Beagle犬和食蟹猴血清生化和血液学指标的测定

目的建立Beagle犬和食蟹猴血液及血清生化指标的正常参考值范围,为判定血液和血清生化指标异常提供依据。方法普通级健康Beagle犬,6～9个月龄,食蟹猴,2～3岁。Beagle犬前肢桡静脉采血(食蟹猴为前臂静脉),分别采用Hitachi 7060自动生化分析仪和Advia 120自动血球分析仪检测生化和血液指标,对测定结果作统计检验。结果经过统计分析,分别得出Beagle犬及食蟹猴血清生化和血液指标的正常参考均值以及标准差。结论初步建立不同性别间Beagle犬和食蟹猴的血液学指标和血生化指标正常值的参考范围。     

注射用灯盏花素在比格犬与食蟹猴的体内毒性比较

目的:比较注射用灯盏花素对比格(Beagle)犬和食蟹猴的体内毒性。方法:普通级Beagle犬32只,雌雄各半,设生理氯化钠溶液(NS)对照和注射用灯盏花素40,80,120 mg·kg~(-1)剂量组。食蟹猴4只,设NS对照和注射用灯盏花素200 mg·kg~(-1)组。2种动物均静脉滴注给药13周,停药恢复4周,观察体内毒性。结果:Beagle犬80和120 mg·kg~(-1)组出现呕吐、腹泻、流涎等不良反应。120 mg·kg~(-1)组有1只动物给药11d皮肤出现斑疹、荨麻疹;给药第11周有1只动物出现呕血、便血后死亡。食蟹猴200 mg·kg~(-1)组仅发现1只动物出现间断性流涎。Bea- gle犬和食蟹猴各剂量组体重增长,进食量正常,血液、生化等其他各项检测指标未见明显异常。结论:食蟹猴和Beagle犬对注射用灯盏花素的耐受性、敏感性和毒性反应均存在种属差异。     

巴马小型猪植入式遥测动物模型的建立及应用

目的 基于遥测技术建立适用于监测清醒自由活动状态下巴马小型猪心电、血压、体温等生理指标的动物模型,为其在安全药理学研究中的应用提供支持。方法 8只巴马小型猪（雌雄各半）经手术植入植入子,手术后恢复3~4周,经体格检查确认已完全恢复后,采用EMKA遥测系统连续监测至少24 h心电图、血压等生理指标,包括心率、PR间期、QRS间期、QT间期、校正QT （QTcv）间期、体温、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、平均动脉压（MBP）,并于次周重复监测1次。对巴马小型猪的24 h指标变化进行分析,并与Beagle犬和食蟹猴数据进行种属间比对分析。结果 巴马小型猪的心电数据和血压数据昼夜节律均不明显;体温呈现明显的昼夜节律,白天体温高,夜间体温低;动物的心率、血压和体温均受外界影响比较大,与动物的活动呈现明显的相关性;与Beagle犬和食蟹猴比较,巴马小型猪的心率和人类最为相似,SBP仅稍高于人类。结论 通过体内植入植入子,成功建立了巴马小型猪植入式遥测动物模型;与Beagle犬和食蟹猴比较,巴马小型猪更适合用于药物对心血管系统影响的评价。     

辛伐他汀在人、食蟹猴和大鼠血浆中稳定性的种属差异

目的 建立LC—MS／MS法测定辛伐他汀在食蟹猴血浆中的检测方法学,并比较其在人、食蟹猴和大鼠3种动物血浆中的稳定性差异。方法建立LC—MS／MS分析食蟹猴血浆辛伐他汀药物浓度的方法学;配制辛伐他汀3种动物血浆样品,分别于室温放置4h、24h及-80℃冻存1个月,并定量检测。结果辛伐他汀线性范围为0．5～50μg·L^-1,定量下限为0．5μg·L^-1,相对回收率99～109％,日内、日间精密度均小于6．67％;辛伐他汀在食蟹猴血浆中室温放置24h样品的药物浓度降低70％左右;在SD大鼠血浆中室温放置4h和24h样品的药物浓度分别降低75％和80％左右;在人血浆中室温放置24h的样品的药物浓度降低30％左右;-80℃冻存条件下,除大鼠血浆样品外,其他样品基本稳定。结论所建立的方法适用于小体积实验动物辛伐他汀药动学研究;辛伐他汀在不同动物种属血浆中的稳定性存在很大差异。     

小分子抗肿瘤化合物SPH0396在不同种属体内外代谢的比较

目的:比较研究SPH0396在不同种属的体内外代谢产物.方法:采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UPLC/Q-TOF MS),比较研究不同种属肝微粒体中SPH0396的体外代谢产物,并进一步研究比格犬和食蟹猴分别灌胃给予SPH0396后血浆中的代谢产物.结果:SPH0396在体内外的代谢产物主要有N-去甲基代谢产物和氮氧化代谢产物.结论:SPH0396在猴的体内外代谢产物与人肝微粒体基本一致,该研究结果可为临床前药代和安全性评价的实验动物选择提供依据.     

基于高效液相色谱-串级质谱法研究肝微粒体中T-2毒素代谢的种属差异性

目的比较T-2毒素在不同种属动物肝微粒体中代谢的差异性。方法将T-2毒素与小鼠、大鼠、比格犬、猴和人肝微粒体37℃孵育不同时间,孵育液经蛋白沉淀后采用高效液相色谱-质谱法检测,比较T-2毒素在不同种属动物中代谢动力学参数及代谢产物生成量的差异。结果 T-2毒素在人肝微粒体中半衰期(t_(1/2))<1 mim,在小鼠和猴肝微粒体中为2~4 min,在比格犬肝微粒体中为13 min,在大鼠肝微粒体中为39 min。5种动物对T-2毒素的肝清除能力可分为3组,即人、比格犬和大鼠为1组;猴和小鼠各为1组其中小鼠组对T-2毒素的肝清除率是人、比格犬和大鼠组的3~4倍不同种属的肝微粒体对T-2毒素的亲和力存在显著差异,其中T-2毒素在小鼠肝微粒体中的亲和力最高,其余依次为人、比格犬、大鼠和猴。酶的转化速率以在猴肝微粒体中最大,大鼠和比格犬中略小,而人和小鼠肝微粒体中酶转化速率仅为猴肝微粒体中转化速率的1/10~6。T-2毒素在猴肝微粒体中主要代谢产物为3'-OH-T-2和新茄病镰刀菌烯醇,在人和大鼠肝微粒体中为T-2三醇和HT-2毒素,在比格犬肝微粒体中以HT-2毒素和3'-OH-T-2毒素为主,在小鼠中则以T-2三醇和3'-OH-T-2毒素为主。T-2毒素在小鼠、大鼠、比格犬和人肝微粒体中主要以水解代谢转化为主,而在猴肝微粒体中则以羟基化代谢为主。结论 T-2毒素的代谢参数、代谢产物及其生成量、代谢途径均存在种属差异性。     

大黄酸在大鼠和比格犬体内的吸收动力学研究

目的：研究中药大黄的活性蒽醌单体大黄酸（rhein）在SD大鼠和Beagle犬体内的吸收动力学特征,为临床的进一步研究提供基础参数和依据。方法：采用HPLC-荧光检测法分别测定SD大鼠和Beagle犬在灌胃及静脉注射两种给药途径下单次给予不同剂量的大黄酸药物后,两种动物血浆样品中的大黄酸经时曲线过程并计算相应的药代动力学参数及绝对生物利用度。结果：SD大鼠灌胃及静脉注射高、中、低剂量大黄酸后,AUC与剂量间呈一定的线性关系（r〉0.99）,灌胃及静脉注射3个剂量下的半衰期结果相似。在上述研究范围内大黄酸在大鼠体内的药代动力学行为近似是线性的。用面积法,算得高、中、低3个剂量下大黄酸在大鼠体内的绝对生物利用度分别为16.4%、23.8%、19.4%。对6只Beagle犬进行随机交叉试验,静脉注射大黄酸真溶液（0.4mg/kg）和灌胃大黄酸混悬液（20mg/kg）,算得静注及灌胃后药物的消除半衰期分别为（1.77±0.93）、（3.25±0.80）h,Beagle犬体内的绝对生物利用度为（49.7±7.4）%。对Beagle犬组（6只）和SD大鼠灌胃3剂量组（18只）各只动物生物利用度进行方差分析,结果显示差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论：大黄酸在不同动物间吸收存在一定的种属差异,吸收程度在Bea-gle犬体内略高于在大鼠体内。     

间接ELISA法测定猴血清中埃博拉病毒单克隆抗体MBS77E及药动学研究

目的:建立食蟹猴血清中抗埃博拉病毒单克隆抗体MBS77E的间接酶联免疫吸附(ELISA)定量测定法,并进行食蟹猴体内药动学研究.方法:建立优化一种定量检测食蟹猴血清中抗埃博拉病毒单克隆抗体MBS77E浓度的间接ELISA法,并进行全面验证.4只食蟹猴分为2组,每组2只,分别静脉推注不同剂量的MBS77E(5和100 m...     

药物全身暴露动物角膜损伤的观察

角膜损伤,直接影响视力,在临床上是一种比较严重的副作用。本研究观察了一种抗肿瘤药对动物角膜的损伤。1材料与方法供试品名称:BMA-1,化学合成药物。动物种属:Beagle犬24只及Wistar大鼠160只。Beagle犬口服给予5、15、50mg/kg,大鼠灌胃给予20mg/kg;1次/d,连续8周。2结果2.1Bea     

常用实验动物比较解剖学介绍及脏器病理取材规范方法探讨

我们针对常用的4种实验动物（大鼠、小鼠、犬和食蟹猴）的主要脏器比较解剖学和病理取材规范，做如下探讨：     

人与不同种属动物骨髓粒系祖细胞对硫芥敏感性的比较

本文用半固体琼脂体外培养技术和琼脂扩散盒体内培养技术测定了人和不同种属动物骨髓粒系祖细胞(CFU—GM),比较了在体内与体外条件下硫芥对不同种属动物骨髓CFU—GM的剂量存活曲线。人、犬、大鼠和小鼠离体骨髓细胞受硫芥作用后CFU—GM的剂量存活曲线在半对数座标图中呈指数性直线,D_(10)(μmol/L)分别为:人0.79,犬0.24,大鼠0.49,小鼠0.84,对硫芥的敏感性以犬最敏感.其次是大鼠.人和小鼠相对最低.硫芥中毒犬、大鼠和小鼠骨髓CFU—GM对硫芥敏感性与体外结果基本一致.     

Access2免疫化学发光仪检测动物血清心肌钙蛋白I的分析性能确证

目的对美国贝克曼库尔特有限公司Access2免疫化学发光仪的主要分析性能进行验证。方法对该仪器检测项目血清心肌钙蛋白I(Cardiac Troponin I,c Tn I)进行性能验证。利用变异系数分别对质控及大鼠、犬和食蟹猴血清心肌钙蛋白I的精密度进行评估,并根据质控精密度数据对质控的靶值范围进行计算。利用相对偏差及靶值范围对准确度进行评价;利用携带污染率对携带污染情况进行评价。利用线性方程对Trop I的线性范围进行评价,同时对Access 2免疫化学发光仪检测动物血清c Tn I的功能灵敏度进行了评价。结果 Access2免疫化学发光仪检测c Tn I低、中、高3个水平质控的批内RSD均<8%,批间RSD均<63.75%,大鼠、犬和食蟹猴血清c Tn I批内RSD均<8%。Bio-Rad 3水平质控的靶值范围分别为:0.363 8~0.473 5、1.898 6~2.819 3、7.950 3~9.367 6 ng/m L。Access2免疫化学发光仪检测c Tn I的RSD<16.32%,且低、中、高3水平质控均在各自的靶值±30%范围内。携带污染率<10%,线性验证高值动物血清按一定比例稀释后将所得理论值与实测值进行回归分析,a值介于0.95~1.05,R>0.975,线性范围为0.016 0~82.843 3 ng/m L,功能灵敏度为0.007 6 ng/m L。结论 Access2免疫化学发光仪检测c Tn I的精密度、准确度、携带污染率及线性范围均在可接受范围内,且本研究获得了动物血清c Tn I检测的线性范围及功能灵敏度。因此,Access2免疫化学发光仪可用于临床前不同动物种属c Tn I的检测。     

单抗NC05017安全性评价研究中的新技术方法

目的由于单抗类药物在种属特异性、免疫原性、免疫毒性、药代动力学和毒代动力学等方面都有别于常规药物,因此通过嵌合单抗NC05017的安全性评价研究,探索单抗类药物安全性评价的新技术和新方法。结果在NC05017的试验研究中,共使用了4种不同于常规药物安全性评价的新技术方法:(1)通过体外试验筛选和确定药物敏感动物:利用血小板结合试验,发现NC05017与人、Beagle犬和恒河猴的血小板结合力为:人>Beagle犬>恒河猴,而与大鼠、小鼠则没有特异性结合,因此,在动物选择上首选Beagle犬进行药物安全性评价研究;(2)组织交叉反应试验:构建了用于单抗类药物安全性评价的人体组织库,完成了该药物与人体组织的交叉反应试验,结果发现NC05017与29种正常人体组织均无特异性组织交叉反应,但能与人血小板特异性结合,其和药效学试验结果一致;(3)药代动力学评价:自主研制开发了NC05017的多克隆抗体酶标检测试剂盒,完成了Beagle犬血浆中测定重组抗体融合蛋白NC05017的方法学构建。方法学认证结果显示该试剂盒测定方法可靠,特异性强,灵敏度高,重现性好,回收率高,线性范围可满足药代动力学研究的需要;(4)免疫原性检测:本试验采用改良的ELISA方法测定了不同给药阶段Beagle犬血清抗体水平,结果发现重复给予NC05017不能引起Beagle犬血清中产生抗NC05017的特异性IgG抗体。结论通过以上4种方法的研究,能更准确、更全面的评价单抗类生物技术药物的毒性反应,为我国同类药物的安全性评价研究提供参考依据。     

全人抗EGFR单抗PUM200与不同种属EGFR的结合特征

目的:建立全人抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单抗PUM200临床前研究相关种属动物的筛选方法。方法:使用流式细胞术,细胞免疫荧光的方法分析PUM200与人外阴鳞状细胞癌A431及人结肠癌SW620细胞表面EGFR特异性的结合。使用免疫组织化学及直接免疫荧光的方法比较PUM200与食蟹猴、恒河猴、SD大鼠、Wistar大鼠及Balb/c小鼠皮肤组织EGFR特异性结合。结果:PUM200与A431细胞结合呈阳性,与SW620细胞不结合。与食蟹猴、恒河猴皮肤呈阳性结合,与SD大鼠、Wistar大鼠及Balb/c小鼠的皮肤结合反应呈阴性。结论:PUM200与表达EGFR的人癌细胞、非人灵长类动物皮肤特异性结合,与啮齿类动物皮肤不结合。     

食蟹猴连续皮下注射YKY-011毒性试验血清Ⅰ型胶原交联氨基末端肽含量的检测

目的建立食蟹猴血清Ⅰ型胶原交联氨基末端肽(NTx)的含量检测方法,用以评估YKY-011重复给予食蟹猴毒性试验中Ⅰ型胶原交联氨基末端肽的含量变化。方法采用竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测,验证考察了检测方法的线性范围、精密度和准确性,并对YKY-011重复给药毒性试验中食蟹猴的血清Ⅰ型胶原交联氨基末端肽含量进行了检测。结果建立并验证了灵敏度高、稳定性良好的检测猴血清中Ⅰ型胶原交联氨基末端肽的酶联免疫吸附测定方法;食蟹猴连续皮下注射YKY011在给药2周后较给药前血清Ⅰ型胶原交联氨基末端肽开始下降,且与同剂量市售对照组下降幅度相当。结论该酶联免疫吸附测定方法可用于食蟹猴血清Ⅰ型胶原交联氨基末端肽的检测,YKY-011可有效降低食蟹猴血清中Ⅰ型胶原交联氨基末端肽水平,并与市售对照品降低幅度类似。     

注射用头孢曲松钠动物体内药代动力学和相对生物利用度研究

目的：对比上海新亚药业与罗氏制药生产的两种注射用头孢曲松钠产品（简称为新亚和罗氏芬）在SD大鼠和食蟹猴的药代动力学性质差异。方法：实验动物在静脉注射和肌肉注射后,采用UPLC-MS/MS测定血浆中头孢曲松浓度,通过Kinetica 5.1计算药代动力学参数。结果：静脉注射后,新亚和罗氏芬在SD大鼠体内的AUC0-t分别为483.4±179.5μg·h/ml、542.4±166.0μg·h/ml、在食蟹猴体内分别为1703.6±564.4μg·h/ml、1811.7±601.7μg·h/ml。肌肉注射后,新亚和罗氏芬在SD大鼠体内的AUC0-t分别为412.6±153.4μg·h/ml、451.7±147.1μg·h/ml、在食蟹猴体内分别为1454.9±592.9μg·h/ml、1367.3±772.0μg·h/ml。相对于罗氏芬,新亚在SD大鼠体内静脉和肌肉注射的相对生物利用度分别为(89.1±98.6)%、(91.3±55.4)%、在食蟹猴体内分别为(94.0±9.6)%、(106.4±103.0)%。结论：两种制剂在大鼠和食蟹猴上的药代动力学特点类似,未见显著差异。     

Access 2免疫化学发光仪检测动物血清心肌钙蛋白I的分析性能确证

目的 对美国贝克曼库尔特有限公司Access2免疫化学发光仪的主要分析性能进行验证。方法 对该仪器检测项目血清心肌钙蛋白I(Cardiac Troponin I, cTnI)进行性能验证。利用变异系数分别对质控及大鼠、犬和食蟹猴血清心肌钙蛋白I的精密度进行评估, 并根据质控精密度数据对质控的靶值范围进行计算。利用相对偏差及靶值范围对准确度进行评价;利用携带污染率对携带污染情况进行评价。利用线性方程对TropI的线性范围进行评价, 同时对Access 2免疫化学发光仪检测动物血清cTnI的功能灵敏度进行了评价。结果 Access2免疫化学发光仪检测cTnI低、中、高3个水平质控的批内RSD均<8%, 批间RSD均<63.75%, 大鼠、犬和食蟹猴血清cTnI批内RSD均<8%。Bio-Rad 3水平质控的靶值范围分别为:0.363 8～0.473 5、1.898 6～2.819 3、7.950 3～9.367 6 ng/mL。Access2免疫化学发光仪检测cTnI的RSD<16.32%, 且低、中、高3水平质控均在各自的靶值±30%范围内。携带污染率<10%, 线性验证高值动物血清按一定比例稀释后将所得理论值与实测值进行回归分析, a值介于0.95～1.05, R> 0.975, 线性范围为0.016 0～82.843 3 ng/mL, 功能灵敏度为0.007 6 ng/mL。结论 Access2免疫化学发光仪检测cTnI的精密度、准确度、携带污染率及线性范围均在可接受范围内, 且本研究获得了动物血清cTnI检测的线性范围及功能灵敏度。因此, Access2免疫化学发光仪可用于临床前不同动物种属cTnI的检测。     

RNAⅢ抑制肽的急性毒性和全身主动过敏实验

摘要：目的:观察RNAⅢ抑制肽衍生物RIP1183对SD大鼠、Beagle犬的急性毒性反应和对豚鼠过敏反应。方法:SD大鼠和Beagle犬随机分为RIP1183给药组和对照组。SD大鼠尾静脉注射RIP1183,单次剂量为50 mg·kg-1,间隔4～5 h,连续2次总剂量为100 mg·kg-1,对照组给予等体积的0.9%氯化钠注射液,给药后连续14 d观察RIP1183对大鼠的毒性作用。Beagle犬静脉注射RIP1183,最大给药剂量为50 mg·kg-1,对照组给予等体积的0.9%氯化钠注射液,给药后连续14 d观察RIP1183对Beagle犬的体质量、体温、摄食量、血清生化指标、血液学指标、眼科检查和心电图的影响。采用豚鼠全身主动过敏实验,Hartley豚鼠随机分为阴性对照组（0.9%氯化钠注射液）、阳性对照组（牛血清白蛋白V）、RIP1183低(9.3 mg·kg-1、高(18.6 mg·kg-1)剂量组,每组6只。动物致敏腹腔注射给药3次,激发静脉注射给药2次,激发给药后观察动物是否出现过敏反应。结果:给予RIP1183后,SD大鼠外观、行为活动、饮食等均未见明显异常,体质量增长正常,结束时全部存活,大体解剖未见肉眼可见变化。Beagle犬给药后,其体质量、体温和摄食量与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）,其他各项指标均无异常。阳性对照组豚鼠在激发后出现过敏症状,RIP1183各剂量组豚鼠激发后未见明显异常和过敏反应症状。结论:SD大鼠和Beagle犬分别静脉给予100 mg·kg-1和50 mg·kg-1?RIP1183后均无异常反应亦无死亡;豚鼠的RIP1183过敏反应为阴性。     

聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子大鼠和Beagle犬的免疫原性

目的：在进行聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子（PEG30-rhG-CSF）大鼠和Beagle犬重复给药毒性试验时,观察给药后动物血清中抗PEG30-rhG-CSF抗体的产生和抗体的中和活性,为非临床安全性评价的确切性以及临床给药周期提供依据。方法：大鼠分为赋形剂对照组、PEG30-rhG-CSF0.75、3.0、12mg/kg组,sc给药,隔日1次,连续2周;Beagle犬分为赋形剂对照组、PEG30-rhG-CSF0.25、1.0和4.0mg/kg,sc,每周1次,连续4周。采用ELISA法检测动物血清中抗PEG30-rhG-CSF的抗体,采用NFS-60细胞/MTT比色法检测抗体的中和活性。结果：大鼠在给药期和恢复期各剂量组动物血清中均未检测到抗PEG30-rhG-CSF的结合抗体。Beagle犬在给药的第1周和第2周,未检测到结合抗体,但在第4周时,低、中和高3个剂量组各有5只（5/6）的动物血清中检测到结合抗体,而抗体滴度与剂量无明显相关性。恢复4周后,仅高剂量组1只（1/2）动物出现抗体,且抗体滴度呈下降趋势。另外,在给药期和恢复期,血清中所产生的抗体均无中和PEG30-rhG-CSF的活性。结论：大鼠重复给予PEG30-rhG-CSF的毒性试验中,所有动物血清中均未检测到结合抗体和中和抗体;Beagle犬用药组的绝大部分动物血清中出现抗PEG30-rhG-CSF的抗体,但所产生抗体无中和活性。     

食蟹猴静脉注射抗CD20功能人源化单克隆抗体SM09重复给药毒性研究

目的:评价食蟹猴静脉重复给药抗CD20功能人源化单克隆抗体SM09的安全性。方法:将食蟹猴随机分为溶媒对照组,SM09低、高剂量组(25,50 mg.kg-1),每组6只,静脉注射给药,每周1次,连续8周,恢复期12周,进行各项毒理学指标检测。结果:除个别动物偶见呕吐外,体重、进食量、体温、尿、心电图、骨髓细胞计数等均未显示与供试品相关的改变。SM09给药后能够诱导动物产生快速深度的外周血B细胞清除,至恢复期结束,多数动物外周血中B细胞水平恢复正常。给药4周,动物血液白细胞及淋巴细胞下降,之后逐渐回升。给药结束时动物补体C4水平略有降低。组织病理学检查结果除药理学作用相关的改变外,未见其他与供试品相关的改变。结论:食蟹猴连续静脉注射SM09,总体上具有良好的剂量耐受性,除观察到与药理作用相关的效应外,未见其他毒性反应。