整合素受体介导bcl-2反义核酸联合化疗药物对大肠癌细胞的增殖抑制作用

目的:评价以整合素配体-聚乙烯亚胺复合物(RGD-PEI)为载体携带bcl-2反义核酸(ASODN)分别联合化疗药物三氧化二砷(As2O3)和羟喜树碱(HCPT)对大肠癌细胞caco-2增殖抑制的作用。方法:改良MTT法检测bcl-2ASODN联合化疗药物对细胞的半数抑制率(IC50),金正均Q值法判断化疗药物与反义核酸联合使用的效果,并计算化疗药物的增敏倍数。结果:单用As2O3和HCPT的IC50分别是3.478μmol/L及0.771μg/mL;0.75μmol/LASOND联合As2O3和HCPT的IC50分别为3.393μmol/L和0.726μg/mL,与单用As2O3和HCPT的IC50相似;而相同浓度的RGD-PEI-ASODN联合As2O3及HCPT的IC50分别为0.119μmol/L和0.071μg/mL,将caco-2细胞对化疗药物的敏感性分别提高29.2倍及10.8倍。结论:在整合素受体介导时可以有效提高反义核酸对caco-2细胞的增殖抑制率,与化疗药物联用能明显提高细胞对化疗药物的敏感性。     

端粒酶活性的抑制对顺铂诱导K562细胞凋亡的影响

目的 利用人类端粒酶逆转录酶（hTERT)基因反义寡核苷酸（ASODN）抑制K562细胞端粒酶活性后,探讨顺铂对K562细胞凋亡的影响。方法 采用聚合酶链反应－酶联免疫吸附法（PCR－ELISA）检测端粒酶活性的变化;以间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白表达含量的变化。琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂;用流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果 hTERT基因ASODN作用于K562细胞后,hTERT蛋白的表达水平及端粒酶活性下降;ASODN作用于K562细胞24h再加入顺铂作用72h,经琼脂糖凝胶电泳即可见到DNA梯形条带,而正义寡核苷酸（SODN）与顺铂联合作用组及单独应用顺铂均未见到明显的DNA梯形条带。hTERT基因ASODN作用于K562细胞24h,再加入5μmol/L顺铂作用48,72h的凋亡细胞百分率（17．43％和20．34％）分别与SODN联合顺铂作用组（7．43％和9．23％）、单用顺铂作用组（5．49％和7．34％）进行比较,差异有显著性（P＜0．01）。结论 以hTERT基因mRNA起始密码区为靶点的ASODN能特异性地抑制K562细胞的端粒酶活性;端粒酶活性的下调可促进顺铂诱导K562细胞凋亡。     

bcl-2基因反义寡核苷酸的设计与白血病细胞对Ara-C敏感性研究

寻找在bcl-2mRNA上除了起始区以外的反义寡核苷酸作用的敏感位点和观察这些核苷酸对白血病细胞的阿糖胞苷敏感性的影响。用RNAstructure软件模拟bcl-2mRNA的二级结构设计合成两端硫代修饰反义寡核苷酸，用MTT法测定抑制HL-60和K562细胞的阿糖胞苷半数抑制浓度（IC50）值；用流式细胞术检测HL-60和K562细胞凋亡率和bcl-2蛋白表达水平。结果发现，10μmol/Lbcl-2基因的反义寡核苷酸同Ara-C结合使用，能明显地抑制HL-60和K562细胞bcl-2基因蛋白的表达，促进细胞凋亡，减低Ara-C的IC50值；同时发现针对蛋白编码区的反义寡核苷酸有更强的作用。结论：除了bcl-2mRNA的起始区外，在bcl-2mRNA的其他部位存在有设计反义寡核苷酸更有效的位点，该项研究将为反义药物的设计提供新的有用途径。     

三氧化二砷对K562/ADM耐药细胞凋亡抑制的逆转作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导白血病K562/ADM耐药细胞凋亡的分子机制。方法:采用MTT比色法检测K562/ADM耐药细胞增殖活性,细胞形态学和annexinV /PI双染色检测细胞凋亡,RT-PCR检测mdr1、bcl-2和caspase-3基因mRNA的表达水平,流式细胞法(FCM)测定P-糖蛋白(P -glycoprotein,P-gp)和bcl-2蛋白表达及caspase-3活性。结果:As2O3显著抑制K562/ADM耐药细胞的增殖;经 As2O3处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变,annexinV /PI双染显示凋亡细胞明显增加;mdr1mRNA表达和P-gp合成明显降低,凋亡抑制基因bcl-2mRNA及其蛋白bcl-2表达下调, caspase-3mRNA表达和caspase-3活性显著增强。结论:As2O3诱导K562/ADM耐药细胞凋亡,其主要机制可能为As2O3抑制 mdr1和bcl-2基因表达,逆转耐药白血病细胞因bcl-2和P-gp高表达所介导的凋亡抑制。     

三氧化二砷对K562细胞血管内皮生长因子及受体和MMP-2、9的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对K562细胞的血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR）表达水平和基质金属蛋白酶2、9（MMP-2、9）活性的影响。方法用MTT法测定As2O3对K562细胞的毒性，酶联免疫吸附试验测定细胞上清中VEGF含量，流式细胞术检测细胞的VEGFR表达率，明胶酶谱法半定量测定细胞上清中MMP-2、9的活性。结果①Mar法检测K562细胞的，IC50为（2．12±0．11）μmol／L，0．4～6．4μmol／LAs2O3可显著抑制K562细胞的增殖（P＜0．05）。②0．05μmol／L As2O3对VEGF无明显影响（P＞0．05）；0．4和3．2μmol／LAs2O3可明显下调VEGF表达（P＜0．05）；As2O3对VEGFR的表达无明显影响（P＞0．05）。③MMP-2、9经0．05μmol／L As2O3处理72h、0．4和3．2μmol／L As2O3处理24、48和72h均可显著抑制K562细胞MMP-2、9的活性（P＜0．05），这种抑制作用随As2O3浓度增加和作用时间延长而逐渐增强。结论As2O3可下调K562细胞VEGF的表达和抑制MMP-2、9的活性。     

Survivin联用bcl-2反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨survivin、bcl-2反义寡核苷酸(ASODN)联用对白血病细胞凋亡的诱导作用。方法:设计并合成靶向survivin ASODN和bcl-2的ASODN,应用脂质体Lipofectamine TM2000作为载体,转染寡核苷酸入白血病K562细胞。实验分为空白对照组、脂质体空转染组、无关序列寡核苷酸组、survivin ASODN组、bcl-2ASODN组和survivin、bcl-2ASODN半量联用组。转染48h后采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR半定量检测K562细胞survivin mRNA表达。结果:survivin ASODN和bcl-2ASODN对K562细胞均有一定的增殖抑制作用,抑制率分别为48.78%、40.24%。而survivin、bcl-2ASODN半量联用组的细胞增殖抑制率为60.98%,明显高于单用组(P<0.01)。与非ASODN组相比,survivin ASODN和bcl-2ASODN均可诱导K562细胞凋亡,凋亡率分别为(13.36±4.03)%、(10.40±1.71)%,两者联用凋亡率提高到(26.14±4.39)%(P<0.01)。Survivin、bcl-2ASODN半量联用组survivin mRNA水平明显低于survivin ASODN组和bcl-2ASODN组。结论:survivin、bcl-2ASODN联用可协同抑制K562细胞的增殖,增强凋亡诱导作用,可为白血病基因治疗提供一项新策略。     

bcl-2硫代反义寡核苷酸对Raji细胞增殖和凋亡的影响

研究bcl-2硫代反义寡核苷酸(bcl-2 ASODN)对淋巴系统恶性肿瘤的作用及机制。将bcl-2 ASODN与Raji细胞共孵育，应用MTT检测，电镜超微结构，流式细胞仪（FCM）分析和RT-PCR方法，观察bcl-2 ASODN对Raji细胞增殖及凋亡的影响，以及bcl-2蛋白及mRNA水平的变化。MTT检测显示bcl-2 ASODN可以部分抑制Raji细胞增殖；经ASODN作用48h，电镜超微细胞观察细胞呈现典型凋亡特征，包括胞膜出芽，异染色质核膜下浓聚形成凋亡小体及胞核破裂；FCM检测Annexin V^ /PI^-的凋亡细胞比例升高，20μmol/L bcl-2 ASODN处理Raji细胞72h，细胞凋亡率达43.86%，比对照组（10.05%）明显增高。bcl-2阳性细胞率逐渐下降，于72h达低谷为0.88%，明显低于对照组（79.54%）。bcl-2 mRNA水平亦显下降。结论 bcl-2 ASODN通过下调bcl-2蛋白表达水平，诱导Raji细胞凋亡。     

亚硒酸钠对K562/ADR多药耐药的逆转作用及其机制

本研究探讨亚硒酸钠对白血病耐药细胞株K562/ADR细胞的多药耐药性的逆转作用及其逆转机制。用噻唑蓝（MTT）法检测亚硒酸钠对K562/ADR细胞的生长抑制作用及其对K562/ADR细胞耐药性的逆转作用;应用流式细胞仪检测亚硒酸钠对K562及K562/ADR细胞凋亡率的影响;用半定量RT-PCR法检测K562/ADR细胞中mdr1和bcl-2基因的表达情况。结果表明,10μmol/L亚硒酸钠可以明显增加K562/ADR细胞对阿霉素敏感性,其耐药逆转倍数为2.31;早期凋亡率在10μmol/L亚硒酸钠作用于K562细胞48小时是升高的;而中、晚期凋亡率在亚硒酸钠5、10μmol/L作用48、72小时时均明显升高;两种浓度亚硒酸钠在作用48小时可使K562/ADR细胞早期凋亡率增加,作用48、72小时可使K562/ADR的细胞中、晚期凋亡率增高,10μmol/L的亚硒酸钠所致凋亡率高于5μmol/L,作用72小时的凋亡率高于48小时;亚硒酸钠可使K562/ADR细胞mdr1 mRNA及bcl-2mRNA表达下降。结论：亚硒酸钠可部分逆转K562/ADR细胞的耐药性,其机制可能是增加K562/ADR细胞凋亡率,下调mdr1 mR-NA和bcl-2 mRNA的表达。     

二硫化二砷联合伊马替尼诱导慢性髓细胞白血病细胞凋亡机制探讨

目的：观察二硫化二砷（As2S2）和伊马替尼（STI571）联合用药对慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）细胞株的作用机制。方法：应用MTT增殖抑制实验、锥虫蓝拒染细胞计数、瑞氏染色细胞形态观察、Annexin V流式细胞仪检测凋亡细胞,RT-PCR检测bcr-abl mRNA的表达及蛋白印迹（Western blot）分析BCR-ABL的表达、细胞色素C（cytoC）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（caspase）蛋白表达,观察As2S2、STI571联合或单独作用于STI571敏感细胞株K562S及耐药细胞株K562R的情况。结果：2.5μmol/LAs2S2＋0.25μmol/LSTI571或4μmol/LAs2S2＋8μmol/LSTI571联合用药对K562S或K562R有明显生长抑制协同作用和促凋亡协同作用;联合用药对K562S或K562R的bcr-abl mRNA的表达无明显影响,但K562S细胞BCR-ABL表达明显减少,K562R细胞BCR-ABL表达略有减少。且联合用药可促进凋亡诱导蛋白cytoC释放增多及caspase9和caspase3前体下调。结论：STI571与As2S2联合用药对K562S和K562R细胞有明显的生长抑制和促凋亡的协同作用,这一作用可能通过减少BCR-ABL表达及凋亡相关蛋白cytoC释放,并下调caspase9和caspase3前体的表达以促进细胞凋亡。     

Chk1/2反义寡核苷酸对顺铂作用下K562细胞凋亡的影响

为了观察顺铂作用下细胞周期变化规律和Chk1／2反义寡核苷酸转染K562细胞后对顺铂诱导凋亡的影响，采用流式细胞术检测顺铂作用下K562细胞周期变化；以脂质体作为载体，转染Chk1／2反义寡核苷酸于K562细胞，用Western blot和共聚焦显微镜检测转染Chk1／2反义寡核苷酸后Chk1／2蛋白表达；用流式细胞术检测转染Chk1／2反义寡核苷酸后顺铂作用下细胞凋亡率。结果发现，10μmol／L顺铂作用下K562细胞出现S期阻滞，Chk1／2反义寡核苷酸对K562细胞中Chk1／2蛋白表达有明显抑制作用，转染Chk1／2反义寡核苷酸可明显增加顺铂诱导下K562细胞凋亡率，Chkl和Chk2联合转染作用优于单独转染。结论：Chk1／2可作为白血病增敏治疗的有效靶点。     

乳腺癌环氧合酶-2和基质金属蛋白酶-2及其抑制因子的表达

目的 研究环氧合酶(COX)-2、基质金属蛋白酶(MMP)-2及其抑制因子(TIMP-2)在乳腺癌组织中的蛋白表达及其相互关系.方法 建立组织芯片平台,应用免疫组织化学S-P法检测127例乳腺癌组织COX-2、MMP-2和TIMP-2蛋白的表达情况.结果 乳腺癌COX-2、MMP-2和TIMP-2阳性率分别为81.1%(103/127)、96.9%(123/127)和60.6%(77/127);COX-2的表达与乳腺癌腋淋巴结转移和TNM分期均呈正相关(P<0.01,P<0.05),与孕激素受体表达呈负相关(P<0.05);MMP-2蛋白表达与COX-2表达呈显著正相关(r=0.290,P<0.01).结论 乳腺癌COX-2表达状况与肿瘤侵袭转移有密切关系,COX-2可能通过调控MMP-2表达来促进肿瘤侵袭转移.     

COX-2和MMP-2在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨环氧化酶-2（cyclooxygenase,COX-2）和基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）在乳腺癌中表达的意义和相互关系。方法免疫组化方法（S-P法）观察70例乳腺癌,15例乳腺良性肿瘤与15例正常乳腺组织的COX-2和MMP-2的表达。结果正常乳腺组织和良性肿瘤中COX-2和MMP-2无表达,乳腺癌组织中COX-2和MMP-2的阳性表达率分别为57.14%和61.43%（P〈0.05）,cyclinE和p53的阳性表达与乳腺癌的临床分期密切相关（P〈0.05）;cyclinE和p53在乳腺癌的阳性表达具有相关（P〈0.05）,共同阳性表达的患者5年生存率明显低于阴性者（P〈0.05）。结论COX-2和MMP-2在乳腺癌中均有高表达,在乳腺癌的发病过程中它们的高表达具有协同效应,共同促进乳腺癌的发生和发展。     

MMP-2和TIMP-2在大肠癌中的表达及意义

<正>1材料与方法 1.1材料收集深圳市福田人民医院2002-01—2006-12间经手术切除的102例大肠癌(CRC)组织及14例大肠腺瘤组织的石蜡标本。102例CRC中,男性66例,女性36例;年龄31～88岁,平均58岁;高分化癌58例,中分化癌25例,低分     

冠状动脉支架置入后血管再狭窄与PR2Y2基因单核苷酸多态性的相关性

背景:越来越多的基础研究显示P2RY2基因在心血管系统中起重要的调节作用.已有研究表明,人类尸=2开y2基因可能与冠状动脉支架置入后再狭窄的发生相关.目的: 验证人类P2RY2基因单核苷酸多态性与冠状动脉支架置入后再狭窄的相关性.设计、时间及地点:病例一对照观察,于2006-03/2008-06在新疆医科大学第一附属医院心脏中心完成.对象:纳入冠状动脉支架置入后再狭窄患者32例,另外选择120例既往无心血管系统疚病史的人作为对照组.方法:选择P2RY2基因的5个单核苷酸多态性rs4944831,rs1783596,rs4944832,rs4382936及rs10898909,通过TaqMan单核苷酸多态性基因分型的方法进行基因分型.主要观察指标:分析并比较2组5个单核苷酸多态性基因型频率和等位基因频率的分布,并应用Logistic回归分析方法分析支架置入后再狭窄主要危险因素对结果的影响.结果:支架置入后再狭窄组与正常对照组相比,rs4944831在基因型和显性模型(TG+GG)的分布差异有显著性意义(P=0.039,0.040);rs10898909在隐性模型(AA)和等位基因的分布差异有显著性意义(P=0.022,0.039).Logistic回归分析显示,TG+GG在2组的差异消失,而AA在2组的差异依然存在(P=0.016).结论:人类P2RY2基因的rs10898909可作为冠状动脉支架置入后再狭窄的标志,其AA基因型与冠状动脉支架置入后再狭窄的发生有关.     

大鼠■创伤牙周组织中PGE2及TXB2水平的分析

目的:观察大鼠创伤牙周组织中的PGE2、TXB2水平的变化,探讨大鼠创伤对牙周组织的影响。方法:将48只大鼠随机分为实验组和对照组,每大组各又分为4小组,每小组6只,创伤3d、2周、4周及12周时处死大鼠,提取创伤牙龈、牙槽骨标本测定PGE2、TXB2含量。检测结果进行统计学分析。结果:对照组各组间PGE2、TXB2含量均无差异(P>0.05)。实验组各组间PGE2、TXB2含量有显著差异(P<0.001),其中3d组除牙龈TXB2高于对照组外(P<0.01),余PGE2、TXB2均明显高于对照组(P<0.001);2周组PGE2、TXB2最高,4周组PGE2、TXB2有所下降,但均高于对照组(P<0.001);12周组PGE2、TXB2明显下降,接近对照组(P>0.05)。结论:创伤牙周组织中PGE2、TXB2的变化规律是由病变到修复到适应的过程。     

COX-2和MMP-2在胃癌组织中的表达及临床意义

目的研究环氧合酶-2（Cydooxygenase-2，COX-2）和基质金属蛋白酶-2（Matrix metalloproteinase-2，MMP-2）的表达以及与胃癌浸润转移的关系，探讨二者间的相互关系。方法采用SP免疫组织化学技术，取吉林大学第一临床医院病理科存档的胃癌石蜡标本46例及正常胃组织15例，每例切片2张，分别检测COX-2和MMP-2的表达情况，分析其与胃癌浸润转移的关系。结果用SPSS10．0统计软件进行分析。结果15例正常胃组织中COX-2和MMP-2的表达为阴性，46例胃癌组织中COX-2的阳性表达率为60．9％（28／46），显著高于正常胃组织（P〈0．05），COX-2阳性表达与胃癌淋巴结转移、临床分期相关（P〈0．05），与胃癌大小、浸润程度、分化程度无关（P〉0．05）。MMP-2的阳性表达率为71．7％（33／46），显著高于正常胃组织（P〈0．05），MMP-2阳性表达与胃癌淋巴结转移、临床分期、浸润深度相关（P〈0．05），与肿瘤大小及分化程度无关（P〉0．05），COX-2与MMP-2表达密切相关（P〈0．05）。结论COX-2和MMP-2在胃癌组织中的表达密切相关，COX-2和MMP-2的高表达促进了胃癌的浸润和转移，提示COX-2和MMP-2可作为判断预后的指标和化学治疗的靶点。     

C2R模型与C2GS2模型在胸外科监护室护理人力资源效率评价中的应用研究

目的 研究某市胸外科监护室护理单元相对效率,为管理者合理配置护理人力资源提供建议.方法 应用C2R模型和C2GS2模型对某市12个胸外科监护室护理单元的相对效率进行评价.结果 从纯粹的投入产出技术层面评估,参评的护理单元中,相对有效的决策单元占75%;相对无效的决策单元通过各指标的理想值可达到相对有效.结论 胸外科监护室护理人力资源存在不足与低效并存的现象;应用DEA模型对护理效率进行评估可以为人力资源配置提供科学依据.     

基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及意义

目的:研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)在卵巢浆液性囊腺肿瘤中的表达及与卵巢浆液性囊腺癌的临床、病理特征之间的关系.方法:通过免疫组化方法检测16例卵巢浆液性囊腺瘤、15例交界性卵巢浆液性囊腺瘤及40例卵巢浆液性囊腺癌中MMP-2和TIMP-2的表达情况,并应用图像分析仪对卵巢浆液性囊腺癌MMP-2、TIMP-2阳性细胞百分面积进行定量检测,计算MMP-2/TIMP-2比值.结果:卵巢浆液性囊腺瘤、交界性卵巢浆液性囊腺瘤及卵巢浆液性囊腺癌中MMP-2的表达分别是25%、60%、73%,TIMP-2的表达分别是31%,47%,63%.MMP-2/TIMP-2比值在卵巢浆液性囊腺癌Ⅲ、Ⅳ期较Ⅰ、Ⅱ期增大,低分化(G3)较中、高分化(G2、C1)增大.结论:MMP-2和TIMP-2可能均与卵巢浆液性囊腺癌的形成和进展有关.     

COX-2和HER-2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的研究COX-2和HER-2在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测了68例非小细胞肺癌组织中COX-2和HER-2的表达水平,分析两者与临床病理参数之间的关系以及分析两者之间的相互关系。结果非小细胞肺癌中COX-2阳性表达率为54/68(79.41%),COX-2的高表达与病理类型及TNM分期相关(P<0.05);HER-2阳性表达率为26/68(38.24%),HER-2的表达与年龄相关(P<0.05)。HER-2与COX-2的表达强度之间呈显著正相关(r=0.2486,P=0.041)。HER-2阳性/COX-2高表达的NSCLC临床分期晚、淋巴结转移率高。结论COX-2在NSCLC中高水平表达并与HER-2密切相关,检测COX-2与HER-2的表达对NSCLC预后的判断可能具有重要价值。     

CO_2气腹后动脉血PaCO_2的变化及不同潮气量对动脉血PaCO_2的影响

目的探讨CO2气腹手术动脉血气CO2分压(PaCO2)的变化以及不同潮气量对动脉血PaCO2的影响。方法选择腹腔镜下胆囊切除或子宫切除术病人56例,ASA分级Ⅰ-Ⅱ级,所有病例分成两组(Ⅰ、Ⅱ组),每组28例。Ⅰ组潮气8ml/kg体重,Ⅱ组潮气量10ml/kg体重,全麻后分别于气腹前和气腹后30、60和120min抽动脉血检测PaCO2。结果Ⅰ组病人气腹后动脉血PaCO2明显上升且随着气腹时间的延长而升高,其中有2例手术时间超过2h,气腹后120min动脉血PaCO2最达62mmHg,其变化具有非常显著性差异(P<0.001)。Ⅱ组气腹前后动脉血PaCO2略有升高,但无明显差异(P>0.05)。结论CO2气腹后动脉血PaCO2升高,且随着气腹时间延长而逐渐升高但并非线性升高;10ml/kg体重潮气量可有效地防止CO2气腹后动脉血PaCO2升高,使腹腔镜手术更安全。