精子DNA完整性检测技术研究进展

氧化胁迫、精子染色质包装或分离异常、凋亡异常发生等因素可引起精子DNA损伤。精子DNA完整性异常,会影响受精和胚胎发育,最终导致不孕不育、流产、死产、子代智力低下和染色体疾病。传统的精液检查往往不能找到精子DNA完整性异常患者的不育原因,因此对这部分患者进行精子DNA完整性检查具有更重要的意义。目前已经建立了很多方法来检测精子DNA的完整性,现就常用的精子DNA完整性检测技术的原理、方法、步骤及其临床应用作一综述。     

精子DNA完整性研究及其临床意义

精子DNA完整性检测反应了精子DNA的损伤程度,其发生机制可能与精子细胞发生过程中的凋亡发生异常、染色质组装异常或氧化应激反应有关。目前常用的精子DNA完整性检测方法有单细胞凝胶电泳法、原位标记法、精子染色质结构分析法、吖啶橙试验、精子染色质扩散试验和8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）测定法等。精子DNA完整性检测对揭示男性不育的病因、预测辅助生殖结局以及指导临床治疗具有重要意义。     

精子DNA完整性与精液常规指标相关性分析

目的 探讨精子DNA完整性与精液常规指标的关系.方法 按照WHO<人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册>要求对370例男性患者进行精液常规检测及精子DNA完整性分析.以上述手册设定的各精液常规检测指标参考值为依据分组,比较各组间精子DNA完整性是否存在差异,进而分析精子DNA完整性与各精液常规指标的相关性.结果 370例患者中,以不同年龄(岁)(≤30和＞30)、精子活率(%)(≥60和＜60)、前向运动精子活力(%)(≥50和＜50)分组,比较各组间精子DNA完整性无统计学差异(P＞0.05);而以不同精子密度(106/ml)(＜20和≥20＝、精液粘稠度(适中和粘稠)分组,各组间精子DNA完整性比较存在统计学差异(P＜0.05),其中不同密度精子DNA完整性差异显著.结论 与精子数量相关的精子发生过程是影响精子DNA完整性的主要原因;年龄因素及精子运动能力相关的附性腺功能与精子DNA完整性无关;选择合适的精液处理方式,尽量不破坏精子DNA完整性对于男科实验室精液检测及辅助生育技术过程中受精所需的精子悬液的制备等至关重要.     

精索静脉曲张对孕前男性精浆生化及精子DNA完整性的影响

目的 探讨精索静脉曲张(varicocele,VC)对孕前男性精浆生化及精子DNA完整性的影响.方法 孕前男性246例按照有无VC分为VC和对照组,分别检测精浆生化指标、精子DNA完整性.比较VC组与对照组精浆生化及精子DNA碎片率(DNA fragmentation index,DFI),分析VC组不同曲张程度患者精...     

精子DNA完整性与精子形态的相关性研究

精子形态与其功能密切相关,任何形态上的缺陷都可能导致其功能下降,引起男性不育。已有研究证实,常规检查精液参数正常的男性不育患者可能存在精子DNA异常。精子DNA损伤可能影响辅助生殖技术（ART）的结局,增加复发性自然流产的发生率及卵胞浆内单精子注射（ICSI）后代的遗传风险等相关风险。因此精子DNA完整性检测不仅有助于探索不育的病因,而且有望成为ART治疗结局的重要评估手段.     

精浆piRNA对精子DNA完整性及辅助生殖技术结局的影响

目的通过检测男性不育症患者精浆中存在的睾丸特异piRNA与精子DNA损伤程度的关系,探讨其对精子DNA完整性及辅助生殖技术(ART)结局的影响。方法分析149例男性不育症患者精液质量及精子DNA完整性;按精子DNA碎片指数(DFI)将不育症患者分为:A组(DFI≤15%)、B组(15%DFI30%)、C组(DFI≥30%),采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)检测各组患者精浆中piRNA-013423和piRNA-023386的表达量,比较各组患者受精率、卵裂率、优胚率、生化妊娠率及临床妊娠率的差异。结果与A、B组比较,C组的精子密度、前向活动精子、精子活动率、正常形态率均明显下降(P0.05),A、B两组比较,B组精子活动率下降(P0.05)。A、B、C三组中,C组患者piRNA-013423、piRNA-023386表达均低于A、B组(P0.01);C组患者受精率、卵裂率、优胚率、生化妊娠率及临床妊娠率均低于A、B组(P0.01)。结论男性不育症患者存在精子DNA不同程度的损伤,精浆中piRNA的水平与精子DNA完整性有关,DNA完整性差的患者精浆piRNA表达降低,且影响ART临床结局。提示piRNA可能通过某些信号通路调控精子DNA损伤,但具体机制需要下一步深入研究探讨。     

运用吖啶橙试验对302例不育症患者精子DNA完整性的评估

目的 探讨吖啶橙试验在精子DNA完整性评估中的应用价值.方法 选择男性不育症患者302例.通过吖啶橙试验(AOT)与计算机辅助精液分析(CASA)检测DFI(精子DNA损伤指数,即精液标本中存在DNA损伤的精子所占的比率)和精液常规参数.结果 所有302例不育患者中,DFI异常者72例,占23.84%.共260例患者精液常规参数异常,其中DFI异常50例,占19.23%;42例患者精液常规参数正常,DFI异常22例,占52.38%.畸形率异常组,DFI异常率为51.06%(24/47);活动率低下组,DFI异常率为38.65%(63/163);精子密度低下组,DFI异常率为36.67%(22/60).精子活动率和精子密度与DFI均呈负相关,r分别为-0.297,-0.217,P均<0.01;精子畸形率与DFI呈显著正相关,P<0.01,r=0.352.结论 评估精子DNA完整性在不育症临床上有重要作用,吖啶橙试验能够满足这一需要,值得推荐.     

改良精子染色质扩散实验对精子DNA完整性检测的初步探讨

目的:通过对传统精子染色质扩散实验(SCD)方法进行改良,探索一种更简单、快速、准确的精子DNA完整性检测方法。同时对改良SCD法检测的正常参考值范围进行初步探讨。方法:对传统SCD法在实验过程、试剂配制及器具使用上进行了改良优化,同时对改良前后SCD法进行了比较。此外,利用改良SCD法对293例正常生育男性精液进行精子DNA完整性检测。结果:建立了改良SCD检测法,经统计分析改良前后测定结果无统计学差异,同时初步对改良SCD法检测的正常精子DNA百分比参考值范围进行了确定,其值为精子DNA异常发生率<32.58%。结论:改良SCD方法能更快速地对精子DNA的完整性进行检测,同时,由于降低了试剂成本,该法更容易在实际工作中得到普及。     

吸烟对精子染色质结构完整性影响的探讨

目的:探讨吸烟对精子染色质结构完整性的影响。方法:784例男性不育患者从病例库中选取,根据吸烟与否及每日吸烟支数(≤10、11~19、≥20)和吸烟年限(≤5、6~9、≥10)进行分组,比较各组患者精液常规检测参数及精子染色质结构受损和精子核成熟情况。精子染色质结构完整性采用流式细胞仪检测,DNA损伤程度和不成熟精子指数分别以DNA损伤指数(DFI)和高DNA着色性(HDS)来表示。结果:吸烟≥20支/日和吸烟年限≥10年的患者组精液量、前向运动精子比例低于其他组而精子畸形率高于其他组(P<0.05);吸烟组男性的DFI和HDS值均升高(P<0.05);HDS与前向运动精子比例呈负相关(r=-0.18,P<0.05),DFI与HDS均与精子畸形率呈正相关(r=0.31与r=0.39,P均<0.05)。结论:日吸烟量≥20支或吸烟年限≥10年对男性的精液量、前向运动精子比例和精子畸形率都有影响,吸烟影响男性精子DNA完整性和精子核成熟。     

DNA损伤修复基因多态性与男性不育的研究进展

DNA修复机制的缺陷能引起生殖细胞DNA损伤的增加,从而导致精子产生过程出现异常和男性不育.高保真DNA修复对维持生殖细胞基因组的完整性和质量至关重要.因此,正常的精子生成过程中DNA损伤修复系统是一个关键因素,参与生殖细胞DNA损伤修复基因功能的异常会造成精子数量减少以及精子异常.本文主要从DNA损伤修复基因XRCC...