同种MHC基因胸腺转移诱导小鼠心肌移植耐受

目的：通过胸腺内注射表达外源性主要组织相容性抗原复合物（MHC）抗原质粒PXN（N2－B19－H－2Kb），诱导异基因小鼠心肌移植耐受。方法：给BALB／C小鼠胸腺内注射质粒PXN（N2－B19－H－2Kb），将外源性的编码C57BL／6小鼠MHCI类抗原的H－2KbcDNA转移到BALBC／C小鼠胸腺，2周后行C57BL／6小鼠心肌移植。用聚合酶链反应（PCR），反转录聚合酶链反应（RT－PCR），单克隆抗体免疫萤光染色流式细胞仪检测BALB／C小鼠胸腺细胞DNA，mRNA和MHC蛋白质表达。结果：BALB／C小鼠胸腺细胞表面有外源性MHC分子表达，转染效率为5．1％，胸腺内注射质粒PXN（N2－mg－H－2Kb）能明显延长移植小鼠心肌的存活时间，平均17d，对照为8d（P＜0．01）。结论：同种MHC基因转移至受体鼠胸腺可以诱导特异性的免疫耐受。     

静脉注射活化B细胞诱导Mls特异性免疫耐受

在胸腺摘除的成年小鼠静脉内注射Ｍｌｓ＋的活化Ｂ细胞可诱导Ｍｌｓ特异性免疫耐受。来源于ＣＤＦ１小鼠（Ｍｌｓ－１ｂ／ａ）的脾脏Ｂ淋巴细胞用抗ＩｇＭ抗体加ＩＬ－４刺激后静脉注射给摘除胸腺的成年ＢＡＬＢ／ｃ小鼠（Ｍｌｓ－１ｂ），在注射后第７、１１、１５天淋巴结中ＣＤ４＋Ｖβ６＋Ｔ细胞显著减少，而ＣＤ８＋Ｖβ６＋Ｔ细胞数无明显改变；在注射后第３天，与对照组相比，ＣＤ４＋Ｖβ６＋Ｔ细胞增加，但这些细胞对Ｍｌｓ抗原的反应性明显低于对照组。这些结果清楚地表明，自反应Ｔ细胞不但在胸腺被排除或功能性“排除”，而且在外周通过同样的机制维持自身耐受。     

元参组方对粒系造血祖细胞的增殖作用

目的研究中药方剂对急性骨髓型放射病的治疗效果和对造血系统的作用及其作用机理。方法选用元参等11种中药组成元参组方,小鼠一次皮下注射后,观察不同时间外周血细胞、胸腺重量、骨髓有核细胞、粒系造血祖细胞、胸腺细胞与骨髓细胞混合培养后粒系造血祖细胞的变化。结果元参组方早期加速粒细胞的成熟和释放,第6天约为注射前的1．5倍。给药8d后,试验组胸腺重量、骨髓有核细胞、脾指数分别为（85．9±5．6）mg、（8．9±1．3）×10^6／每根股骨、1．42,对照组胸腺重量、骨髓有核细胞、脾指数分别为（74．2±6．2）mg、（6．8±0．5）×10^6／每根股骨、1．0,试验组明显高于对照组。试验组小鼠胸腺细胞与对照组小鼠骨髓细胞按20：1混合培养,骨髓CFU-G约为加入未注射元参组方的小鼠胸腺细胞的1．5倍。未注射元参组方则未见有放大作用。结论元参组方对外周血白细胞、骨髓有核细胞、胸腺重量和粒系造血祖细胞有明显的升高作用,激活胸腺细胞对粒系造血祖细胞的增殖有明显的放大作用。这种放大作用通过元参组方激活胸腺细胞实现。     

表达GFP的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌体内感染抗原呈递细胞的动态变化

目的：阐明重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内早期感染抗原呈递细胞(APC)的动态变化规律。方法：用一定剂量的表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550(pY．AG-FP)口服接种BALB／c小鼠。3d后，取腹腔巨噬细胞培养24h，用荧光显微镜观察。另以该细菌静脉注射小鼠，于感染后3、6和12h，制备脾脏、肝脏低浮密度细胞。用流式细胞术检测巨噬细胞和树突状细胞的感染率。结果：巨噬细胞感染X4550(pYAGFP)的百分率，腹腔中约为50％，肝脏和脾脏中约为20％～40％。树突状细胞感染X4550(pYAGF、P)的百分率，脾脏中约为4％～10％，肝脏中约为10％～20％。巨噬细胞的吞噬能力明显高于树突状细胞。结论：感染早期，重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内已被APC所摄取，为诱导有效的免疫应答提供了先决条件。     

丙戊酸钠对视网膜色素变性小鼠光感受器细胞的保护作用

观察在视网膜变性小鼠（retinal degeneration mouse,rd小鼠）视网膜色素变性过程中,丙戊酸钠（valproate sodium,VPA）是否对光感受细胞具有保护作用。取48只新生rd小鼠,随机分为VPA组和正常对照组,每组24只。（1）VPA组,出生后每日以VPA100mg/kg的剂量进行腹腔注射;（2）对照组,出生后每日腹腔注射与VPA相同体积的生理盐水。于出生后7天、14天、21天、28天分别将VPA组和对照组的6只小鼠处死,取眼球做冰冻切片,行HE染色,对两组视网膜光感受器细胞数进行计数,并测量外核层厚度;用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal deoxy-nucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL法）检测凋亡细胞数,并对凋亡细胞数目进行统计分析。结果显示：（1）出生后7天VPA组光感受器细胞数和外核层厚度与对照组相比并无统计学差异,出生后14天、21天、28天,VPA组光感受器细胞和外核层厚度多于对照组,两者具有统计学差异（P〈0.05）;（2）两组光感受器细胞均于出生后7天开始出现凋亡,在出生后7天、14天VPA组外核层凋亡数少于对照组,两者具有统计学差异。提示VPA具有对抗视网膜色素变性小鼠光感受器细胞凋亡的作用,能延缓光感受器细胞的进行性退变。     

汉防己对胸腺的细胞增殖的影响研究

目的研究汉防己（Han-Fang-Chi／Stephenia tetrandra S Moore）对小鼠胸腺的细胞增殖的影响，探讨其作用机制。材料与方法取小鼠胸腺的细胞，分为对照组和药物组（汉防己煎剂浓度分别为1μg／ml，10μg／ml，50μg／ml，100μg／ml），采用MTT法统计学比色意义法观察防己对小鼠胸腺的细胞增殖的影响。结果汉防己煎剂在1～100μg／ml可不同程度抑制胸腺的细胞增殖，结果有（P〈0．05），其半数抑制浓度IC50为8．34μg／ml。结论防己（1～100μg／ml）可不同程度抑制小鼠胸腺的细胞的增殖，具有时间依赖性和剂量依赖性，即随着时间延长和剂量增加，其抑制作用逐渐增强。     

登革2型病毒43株NS1基因重组质粒DNA的免疫原性及保护作用研究

目的 研究以pcDNA3.1为载体的登革2型病毒43株（D2－43）NS1基因重组DNA的免疫原性及对登革病毒感染所致小鼠神经毒的免疫保护作用。方法 将纯化的pcDNA-NS1重组质粒DNA采用肌肉多点注射途径免疫3周龄BALB／c小鼠，剂量为每只100μg/次，检测了免疫鼠血清抗体滴度及特异性细胞毒作用。并以D2－43病毒脑内攻击6周龄BALB/c小鼠产生的神经毒症状为实验模型，对pcDNA-NS1的免疫保护作用进行了初步探讨。结果 用间接ELISA测得pcDNA-NS1免疫后抗体滴度为1：800，在补体存在下，对D2－43病毒感染的BHK－21细胞特异性杀伤率可达到61．6％。由免疫的BALB／c小鼠脾制备的效应细胞在体外可特异性地杀伤D2－43感染的P－815细胞（H－2^d)。当效靶比（E／T）为20：1时，pcDNA-NS1质粒免疫后的特异性CTL杀伤百分率为22．6％。将100 LD50的D2－43病毒经脑内攻击BALB／c小鼠，结果表明免疫pcDNA-NS1组小鼠存活率最高（90．9％）；与免疫pcDNA3.1对照组比较，P值＜0．05。结论 pcDNA-NS1质粒免疫BALB／c小鼠不仅可诱导体液免疫，还可诱导特异性细胞免疫。初步结果还显示，用含NS1基因的重组质粒DNA免疫的小鼠能免受致死剂量登革病毒的攻击，为登革热新型疫苗的研究奠定了基础。     

肠管上皮内T细胞的来源、分布和组成

[日]／南野昌信／／临床免疫．－1996，28（2）．．265～268肠管上皮细胞间分布着淋巴细胞，称之为粘膜上皮间淋巴细胞（IEL）．小鼠末梢血T细胞几乎全部是TCRαβ，而IEL是由40％～70％TCRαβ细胞和30％～60％TCRγδ细胞组成．根据研究认为αβUEL的分化为胸腺依赖性（TD-IEL），γδIEL分化则是非胸腺依赖性（TI－IEL），αβIEL可以区分为CD8αβ+和CD8αα+两个亚型，前者可能为TD-IEL，后者是TI－IEL．利用裸鼠和胸腔搞出的铁合体小鼠观察胸腺对IEL分化的影响．结果，成熟小鼠搞出胸腺制备成俄合体小景时，在胸…     

CD4单克隆抗体改变新生小鼠胸腺细胞亚群的分布和功能

新生期小鼠（３～７天）腹腔注入ＣＤ４ＭｃＡｂ，可引起胸腺细胞表型和功能变化。胸腺细胞表型分析显示：胸腺细胞总数、ＤＰ和ＣＤ４ＳＰ细胞明显减少；ＣＤ８ＳＰ细胞数增加；ＤＮ细胞数目变化不大。上述变化与ＣＤ４ＭｅＡｂ和胸腺细胞表面的ＣＤ４分子的结合有关。功能试验表明：实验组小鼠胸腺细胞对有丝分裂素ＣｏｎＡ、ＰＷＭ的反应性降低，混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）也明显低于对照组。但是胸腺细胞对异型细胞的杀伤作用则高于对照组。功能试验的结果与表型的变化是吻合的，有剂量依赖性。ＣＤ４ＭｃＡｂ引起的胸腺细胞表型和功能的变化是可以恢复的，一般于注射ＣＤ４ＭｃＡｂ后１０天，胸腺细胞亚群分布恢复或接近正常，而功能则恢复较慢。     

成年小鼠皮肤移植耐受诱导的实验研究

静脉注射ＢａＩｂ／ｃ小鼠（Ｈ－２￣ｄ）脾细胞和骨髓细胞，４８小时后，腹腔注射环磷酰胺和抗胸腺细胞血清，可诱导Ｂ６小鼠（Ｈ－２￣ｂ）对ＢａＩｂ／ｃ小鼠皮肤移植的长期耐受（＞８０天）．耐受Ｂ６小鼠可正常排斥无关品系ＣＢＡ／Ｊ小鼠（Ｈ－２￣ｋ）的皮肤，显示了耐受的特异性。上述诱导方案可导致受体小鼠脾细胞对ＣｏｎＡ、ＬＰＳ诱导的增植反应的抑制，但这种全身性免疫抑制可在短期内恢复，而供体特异性的同种异型反应，如ＭＬＲ和ＤＴＨ则不能恢复。     

大肠杆菌脂多糖和氢化考的松诱导胸腺细胞凋亡的实验研究

用琼脂糖凝胶电泳、电镜等方法研究大肠杆菌脂多糖（ＬＰＳ）和氢化考的松所致的小鼠胸腺细胞凋亡，以建立适于实验的细胞凋亡模型，并确定了凋亡模型的最佳用药剂量和时相。实验结果表明，ＬＰＳ和氢化考的松均可诱导小鼠胸腺细胞发生凋亡，ＬＰＳ腹腔注射量为２５μｇ／只时造模较为适宜，造模最佳时相为腹腔注射１８ｈ，氢化考的松模型经测定其最佳时相为肌肉注射２４ｈ。两种凋亡模型比较，ＬＰＳ模型造模时间短（仅需１８ｈ），     

核酸疫苗Sj14-3-3联合CpG和mIL-12免疫小鼠抗日本血吸虫攻击感染的研究

目的 在证明核酸疫苗pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3具有部分抗血吸虫感染的基础上，联合使用CpG和pcDNA3．1（＋）-mIL-12，观察此二种佐剂在攻击感染小鼠的免疫效果及其抗血吸虫感染的保护机制。方法 分别用pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3＋pcDNA3．1（＋）-mIL-12、pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3＋CpG、pcDNA3．1（＋）-mIL-12和CpG免疫小鼠。攻击感染后6W计数成虫负荷和肝虫卵数；检测免疫后0W、6W和12W小鼠血清总IgG、IgG1和IgG2a水平；检测小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4；流式细胞术检测免疫鼠脾细胞中CD4^＋和CD8^＋T细胞的比率。结果 pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3＋pcDNA3．1（＋）-mIL-12和pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3＋CpG免疫小鼠的减虫率分别为41．2％和28．7％；减卵率分别为52．6％和41．2％。单独使用pcDNA3．1（＋）-mIL-12和CpG也有一定的免疫保护作用。保护性免疫主要通过诱导宿主产生CTL、TH1型和体液免疫应答。结论 pcDNA3．1（＋）-mIL-12和CpG具有较强的增强核酸疫苗pcDNA3．1（＋）-Sj14-3-3抗血吸虫攻击感染作用。     

IL-2基因修饰成纤维细胞对肝癌荷瘤小鼠的治疗实验

目的研究双顺反子逆转录病毒载体介导ＩＬ－２基因转导成纤维细胞对小鼠肝癌的治疗作用。方法利用双顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ／ＩＬ－２将ＩＬ－２基因转导小鼠成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３，然后将分泌ＩＬ－２的成纤维细胞与６０Ｇｙγ射线照射的肝癌Ｈ２２细胞皮下植入三天前５×１０５或２．２×１０５肝癌Ｈ２２细胞皮下注射的ＢＡＬＢ／ｃ鼠。结果分泌ＩＬ－２的成纤维细胞治疗组能明显增加荷瘤小鼠的生存率（Ｐ＜０．０２５），抑制肿瘤生长（Ｐ＜０．０５），在肿瘤植入第７０天无肿瘤形成的小鼠再次注射１×１０６Ｈ２２细胞仍然不发生肿瘤。５１Ｃｒ释放试验表明来自照射Ｈ２２与分泌ＩＬ－２成纤维细胞混合液注射的小鼠脾细胞与５１Ｃｒ标记的Ｈ２２细胞共培养后，５１Ｃｒ特异释放明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。结论实验结果表明ＩＬ－２基因修饰的成纤维细胞能诱导针对肝癌的特异免疫反应。     

肾上腺素、去甲肾上腺素对小鼠胸腺的影响

目的探讨肾上腺素、去甲肾上腺素对小鼠胸腺的影响。方法取5-6周雄性小鼠,随机分为4组,每组15只,腹腔注射生理盐水（对照组）、肾上腺索和去甲肾上腺素（NE＋E）,分别于5、7、9天后取胸腺,HE染色观察胸腺组织学变化,免疫组织化学法检测胸腺组织中相关凋亡基因Bcl-2和Bax产物的表达,原位末端标记法（TUNEL）计算胸腺组织凋亡细胞数。结果药物处理组的胸腺细胞凋亡均高于对照组（P〈0．05）,而各药物组无显著性差异（P2〉0．05）。结论肾上腺素和去甲肾上腺素可促进小鼠胸腺组织退化,诱导小鼠朐腺细胞凋亡。     

抗肠道感染的细胞免疫

用单核细胞增多症李斯特氏菌口服感染小鼠,以研究感染的传播机制及免疫反应。实验发现:口服该菌后唯一的肠道侵犯部位是肠集合淋巴结。最低感染剂量为2×10~8个细菌,低于此剂量则感染结果不一致。细菌侵入肠集合淋巴结后迅速扩散,2～3天到达肠系膜淋巴结,4天后到达肝、脾。小鼠经口服感染后第6天发现迟发性超敏反应。第二次再经口服途径攻击时,2～3天肝、脾内的细菌已被完全清除。如用静脉途径进行二次攻击,也有同样的免疫保护效应。将免疫小鼠的脾、肠集合淋巴结及肠系     

鼠巨细胞病毒感染对小鼠脾细胞IL-12 p35和p40基因转录和表达的影响

目的 探讨鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对小鼠脾细胞内TH-1细胞调控因子白细胞介素-12（IL-12）p35和p40基因转录和表达影响的时序性变化特点。方法 制备全身播散型MCMV感染小鼠模型，于感染后3d,5d、7d、10d和14d分离小鼠脾细胞，在PHA刺激后用RT-PCR法检测脾细胞内IL-12 p35和p40 mRNA水平时序性变化，ELISA法测定脾细胞培养上清中IL-12 p70和IFN-γ蛋白水平变化。结果 模型鼠在感染后第3天IL-12 p70表达显著增高（P〈0．05），但第5天后急剧下降，显著低于正常鼠（P〈0．05）；IFN-γ在感染后第3天增高达峰值（P〈0．01），随后逐渐下降，在感染后第10～14天降至正常水平；IL-12 p35mRNA水平变化与IL-12 p70完全一致；而p40mRNA则从感染第3天开始持续高水平表达（P〈0．01）。结论 IL-12 p35mRNA和IL-12 p70在感染5d后持续明显下降是感染后期TH1类细胞因子持续低表达、TH1反应受抑制的主要原因之一；感染后IL-12 p40mRNA持续高水平可能导致拮抗剂（p40）2表达增加，后者可进一步抑制IL-12功能。     

RIL—2对急性克氏锥虫感染小鼠的抗SRBC直接溶血空斑反应及抗虫保护性免疫影响的初步研究

为研究ＩＬ—２在克氏锥虫感染过程中出现的免疫抑制机制中的作用，８只克氏锥虫感染的Ｃ３Ｈ／ＨｅＪｎ小鼠每日皮下注射两次，每日总量５０００μ重组人ｒＩＬ－２；对照组相同数量小鼠皮下注射等量的无钙、镁离子的ＰＢＳ。实验结果表明ｒＩＬ－２注射组小鼠脾细胞对羊红细胞的反应能力由ＰＢＳ注射鼠的１５。２％提高到９３。５％（Ｐ＜０．０５）。相当接近于正常的未感染小鼠的空斑形成细胞数。ｒＩＬ－２注射组小鼠仅表现轻度降低的寄生虫血症，其动态变化在两组间未显示出差异。除ＰＢＳ组的１只小鼠在感染后第３６ｄ死亡外，ｒＩＬ－２以及ＰＢＳ注射组的其它动物都在克氏锥虫急性感染期存活。尽管ｒＩＬ－２注射并未明显地提高克氏锥虫急性感染期Ｃ３Ｈ／ＨｅＪｎ小鼠的抗虫保护性免疫，本实验提示ＩＬ－２不足是克氏锥虫急性感染期Ｃ３Ｈ／ＨｅＪｎ小鼠非特异性免疫抑制的原因之一。     

75mGy X线全身照射对小鼠脾细胞抗瘤活性的增强作用

将经７５ｍＧｙＸ线全身照射后小鼠的脾细胞过转移至同系小鼠体内，观察其对肿瘤生长及转移的影响，结果发现，照射组小鼠脾细胞可明显抑制与小混合注射的Ｌｅｗｉｓ肺癌（ＬＬＣ）细胞的生长和自发肺转移（Ｐ〈０．０５～０．０１）。与假照组相比，照射后２４ｈ照射组小鼠脾脏有核细胞数增多（Ｐ〈０．０２），脾细胞对ＣｏｎＡ和ＩＬ－２的反应性增强（Ｐ〈０．００１），ＮＫ细胞毒活性明显提高（Ｐ〈０．０１），提示，脾细胞免     

多器官衰竭综合征小鼠模型的炎性细胞因子变化

MoniqueJetalCritCareMed．-1996；24（7）．-1096～1120多器官衰竭综合征（MOF）是急救科和外科死亡的主要原因，而巨噬细胞M的持续活化和全身性炎性细胞因子增加在MOF的发生机理中起重要作用。用小鼠模型研究了MOF时血清中细胞因子和M产生细胞因子能力的变化。以1mg／g体重的剂量腹腔注射酵母多糖，诱导C57BC／C雄鼠产生类似人MOF的症状。观察12天中的①小鼠的一般状况；②血清中IL－la，IL－18，TNG－a和IL－6，TNF－a的生物学活性；腹腔＊O及其在体外＊％（IO吵m！）刺激后产生细胞因子的能力等变化。酵母多糖诱导的小…     

人化SCID小鼠对肝癌抗原的体液免疫应答

为了较真实地反应人体内免疫系统对肝癌抗原的免疫应答，我们选择了ＳＣＩＤ小鼠作为模型。实验选择４～１２周龄ＳＣＩＤ小鼠（免疫缺陷特性稳定），用人胎肝和胸腺细胞悬液（２×１０７／只）经腹腔注射途径及用适量（５００Ｕ／只）ＩＬ－２诱导，对其进行了免疫重建。...