固定化酵母细胞生产1,6—二磷酸果糖的动力学研究

筛选获得一株１，６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）的高产酵母菌株，改变通透性后的酵母细胞，在发酵及固定化生产ＦＤＰ过程中发现Ｆｅ＾２＋和甘油能大量提高ＦＤＰ的积累。将戊二醛交联后的酵母细胞，用卡拉胶固定化后，装入酶反应柱，连续生产ＦＰＤ，柱反应可稳定在１０天以上，转化率维持在２０％以上。     

固定化酵母细胞生产1，6－二磷酸果糖的动力学研究

筛选获得一株１,６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）的高产酵母菌株,改变通透性后的酵母细胞,在发酵及固定化生产ＦＤＰ过程中发现Ｆｅ２＋和甘油能大量提高ＦＤＰ的积累。将戊二醛交联后的酵母细胞,用卡拉胶固定化后,装入酶反应柱,连续生产ＦＰＤ,柱反应可稳定在１０天以上,转化率维持在２０％以上。     

固定化啤酒酵母细胞合成5’-三磷酸腺苷

用K-卡拉胶包埋啤酒酵母制成固定化细胞,在0.05mol/L葡萄糖,0.022mol/L腺苷酸,0.012mol/LMgSO_4·7H_2O,0.2mol/L氯化钾,0.2mol/L磷酸钾缓冲溶液(pH7.0)中,35℃反应4小时,5′-三磷酸腺苷转化率可达42%,在50ml三角烧瓶中分批反应,连续使用5次,5′-三磷酸腺苷转化率仍维持在37%以上。     

啤酒酵母培养条件对ATP生产的影响：I.供氧对酵母合成ATP活？…

结合酵母细胞酶促合成ＡＴＰ的活性测试，在５Ｌ发酵罐中培养啤酒酵母，考察了通气对菌体生长和细胞活性的影响。实验结果表明：通气量的变化，对菌体的生长速度和得率具有明显的调节作用；采用氧限制方法培养的啤酒酵母用于ＡＴＰ生产时得率可达到１００％。通气量６．０Ｌ／（Ｌ·ｈ）时培养的酵母细胞用于ＡＴＰ生产的效率比在通气量６０Ｌ／（Ｌ·ｈ）下培养的酵母细胞提高５０％以上。     

固定化酵母生产L—间羟基苯基乙酰基甲醇的研究

报道间羟基苯基乙酰基甲醇的高产酵母菌株筛选,并将其固定化,海藻酸下包埋法比聚乙类醇－海藻酸钙包埋法效果好,其浓度为１％,包埋量为３ｇ／１０ｍｌ,固定化细胞的最佳底物浓度,糖浓度和最佳反应时间与游离细胞一致,分别为１０ｍｇ／ｍｌ,１００ｍｇ／ｍｌ和６ｈ;但最适反应温度比游离细胞５Ｃ,为３０℃;     

啤酒酵母培养条件对ATP生产的影响 Ⅰ.供氧对酵母合成ATP活性的影响

结合酵母细胞酶促合成ＡＴＰ的活性测试，在５Ｌ发酵罐中培养啤酒酵母，考察了通气对菌体生长和细胞活性的影响。实验结果表明：通气量的变化，对菌体的生长速度和得率具有明显的调节作用；采用氧限制方法培养的啤酒酵母用于ＡＴＰ生产时得率可达到１００％。通气量６．０Ｌ／（Ｌ·ｈ）时培养的酵母细胞用于ＡＴＰ生产的效率比在通气量６０Ｌ／（Ｌ·ｈ）下培养的酵母细胞提高５０％以上。     

固定化酵母生产L－间羟基苯基乙酰基甲醇的研究

报道间羟基苯基乙酰基甲醇的高产酵母菌株筛选,并将其固定化,海藻酸钙包埋法比聚乙烯醇（ＰＶＡ）－海藻酸钙包埋法效果好,其浓度为１％,包埋量为３ｇ／１０ｍｌ。固定化细胞的最佳底物浓度、糖浓度和最佳反应时间与游离细胞一致,分别为１０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ和６ｈ;但最适反应温度比游离细胞高５℃,为３０℃;最佳ｐＨ比游离细胞高１～２个ｐＨ单位,为ｐＨ６。固定化细胞能反复用于羟基苯基乙酰基甲醇生产５次。但在柱式反应器中,转化效率大大下降。固定化细胞在４℃时贮存３０ｄ活性基本上无损失。     

用固定化啤酒酵母细胞合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱

κ－卡拉胶－魔芋多糖复配胶包埋的啤酒酵母细胞，经冻融处理后用于合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱（CDP－胆碱）。结果表明：250mL摇瓶中加入50mL反应液（葡萄糖400mol/L，CMP10mmol/L，磷酸碍碱50mmol/L,K2HPO4-KH2PO4缓冲液100mmol/L，MgSO410mmol/L,pH=8.0），固定化细胞1200g/L,34℃、150r/min下，反应4h后补加400mmol/L葡萄糖，反应8h可使60％以上的CMP转化为CDP－胆碱。反应液经灭菌和添加辅酶I（NAD^ ）后，固定化细胞可连续使用4次，CDP－胆碱转化率维持在40％以上。     

固定化酵母细胞生物合成谷胱甘肽的研究

利用酵母细胞自身ＧＳＨ合成酶和糖酵解途径再生的ＡＴＰ能够合成ＧＳＨ，在含葡萄糖０．７ｍｏｌ／Ｌ，硫酸镁１０ｍｍｏｌ／Ｌ，０．３ｍｏｌ／Ｌ磷酸钾缓冲液和谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸各２０ｍｍｏｌ／Ｌ的１０ｍＬ反应液中，加入１０ｇ（湿重）固定化酵母细胞，３０℃振荡反应８ｈ产生０．９１ｇ／Ｌ的ＧＳＨ。加入腺苷会降低ＧＳＨ的产量；当腺苷开始转化生成ＡＴＰ时加入前体，可明显提高ＧＳＨ的产量。实验结果初步表明：Ａ     

固定化细胞降解苯酚的影响因素研究

含酚废水来源广泛 ,以酚类化合物为代表的有机污染物占了我国地面水有机污染物的主要部分[1] 。酚属细胞原浆毒物 ,排入水体后不仅可对生物造成急、慢性危害 ,而且影响水体自净及感官性状。为此 ,美国及中国环保局都将酚类化合物列为环境优先监测污染物。固定化细胞法处理含酚废水是近年来发展起来的一项生物工程技术 ,目前已取得一些研究成果[2 ,3] ,但离实际应用尚有距离。本研究试图考察不同因素对固定化细胞酚降解效率的影响 ,为该技术实用化提供依据。1　材料与方法1 1　实验材料1 1 1　固定化试剂　包埋剂为工业品聚乙烯醇(ＰＶＡ ,17…     

生物发光法快速检测细胞内三磷酸腺苷

目的建立检测细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量的生物发光方法，并利用该方法检测红细胞和不同再灌注处理心肌细胞内ATP的含量。方法制备所需测定的细胞ATP提取液，采用荧光素一荧光素酶检测系统检测ATP含量，ATP的含量与系统中所发射的光子数成正比，发光强度越大，ATP含量越高，通过检测发光强度计算ATP的含量。结果通过对红细胞内ATP含量的测定，确定了测定细胞内ATP的最佳反应条件：pH=7．8，温度20～25℃，荧光素酶浓度3．0mg／ml。利用确定的最佳条件对各种不同处理的心肌细胞内ATP浓度进行了检测，ATP检测结果与心肌功能的实验观察结果符合。结论生物发光方法测定ATP含量方法简单、结果可靠，可以在短时间内得到检测结果，是一种检测细胞内ATP的有效方法。     

三磷酸腺苷对兔骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

目的观察体外三磷酸腺苷（ATP）对骨髓问充质干细胞（Mscs）生物学特性的影响。方法抽取兔骨髓,采用淋巴细胞分离液密度梯度法分离单核细胞,体外培养传代,观察不同代细胞的生长特性;在第三代时加入ATP,观察MSCs的形态学变化,并行诱导细胞的组织化学染色。结果MSCs在体外可以扩增,以第三代细胞的增殖最快,在ATP存在的条件下向神经样细胞分化,巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶及胶质纤维酸性蛋白抗体免疫组化染色呈阳性。结论MSCs在体外ATP的作用下分化为神经细胞。     

固定化诺卡氏菌批次连续转化生产L(+)酒石酸

采用卡拉胶包埋具有环氧琥珀酸水解酶活性的诺卡氏菌用于生产L( )酒石酸。为了提高细胞固定化的效率,采用自制的固定化装置,将固定化细胞制成细条状,可以加快固定化细胞的制备,获得具有高活性和强度的固定化细胞颗粒,固定化细胞的最佳菌体浓度为100 g(湿细胞)/L。将固定化细胞用于填充床反应器进行反复批式反应,可以反复利用48次以上,将0.85 mol/L的环氧琥珀酸溶液转化为L( )酒石酸,酒石酸的得率不低于96%。     

肌酸激酶法测定红细胞中ATP含量

建立了用单一工具酶 (CK)测定红细胞中三磷酸腺苷 (ATP)含量的比色测定法。在 PH9.0环境下 ,以肌酸激酶 (CK)催化肌酸与标本中 ATP反应 ,产生的磷酸肌酸用磷钼酸比色法进行检测 ,从而获得 ATP含量。线性范围0 .1～ 0 .9mmol/ g Hb,批内、批间平均变异系数分别为 1.6 4 %、2 .12 % ,平均回收率为 10 1.8% ,与己糖激酶法有极好的相关性 (r=0 .999,y=4 0 .89+1.0 0 6 x)。结果表明本法具有良好的精确性 ,且操作简便更具实用性     

三磷酸腺苷对脂多糖诱导内皮祖细胞表达炎症因子的影响及其机制

目的：分析三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导内皮祖细胞 (endothelial progenitor cells,EPCs)表达炎症细胞因子的影响,并探讨其机制。方法：采用密度梯度离心法分离人脐 血单个核细胞,用RT-PCR检测LPS(1 mg/mL)诱导EPCs表达炎症细胞因子的情况,低浓度的ATP(5 μmol/L)对LPS诱 导EPCs表达细胞炎症因子的影响,不同浓度(5,50 μmol/L)的ATP对EPCs中TLR4,MyD88和CD14 mRNA表达的影 响;Western印迹检测LPS(1 mg/mL)对EPCs表达TLR4调节蛋白MyD88和CD14的影响以及信号通路的活化情况,低浓 度ATP(1,5 μmol/L)对LPS诱导EPCs表达TLR4,MyD88和CD14的影响以及信号通路的活化情况。结果：EPCs高表达 TLR4,其配体LPS(1 mg/mL)显著上调IL-1β,MCP-1和ICAM-1的mRNA表达(均P<0.01),并呈时间依赖性上调MyD88和 CD14蛋白的表达,同时活化ERK和NF-κB信号通路。低浓度ATP抑制LPS诱导的IL-1β,MCP-1和ICAM-1 mRNA的表达 (均P<0.05),同时也下调LPS诱导的TLR4,MyD88和CD14蛋白的表达(P<0.01或P<0.05),并抑制LPS诱导的NF-κB信号 通路的活化(P<0.05)。结论：ATP在低浓度时通过负性调节TLR4信号通路而抑制LPS诱导的炎症细胞因子在EPCs中的 表达。     

依赖Ca2+的ATP过量释放在机械牵张所致气道上皮黏蛋白5AC高分泌中的作用

目的探讨人气道上皮细胞三磷酸腺苷(ATP)释放量的改变在机械通气所致气道黏液高分泌中的作用。方法人气道黏膜上皮细胞(HBE16)体外培养,通过节律性倾斜细胞培养板,利用液体的表面张力、大气压及液体重力所产生的牵张力(剪应力)及压力(压应力)给予压力牵张刺激,并利用向密闭盒中注入医用氧气增加压力以模拟机械通气,各组培养细胞依施加条件不同而分为对照组、单纯倾斜组、倾斜+钙离子螯合剂BAPTA-AM、倾斜+BAPTA-AM+钙离子螯合剂EGTA、加压+倾斜、加压+倾斜+嘌呤P2Y受体阻断剂reactive blue-2(RB-2)、加压+倾斜+BAPTA-AM、加压+倾斜+BAPTA-AM+EGTA,共8组,分别采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定细胞活性、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组黏蛋白(MUC)5AC mRNA表达水平、ELISA法检测细胞培养上清液中MUC5AC含量、高效液相色谱法(HPLC)检测培养液中ATP释放量。结果加压+倾斜组细胞MUC5AC mRNA相对含量、培养上清液中ATP释放量和MUC5AC蛋白分泌量分别为:(11.80±0.01)、(7.41±0.45)μmol/g、(0.77±0.26),显著高于单纯倾斜组的(6.60±0.01)、(2.76±0.47)μmol/g、(0.25±0.01)及对照组的(3.40±0.01)、(0.00±0.01)μmol/g、(0.02±0.01)(均P<0.05)。RB-2、EGTA+BAPTA-AM处理后的加压+倾斜组细胞的MUC5AC mRNA相对含量分别为:(10.5±0.03)、(11.9±0.11),与加压+倾斜组相比抑制作用不显著(P>0.05);培养上清液中ATP释放量分别为:(0.05±0.02)μmol/g、(0.08±0.02)μmol/g,较加压+倾斜组显著降低(均P<0.05)。结论机械通气可以显著提高气道黏膜上皮MUC5AC的分泌,其机制与气道上皮细胞依赖Ca2+的ATP的过量释放密切相关。     

斑蝥素对G1/S期肾小管上皮细胞ATP的调节

目的通过斑蝥素对G1/S期肾小管上皮细胞(RTECs)低氧损伤后细胞ATP代谢影响的研究,探讨斑蝥素稳定肌动蛋白微丝骨架系统的机制。方法将新生猪G1/S界面RTECs分为3组:实验组(氰化钠 斑蝥素)、缺氧组(氰化钠)和空白对照组,应用反相高效液相比较缺氧后各组细胞内ATP含量的变化。结果实验组细胞内ATP含量[(14.50±0.26)mmol/g蛋白]明显高于缺氧组[(4.25±0.11)mmol/g蛋白]和空白对照组[(8.58±0.13)mmol/g蛋白](P<0.01)。结论斑蝥素稳定肌动蛋白微丝骨架系统可能与抗RTECs低氧损伤后细胞能量代谢紊乱相关。