纤维连接蛋白——口腔鳞状细胞癌细胞迁移的促动因子

肿瘤细胞在组织中穿越和迁移时,会遇到大量的细胞外基质 (extracellular matrix, ECM) 分子与上皮基底膜.纤维连接蛋白(fibronectin, FN)是一种黏附ECM分子,有黏附细胞和扩散介质的作用,在生长发育、创伤愈合和肿瘤形成方面有重要作用[1].FN也通过其趋化性和趋触性刺激细胞运动[2]. FN以可溶和不可溶两种形式存在.可溶性FN以高浓度出现在浆液和其他体液及细胞培养液.不可溶性FN充当介质介导细胞的附着. 本研究将探索PTF分泌的可溶性因子在鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)迁移和浸润中的作用,并确定FN是否是瘤旁纤维细胞(peribumor fibroblast, PTF)条件培养液(conditioned medium, CM)中的趋化因子.     

纤维连接蛋白不同可变区在口腔鳞癌的表达

目的:观察含额外区A(extradomain A,EDA)或额外区B(extradomain B,EDB)可变区的纤维连接蛋白(fibronectin,FN)在口腔鳞癌组织、细胞外基质以及体外细胞培养液中的表达.方法:(1)免疫组织化学染色;(2)鳞癌细胞体外培养;(3)细胞外基质的免疫荧光检查;(4)对肿瘤周围纤维细胞和正常纤维细胞的培养液进行蛋白印迹试验检查.结果:EDA和EDB在口腔鳞癌浸润癌巢周围的反应性基质区内有不同程度表达.肿瘤周围纤维细胞在体外分泌了大量富含EDA可变区的FN和少量的EDB可变区FN;正常纤维细胞只分泌EDA-FN基质而不分泌EDB-FN基质.肿瘤周围纤维细胞条件培养液中仅出现含EDA可变区的FN.结论:EDA和EDB在病损组织、体外细胞培养和肿瘤周围纤维细胞条件培养液中表达的差异提示这两个选择性剪切片段可能具有不同功能.     

肝X受体激动剂T0901317对TGF-β1诱导人正常肺成纤维细胞纤维连接蛋白表达的影响

目的 探讨肝X受体激动剂T0901317对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人正常肺成纤维细胞纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响.方法 组织块贴壁法培养人正常肺成纤维细胞,波形蛋白和角蛋白免疫组织化学鉴定.T0901317及 TGF-β1刺激人正常肺成纤维细胞后,分别应用Western blot 和激光共聚焦显微镜观察FN的表达.结果 成纤维细胞表达波形蛋白,不表达角蛋白.Western blot和免疫荧光结果均显示正常肺成纤维细胞基态下表达较多的FN,TGF-β1可以诱导FN表达的进一步上调,而T0901317在5 μg/mL时即可抑制这种表达的上调.结论 肝X受体激动剂T0901317可以抑制TGF-β1诱导的体外人正常肺成纤维细胞FN表达的上调,可能具有潜在抗纤维化治疗作用.     

bFGF对成骨细胞整合素β1亚单位表达和细胞黏附的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对成骨细胞整合素81亚单位表达的影响,探讨纤维黏连蛋白(FN)与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单独或联合应用时对成骨细胞在生物衍生骨支架上黏附的影响.方法:培养成骨细胞,以bFGF(100 ng/ml)刺激,接种于FN(10μg/ml)修饰的生物衍生骨支架上,Western blot检测bFGF对FN受体整合素β1亚单位表达的影响,MTT检测组间细胞黏附效率差异,电镜观察细胞密度与形态.结果:Western blot检测发现应用bFGF刺激后,成骨细胞整合素β1亚单位表达增强;MTT检测发现单独应用FN与bFGF均可增加细胞在生物衍生骨上的黏附效率(P＜0.01),但二者联合应用时,产生的效应进一步增强,二者存在统计学上的交互作用(P＜0.01);电镜观察也证明,二者联合应用时细胞密度、铺展效果均优于单独应用.结论:bFGF可以显著增强成骨细胞FN受体整合素β1亚单位的表达,明显提高成骨细胞在FN修饰生物衍生骨支架上的黏附效率,bFGF与FN对于促进成骨细胞的黏附具有交互作用.     

纤维连接蛋白对大鼠肺成纤维细胞纤维连接蛋白和整合素α5β1表达的影响

目的　研究纤维连接蛋白 (fibronectin ,FN)及其受体整合素α5β1在肺纤维化中的作用。方法　应用Northern印迹杂交和免疫细胞化学技术。结果　经FN作用 2h ,肺成纤维细胞α5β1和FNmRNA的杂交信号均增强 ,6h达最高值 ;FN作用 6、1 2、2 4h ,免疫细胞化学染色显示整合素α5β1、FN蛋白的表达增强 ;经α5单克隆抗体预作用 ,FN作用组的肺成纤维细胞整合素α5β1和FN蛋白表达减弱 ,其抑制作用依次分别在 6h(α5β1)、1 2h(FN)最明显。结论　FN能直接刺激肺成纤维细胞合成FN或通过上调整合素α5β1的表达来促进自身合成FN。     

纤维连接蛋白对大鼠肺成纤维细胞纤维连接 蛋白和整合素α5β1表达的影响

目的研究纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及其受体整合素α5β1在肺纤维化中的作用。方法应用Northern印迹杂交和免疫细胞化学技术。结果经FN作用2h,肺成纤维细胞α5β1和FNmRNA的杂交信号均增强,6h达最高值;FN作用6、12、24h,免疫细胞化学染色显示整合素α5β1、FN蛋白的表达增强;经α5单克隆抗体预作用,FN作用组的肺成纤维细胞整合素α5β1和FN蛋白表达减弱,其抑制作用依次分别在6h(α5β1)、12h(FN)最明显。结论FN能直接刺激肺成纤维细胞合成FN或通过上调整合素α5β1的表达来促进自身合成FN。     

转化生长因子-β1对瘢痕成纤维细胞的调节及意义

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞中纤维粘连蛋白(FN)和肌动蛋白(α—actin)表达的诱导作用，探讨TGF-β1与瘢痕挛缩的关系。方法 采用细胞培养、免疫组化、图像分析技术，观察在不同含量TGF-β1的作用下，瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达情况。结果 不同含量的TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达FN和α—actin的作用不同，分别以25～100μg／L和10～50μg／L为有效；与正常瘢痕组织相比，增生性瘢痕的成纤维细胞在表达FN和α—actin方面，对TGF-β1的反应更为敏感，差异均有显著性意义(P＜0．01)。结论 TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达增加可能与瘢痕挛缩有关。     

纤维连接蛋白诱导人胚胎肺纤维细胞增殖的MAPK信号转导通路研究

目的 探讨纤维连接蛋白(FN)诱导人胚胎肺纤维细胞(HFL1)增殖的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路.方法 采用不同浓度FN刺激HFL1,观察细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059、p38蛋白激酶抑制剂SB203580对FN诱导HFL1增殖作用的影响.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况.结果 FN对HFL1诱导增殖作用呈剂量依赖性升高趋势,在50 ng/ml时作用显著;PD98059和SB203580可抑制FN诱导的HFL1细胞增殖.结论 FN诱导HFL1的细胞增殖可以通过MAPK信号转导途径实现.     

PDGF、FN诱导FHL1细胞增殖的P13K信号转导通路研究

目的 探讨血小板源性生长因子(PDGF)和纤维连接蛋白(FN)诱导人胚胎肺成纤维细胞(HFL1)增殖的磷酸酰基醇-3-激酶(P13K)信号转导通路.方法 采用不同浓度的PDGF和FN分别刺激HFL1并观察P13K抑制剂wortmannin(WMN)对PDGF、FN诱导HFL1增殖作用的影响.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况.结果 PDGF和FN对HFL1的诱导增殖作用明显,并呈剂量依赖性升高趋势,二者均在50 ng/mL时作用显著;P13K抑制剂wortmannin可抑制PDGF和FN诱导的HFL1细胞增殖.结论 PDGF和FN诱导HFL1的细胞增殖可以通过P13K信号转导途径实现.     

26例脑瘤病人血浆纤维结合蛋白的测定及意义初探

血浆纤维结合蛋白(Fibronectin FN)是由成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞等合成的一组高分子糖蛋白。FN与细胞形态及支架的组织、细胞粘附及扩散、内环境稳定、颗粒性物质吞噬、细胞的分化及肿瘤发生、发     

纤维粘连蛋白在口腔粘膜白斑中的表达

目的：探讨纤维粘连蛋白（fibronectin,FN）在口腔粘膜白斑（oral leukoplakia,OLK）中的表达。方法：体外培养正常和口腔白斑上皮细胞及成纤维细胞;酶联免疫反应（ELISA）法测定各细胞培养液中FN的浓度;采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法观察FN在正常口腔粘膜、白斑粘膜和鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)粘膜组织及细胞中的分布; RT PCR技术观察正常口腔粘膜和口腔白斑粘膜上皮及成纤维细胞中FN的表达。结果：ELISA法测定结果显示,白斑成纤维细胞培养液中FN浓度比正常口腔粘膜成纤维细胞培养液明显降低（P<0.01）,而二者上皮细胞培养液中FN浓度差异无统计学意义（P>0.05）; RT PCR检测显示,FN在白斑成纤维细胞中的表达显著下降;免疫组化结果与正常口腔粘膜相比,口腔白斑上皮和结缔组织中FN的表达均有不同程度的减少,但其减损程度低于口腔鳞癌组织。结论：口腔粘膜白斑组织中FN表达减少,在白斑癌变的发生和发展过程中具有一定的意义。     

低氧促进肌成纤维细胞表达和分泌结缔组织生长因子及纤维连接蛋白

目的:观察低氧对肾肌成纤维细胞合成和分泌结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和细胞外基质纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响,以了解肌成纤维细胞在肾间质纤维化过程中的作用.方法:(1)采用原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞,以密闭的细胞培养罐造成低氧环境(1%O2 ,体积分数),应用Western blot方法检测低氧和正常氧(21%O2 ,体积分数)条件下低氧诱导因子-1α( hypoxia induced factor-1α,HIF-1α)蛋白的表达,验证所营造的低氧条件是可靠的.(2)用Western blot方法检测在低氧和正常氧条件下,各时间点上细胞及上清液中CTGF和FN蛋白水平.(3) 用RT-PCR方法检测低氧和正常氧条件下,各时间点FN mRNA表达的变化.(4)用明胶酶谱法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotei- nase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP -9)的活性.结果:正常氧组HIF-1α蛋白表达微弱,低氧组有较高水平HIF-1α蛋白表达.低氧作用于原代培养的肌成纤维细胞6 h,12 h和24 h后细胞内的CTGF蛋白均比正常氧组增高,分别为175%±52%,347%±67%和143%±27%,以12 h最明显(P＜0.05);低氧刺激24 h时上清液中CTGF蛋白显著增加,是正常氧组的348%±99%(P＜0.05);低氧刺激肌成纤维细胞6 h,12 h和24 h后上清液中FN蛋白水平增加,分别是正常氧组的187%±42%,199%±51%和210%±29%,以24 h 最明显(P＜0.05),而对应时间点上清液中MMP-9和MMP-2活性无明显变化,但细胞内FN蛋白减少,低氧剌激6 h为正常氧组的64%±13%.低氧刺激肌成纤维细胞3 h,FN的mRNA水平开始上升,6 h达到正常氧组的135%±13%(P＜0.05),12 h 下降接近正常氧水平.结论 :低氧可通过促进肌成纤维细胞表达CTGF和FN参与肾间质纤维化的进展.     

体外重组基底膜侵袭实验条件及计数方法的探讨

目的:探讨体外重组基底膜侵袭实验中最佳趋化条件及细胞计数方法.方法:采用体外重组基底膜侵袭实验方法,加入不同趋化 剂:成纤维细胞条件培养液、纤维黏连蛋白(FN)、条件培养液与FN联合;HE染色后,采用40×光镜随机视野计数法及利用显微 照相系统全滤膜计数法计数.结果:趋化剂组穿膜细胞数显著高于对照组;条件培养液和FN联合穿膜细胞数显著高于单独条件 培养液组和FN组;条件培养液组穿膜细胞数高于FN组;随机视野计数法与全滤膜计数法相比所得结果误差大.结论:趋化剂能 显著增加细胞的定向穿膜侵袭能力,不同趋化剂的趋化能力各有不同;全滤膜计数法是一种客观准确的细胞计数法.     

bFGF的生物作用分子机制研究进展

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是一种作用广泛的细胞因子,它的书写形式有bFGF和FGF-2两种.bFGF是成纤维细胞生长因子家族中的一员.早在1940年,Hoftman等在脑和垂体的抽提物中发现一种能够促进成纤维细胞生长的物质.     

纤维连接蛋白在肿瘤及抗感染研究的进展

纤维连接蛋白(FN)是细胞外基质的重要成份,为一种具有多种功能的糖蛋白大分子,参与细胞的黏附、迁移、止血、损伤修复等过程,在抗感染、维持微血管的完整性等方面具有重要作用,曾有“调理性α2表面结合蛋白“、“细胞表面蛋白“及“细胞黏附因子“之称.FN主要由肝细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞、成肌细胞、成软骨细胞等产生.FN分子结构中含有各种结构域,能选择性地与细胞外基质中各种大分子,如胶原、肝素、纤维蛋白以及各种细胞表面整合素受体结合,发挥多种生物学效应[1].近年来,对FN的结构、功能研究,尤其在肿瘤及抗感染研究中取得了很大的进展,笔者就此作一综述.……     

纤维粘连蛋白与肿瘤

<正> 1 概述 1.1 历史 1948年,Morrison等首次在血浆中发现一种高分子糖蛋白,命名为冷不溶球蛋白,此后20余年间,这一发现没有受到应有的重视.直到70年代,人们注意到转化细胞蛋白质丢失的现象,引起许多领域学者的研究,出现了各式各样的命名,随着研究的深入,发现这些物质实为一种物质,命名为“Fibronectin(FN)”,并分为血浆型FN和细胞型FN.     

早期糖尿病大鼠肾小球中纤维连接蛋白和碱性成纤维细胞生长因子的表达

采用链脲佐菌素建立大鼠糖尿病 (DM)模型 ,观察 DM形成后 1、2、4周肾小球中纤维连接蛋白(FN)和碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)的表达。结果 :FN在 DM1周和 2周鼠肾小球内的表达无明显变化 ;在第4周 ,FN除了系膜区染色明显加深外 (P<0 .0 5 ) ,还出现了肾小球基底膜的强染。在第 1周 ,模型鼠肾小球系膜区b FGF染色较正常加强 (P<0 .0 5 ) ,第 2周恢复到基础水平 ,第 4周在系膜区又出现了较 1周时更强的表达 (P<0 .0 5 )。上述结果提示 ,DM早期肾小球内即有细胞外基质的堆积 ,FN为一敏感指标 ;b FGF后期表达上调与 FN沉积有关。     

槲皮素对大鼠心脏成纤维细胞纤维连接蛋白和转化生长因子β_1表达的影响

目的研究槲皮素(Que)对培养的乳鼠心脏成纤维细胞的纤维连接蛋白(FN)和转化生长因子β_1(TGF-β_1)表达的影响,探讨其在心肌肥厚中可能的作用机制。方法分离培养SD仔鼠心脏成纤维细胞,再以Que、AngⅡ、Que+AngⅡ等干预,通过WST-1法检测细胞增殖,免疫组化方法测定心肌成纤维细胞FN及TGF-β_1的表达。结果与对照组比较,Que各浓度组(10~(-6)-10~(-4)M)心脏成纤维细胞的吸光度值差异无统计学意义(P0.05),AngⅡ组心脏成纤维细胞的吸光度值增加(P0.05);与AngⅡ组比较,10~(-6)-10~(-4)M Que与10-6M AngⅡ共同干预后吸光度值逐渐降低(P0.05)。结论 Que呈浓度依赖性的抑制AngⅡ介导的心肌成纤维细胞增殖。Que呈浓度依赖性的抑制基础状态及AngⅡ介导的FN、TGF-β_1的表达。     

组织纤维连接蛋白在创伤修复中的作用

目的:探讨组织纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)在创伤修复过程中的变化和意义。方法:采用大鼠腓肠肌钝击伤模型,分别于伤后8小时、24小时、72小时、7天和12天进行一般观察、组织切片,FN免疫组化观察。结果:组织FN在创伤后迅速增加,于伤后72小时达高峰,于第7天开始消退,其中FN阳性区主要分布于变性、坏死区域和小血管周围。72小时后成纤维细胞明显增多,细胞FN阳性,但阳性程度不如前者。结论:修复过程中组织FN主要来源于血浆FN的沉积,而后期则有一部分来自成纤维细胞的合成。     

苦参碱抑制大鼠肺成纤维细胞增殖及其机制

目的观察苦参碱(Mat)对大鼠肺成纤维细胞增殖及纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)表达的影响.方法体外培养新生Wistar大鼠的肺成纤维细胞,倒置显微镜下观察活细胞形态;四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞分析仪测定细胞周期;免疫荧光测定FN的蛋白含量.结果不同浓度苦参碱处理36 h后,细胞MTT-OD值呈递减趋势,S期细胞百分率下降,G0/G1期百分率上升,FN的表达下降,且成剂量依赖性,与空白组相比,差异有显著性(P＜0.01).结论苦参碱可抑制大鼠肺成纤维细胞增殖,其作用与降低FN表达有关.