125Ⅰ-HPNS-TOC的生物学评价

目的研究联接标记法制备的^125I—HPNS—TOC与小细胞肺癌株NCI—H446的受体结合特性及其在小鼠体内的分布。方法^125I—HPNS—TOC与NCI—H446进行受体分析,并进行昆明鼠体内分布实验。结果^125I—HPNS—TOC与NCI—H446上的SSTR结合的具有高亲和力,在小鼠体内主要经消化系统和泌尿系统排出体外。结论^125I—HPNS—TOC与SSTR结合力高,有望成为生长抑素受体阳性肿瘤的靶向放射性药物。     

神经细胞粘附分子对人恶性脑胶质瘤细胞株体内外增殖能力的影响

目的：探讨神经细胞粘附分子（neural cell adhesion molecule,NCAM)对人脑胶细胞株U251MG增殖行为的影响。方法：将外源性NACM－140质粒转入U251MG细胞株,采用流式细胞仪及培养细胞增殖动力学方法比较转染前后细胞的细胞周期、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达及群体增殖速度;在裸鼠颅内原位接种上述细胞,观察成瘤率及肿瘤大小。结果：NCAM转染后细胞的体外增殖速度减慢（P＜0．05）,S期细胞减少,PCNA表达率下降;裸鼠颅内接种的成瘤率显降低（P＜0．01）,肿瘤体积明显较小。结论：转染外源性NCAM在体外、体内均可抑制人脑胶质瘤细胞株U251MG的增殖。     

生长抑素受体2亚型在NCI-H446细胞和裸鼠肺组织细胞中的表达

目的研究生长抑素受体2(SSTR2)亚型在NCI-H446细胞和正常裸鼠肺组织细胞中的表达特性。方法选择体外培养的小细胞肺癌NCI-H446细胞株及裸鼠正常肺组织的冷冻切片,应用免疫荧光技术检测SSTR2亚型的分布与表达。结果NCI-H446细胞在激光共聚焦显微镜下呈现明亮的绿色荧光,肺组织的冷冻切片也可见闪亮荧光。SSTR2在NCI-H446细胞和正常裸鼠肺组织中表达的阳性率分别为100.0%、93.8%,两者比较差异无显著性(χ2=0.004,P>0.05);但两种标本细胞SSTR2强阳性表达数构成比之间比较,差异有显著意义(χ2=5.661,P<0.05)。结论体外培养的NCI-H446小细胞肺癌细胞株和正常裸鼠肺组织细胞均有SSTR2亚型表达,但小细胞肺癌细胞上的表达密度明显高于正常肺组织。     

瑞香狼毒水提物对肺癌细胞耐药基因蛋白表达的影响

目的探讨瑞香狼毒水提物对三种肺癌耐药基因蛋白表达的影响。方法用瑞香狼毒水提取物处理两肺癌细胞株（人小细胞肺癌NCI—H446和人非小细胞肺腺癌NCI—H157），用药前后分别用免疫组织化学sP法检测肺癌细胞中：多药耐药基因（MDR）、肺耐药蛋白（LRP）、生存素（survivin）的表达情况。利用形态学图像分析，比较瑞香狼毒用药前后三种耐药基因蛋白表达的情况。结果瑞香狼毒用药前后两肺癌细胞株三种癌基因表达情况如下：NCI—H446细胞株用药前MDR、LRP和Survivin细胞阳性率和辉度均高于用药后（P〈0．05）。NCI—H157细胞株用药前MDR、LRP和细胞阳性率和辉度均高于用药后（P〈0．05），而Survivin的表达用药前后差异不显著（P〉0．05）。结论瑞香狼毒提取物对两种肺癌细胞株的某些耐药基因蛋白的表达有明显的抑制作用。     

新型Bcl-2反义寡核苷酸（F951）治疗人小细胞肺癌的药效学实验研究

目的 建立人小细胞肺癌NCI-H446细胞裸鼠异种移植瘤模型。方法 细胞悬液初代移植后，皮下埋块法连续传代移植，观察移植瘤的生物学特性。结果 潜伏期短、不易自行消退，呈进行性生长，并可出现肝转移．移植瘤细胞的组织形态与超微结构保留了NCI-H446细胞的特点．染色体检查证明为人类肿瘤细胞染色体核型。结论 皮下埋块法进行连续传代移植可缩短异种移植瘤的潜伏期，经过三次连续传代移植的NCI-H446细胞裸鼠移植瘤可作为人小细胞肺癌裸鼠异种移植瘤模型。     

鼻咽癌细胞株裸鼠移植瘤中癌细胞增生凋亡及其相关基因的表达

目的：研究鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１、ＣＮＥ２裸鼠移植瘤中癌细胞增生、凋亡及其与肿瘤生长速度的关系,探讨移植瘤中肿瘤细胞凋亡的机理。方法：将鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１、ＣＮＥ２分别接种于裸鼠皮下,并连续在体内传９代。对每一代肿瘤组织进行ＨＥ染色,ＴＵＮＥＬ法（原位细胞死亡末端标记法）检测原位细胞凋亡及免疫组化法检测ＰＣＮＡ、ｂｃｌ２、ｂａｘ和ｐ５３的表达。结果：ＣＮＥ２移植瘤生长速度快于ＣＮＥ１移植瘤;ＣＮＥ２移植瘤内肿瘤细胞分裂指数和细胞增生指数明显高于ＣＮＥ１移植瘤,而细胞凋亡却相对较少;移植瘤组织中的凋亡主要表现为“皱缩性坏死”和“凋亡小体”的形成;所有移植瘤组织中都有ｐ５３蛋白积聚和ｂａｘ过表达,但却未见ｂｃｌ２的表达。结论：ＣＮＥ１和ＣＮＥ２细胞株移植于裸鼠皮下后,生长速度的差异是由于肿瘤细胞增生凋亡比例不同所致;裸鼠移植瘤组织中瘤细胞的死亡主要表现为凋亡,凋亡的途径可能是不依赖于野生型ｐ５３,而由ｂａｘ所介导的     

AEG-1对裸鼠肝癌模型中肝癌细胞生长及肺转移的影响

摘要:目的 研究过表达和沉默 AEG-1基因对肝癌细胞生长的影响,以及 AEG-1基因在调节肝癌细胞定向肺转移 中的作用。方法 分别以携带过表达 AEG-1序列及对照基因序列的慢病毒(lentivirus)转染 SMMC-7721肝癌细胞株 (SMMC-7721-AEG-1-L;SMMC-7721-control-L);以携带shRNAAEG-1及对照shRNA 质粒(plasmid)转染SMMC-7721 细胞株(SMMC-7721-shAEG-1-P;SMMC-7721-control-P);使用实时定量 PCR 和 Westenblot检测 AEG-1的表达;随后 使用荧光素酶基因慢病毒包装颗粒转染上述4种稳定转染细胞株。使用上述细胞株分别建立3种裸鼠肝癌模型:皮下 移植瘤模型,原位移植瘤模型和血行播散模型;每种细胞株每一模型5只 Balb-c裸鼠,共60只。建立皮下移植瘤模型, 观测肿瘤的生长情况并绘制肝细胞肿瘤生长曲线;建立肝癌原位移植瘤和血行播散模型,采用生物发光活体成像技术及 组织病理学方法监测造模成功率及肿瘤在肝内、肝外转移情况。结果 通过肝癌皮下移植瘤模型可观察到 AEG-1过表 达组肿瘤体积显著高于对照组,且裸鼠肝脏组织出现弥漫性侵袭转移灶;在肝癌原位移植瘤和血行播散模型中可观察到 AEG-1过表达/沉默可以导致肝癌细胞肝内转移、肺转移率和转移灶数量显著增高/降低。结论 过表达 AEG-1基因可 促进肝癌细胞生长以及定向肺转移,沉默 AEG-1基因抑制肝癌细胞生长及定向肺转移。     

流式细胞术检测EGFL7在肺癌不同细胞株中的表达差异

目的 探讨不同类型肺癌细胞株中EGFL7（类表皮生长因子域7）蛋白的表达差异,为进一步研究EGFL7在肺癌发病机制中的作用奠定基础.方法 选取三种常用的细胞株A549（肺癌腺）、H446（小细胞肺癌）和H69（小细胞肺癌）,采用流式细胞仪检测它们的EGFL7的表达,并比较三者之间的差异是否具有统计学意义.结果 流式细胞仪检测结果显示,EGFL7在肺腺癌细胞株A549细胞内的表达（18.17%）明显低于小细胞肺癌细胞株H446（31.20%）和H69（34.33%）细胞内的表达（P＜0.01）,两种小细胞肺癌细胞株H446和H69细胞内的表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 EGFL7可能在小细胞肺癌的发病机制中发挥重要作用.     

达菲抗原趋化因子受体在不同转移性人乳腺癌细胞中的差异表达

目的研究不同转移潜能乳腺癌细胞株中达菲抗原趋化因子受体(Duffy antigen receptor for chemokines,DARC)mRNA表达和蛋白质水平的差异,探讨DARC与乳腺癌细胞转移潜能的相关性。方法培养高低转移潜能的人乳腺癌MDA-MB-435细胞株,并将其接种到裸鼠体内,以体外培养细胞和裸鼠体内原位异种移植瘤为标本,用RT-PCR法检测DARC mRNA的表达,同时在细胞涂片上,用抗Fy3单抗检测DARC的蛋白质水平。结果高转移潜能MDA-MB-435细胞的DARC表达显著性地低于低转移潜能MDA-MB-435细胞,并且在接种高转移潜能MDA-MB-435细胞而形成的裸鼠体内原位移植瘤中的DARC表达也显著性地低于低转移潜能MDA-MB-435细胞来源的移植瘤。结论本研究首次揭示趋化因子清除槽DARC的表达差异与人乳腺癌细胞的不同转移潜能有关,有望成为抑制乳腺癌转移的新靶点。     

转移力不同的肺癌克隆细胞中nm23-H1基因产物NDPK的表达

【目的】比较转移抑制基因nm2 3 H1表达产物核苷酸二磷酸激酶 (nucleosidediphosphatekinase ,NDPK)在转移力不同的肺癌克隆株中的表达。【方法】通过单细胞克隆技术及裸鼠接种筛选出高转移及低转移的人肺巨细胞癌克隆细胞株及高转移的人肺腺癌克隆细胞株 ,用LSAB免疫组化法检测nm2 3 H1基因产物NDPK的表达。【结果】NDPK在高转移及低转移的人肺巨细胞癌克隆细胞移植瘤及转移瘤中均有表达 ,高转移株的阳性细胞数目及强度均高于低转移株和裸鼠正常肺组织 ;NDPK在高转移的肺腺癌克隆细胞移植瘤中有表达 ,表达强度低于裸鼠正常肺组织。【结论】nm2 3 H1基因对肺巨细胞癌并不具转移抑制基因的功能 ,而可能促进肿瘤的发生、发展和转移。     

RNA干扰介导的MAGE3基因表达沉默对肺癌细胞定植和转移的影响

目的构建针对人MAGE3基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体,观察RNA干扰介导的MAGE3基因表达默寂对肺癌细胞定植和转移的影响.方法设计MAGE3靶向的发夹状siRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPERneoGFP载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体包裹转染人肺癌细胞NCI-H446,采用RT-PCR和Western印迹检测MAGE3基因mRNA和蛋白表达水平的变化.用软琼脂克隆形成实验和细胞体外侵袭实验,观察对肿瘤形成能力和侵袭力的影响.结果把针对MAGE3基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pSUPERneoGFP载体,经过酶切鉴定与测序,结果正确;RT-PCR和Western印迹检测显示, MAGE3基因的表达水平明显降低;转染siRNA表达载体组的肺癌细胞在软琼脂中形成克隆数和穿透Matrigel的细胞数都显著下降,与未转染和转染空载体组比较差异有显著性（P﹤0.05）.结论成功构建了针对MAGE3基因的siRNA载体, RNA干扰介导的MAGE3基因表达沉寂可有效降低肺癌细胞定植和转移.     

MnSOD沉默对NCI-H446细胞系球细胞体外致瘤性的影响

目的：研究锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)沉默对人小细胞肺癌NCI-H446细胞 系球细胞体外致瘤性的影响及其潜在的机制。方法：采用悬浮培养法得到人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞,用 Western印迹分析MnSOD和尿激酶型纤溶原酶激活物(urokinase type plasminogen activator,uPAR)表达。利用腺病毒感染 技术沉默NCI-H446细胞MnSOD,球形成法和软琼脂集落形成法评价MnSOD沉默对NCI-H446球细胞体外致瘤性的影 响,用Western印迹检测uPAR的表达。结果：与NCI-H446细胞比较,NCI-H446细胞第2代球细胞的球形成率和集落形 成率及MnSOD和uPAR表达明显增加(P<0.05)。表达shMnSOD的腺病毒抑制NCI-H446细胞第2代球细胞球形成率、集 落形成率及uPAR的表达。结论：MnSOD可能通过调控uPAR表达维持小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞的体外高致 瘤性。     

热疗联合紫杉醇对NCI-H446细胞增殖和VEGF mRNA表达的影响

目的:观察热疗联合紫杉醇对NCI-H446细胞增殖作用以及VEGF mRNA表达的影响。方法:将NCI-H446细胞分组,Ⅰ热疗组(43℃加热90 min);Ⅱ紫杉醇组;Ⅲ热疗联合紫杉醇组;Ⅳ对照组(常规培养细胞)。分别在处理72 h后用MTT法检测4组细胞增殖情况;RT-PCR检测各组细胞中VEGF mRNA的表达量。结果:加热抑制了NCI-H446细胞的增殖;单独应用紫杉醇随着药物浓度的倍比增大,增殖抑制率逐渐增大;加热联合紫杉醇与对应浓度单独使用比较差异有统计学意义(P<0.05)。加热降低了NCI-H446细胞中VEGF mRNA的表达;加热联合紫杉醇组中NCI-H446细胞中VEGF mRNA的表达量明显减少,与对应浓度紫杉醇组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:43℃加热90 min联合紫杉醇对NCI-H446细胞增殖有抑制作用,并降低了VEGF mRNA的表达量。     

Ad-PTEN对人小细胞肺癌NCI-H446细胞生长的抑制作用

目的研究重组腺病毒第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）对小细胞肺癌的抑癌增效和化疗增敏效应及其分子机制。方法采用重组腺病毒载体PTEN（简称Ad-PTEN）感染QBI-293A细胞,并用该细胞进行病毒扩增和效价测定。将Ad-PTEN感染NCI-H446小细胞肺癌细胞。分为5组：PBS组、空载体Ad组、Ad-PTEN组、顺铂（DDP）组和Ad-PTEN＋DDP组,Western blot鉴定PTEN基因表达,MTT法和流式细胞仪（FCM）检测Ad-PTEN对NCI-H446小细胞肺癌细胞的生长抑制和诱导凋亡的增效作用,用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因p53、bax、caspase-3、bcl-2、和survivin的转录。结果 Ad-PTEN可在QBI-293A细胞中增殖。Ad-PTEN感染NCI-H446细胞后,Western blot检测到了PTEN基因的表达。Ad-PTEN组、DDP组、Ad-PTEN＋DDP组体外能明显抑制人NCI-H446小细胞肺癌细胞的生长和诱导凋亡,且Ad-PTEN＋DDP组效应较Ad-PTEN组、DDP组更为显著（均P〈0.05）。Ad-PTEN组、DDP组、Ad-PTEN＋DDP组的NCI-H446细胞中的p53、bax及caspase-3基因表达均上调,而Bcl-2和Survivin基因表达均下调,这些凋亡相关基因的上调或下调的表达趋势以Ad-PTEN＋DDP组最显著（均P〈0.05）。结论 Ad-PTEN体外可抑制NCI-H446小细胞肺癌细胞生长,Ad-PTEN对DDP的细胞毒作用具有增敏效应,其机制可能与上调p53、bax及caspase-3基因表达和下调bcl-2和survivin基因表达有关。     

DADS诱导小细胞肺癌细胞株NCI-H446凋亡及其分子机制

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)诱导人肺癌细胞株NCI-H446凋亡及其分子机制.方法 流式细胞仪检测DADS诱导NCI-H446细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜检测NCI-H446细胞内Ca2+水平变化;利用免疫细胞化学法检测NCI-H446细胞内Bcl-2蛋白表达.结果 与对照组相比,DADS处理组细胞的凋亡率显著增加(P＜0.05);DADS处理组细胞内Ca2+水平升高(P＜0.05).DADS下调Bcl-2(P＜0.05).结论 DADS诱导小细胞肺癌细胞株NCI-H446凋亡,其具体机制可能与DADS下调Bcl-2蛋白表达和促进细胞内Ca2+水平升高有关.     

Ubc9对肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响及机制探讨

目的探讨过表达Ubc9蛋白对人肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响及可能机制。方法构建pEGFP-N1-Ubc9真核表达载体,稳定转染到肺癌细胞系NCI-H446细胞,以蛋白免疫印迹实验检测外源Ubc9的表达,以流式细胞术分析细胞凋亡情况,利用Western blot方法检测转染前后NCI-H446细胞Bcl-2蛋白表达水平。结果成功构建Ubc9真核表达质粒,蛋白免疫印迹实验证实外源性Ubc9蛋白质于肺癌NCI-H446细胞高表达,流式细胞术检测发现目的蛋白质过表达后的细胞凋亡比率降低,转染组凋亡率(5.52±0.48)%明显低于空转染组的(10.11±0.92)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot方法检测转染组Bcl-2蛋白表达水平则高于空转染组。结论Ubc9高表达可以抑制NCI-H446细胞的凋亡,其凋亡水平的改变与影响Bcl-2蛋白的表达有关。     

FGF-2对小细胞肺癌细胞株NCI-H446 survivin表达及Smac亚细胞定位的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,FGF-2)对小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)细胞株NCI-H446中survivin的表达及Smac亚细胞定位的影响.方法:Western 印迹分析FGF-2对NCI-H446中凋亡抑制蛋白survivin表达的影响.Western印迹和免疫荧光分析FGF-2对线粒体释放的促凋亡蛋白Smac的亚细胞定位的影响.流式细胞术检测NCI-H446的细胞凋亡百分率.Hoechst 33258染色观察FGF-2对NCI-H446细胞凋亡的影响.结果:FGF-2能明显诱导NCI-H446细胞中survivin蛋白的表达,survivin的表达水平与FGF-2作用的浓度和时间明显相关.血清饥饿诱导的Smac蛋白从线粒体的释放可被FGF-2所抑制.FGF-2能明显抑制血清饥饿诱导的凋亡.结论:FGF-2可显著提高SCLC细胞株NCI-H446中凋亡抑制蛋白survivin的表达水平,并显著抑制血清饥饿诱导的促凋亡蛋白Smac释放入胞浆.这可能与其抑制肿瘤细胞凋亡有关.     

细胞粘附分子在C57BL/6小鼠垂体的表达与分布

目的：观察几种不同细胞粘附分子（CAMs）（NCAM、L1和CHL1）在C57BL/6小鼠垂体的表达与分布。方法：C57BL/6小鼠经心脏灌注取垂体,行NCAM、L1和CHL1免疫荧光染色及蛋白质印迹检测。结果：蛋白质印迹分析显示垂体NCAM相对表达量显著高于L1（P〈0.01）,但未检测到CHL1。免疫荧光染色显示NCAM广泛表达于垂体前叶,L1选择性表达于垂体前叶细胞和神经垂体,CHL1荧光信号仅见于垂体中叶。结论：NCAM、L1和CHL1在C57BL/6小鼠垂体的表达量有显著差异,其在垂体组织中的分布亦有区别,提示这些CAMs在垂体中的作用不同。