辐射诱导乏氧HeLa细胞HIE-Lα和DNA-PK相互调控机制的研究

目的 初步探讨辐射效应诱导下乏氧人宫颈癌细胞系HeLa细胞乏氧诱导因子-lα(HIF-lα)和DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)表达相关性及其调控机制.方法 免疫印迹法检测乏氧状态下HeLa细胞接受射线照射后HIF-lα和DNA-PK(包括DNA-PKcs及Ku80)表达情况;运用靶向抑制HIF-lα或DNA-PKcs的小发卡样干扰RNA(shRNA)表达质粒分别转染乏氧HeLa细胞,经辐射诱导后检测不同时间点各自DNA-PKcs或HIF-lα表达的变化.结果 乏氧HeLa细胞经辐射诱导后0、12、24、48 h时间点检测到HIF-lα、DNA-PKcs和Ku80表达随时间增加逐渐增高,其中HIF-lα和DNA-PKcs的相对表达量呈正相关(r=0.816,P=0.041);运用HIF-lα-shRNA表达质粒明显抑制乏氧HeLa细胞内HIF-lα表达,检测到细胞经照射后12、24、48 h时间点DNA-PKcs的表达与转染空白质粒的阴性对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05);而pDNA-PKcs-shRNA表达质粒抑制DNA-PKes表达后检测各时间点HIF-lα的表达与转染空白质粒的阴性对照组相比均明显减少(P<0.05).结论 辐射诱导乏氧HeLa细胞内HIF-lα表达与DNA-PKcs的表达水平相关;通过抑制DNA-PKcs的表达能显著降低乏氧HeLa细胞HIF-lα表达水平,对HIF-lα的调控机制提出新的思路.     

沉默乏氧诱导因子-1α基因对乏氧人肝癌细胞SMMC-7721放射敏感性的影响

目的探讨RNA干扰乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因对CoCl2诱导的乏氧人肝癌细胞SMMC-7721放射敏感性的影响及其机制。方法利用分子生物学技术构建靶向HIF-1α基因的RNA干扰质粒pGenesil-HIF,脂质体介导转染SMMC-7721细胞后进行乏氧培养,分别采用RT-PCR和Western blot法检测HIF-1α基因的mRNA和蛋白表达,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,克隆存活实验检测细胞放射敏感性的变化。结果酶切鉴定和测序证实重组质粒pGenesil-HIF构建正确,转染质粒后乏氧培养24 h,SMMC-7721细胞HIF-1α基因的mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组和阴性干扰组（P〈0.05或P〈0.01）;乏氧培养24 h、48 h和72 h后,HIF-1α干扰组细胞增殖活性明显低于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,细胞阻滞于G0/G1期（P〈0.01）;乏氧培养48 h和72 h后HIF-1α干扰组细胞凋亡百分率明显高于对照组（P〈0.01）;乏氧培养72 h后HIF-1α干扰组SMMC-7721细胞放射增敏比为1.45。结论 RNA干扰HIF-1α基因可增强乏氧人肝癌细胞SMMC-7721的放射敏感性,其机制可能与RNA干扰HIF-1α基因抑制乏氧细胞增殖和诱导凋亡有关。     

乏氧诱导的自噬与肺腺癌放射抵抗的相关性研究

目的 研究乏氧诱导的自噬与肺腺癌放射抵抗之间的相关性.方法 肺腺癌A549细胞行常氧和乏氧培养.构建靶向抑制乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)的shRNA表达质粒,转染乏氧A549细胞,筛选稳定表达的克隆细胞.克隆形成实验检测细胞放射敏感性.Western blot法检测各处理组细胞HIF-1α、beclin1蛋白的表达.结果 乏氧细胞存活分数(SF2)为0.62,常氧细胞为0.43,提示乏氧A549细胞放射敏感性降低.常氧下A549细胞HIF-1α和beclin1蛋白低表达,乏氧12、24、48 h时间点HIF-1α和beclin1蛋白表达明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).相应时间点HIF-1α与beclin1的表达呈正相关(r＝0.75,P＜0.05).A549/HIF-1α-shRNA的SF2为0.45,放射增益比(SER)为0.72,明显低于阴性对照组,说明抑制HIF-1α表达明显提高乏氧A549细胞放射敏感性.乏氧条件下HIF-1α的表达被抑制后 beclin1 蛋白的表达明显降低(24 h:t=5.69,P=0.01;48 h:t=5.13,P=0.01).结论 乏氧诱导的自噬参与肺腺癌的放射抵抗.     

RNA干扰沉默乏氧诱导因子1α对乏氧条件下食管鳞癌细胞化疗敏感性的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默乏氧诱导因子（HIF）-1α对食管鳞癌EC9706细胞乏氧条件下化疗敏感性的影响及其机制。方法应用化学乏氧法[氯化钴（CoCl2）加入培养液的终浓度为75μmol／L]体外模拟肿瘤乏氧微环境。采用MTS比色法检测常氧培养组和乏氧培养组EC9706细胞在顺铂／紫杉醇作用下细胞的抑制率,以及RNA干扰后乏氧培养细胞在顺铂／紫杉醇作用下细胞的抑制率。应用Western印迹方法检测HIF-1α基因沉默后乏氧诱导HIF-1α蛋白表达变化。用流式细胞仪检测RNA干扰前后乏氧条件下EC9706细胞的细胞周期。结果针对HIF-1α基因的siRNA干扰技术,有效抑制乏氧诱导的HIF-1α蛋白表达。同一药物浓度常氧培养组细胞抑制率均明显高于乏氧培养组（均P〈0．05）。相同药物浓度及相同的乏氧条件下RNA干扰组抑制率均明显高于未转染组及转染control siRNA组（均P〈0.05）。相同的乏氧条件下转染HIF-1α siRNA与未转染组／转染无关对照siRNA组相比,S期显著增加（P〈0．05）、G1期细胞减少（P〈0．05）。结论乏氧条件下HIF-1α诱导EC9706细胞周期停止,可能是乏氧条件下细胞耐药的机制之一。RNA干扰可逆转食管癌细胞EC9706乏氧环境中化疗耐药。     

化学乏氧人肝癌细胞SMMC-7721中HIF-1α和miR-210的表达

目的探讨不同浓度CoCl2对人肝癌细胞SMMC-7721乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）和miR-210表达的影响以及RNA干扰HIF-1α基因对miR-210表达的影响。方法采用Western blot法检测不同浓度CoCl2培养24 h后SMMC-7721细胞HIF-1α蛋白表达变化,实时定量PCR检测miR-210相对表达量。脂质体介导靶向HIF-1α基因的RNA干扰质粒pGenesil-HIF转染SMMC-7721细胞后,乏氧培养24、48和72 h,分别采用Western blot法和实时定量PCR检测细胞HIF-1α蛋白表达变化和miR-210相对表达量。结果 50和100μmol/L CoCl2培养24 h后细胞HIF-1α蛋白表达和miR-210相对表达量与0μmol/L组相比,差异均无统计学意义（均P〉0.05）;150和200μmol/L CoCl2培养24 h后细胞HIF-1α蛋白表达和miR-210相对表达量均显著高于0μmol/L组（P〈0.05或P〈0.01）。转染质粒pGenesil-HIF后乏氧培养24、48和72 h,细胞HIF-1α蛋白表达和miR-210相对表达量显著低于阴性干扰组（均P〈0.01）。结论化学乏氧人肝癌细胞SMMC-7721中HIF-1α和miR-210表达明显上调,RNA干扰HIF-1α基因可明显下调乏氧细胞miR-210表达。     

含hNIS报告基因的乏氧调控重组质粒的构建及其功能鉴定

目的构建乏氧应答启动子调控的人钠/碘共同转运体（hNIS）报告基因重组质粒,为实体瘤微环境乏氧的实时监测提供研究基础。方法合成乏氧反应元件（HRE）的核苷酸片段,克隆入pGL3-promoter,构建为pGL3-promoter-5×HRE载体。然后将扩增的hNIS基因插入pGL3-promoter-5×HRE载体中,构建为pGL3-promoter-5×HRE-NIS重组质粒并进行测序验证。以DMSO处理组作为对照,CoCl_2处理HEK293细胞模拟乏氧;将经验证的pShuttle-NIS质粒转染HEK293乏氧细胞,同时将构建的pcDNA3.1-HIF-1α质粒和pShuttle-NIS质粒按照3：1比例转染HEK293细胞,转染空质粒pcDNA3.1和pShuttle-NIS质粒组作为对照。通过qRT-PCR法检测hNIS基因表达的变化。并用高锝酸盐（~（99m）TcO_4~-）处理双质粒共转染的HEK293细胞,洗脱游离~（99m）TcO_4~-后通过γ计数器采集细胞放射性计数,检测所表达NIS蛋白的功能。结果克隆的基因产物与预期一致,序列无碱基的突变。共转染HIF-1α质粒组及转染pShuttle-NIS的CoCl_2处理组,其hNIS mRNA的表达量显著高于转染空质粒及DMSO处理组（均P〈0.01）。共转染HIF-1α质粒组细胞的~（99）TcO_4~-摄取率显著高于空质粒对照组（P〈0.01）。结论 pGL3-promoter-5×HRE-NIS重组质粒转染后能介导细胞摄取~（99m）TcO_4~-,为微环境细胞乏氧的核素显像提供实验依据。     

DNA-PKcs反义核酸增强HeLa细胞对辐射及化疗药物顺铂的敏感性

目的构建表达DNA-PKcs反义核酸的真核表达载体，建立DNA—PKcs表达被反义核酸抑制的细胞模型。方法采用RT-PCR扩增DNA—PKcs的cDNA片段，DNA重组技术构建四环素控制表达的真核表达载体；利用Lipofectamine介导基因转染，Western blot分析鉴定反义核酸抑制DNA—PKcs表达的细胞模型；细胞克隆形成法和细胞生长曲线分析细胞对UV和顺铂的敏感性。结果克隆了DNA-PKcs 5’端320bp cDNA片段，重组于tet启动子控制表达质粒pCl^neo-Tet-splice，转染Hela细胞，获得3个稳定转化克隆；Western blot结果表明细胞中DNA-PKcs表达受到反义核酸的抑制，并且细胞对紫外线辐射和顺铂敏感性增加。结论成功建立了DNA-PKcs表达受到反义核酸抑制的细胞模型，抑制DNA-PKcs表达提高了细胞的辐射和顺铂的敏感性。     

乏氧条件下紫杉醇对SPCA1肺癌细胞的影响

[目的]探讨乏氧条件下紫杉醇对SPCA1肺癌细胞的影响及其机制。[方法]MTT法检测常氧和乏氧条件下紫杉醇对SPCA1细胞的毒性作用;流式细胞术检测紫杉醇对SPCA1细胞周期和凋亡的影响。采用定量RT-PCR和Western Blotting观察SPCA1细胞乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）、多药耐药基因-1（Mdr-1）mRNA和P-糖蛋白（P-gp）的表达变化。[结果]常氧和乏氧条件下,紫杉醇对SPCA1细胞的IC50分别为8．45μmol／L和18．17μmol／L（P〈0．05）,乏氧时紫杉醇诱导SPCA1细胞凋亡较常氧条件下明显减少（P〈0．05）,但乏氧对细胞周期无明显影响。乏氧能明显增加HIF-1α蛋白表达,但对Mdr-1mRNA和P-gp蛋白表达无明显影响。[结论]乏氧诱导SPCA1细胞对紫杉醇耐药,但Mdr-1可能不是乏氧诱导耐药的主要因素之一,乏氧条件下SPCA1细胞耐药可能还存在其他机制。     

乏氧对EC9706细胞多药耐药相关蛋白表达的影响

目的:研究乏氧对人食管鳞状细胞癌EC9706细胞株的多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响,探讨乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)在乏氧引起肿瘤细胞多药耐药中的作用.方法:采用化学性低氧诱导剂氯化钴(CoCl2)体外培养人食管鳞状细胞癌EC9706细胞株,用RNAi沉默HIF-1α基因表达,应用半定量RT-PCR检测HIF-1α基因沉默效果.应用RT-PCR、免疫细胞化学技术检测RNA干扰前后乏氧条件下MRP1蛋白及RNA水平表达的变化.结果:乏氧后EC9706细胞中MRP1 mRNA和蛋白的表达均增加(P<0.05).针对HIF-1α基因的siRNA干扰技术,能有效沉默HIF-1α基因的表达.同样乏氧条件,转染HIF-1α siRNA后EC9706细胞较未转染及转染Control siRNA组细胞相比,MRP1 mRNA和蛋白的表达均减少(P<0.05).结论:HIF-1α上调食管鳞状细胞癌细胞中MRP1的表达可能是乏氧条件下化疗耐药的机制之一;HIF-1α可望成为新的食管鳞状细胞癌治疗的靶点.     

HIF-1及HRE在乏氧肿瘤靶向治疗中的应用

实体瘤普遍存在乏氧。而乏氧能够诱导多种转录因子表达,其中乏氧诱导因子-1（hypoxia—inducible factor-1,HIF-1）最重要。据文献报道。HIF-1与启动子或增强于序列中的乏氧反应元件（hypoxia response element,HRE）结合后可以上调多种基因表达,如血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及受体、促红细胞生成素（erythro—poietin,EPO）、糖酵解酶、多药耐药基因等,因此增强了肿瘤细胞对葡萄糖的摄取和酵解。促进肿瘤的血管形成和细胞增殖。使肿瘤细胞更具有侵袭和对放化疗的抗拒能力。故利用HIF-1及HRE靶向治疗和其他干扰HIF-1功能的措施不但可以杀伤肿瘤细胞,还能够抑制肿瘤增殖和血管的形成。     

乏氧诱导因子-1α抑制剂YC-1对乏氧脑胶质瘤SHG44细胞株的放射增敏作用

目的探讨乏氧诱导因子1α（HIF-1α）抑制剂YC-1对乏氧脑胶质瘤SHG44细胞株的放射增敏作用及其作用机制。方法选择脑胶质瘤SHG44细胞株,分别在常氧（20%O2）、乏氧（1%O2）12 h和24 h、乏氧＋YC-112 h和24 h这5种不同条件下培养,采用Western blot检测HIF-1α的表达水平;细胞克隆形成实验绘制细胞存活曲线以观察其放射敏感性;利用剂量分割法绘制亚致死性损伤修复曲线以观察其修复能力。结果脑胶质瘤SHG44细胞株在乏氧12 h和24 h与常氧培养相比,HIF-1α的表达水平显著升高,放射敏感性下降,其氧增强比分别为1.22和1.37,进一步统计分析发现其亚致死性损伤修复能力升高,且在间隔8、10、12 h照射时,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;而当在乏氧12 h和24 h培养的同时加用YC-1时,HIF-1α的表达水平则显著降低,放射敏感性升高,其增强因子均为1.27,进一步统计分析也发现其亚致死性损伤修复显著降低,且在间隔8、10、12 h照射时,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论 YC-1能明显提高乏氧脑胶质瘤SHG44细胞株的放射敏感性,其机制可能与YC-1能抑制细胞的亚致死性损伤修复能力有关。     

shRNA干扰肾癌细胞株786-O和OS-RC-2中HIF-2α的表达对VEGF的影响

目的构建在哺乳动物细胞中表达的低氧诱导因子-2(HIF-2α)的短发夹RNA(shRNA)的表达质粒,在体外模拟肿瘤常氧和低氧环境下研究对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。探讨HIF-2α、VEGF两者之间及其与肾透明细胞癌(CCRCC)的关系,HIF-2α可能为CCRCC潜在的新效靶。方法构建HIF-2α shRNA真核表达载体质粒, shRNA测序鉴定。150 umol/L氯化钴(Co Cl2)模拟细胞低氧环境。设对照组(空白、阴性)和实验组。空白对照组不做转染,阴性对照组转染空质粒,实验组转染HIF-2α shRNA重组质粒,每组均设置常氧和低氧环境组。采用Real time-PCR技术检测786-O和OS-RC-2细胞中HIF-2α基因表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检测VEGF蛋白表达情况。结果 DNA测序证实重组质粒构建成功, shRNA转染786-O和OS-RC-2细胞,实验组中HIF-2α mRNA表达明显受到抑制,且常氧较低氧环境下HIF-2α mRNA表达降低,低氧环境下凋亡显著;常氧和低氧环境下,实验组VEGF蛋白表达量均下降,且常氧环境下蛋白表达下降明显。结论低氧环境下,HIF-2α mRNA表达量升高,促进VEGF蛋白表达。干扰HIF-2α基因后,细胞凋亡率升高,抑制VEGF蛋白表达。该基因可能为治疗CCRCC提供了新的效靶,为下一步实验鉴定奠定基础。     

乏氧和低糖条件下SPCA1肺癌细胞HIF-1α蛋白和Glut-1 mRNA的表达变化

【目的】观察乏氧和低糖对SPCA1细胞凋亡的影响及乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白1(Glut-1)的表达变化。【方法】乏氧低糖处理后用流式细胞术检测SPCA1细胞凋亡率,Western Blotting检测HIF-1α蛋白表达,Northern Blotting检测Glut-1 mRNA表达水平。【结果】乏氧和/或低糖处理后48 h,乏氧高糖组SPCA1细胞凋亡指数(10.2±1.6)%,显著高于常氧高糖组(3.4±1.1)%(P<0.01),乏氧低糖组(32.6±4.7)%显著高于常氧低糖组(4.6±1.4)%(P<0.01)。常氧条件下SPCA1细胞不表达HIF-1α蛋白,Glut-1 mRNA仅轻微表达,但在乏氧和低糖条件下HIF-1α蛋白和Glut1 mRNA表达明显增加。【结论】乏氧低糖条件下SPCA1细胞HIF-1α蛋白和Glut-1 mRNA表达增加,提示SPCA1肺癌细胞通过增加糖代谢以适应乏氧和低糖。     

RNA干扰HIF-1α对人子宫颈癌裸鼠移植瘤多药耐药相关蛋白表达的影响

目的 通过RNA干扰技术沉默人子宫颈癌HeLa细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,在细胞及移植瘤水平研究低氧对子宫颈癌HeLa细胞多药耐药的影响.方法 ①将人子宫颈癌HeLa细胞株(记为HO细胞)、转染pGenesil-1空白质粒的HeLa细胞株(记为H1细胞)及转染HIF-1α-shRNA质粒的Hel.a细胞株(记为H2细胞)分别行不同时间低氧培养,应用免疫印迹法分析每组HeLa细胞中HIF-1α及多药耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)在蛋白水平的表达情况.②应用免疫组织化学法检测HIF-1α及P-gp在上述3种HeLa细胞裸鼠移植瘤模型组织水平的表达情况.结果 ①免疫印迹法检测发现H0和H1组低氧24 h后HIF-1α、p-gp呈强阳性表达,常氧状态下HO、H1和H2组及低氧24 h后H2组未见HIF-1α表达,P-gp呈弱阳性表达.②HO、H1、H2组移植瘤中HIF-1α的平均吸光度值分别为(0.550 8±0.077 1)、(0.573 1±0.053 8)、(0.1701±0.088 4),P-gp的平均吸光度值分别为(0.697 62±0.114 0)、(0.696 4±0.107 2)、(0.213 8±0.035 1).结论 RNA干扰技术沉默人子宫颈癌HeLa细胞低氧诱导因子HIF-1α,可显著降低人子宫颈癌HeLa细胞中H1F-1α及P-gp表达,且二者有明显的相关性.     

乏氧对肺腺癌A549细胞P糖蛋白和多药耐药相关蛋白表达的影响

目的 通过研究乏氧对人肺腺癌细胞株A549的P糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响,探讨乏氧在引起肿瘤细胞多药耐药中的作用。方法 乏氧条件下(2％O2)人肺腺癌细胞株A549体外培养24h,丙酮固定后运用免疫组织化学的方法对乏氧诱导因子-1α(HIE-1α)、P-gp和MRP的表达进行检测,并用MTT法检测乏氧条件下A549细胞在阿霉素和顺铂作用下的存活率。结果 乏氧条件下人肺腺癌细胞株A549中乏氧诱导因子-1α、P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白的表达明显较正常氧浓度下增高,HIF-1α与P-gp、MRP的表达增高存在明显的相关性。乏氧条件下人肺腺癌细胞株A549对阿霉素的耐药性明显增强。结论 在人肺腺癌A549细胞中HIF-1α蛋白表达与P-gp和MRP表达存在明显的相关性。     

HIF-1α慢病毒干扰载体构建及GL261小鼠胶质瘤稳定沉默细胞系的建立

目的 研究短发夹状RNA（shRNA）干扰慢病毒表达载体对小鼠胶质瘤GL261细胞系中乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因的沉默效应。方法 构建针对小鼠胶质瘤GL261细胞HIF-1α mRNA的不同干扰靶点的4个shRNA表达载体,筛选出HIF-1α基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的Oligo DNA,构建pLenti6.3-shRNA3慢病毒载体感染靶细胞GL261,获得稳定沉默HIF-1α细胞株,利用实时定量PCR和Western blot方法检测稳定细胞株HIF-1α的沉默效应。结果 成功构建了具有HIF-1α沉默效应的慢病毒干扰载体,通过倍比稀释测定干涉病毒滴度为1.15×108TU/mL。实时定量PCR和Western blot实验均证实慢病毒转染后,GL261细胞株中HIF-1α表达水平明显降低。结论 针对HIF-1α基因不同位点的不同shRNA具有干扰效率的差异。特异性的shRNA可稳定地介导HIF-1α基因沉默。     

荷脑胶质瘤裸鼠~(99m)Tc-HL91乏氧显像与HIF-1α表达的相关性研究

目的研究脑胶质瘤99mTc-HL91乏氧显像特征以及与乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的相关性。方法将10只荷人脑胶质瘤裸鼠分别于腹腔注射99mTc-HL91 2、4、6h后行全身平面显像,计算感兴趣区内肿瘤组织与头部组织放射性计数比值（T/NT）,免疫组织化学方法检测肿瘤组织HIF-1α的表达水平。结果99mTc-HL91乏氧显像各时相肿瘤显影均较清晰,2、4、6h的T/NT值分别为1.415±0.25,1.855±0.20,1.818±0.19,各时相间T/NT值比较差异均有显著性（P〈0.05）。99mTc-HL91显像的T/NT值（4h）与HIF-1α的表达水平呈正相关（r=0.833,p〈0.05）。结论脑胶质瘤组织对乏氧显像剂99mTc-HL91有较好的摄取与滞留,各时相肿瘤显影清晰,其中以4 h的T/NT值为最高。99mTc-HL91乏氧显像的T/NT值与HIF-1α的表达水平呈正相关。     

低氧诱导因子促内皮祖细胞活性的可行性研究

目的探讨在体外低氧诱导因子-1α（HIF-1α）促血管内皮祖细胞（EPCs）成血管活性的可行性。方法密度梯度法分离人外周血EPCs，电穿孔技术转染HIF-1α质粒至EPCs，RT-PCR法观察未转染／转染质粒在转染后3、12、20、72h，HIF-1α及下游靶基因血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达含量的变化；免疫组化法检测常氧中转染前后HIF-1α蛋白表达、VEGF受体Flk-1蛋白表达在不同组质粒转染后的差异；ELISA法测定各组质粒转染后VEGF在培养基上清中释放含量及VEGF依赖性一氧化氮合成酶（eNOS）含量的改变。结果HIF-1α基因有效转染入EPCs；HIF-1α mRNA在未转染时即有表达，在HIF-1α质粒转染后3、12、20、72h，含量较未转染时增加（P〈0．05）；HIF-1α过表达诱导VEGF表达上调（P〈0．05）。Flk一1蛋白在常氧下有一定含量，在HIF-1α质粒转染后Flk-1蛋白表达进一步增加。VEGF释放含量在HIF-1α过表达组显著增加（P〈0．05）；HIF-1α诱导eNOS含量增加，并与时间、VEGF刺激量成正比。结论HIF-1α质粒在体外能有效的转染入EPCs，促进其下游靶基因及受体表达，引起相应的功能学改变，促EPCs向内皮细胞分化、扩增，可进一步应用于基因治疗。     

乳腺癌组织中DNA依赖蛋白激酶的表达变化

目的探讨乳腺癌组织中DNA依赖蛋白激酶（DNA—PK）的表达变化及其意义。方法采用免疫组化sP法检测56例乳腺癌组织及50例乳腺良性病变组织中DNA—PK的3个亚基DNA—PKcs、Ku70、Ku86的表达情况，同时检测这些组织中雌激素受体（ER）及癌基因c—erbB-2的表达。结果Ku70、Ku86在乳腺癌组织中的表达明显低于乳腺良性病变组织（P〈0，01），而且Ku70和Ku86的表达随乳腺癌病理分级的升高而降低，但DNA-PKcs在两者中的表达则无明显变化。Ku70与Ku86的表达在ER阳性组高于ER阴性组，在c—erbB-2阳性组的表达则低于c-erbB-2阴性组，差异均有极显著性意义（均P〈0．01）。结论Ku70和Ku86的低表达在乳腺癌的发生和发展中有重要意义，且其与ER、c—erbB-2关系密切，对乳腺癌的临床治疗及预后判断有一定的指导意义。     

乏氧对人舌鳞癌Tca8113细胞HIF-1α表达影响的研究

目的 初步研究乏氧对人舌鳞癌Tca8113细胞HIF-1α表达水平的影响.方法 将处于对数生长期的Tca8113细胞置于1%O2、5%CO2、94%N2混合气体的乏氧培养箱内培养,分别在乏氧培养1/2、1、3、6、12和24 h时取出.每个时间段均设常氧培养对照组(5%CO2、95%O2).采用RT-PCR技术检测不同培养条件下细胞HIF-1α mRNA的表达情况.结果 HIF-1α的表达在乏氧12 h明显升高并达最高峰,24 h时又下降至常氧水平.每个时间段乏氧组HIF-1α的表达均高于其相应的常氧对照组.结论 乏氧影响了人舌鳞癌Tca8113细胞HIF-1α基因的表达水平,肿瘤细胞通过上调HIF-1α基因的表达适应肿瘤乏氧的微环境,有利于肿瘤的发生与发展.