以及对照刺激BMM 6 h,q RT-PCR和ELISA检测各组IL-1β的表达,q RT-PCR和Western blot检测各组NLRP3、ASC、caspase-1的表达。分离野生型C57BL/6和NLRP3-/-小鼠骨髓细胞,诱导分化为WT BMM、NLRP3-/-BMM,分别用WT C.jejuni和△ChuZ C.jejuni刺激BMM 6 h,ELISA检测各组IL-1β的表达。分离野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞,诱导分化为BMM,分别用WT C.jejuni、△ChuZ C.jejuni刺激BMM、BMM+MCC950(NLRP3炎性小体抑制剂)6 h,ELISA检测各组IL-1β的表达。结果与对照组相比,WT C.jejuni、△ChuZ C.jejuni均能显著促进BMM IL-1β、NLRP3、procaspase-1、caspase-1的表达(P0.01);△ChuZ C.jejuni组与WT C.jejuni组相比,IL-1β、NLRP3、procaspase-1、caspase-1的表达显著降低(P0.01)。与WT BMM组相比,WT C.jejuni、△ChuZ C.jejuni分别刺激NLRP3-/-BMM后,IL-1β表达均显著降低(P0.01)。同时,与control组相比,WT C.jejuni、△ChuZ C.jejuni刺激+MCC950组后,IL-1β表达均也显著降低(P0.01)。结论空肠弯曲菌血红素氧化酶ChuZ与巨噬细胞中NLRP3/ASC/caspase-1炎性小体的激活程度相关,并促进巨噬细胞中IL-1β的表达,参与了空肠弯曲菌对宿主的炎性作用。     

金黄色葡萄球菌α-toxin(Hla)促进皮肤组织中IL-19表达上调的作用机制研究

目的探究金黄色葡萄球菌α-toxin(Hla)促进皮肤组织中IL-19表达上调的作用机制。方法采用WT S.Aureus、△Hla S.aureus(Hla缺失菌株)以及PBS感染Balb/c小鼠背部皮肤,收集感染后第1、3、7天的皮肤组织,HE染色检测组织炎性病理损伤,q RT-PCR和ELISA分别检测IL-19、IL-1β的m RNA和蛋白水平的表达。分离小鼠骨髓的中性粒细胞,分别用WT S.Aureus、△Hla S.aureus以及meida(不含菌液的培养基)刺激6 h后,q RT-PCR、ELISA和Western blot检测IL-1β的表达。不同浓度IL-1β刺激角质形成细胞PAM 2-12后,q RT-PCR和ELISA分别检测IL-19的表达。结果△Hla S.aureus组与WT S.aureus组相比,其皮肤损伤的面积减小,炎性细胞浸润和脓肿形成减少。同时q RT-PCR和ELISA检测发现,△Hla S.aureus组与WT S.aureus组相比,IL-19的m RNA和蛋白表达水平显著降低(P0.01)。体外中性粒细胞刺激发现,△Hla S.aureus组与WTS.aureus组相比,IL-1β蛋白表达水平显著降低(P0.01)。体外IL-1β刺激角质形成细胞PAM 2-12发现,与不刺激组相比,IL-19的m RNA和蛋白表达水平显著增加(P0.01),并呈剂量依赖性。结论金黄色葡萄球菌分泌的α-toxin能够作用于中性粒细胞,促进了IL-1β的表达,IL-1β的过表达作用于皮肤的角质形成细胞,从而促进了IL-19的上调,可能参与了银屑病的发生与发展。     

幽门螺杆菌经ROS通路激活NLRP3炎症复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18

目的:研究幽门螺杆菌(H.pylori)对NLRP3炎症复合体活化的影响及活性氧(ROS)在其中的作用。方法:将THP-1细胞与H.pylori SS1共孵育,于不同时间点收集细胞及上清,ELISA检测细胞上清中IL-1β和IL-18的含量;流式细胞术(FCM)检测胞内ROS的产生;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测细胞中NLRP3、caspase-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中caspase-1活性亚单位p10的表达;检测ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)及NLRP3特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)预处理细胞后相关信号分子的表达。结果:H.pylori SS1能以时间依赖性和剂量依赖性方式诱导THP-1细胞产生IL-1β、IL-18和胞内ROS;H.pylori SS1刺激能使THP-1细胞NLRP3和caspase-1 mRNA转录水平显著升高;NAC及NLRP3-siRNA预处理THP-1细胞能显著降低H.pylori SS1诱导的NLRP3炎症复合体相关成份的表达及细胞因子的分泌。结论:H.pylori SS1株通过ROS途径激活NLRP3炎症复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18,这可能与机体的先天免疫防御及细菌的致病作用相关。     

NLRP3炎症小体在小鼠甲型流感病毒感染继发MRSA肺炎中的表达变化

目的:探索NLRP3炎症小体在小鼠甲型流感病毒(甲流病毒)HIN1感染继发耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)肺炎中的表达变化。方法:选取C57BL/6小鼠15只,分为空白对照组、MRSA组(MRSA滴鼻感染24 h)和H1N1+MRSA组(甲流病毒H1N1滴鼻预感染6 d后联合MRSA滴鼻感染24 h)。检测小鼠肺组织NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平,并检测白细胞介素1β(IL-1β)在肺组织中的mRNA水平及在血清中的浓度。观察小鼠肺组织病理并分析小鼠IL-1β血清浓度与体重下降率的相关性。结果:MRSA组NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平与空白对照组比均无明显差异(P0.05),但IL-1β的mRNA表达水平及血清浓度均明显高于空白对照组(P 0.01)。H1N1+MRSA组NLRP3、caspase-1的mRNA及蛋白表达水平,及IL-1β的mRNA表达水平和血清浓度均明显高于空白对照组(P 0.01)。H1N1+MRSA组NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于MRSA组(P 0.01),但IL-1β的mRNA表达水平及血清浓度均明显低于MRSA组(P 0.01)。MRSA组肺组织病理呈炎症改变,H1N1+MRSA组肺组织病理改变较MASA组更严重。MRSA组及H1N1+MRSA组小鼠体重下降率与IL-1β血清浓度均成负相关(P 0.05)。结论:MRSA感染引起IL-1β的产生和释放不依赖NLRP3炎症小体,而甲流病毒预感染虽然激活了NLRP3炎症小体,但总体降低了机体抗MRSA免疫的IL-1β的表达及分泌,该效应可能是继发于甲流病毒感染的MRSA肺炎更为严重的机制之一。     

降钙素基因相关肽通过降低炎性小体活性抑制巨噬细胞功能

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)抑制巨噬细胞炎性反应的机制。方法使用不同浓度CGRP处理LPS活化/未活化的小鼠巨噬细胞(RAW264.7),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测巨噬细胞内促炎细胞因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和还原型辅酶Ⅱ氧化酶-活性氧簇-NOD样受体蛋白3(NLRP3)mRNA表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测细胞上清分泌型IL-1β和TNF-α蛋白表达量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内NLRP3蛋白表达水平。结果 CGRP显著降低LPS活化/未活化RAW264.7细胞内炎性因子IL-1β、TNF-α、NLRP3 m RNA水平与蛋白水平,同时,NLRP3下游调节分子Caspase-1的蛋白水平被显著下调。在mRNA水平,NLRP3随CGRP剂量变化而变化的趋势与IL-1β、TNF-α非常相似。结论CGRP抑制巨噬细胞炎性激活,其机制可能与CGRP抑制NLRP3表达与活性有关。     

外周血单核细胞中NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、IL-1β及IL-18表达水平与重症肺炎患者病情严重程度及预后的相关性分析

目的 探讨外周血单核细胞中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体水平与重症肺炎患者病情严重程度及预后的相关性.方法 选取2018年5月至2020年8月期间我院收治的170例肺炎患者作为本研究对象,按病情程度将其分为普通肺炎组(n=90)和重症肺炎组(n=80).另同期选取在我院进行体检的健康人80例作为对照组.记录三组研究对象的一般资料(年龄、性别及体质量指数),三组对象均于入院当天进行采集其空腹8～12 h的外周静脉血,离心提取外周血单个细胞后,采用实时荧光定量PCR仪检测炎性小体NLRP3 mRNA及半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)mRNA水平;采用酶联免疫吸附法测定三组对象外周血的白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-18(IL-18)水平;采用Pearson分析重症肺炎患者NLRP3 mRNA与Caspase-1 mRNA、IL-1β及IL-18的相关性;采用接收者操作特征曲线(ROC)分析上述各临床指标对重症肺炎患者预后的评估效力.结果 与对照组相比,重症肺炎组和普通肺炎组NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、IL-1β及IL-18表达水平均有明显升高(P<0.05),且重症肺炎组NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、IL-1β及IL-18表达水平显著高于普通肺炎组(P<0.05);Pearson相关性分析中,NLRP3 mRNA与Caspase-1 mRNA表达水平、IL-1β及IL-18水平呈正相关(P<0.05);ROC曲线显示,NLRP3预测重症肺炎患者预后的AUC为0.882(95％CI:0.796～0.967,P<0.001),明显高于IL-1β(AUC=0.851)及IL-18(AUC=0.860),此时NLRP3灵敏度为87.332％,特异性为84.251％.结论 在重症肺炎患者外周血中NLRP3、IL-1β及IL-18表达水平异常升高,且病情越严重上述指标表达水平越高,说明NLRP3、IL-1β及IL-18表达水平与重症肺炎患者病情严重程度及预后有密切相关性,可作为重症肺炎发生的早期预测指标,具有一定的临床治疗指导价值.     

ER stress 活化促进星形胶质细胞NLRP3 表达和IL-1β合成分泌

目的:研究Aβ所诱星形胶质细胞NLRP3炎症小体和IL-1β合成分泌的可能调节作用及潜在的分子机制。方法:全营养正常培养新生鼠皮层星形胶质细胞,分别应用ELISA、免疫荧光、Western blot等试验方法检测Aβ对于星形胶质细胞ER stress相关GRP78表达的影响,并通过药理学方法研究ER stress激活对于星形胶质细胞NLRP3蛋白表达以及IL-1β合成分泌的影响。结果:相比对照组,Aβ明显促进ER stress相关蛋白GRP78表达。应用ER stress诱导剂TM处理发现,TM显著促进星形胶质细胞IL-1β、pro-IL-1β以及NLRP3合成表达。另外,应用ER stress阻断剂Sal干预后发现,Sal能明显阻断Aβ所致星形胶质细胞NLRP3炎症小体表达活化。结论:Aβ能够诱导星形胶质细胞ER stress活化,并能通过活化ER stress水平显著促进IL-1β、pro-IL-1β和NLRP3炎症小体表达活化。     

NLRP3炎性小体在呼吸机相关性肺炎患者中的表达及临床意义

目的观察核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors family pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性小体在呼吸机相关性肺炎(ventilator-associated pneumonia,VAP)患者中的表达及临床意义。方法选取2014年1月至2019年1月于本院行机械辅助通气治疗的患者720例作为研究对象。根据是否发生VAP,将其分为VAP组(132例)和非VAP组(588例),按VAP患者病情严重程度将VAP组分为低危组(48例)、中危组(44例)和高危组(40例)。检测各组单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中NLRP3、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)mRNA表达及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)水平,评价NLRP3水平对VAP患者病情严重程度的预测价值。结果VAP组患者外周血NLRP3、Caspase-1 mRNA水平及外周血IL-1β和TNF-α水平显著高于非VAP组(P<0.05);VAP患者中高危组外周血NLRP3、Caspase-1 mRNA水平、急性生理学与慢性健康状况评分(acute physiology and chronic health evaluation score,APACHE II score)及外周血IL-1β和TNF-α水平最高,中危组次之,低危组最低。VAP组患者PBMCs NLRP3 mRNA表达与Caspase-1 mRNA、APACHE II评分、外周血IL-1β和TNF-α水平呈显著正相关(Caspase-1 mRNA:r=0.790,P<0.001;APACHE II评分:r=0.752,P<0.001;IL-1β:r=0.710,P=0.003;TNF-α:r=0.740,P<0.001)。ROC曲线分析显示,NLRP3 mRNA水平曲线下面积为0.862(95%CI 0.799~0.925),其最佳工作点为2.16,此时预测VAP患者病情严重程度的灵敏度和特异性分别为75.21%和81.69%,显著优于APACHE II评分、IL-1β及TNF-α。结论外周血NLRP3炎性小体与VAP的发生、发展密切相关,对于VAP患者病情严重程度的预测,具有一定的临床应用价值。     

NLRP3炎性小体在急性胰腺炎中的表达及临床意义

为探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors family pyrin domain containing 3, NLRP3)炎性小体在急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)中的表达及临床意义,以160例AP患者为研究对象,按AP病情严重程度分为轻症AP(mild AP, MAP)组(52例)、中度重症AP(moderately severe AP, MSAP)组(50例)和重症AP(severe AP, SAP)组(58例);根据患者临床结局,分为存活组(135例)和死亡组(25例)。采用RT-PCR、Western blotting检测各组PBMC中NLRP3、Caspase-1 mRNA及相关蛋白表达,ELISA检测相关细胞因子(IL-1β、IL-18)水平,分别比较各组指标的差异,评价NLRP3水平对AP患者病情严重程度的预测价值。结果显示,不同严重程度AP组间外周血NLRP3 mRNA及蛋白表达,Caspase-1 mRNA及Cleaved-Caspase-10、Cleaved-Caspase-20蛋白表达,外周血IL-1β、IL-18水平比较,差异具有统计学意义(P0.05)。其中SAP组上述指标水平最高,MSAP组次之,MAP组最低。死亡组患者NLRP3、Caspase-1 mRNA表达水平及外周血IL-1β、IL-18水平明显高于存活组(P0.05)。AP患者PBMC NLRP3 mRNA表达与Caspase-1 mRNA、外周血IL-1β和IL-18水平呈正相关(r=0.742,P=0.000;r=0.610,P=0.015;r=0.570,P=0.019),与AP病情严重程度评分[修正CT严重指数(modified CT severity index,MCTSI)评分、Ranson评分及急性生理与慢性健康评估(acute physiology and chronic health evaluation,APACHEⅡ)评分]呈正相关(r=0.705,P=0.004;r=0.690,P=0.006;r=0.638,P=0.012)。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析显示,NLRP3 mRNA的AUC为0.851[95%可信区间(confidence interva,CI) 0.778～0.923],其最佳工作点为2.25,此时预测AP患者病情严重程度的敏感性和特异性分别为76.00%和85.71%,均显著优于IL-1β和IL-18。NLRP3参与了AP患者的机体炎症反应,在对AP患者病情严重程度的预测方面具有一定的应用价值。     

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体、炎性因子、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1与烧伤合并吸入性损伤预后的相关性分析

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体、炎性因子、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)与烧伤合并吸入性损伤的预后相关性。 方法回顾性分析2015年3月至2019年12月北海市人民医院烧伤外科收治的47例烧伤合并吸入性损伤患者的临床资料。根据患者住院期间病情恢复情况分为预后良好组(n＝19)和预后不良组(n＝28)。收集2组患者的临床资料,包括患者性别、年龄、烧伤后入院时间、烧伤面积、烧伤深度;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法分别检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及外周血单个核细胞中NLRP3炎性小体mRNA、Caspase-1 mRNA水平。数据行t检验、χ²检验或Fisher确切概率法、多因素Logistic回归分析及Pearson相关性分析。 结果2组患者性别、年龄、烧伤后入院时间、烧伤面积、烧伤深度、IL-6比较,差异均无统计学意义(P值均大于0.05)。预后良好组患者IL-1β、IL-18、NLRP3炎性小体mRNA、Caspase-1 mRNA表达水平分别为(37.28±6.54) pg/mL、(38.26±8.79) pg/mL、1.75±0.35、1.15±0.27,预后不良组患者IL-1β、IL-18、NLRP3炎性小体mRNA、Caspase-1 mRNA表达水平分别为(49.46±8.87) pg/mL、(76.83±10.58) pg/mL、2.23±0.41、1.94±0.36, 2组比较差异均有统计学意义(t＝5.11、13.10、4.17、8.13,P值均小于0.05);多因素Logistic回归分析显示,IL-1β、IL-18、NLRP3炎性小体mRNA、Caspase-1 mRNA表达水平是导致烧伤合吸入性损伤预后不良的独立危险因素(β＝1.56、0.87、1.05、1.11,P值均小于0.05)。经Pearson相关分析显示,IL-1β、IL-18、NLRP3炎性小体mRNA、Caspase-1 mRNA水平与烧伤合并吸入性损伤预后不良呈正相关(r＝0.42、0.39、0.52、0.56,P值均小于0.05)。 结论IL-1β、IL-18、NLRP3炎性小体、Caspase-1的水平异常升高可作为烧伤合并吸入性损伤患者预后不良的特征指标,可根据上述指标指导临床进行早期救治,有助于降低烧伤合并吸入性损伤患者的病死率。     

幽门螺杆菌黏附素A(HpaA)诱导T细胞高表达IL-21促进胃黏膜损伤

目的研究幽门螺杆菌黏附素A(HpaA)是否能通过诱导T细胞分泌白细胞介素21(IL-21)加剧幽门螺杆菌(H.pylori)感染后的炎症反应及黏膜损伤。方法收集H.pylori感染确诊患者临床内窥镜取得的胃黏膜,以及经根治后再次通过内窥镜取得胃黏膜,通过反转录PCR和Western blot法检测胃黏膜IL-21、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9的mRNA水平及蛋白水平;同时克隆构建表达并纯化HpaA,并取健康未感染成年人外周血单个核细胞(PBMC),磁珠分选获得CD3~+T细胞。使用重组HpaA刺激分选获得的细胞, ELISA检测其上清中IL-21的水平;培养胃黏膜AGS细胞系并使用抗IL-21抗体中和培养液中的IL-21 24 h, Western blot法检测AGS细胞中MMP2及MMP9的蛋白水平。结果 H.pylori感染的胃黏膜中IL-21、MMP2和MMP9蛋白水平显著高于根治后的胃黏膜。重组HpaA蛋白能显著诱导CD3~+ T细胞分泌高水平的IL-21, IL-21处理增加AGS细胞MMP2及MMP9的表达水平;使用抗体阻断IL-21后, MMP2及MMP9的蛋白水平显著降低。结论 HpaA通过诱导T细胞产生IL-21促进H.pylori感染导致的胃黏膜损伤。     

牵张应变对人牙周膜细胞中NLRP3炎症体通路相关因子表达的影响

目的研究牵张应变对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)表达炎症体通路相关因子的影响。方法对体外培养的HPDLCs施加20%牵张应变6、24 h,分别采用实时定量PCR以及免疫印迹技术检测NLRP3、Caspase-1及IL-1β的mRNA及蛋白表达的变化。对体外培养的HPDLCs施加20%牵张应变1、2、4、6 h后,采用酶联免疫吸附实验检测细胞分泌的IL-1β蛋白变化。对照组HPDLCs培养于弹性培养皿中,与动态牵张应变加载组的培养条件一致,但不加载应变。结果 6 h牵张应变作用下HPDLCs中NLRP3、caspase-1及IL-1β的mRNA及蛋白表达较对照组增加(P0.05);24 h牵张应变作用下HPDLCs中NLRP3的蛋白表达水平上调(P0.05);加载牵张应变4、6 h后,细胞培养上清中IL-1β含量随牵张时间的增长而增加(P0.05)。结论20%机械牵张6 h能诱导HPDLCs中NLRP3/Caspase-1炎症体-IL-1β通路因子的表达。     

低温等离子体对胫骨骨折大鼠骨折愈合的作用及机制

目的 探究低温等离子体对胫骨骨折大鼠骨折愈合的作用及可能机制。方法 30只SD大鼠分为假手术组、模型组和低温等离子体照射组，每组10只。HE染色检测大鼠骨折处病理形态改变；ELISA检测大鼠血清ALP水平及骨组织IL-1β和IL-18水平；qRT-PCR和Western blot检测大鼠骨组织成骨相关基因RUNX2、OCN和COL1A1 mRNA和蛋白表达水平；Western blot检测大鼠骨组织NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、cleaved-caspase1和GSDMD表达水平。结果 低温等离子体照射促进胫骨骨折大鼠骨折愈合，增加大鼠血清ALP水平及骨组织成骨相关基因RUNX2、OCN和COL1A1 mRNA和蛋白表达水平，降低大鼠骨组织IL-1β和IL-18水平及NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、cleaved-caspase1和GSDMD表达水平。结论 低温等离子体照射通过抑制NLRP3炎症小体激活促进胫骨骨折大鼠骨折愈合。     

TRIM31 过表达改善脂多糖诱导下神经细胞的炎症损伤

目的:探讨E3泛素连接酶31(TRIM31)对LPS诱导PC12细胞炎症性损伤的保护作用和机制。方法:用不同浓度LPS处理PC12细胞24 h,MTT法检测细胞增殖活性,Western blot检测LPS最佳浓度处理后PC12细胞TRIM蛋白表达水平。将TRIM31过表达质粒(pcDNA3.1-TRIM31)及其阴性对照质粒(pcDNA3.1-NC)转染至PC12细胞,qRT-PCR和Western blot检测细胞TRIM31 mRNA和蛋白表达水平。PC12细胞分为对照组(Control)、LPS组、LPS+NC组和LPS+TRIM31组,分组干预后,ELISA检测细胞上清IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光检测NLRP3蛋白表达,qRT-PCR检测NLRP3、caspase-1 mRNA表达,Western blot检测NLRP3、caspase-1、Cleaved-caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:LPS剂量增加,PC12细胞增殖活性逐渐降低(P0.05),LPS处理可降低PC12细胞TRIM31蛋白表达水平(P0.01),TRIM31过表达,PC12细胞TRIM31 mRNA和蛋白表达水平显著提高(P0.05)。与Control组相比,LPS组细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量、细胞凋亡率及细胞Cleaved-caspase-3和Bax蛋白水平显著提高(P0.05),Bcl-2和TRIM31蛋白水平显著降低(P0.05),NLRP3蛋白荧光强度及NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达水平显著提高(P0.05);与LPS组相比,LPS+TRIM31组细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18含量、细胞凋亡率及细胞Cleaved-caspase-3和Bax蛋白水平显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白水平显著提高(P0.05),NLRP3荧光强度及NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:过表达TRIM31能通过抑制NLRP3炎症小体活化,改善LPS诱导的PC12细胞炎症损伤。     

麻黄定喘汤通过调控NLRP3炎症小体改善咳嗽变异性哮喘豚鼠气道炎症北大核心CSCD

目的:探讨麻黄定喘汤对咳嗽变异性哮喘(CVA)豚鼠气道炎症的影响及其治疗作用是否与NLRP3信号通路有关。方法:选取50只雄性豚鼠随机分为正常组、模型组、麻黄定喘汤低剂量组(5 g/kg)、麻黄定喘汤高剂量组(20 g/kg)和地塞米松组(0.5 mg/kg),每组10只。除正常组外其余建立CVA模型,连续给药4周。末次给药后辣椒素气溶胶激发记录咳嗽次数及咳嗽延迟时间;肺泡灌洗液(BALF)进行Diff-Quik染色检测炎症细胞计数;肺组织进行HE染色、PAS染色、Masson染色观察病理改变;Caspase-1活性试剂盒观察肺组织Caspase-1活性变化;ELISA检测BALF中IL-1β、IL-18、IL-17A、IL-22、IL-23细胞因子含量;Western blot检测肺组织中NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-18、IL-1β蛋白表达水平;免疫组织化学法和免疫荧光法观察NLRP3在气道周围的分布。结果:麻黄定喘汤有效减少咳嗽次数,降低BALF中炎症细胞数及IL-1β、IL-18、IL-17A、IL-22、IL-23炎症细胞因子含量;下调肺组织中NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-18、IL-1β蛋白表达水平;减弱肺组织NLRP3的荧光强度,降低肺组织中Caspase-1活性。结论:麻黄定喘汤可能通过抑制NLRP3炎症小体改善CVA豚鼠气道炎症。     

LPS与ATP共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的建立

目的：探索脂多糖（LPS）和三磷酸腺苷（ATP）共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的最佳条件。方法：采用流式细胞仪F4/80和CD-11b染色检测巨噬细胞纯度,Annexin V-PE/7-AAD双染色法筛选出LPS和ATP共同诱导细胞焦亡的最适浓度及时间。巨噬细胞随机分为control组、LPS组、ATP组和LPS+ATP组;Western blot检测GSDMD、caspase-1、caspase-11、NLRP3、ASC、pro-IL-1β、pro-IL-18和HMGB1蛋白表达水平;ELISA检测培养上清中IL-1β和TNF-α表达水平;透射电镜（TEM）和扫描电镜（SEM）观察巨噬细胞焦亡形态。结果：巨噬细胞的纯度达到90%;500 ng/ml LPS 24 h+5 mmol/L ATP 4 h为诱导巨噬细胞焦亡的最佳组合方式;LPS+ATP组的GSDMD、caspase-1、caspase-11、NLRP3、ASC、pro-IL-1β、pro-IL-18和HMGB1的蛋白表达量明显高于对照组（P<0.05）;培养上清中IL-1β和TNF-α表达量显著高于对照组（P&...     

miR-320a通过靶向调控NLRP3对氧糖剥夺诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的 探讨miR-320a对氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法 建立OGD诱导心肌H9C2细胞损伤模型，采用q RT-PCR法检测细胞中miR-320a和NLRP3 m RNA表达水平。双荧光素酶报告系统验证miR-320a与NLRP3的靶向关系。将miR-320a mimics及其阴性对照mimics-NC、NLRP3过表达质粒及其空载质粒分别或同时转染至H9C2细胞中，再进行OGD损伤诱导。采用CCK-8检测细胞增殖活性；比色法测定细胞上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性；流式细胞术检测细胞凋亡水平；ELISA检测细胞IL-1β和IL-18水平；Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达水平。结果 OGD诱导的H9C2细胞中miR-320a表达水平明显降低，而NLRP3 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）。双荧光素酶报告系统验证，miR-320a靶向负调控NL...     

基于Keap1/Nrf2/NLRP3炎症小体和p62途径探讨右美托咪定改善脑卒中后损伤的内在机制北大核心CSCD

目的:探讨右美托咪定(Dex)对脑卒中后模型脑损伤的改善作用,并基于Keap1/Nrf2/NLRP3炎症小体和p62途径探讨其作用机制。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组、Dex组,除假手术组外,各组采用线栓法制造缺血性脑卒中大鼠模型,假手术组只穿线不结扎。造模成功后,依达拉奉组大鼠给予依达拉奉3.2 mg/kg,Dex组大鼠灌胃给予Dex 50 mg/kg,模型组、假手术组大鼠给予等体积生理盐水,连续给药14 d。采用改良m-NSS法评价大鼠行为学变化;TTC染色测定脑梗死体积;ELISA检测脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;免疫荧光染色检测脑组织内ROS含量;RT-PCR检测脑组织Keap1、Nrf2、NLRP3、p62 mRNA水平;Western blot检测Keap1、Nrf2、NLRP3、p62蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠脑神经功能评分明显升高,脑梗死体积明显增大(P<0.01),脑组织中TNF-α、IL-6、IL-1β及ROS水平明显升高(P<0.01),Keap1、Nrf2、NLRP3、p62 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组相比,Dex组大鼠脑神经功能评分明显降低,脑梗死体积明显减小(P<0.01),脑组织中TNF-α、IL-6、IL-1β及ROS水平明显降低(P<0.01),NLRP3、p62 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.01),Keap1、Nrf2 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论:Dex可明显改善脑卒中大鼠脑损伤,其可能是通过调控Keap1、Nrf2、NLRP3炎症小体及p62相关基因及蛋白表达实现的。     

丹皮酚对β-1,3-葡聚糖诱导的小鼠巨噬细胞Dectin-1 / NLRP3 信号通路抑制作用研究

目的:研究丹皮酚对β-1,3-葡聚糖诱导的巨噬细胞上Dectin-1/NLRP3信号通路的影响。方法:培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,并分成空白对照组、β-1,3-葡聚糖诱导模型组、昆布多糖组和丹皮酚组,β-1,3-葡聚糖诱导巨噬细胞24 h建立ALD炎症模型。通过MTT法检测细胞活性,通过倒置显微镜观察各组形态学变化,通过Western blot检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1蛋白的表达,通过RT-qPCR检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA的表达,通过ELISA检测各组培养液中IL-1β、IL-18的分泌水平。结果:MTT结果表明,与空白对照组相比,β-1,3-葡聚糖诱导模型组抑制细胞增殖活性减弱。与β-1,3-葡聚糖诱导模型组相比,丹皮酚干预后细胞增殖活性增强。形态学观察发现,空白对照组细胞体积小,形态圆润。β-1,3-葡聚糖诱导后细胞体积变大,分化严重,形态狭长。丹皮酚干预后细胞分化减轻,细胞形态近似圆形。Western blot、RT-qPCR和ELISA结果表明,与空白对照组相比,β-1,3-葡聚糖能显著升高巨噬细胞中Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的蛋白表达水平和Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平以及细胞上清液IL-1β、IL-18的分泌水平。而与β-1,3-葡聚糖诱导模型组相比,经丹皮酚干预后可明显降低巨噬细胞中Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的蛋白表达水平和Dectin-1、NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平以及细胞上清液IL-1β、IL-18的分泌水平。结论:本研究结果表明丹皮酚可能通过抑制β-1,3-葡聚糖诱导的Dectin-1/NLRP3信号通路上Dectin-1、Syk、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1的过表达从而有效降低终末炎症因子IL-1β及IL-18的释放,进而有效抑制β-1,3-葡聚糖诱导的ALD炎症反应。