乙型肝炎病毒基本核心启动子A1762T／G1764A位点基因多态性检测方法的建立及应用

[目的]建立多聚酶链式反应-限制性片段长度多态分析（PCR-RFLP）法检测乙型肝炎病毒（HBV）C区基本核心启动子区（BCP）A1762T／G1764A联合突变并对部分临床标本进行检测。[方法]根据HBVBCP区基因设计引物，在G1764位设计MboⅠ酶切位点，根据PCR产物酶切结果判断该位点为G或A。[结果]测序及序列比较显示本文一株突变株：DT-BCP确为1762T／1764A变异株；HBeAg阳性慢性乙肝A1762T和G1764A位点双突变率为60％（18／30），HBeAg阴性组为53．3％（16／30），两组变异率无显著性差异（X^2=0．271，P=0．602）。[结论]本文建立的方法可用于检测HBV BCP区A1762T／G1764A位点双突变。     

乙型肝炎病毒前C区1896变异株的测定及临床应用

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）前C区变异株（1896位点G→A点突变）感染患者的临床特点及应用。方法：采用双探针杂交方法，最后用酶联显色技术检测689例HBV感染患者血清中HBV前C区变异构，按Knodell方法评价肝组织病理损伤。结果：HBV前C区变异株在HBeAg(-)/HBeAb( )的检出率显著高于HBeAg( )/HBeAb(-)／HBeAb(-),且HBcAg( )较高与病毒的大量复制密不可分。结论：对于HBeAg(-)/HBeAb( )的患者应做HBV－DNAnt1896C变异的检测。     

冻干低pH静注免疫球蛋白传播丙型肝炎病毒危险性观察与探讨

通过对冻干低ｐＨ静注免疫球蛋白成品的检测和临床使用观察，发现对献血者进行抗－ＨＣＶ抗体筛选，可使成品抗－ＨＣＶ阳性率大幅度降低。由于筛选方法的限制和ＨＣＶ感染后空窗期的存在，合并后的原料血浆污染ＨＣＶ在所难免；冻干低ｐＨ静注免疫球蛋白成品无论其抗－ＨＣＶ是阴性还是阳性，ＰＣＲ检测ＨＣＶ－ＲＮＡ均为阴性的实验结果提示制备工艺过程可以去除ＨＣＶ。临床初步观察和回顾性调查中均未发现ＨＣＶ传播的迹象。     

探讨前C区A1896变异与乙型肝炎病毒相关的进展性肝病的关系

目的探讨前C区A1896变异与乙型肝炎病毒（HBV）相关的进展性肝病的关系。方法选择172例HBV感染者,采用PCR-RFLP进行A1896变异的检测,并对其临床意义进行分析。结果172例患者A1896变异的总体检出率为45.9%。在A1896变异株和野生株中,慢性无症状携带者（ASC）、慢性乙型肝炎（CHB）、肝硬化（LC）、慢性重型肝炎（CSH）、肝细胞癌（HCC）的构成比差异有统计学意义（P〈0.05）。CHB、LC、CSH、HCC的A1896变异率分别为39.7%、52.0%、50.0%、74.1%,显著高于ASC的12.5%（P〈0.05）。进展性肝病（包括CSH、LC、HCC）的A1896变异率为59.0%,显著高于CHB的39.7%（P〈0.05）。慢性乙型肝病不同临床类型的A1896的野生株、变异株构成比差异无统计学意义（P〉0.05）。HBeAb阳性组的A1896变异率为73.2%,显著高于HBeAg阳性组的28.1%（P〈0.05）。A1896野生株HBeAg阳性率显著高于变异株（45.2%vs 19.0%,P〈0.05）。变异株HBV-DNA复制的均数水平显著高于野生株[（9.55±4.65）lg copies.L-1vs（10.35±4.49）lg copies.L-1,P〈0.01]。结论A1896变异与HBV相关的进展性肝病有关,但与CHB的炎症活动程度无关。A1896变异株的HBeAg阴性率和HBV-DNA病毒载量较野生株高,前者使HBV易逃避免疫清除,后者引起疾病逐步进展。     

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立及应用

[目的]建立和应用半巢式聚合酶链反应法（PCR）检测慢性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒（HBV）共价闭合环状DNA（cccDNA）。[方法]根据HBV基因组DNA正负链上下游缺口序列，设计3个相对保守的引物，建立HBV cccDNA半套式PCR，并用该法检测96例慢性乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA。[结果]96例慢性乙型肝炎患者中，35例HBV cccDNA阳性，阳性率为36．5％。HBV cccDNA阳性组的HBeAg、HBV DNA、ALT和AST水平均明显高于阴性组（P〈0．05），但两组的HBsAg水平无显著差异（P〉0．05）。HBV DNA≥10^5组的HBV cccDNA检出率为58．3％（35／60），明显高于HBVDNA〈10^5组（0％，0／36）（P=0．000）；HBeAg阳性组的HBV cccDNA检出率为50．9％（28／55），明显高于HBeAg阴性组（7／41，17．1％）（P=0．001）。[结论]半套式PCR方法简便，可用于测定血清中HBV cccDNA，以评价抗病毒治疗慢性乙型肝炎的疗效。     

乙肝病毒前C基因区1896位点变异的实验研究

目的探讨慢性乙肝病人血清HBV DNA前c基因区nt1896的变异情况及其与HBV DNA水平及转氨酶（ALT）关系。方法将172例慢性乙肝患者分为两组：大三阳组（106例）和小三组（66例）。检测ALT、HBV DNA及前C区nt1896的变异情况。结果大三阳组与小三阳组HBV DNA阳性率有显著差异（P〈0．05）,nt1896变异率无显著差异（P〉0．05）。小三阳患者中ALT升高组（〉40U／L）HBV DNA（＋）患者nt1896变异率100％,而ALT正常组HBV DNA（＋）患者nt1896变异率30％（3／10）（P〈0．05）。结论大三阳和小三阳慢性乙型肝炎病人都存在较高的前C区nt1896变异率（P〉0．05）。前C区nt1896变异可能是影响HBV DNA复制的一个因素。     

乙型肝炎病毒前C区及基本核心启动子变异检测方法的比较研究

目的 建立错配聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（mPCR-RFLP）检测乙型肝炎病毒（HBV）前C区A1896、基本核心启动子（BCP）T1762/A1764双变异的方法,与直接测序法比较,评估其应用价值.方法 利用错配PCR的原理扩增HBV前C区长194 bp、C启动子区长184 bp的基因片段,扩增产物分别经限制性内切酶Bsu36I、BclI酶切,琼脂糖凝胶电泳,根据酶切图谱多态性,建立检测HBV前C A1896、BCP T1762/A1764双变异的方法,对127份HBsAg、HBV DNA阳性的HBV感染者血清进行分析,酶切同时测序.2份标本用克隆测序以验证酶切鉴定变异株、野株混合感染的准确性.结果 127份血清中125（98.42%）份能用酶切、121（95.21%）份能用测序分析HBV前CA1896、BCP T1762/A1764状况.酶切与测序均成功的119份血清中,16份为前C区A1896变异株,34份为BCP T1762/A1764双变异株,21份为前C区A1896、BCP T1762/A1764联合变异株,48份为前C区G1896、BCP A1762/G1764野株,酶切与测序的结果完全一致.1份酶切鉴定为前C区A1896、G1896混合感染标本的5个克隆子中,1个为前C区A1896变异株,另外4个为前C区G1896野株;另1份酶切鉴定为单纯前C区A1896变异标本的5个克隆子均为前C区A1896变异株,酶切分析结果与克隆测序结果完全相符.结论 与测序法相比,本方法较简便、特异性强,能区分野毒株、变异株混合感染,适合较大样本分析,可用于流行病学调查及临床筛查.     

两种试剂检测抗-HCV在丙型肝炎诊断中的意义

目的提高丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）检出率和检测结果的准确率。方法应用两个厂家抗-HCV ELISA试剂（试剂①、②）检测本院2006年1～12月间2516份输血、手术前住院患者血清标本。再将试剂①、②均阳性的血清标本28份、仅试剂①阳性的15份和仅试剂②阳性的17份血清标本进行HCV RNA RT—PCR荧光定量检测。结果试剂①、②抗-HCV均阳性28份标本的RT—PCR结果均阳性,仅试剂①抗-HCV阳性的15份标本中2份阳性,试剂②抗-HCV阳性的17份标本中3份阳性;仅试剂①或②抗-HCV阳性的32份血清标本中,HCV RNA RT—PCR检测阳性率为15．63％。结论采用双试剂检测能提高抗-HCV的检出率和结果的准确率。     

肝脏疾病与HBV前C区1896位点突变的研究

目的 :分析乙型肝炎病毒 ( HBV)前 C区 1 896位点突变与慢性乙型肝炎 ( CAH)、活动性肝硬化( ALH)和肝细胞肿瘤 ( HCC)的关系。方法 :根据 HBV前 C区 DNA序列 ,采用聚合酶链式反应 ( PCR)分析 HBV第 1 896位核苷酸 G→ A( A1 896)的突变。结果 :通过对三种肝脏疾病患者血清的检测 ,发现CAH、ALH和 HCC患者血清中均存在 HBV突变株 ,其阳性率分别为 47.2 2 % ( 1 7/36)、53.33% ( 9/1 5)和 2 6.0 8% ( 6/2 3)。结论 :CAH和 ALH患者检出率较高 ,而 HCC患者检出率较低 ,说明 HBV突变与HBV在人体持续感染及感染后病情恶化有关 ;HBV突变是引起 HCC的原因之一 ,但并非主要因素     

乙型肝炎病毒前C区基因变异检测及意义

目的　用PCR产物直接测序法检测乙型肝炎病毒前C区基因变异,以指导临床合理使用抗病毒药物。方法　应用套式聚合酶链反应扩增包括前C区基因在内的DNA片段,采用Sanger双脱氧链末端终止法,在ABIPRISM310型核苷酸序列分析仪上直接测序。结果　对8例临床标本进行测序,检出5例G     

乙型肝炎病毒荧光PCR基因分型方法的建立和应用

[目的]建立一种在临床上准确、快速、简便地对乙型肝炎病毒进行基因分型（BCD三型）的方法。[方法]大量分析已分型的HBV基因组序列，寻找出HBV各基因型的型特异性碱基的分布规律，设计型特异性的引物和探针，利用已知全序列HBV建立荧光PCR的基因分型方法。并与PCR-RFLP及S基因测序等分型方法作比较。[结果]荧光PCR方法对已知基因组序列的HBV分型结果与基因组分析完全一致，利用大量随机临床标本摸索的最佳反应条件为94℃，1min；94℃，10s，60℃，30s，40个循环。与PCR-RFLP相比，分型结果一致性在84．0％；与S基因测序分型相比，一致性为96．2％。[结论]利用荧光PCR能灵敏、快速、准确地进行乙型肝炎病毒基因分型，方便临床应用和流行病学调查。     

时间分辨荧光免疫分析法乙型肝炎血清标志物分析灵敏度的建立与分析

[目的]乙型肝炎表面抗原和表面抗体定量测定试剂盒。[方法]时间分辨荧光免疫分析法的分析灵敏度进行建立与分析，以便更好的指导临床诊断和进行流行病学研究。[结果]通过实验研究，乙型肝炎病毒表面抗原定量检测试剂盒和表面抗体定量检测试剂盒的检测低限分别为0．0356ng／ml和0．548mIU／ml，生物检测限分别为0．200ng／ml和5．00mIU／ml，功能灵敏度分别为0．200ng／ml和5．00mIU／ml，线性范围分别为0．200ng／ml-300ng／ml和5．00mIU／ml～1200mIU／ml，并达到中国药品生物制品检定所检定要求。[结论]时间分辨荧光免疫分析法乙型肝炎病毒定量检测试剂盒具有灵敏度高，线性范围宽，特异性强的特点，已能有效应用于临床体外诊断和流行病学研究。     

继续教育思考题

1．简述肥大细胞与肺动脉高压的可能关系。2．试述钙调磷酸酶的生物学作用。     

原花青素对乙型肝炎病毒抗原与抗体表达的影响

目的探讨原花青素对乙型肝炎病毒抗原与抗体表达的影响。方法体外实验：将乙型肝炎病人血清加入不同剂量的葡萄原花青素（GPC）,于37℃下作用12 h后用ELISA法测定乙型肝炎病毒血清标志物（HBV-M）的吸光度值。临床试验：选择处于非活动期的慢性乙型肝炎病毒携带者20例,随机分为治疗组和对照组,每组10例。治疗组给予GPC 100 mg/d,对照组不给药,连续4周,在试验前后分别检测乙型肝炎病毒七项指标。结果体外实验：在培养12 h后,各剂量GPC组与对照组相比,各项指标的表达水平差异均无显著性。临床试验：治疗组试验后HBc-IgM和HBsAb的表达水平较对照组升高,而PreS1和HBsAg则较对照组显著降低（t=2.340~4.885,P〈0.05）。结论 GPC可能对乙型肝炎病毒有一定的抑制作用。     

前S1抗原、HBV—DNA和乙肝病毒血清标志物联合检测的临床意义

[目的]了解乙肝两对半（主要是HBeAg）、乙肝病毒DNA（HBV—DNA）与乙肝前S1抗原（Pre—S1）检测三者之间的关系以及它们的临床应用价值。[方法]采用酶联免疫吸附实验（ELISA）方法对273例乙肝患者血清进行乙肝两对半、Pre—S1抗原的测定，用荧光PCR技术对HBV—DNA进行测定，并分析3者之间的关系。[结果]HbeAg阳性组Pre—S1抗原、HBV—DNA的阳性率分别为85．09％、91．23％。说明Pre—S1抗原与HBV—DNA一样可较好的反映乙肝病毒在体内的活动及复制情况；HbeAg阴性组中Pre—S1抗原与HBVDNA的阳性率分别为37．11％、37．11％，说明在HbeAg阴性组患者仍有病毒复制，不能完全以HbeAg来判断病毒复制与否；与HBV—DNA的检测结果相比较，Pre—S1抗原检测的检出率为88．95％，特异性为87．32％，总符合率为88．28％，HBVDNA与Pre—S1抗原的阳性检出率没有差别（P〉0．05）。[结论]Pre—S1抗原能较好的反映HBV病毒感染及复制情况，三者联合检测互相补充，更有助于临床疾病的诊治。     

环氧乙烷与氟里昂混合气体对乙型肝炎病毒的灭活试验

<正> 环氧乙烷与氟里昂混合气体(下简称混合气体)是一种不易燃烧爆炸的安全灭菌剂。为观察此种混合气体对乙型肝炎病毒的消毒效果并探讨其消毒效果的考核指标,我们进行了实验室研究,现将结果报告如下。     

儿科乙型病毒性肝炎血清五项标志物常见模式和不常见模式分析

[目的]通过检测儿科血清乙肝两对半，分析其存在的常见模式和不常见模式。[方法]采用快速酶联固相免疫一步法（ELISA）检测3988份血清标本中乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（HBe—Ab）、乙肝核心抗体（HBcAb）。[结果]检测结果分析发现儿科血清乙肝两对半常见模式9种、不常见模式8种和罕见模式1种。随机抽取44分标本采用电化学发光法复检，更改模式标本达15份，变更率34．1％。建议对临床标本出现的不常见模式和罕见模式进行常规复检，以提高儿科乙型病毒性肝炎血清学检测结果的可靠性。[结论]实验室应对临床标本出现的不常见模式和罕见模式进行复检，从提高儿科乙型病毒性肝炎血清免疫学检测的可靠性。     

检测乙肝表面抗原大蛋白的临床意义

[目的]检测乙肝患者血清中乙肝表面抗原大蛋白（ Hepatitis B Virus Large Surface Protein, LHBs） 、乙肝前SI、HBVDNA以及ALT，探讨LHBs用于乙肝患者临床诊断的意义。[方法]采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测LHBs以及乙肝前st，采用化学发光方法检测乙肝两对半，采用荧光定量PCR方法对患者HBVDNA进行检测，采用全自动生化分析仪检测丙氨酸转氨酶（ALT）。[结果]1．相同乙肝模式患者血清LHBs与HBVDNA检出率无显著差异（P〉0．05）；2．HBeAg阳性患者血清中LHBs与HBVDNA阳性率均明显高于HBeAg阴性患者，差异显著（P〈0．05）；3．相同乙肝模式患者血清乙肝前S1的检出低于HBVDNA的检出，两者差异显著（P〈0．05）；4．LHBs阳性患者的ALT明显高于LHBs阴性患者。[结论]乙肝表面抗原大蛋白（LHBs）可以弥补由于乙肝病毒变异引起的HBeAg检测的不足，并在一定程度上反映了乙肝患者肝功能状况。     

乙型肝炎病毒灭活指标的探讨

<正> 目前,乙型肝炎病毒尚不能进行组织培养,致使对各种消毒方法的效果评价甚感困难。现时,各作者多采用HBsAg抗原性或HBV-DNA多聚酶灭活,或电镜下观察病毒颗粒破坏与消失来评价。为探讨评价乙型     

大学生对乙肝病毒感染防治知识态度行为的现况调查

目的:了解高校学生这一特殊群体关于乙型病毒感染及其防治的知识态度和行为的现况,及时发现高校学生关于乙型肝炎病毒感染防治知信行方面存在的不足,调动他们对于乙型肝炎防治的积极性和主动性,为今后学校及社会开展乙型肝炎防治教育提供科学规范的背景资料和理论依据。