5,7-二甲氧基白杨素对 HepG2细胞生长的影响研究

目的：通过对5,7-二甲氧基白杨素对 HepG2细胞生长影响的研究,为寻找有开发前景的肝癌治疗活性新化学实体提供理论和实验依据。方法：通过MTT比色法测定观察对体外培养 HepG2细胞和人胚肝（L-02）细胞增殖活性的影响,并评价其对人肝癌细胞作用选择性;细胞计数法观察活细胞及死细胞数,计算细胞存活率,绘制细胞生长曲线。结果：MTT 比色法结果显示,以不同浓度的 dMChR 分别处理 HepG2细胞48 h,其IC50值为3.22μM,其中16.0μM的dMChR作用 HepG2细胞48 h 的相对抑制率达79.59%,而相应浓度的 ChR 和5-FU 的抑制率分别为35.28%和74.01%。且对 HepG2细胞的增殖活性抑制作用选择指数达21.03;细胞计数显示：不同浓度的 dMChR、5-FU 和 ChR 均对体外培养HepG2细胞具有抑制生长作用,呈剂量依赖性,其作用效价高于 ChR（P 〈0.05）,而与5-FU 类似;绘制生长曲线发现dMChR显著抑制 HepG2细胞的生长,呈时间依赖性,其抑制作用强于先导化合物ChR,而与5-FU相似。结论：dMChR抑制 HepG2细胞增殖活性作用强,对L-02细胞增殖活性抑制作用弱,其抑制 HepG2细胞增殖活性作用具有相对选择性。     

5,7-二甲氧基白杨素对HepG2细胞凋亡相关蛋白表达和活性的影响

目的:研究dMChR对HepG2细胞凋亡相关蛋白PPARγ、肿瘤抑制基因PTEN、蛋白激酶B(Protein kinase B,p-AKt)、caspase-3表达和活性的影响.方法:用终浓度分别为1.0、4.0、16.0 μm的dMChR处理HepG2细胞24 h以诱导其发生凋亡,再采用Western-blot法对凋亡细胞中的PPARγ、PTEN、p-AKt和caspase-3表达情况进行分析.结果:PPARγ、PTEN和caspase-3在HepG2细胞中表达上调,并具有剂量依赖性,而p-AKt的表达受到抑制,也呈剂量依赖性.结论:dMChR抗人肝癌作用机制可能是通过活化PPARγ上调PTEN蛋白表达和活性,进而抑制p-AKt活性,促进caspase-3的活化,诱导HepG2细胞凋亡.     

8-溴-7-甲氧基白杨素通过上调Bim诱导肺癌A549细胞凋亡

目的:探讨8-溴-7-甲氧基白杨素(BrMC)诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡作用及分子机制。方法:流式细胞术(PI染色)分别检测白杨素及BrMC处理后的细胞凋亡。蛋白印迹法检测BrMC对Bim蛋白表达以及N-乙酰半胱氨酸对BrMC介导Bim表达的影响。siRNA沉默Bim基因后流式细胞仪检测BrMC对细胞凋亡影响。结果:BrMC对A549细胞的凋亡作用较白杨素更强。经BrMC(10μmol/L)处理后,Bim蛋白水平呈时间依赖性增加。siRNA干扰后,BrMC诱导的A549细胞凋亡率明显降低。结论:BrMC通过上调Bim诱导肺癌A549细胞的凋亡。     

紫花牡荆素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的 研究紫花牡荆素(Casticin)对肝癌HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制.方法 用终浓度为0、0.5、1.0及2.0 μmol/L的Casticin作用于HepG2细胞,于12、24及48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342核染色,观察细胞形态学变化;24 h后收集各组肝癌HepG2细胞,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;RT-PCR检测survivin mRNA表达.结果 MTT法检测显示,Casticin对肝癌HepG2细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系;Hoechst33342染色后,可见核染色质凝集,凋亡细胞呈致密浓染.与对照组相比,Casticin处理后凋亡细胞比例增加.Casticin作用24h后,细胞被阻滞于G2/M期,随药物质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加.RT-pCR结果 显示,Casticin下调肝癌HepG2细胞survivin mRNA表达.结论 Casticin在体外对肝癌HepG2细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断Casticin诱发肝癌细胞凋亡的作用与其对survivin基因表达的抑制有关.     

5,7-二甲氧基白杨素对体外培养宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的:观察5,7-二甲氧基白杨素(dMChR)对体外培养宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法:检测5,7-二甲氧基白杨素对HeLa细胞增殖活性的影响采用MTT法;观察HeLa细胞凋亡形态运用丫啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染色法;检测HeLa细胞凋亡率采用流式细胞术。结果:5,7-二甲氧基白杨素对HeLa细胞增殖具有抑制作用,呈剂量依赖性;5,7-二甲氧基白杨素能有效地诱导HeLa细胞凋亡,呈剂量依赖性。结论:5,7-二甲氧基白杨素具有抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。     

白杨素敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡

目的:研究白杨素(ChR)是否具有增敏重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhsTRAIL)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。方法:体外培养人肝癌Bel-7402细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞死亡率。DNA琼脂糖凝胶电泳确证诱导细胞凋亡作用。Western Bloting检测细胞DR5蛋白的表达。结果:ChR40μmol/L、rhsTRAIL 100ng/mL以及两者合用的细胞死亡率分别为4.91%±0.38%、5.89%±0.39%和28.7%±2.50%。ChR(40μmol/L)联合rhsTRAIL(100ng/mL)处理48小时,人肝癌Bel-7402细胞展示出典型DNA梯形条带图谱。Western Blot分析结果发现:白杨素以浓度和时间依赖的方式上调Bel-7402细胞DR5表达。结论:亚细胞毒性浓度的白杨素具有敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。     

白杨素对5- 氟尿嘧啶诱导人肝癌Bel-7402 细胞凋亡的增敏机制研究

目的 探讨白杨素对5- 氟尿嘧啶（5-FU）诱导肝癌Bel-7402 细胞凋亡的增敏作用。方法 白 杨素单独或联合5-FU 作用Bel-7402 细胞,用MTT 法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡与周期分 布变化;Western blotting 检测Bcl-2、Bax、Bad 及Cleaved Caspase-3 蛋白。结果 50 ～ 250μmol/L 白杨 素作用Bel-7402 细胞48 h 呈浓度依赖性的抑制细胞活力,且100μmol/L 白杨素组细胞存活率为（82.261± 7.793）%。100μmol/L 白杨素单独作用24 h 对Bel-7402 细胞活力和凋亡均无影响（P >0.05）。与空白对照 组比较,100μmol/L 白杨素作用24 h 后,不同浓度5-FU（12.5、25.0 及50.0μg/ml）作用48 h 对Bel-7402 细胞活力的抑制作用增强（P <0.05）;25.0μg/ml 5-FU 诱导Bel-7402 细胞凋亡率增加（P <0.05）;G2/M 期 细胞比例升高（P <0.05）;促凋亡蛋白Bax、Bad 及Cleaved Caspase-3 蛋白表达水平上调（P <0.05）;抗凋亡 蛋白Bcl-2 表达水平下调（P <0.05）。结论 白杨素增强5-FU 诱导人肝癌Bel-7402 细胞凋亡,其机制可能 与线粒体凋亡通路激活有关。     

芹菜素通过上调PTEN蛋白表达诱导人肝癌细胞凋亡

目的 观察芹菜素(apigenin,API)诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用,研究其作用机制是否涉及PTEN蛋白表达的调控.方法 体外培养HepG2细胞,PI染色流式细胞术分析凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带;Western Blot分析细胞PTEN、p-Akt和p-Bad蛋白表达.结果 API诱导HepG2细胞的凋亡,呈浓度依赖性.40μmol/L的API处理HepG2细胞48 h,琼脂糖凝胶电泳呈现典型DNA梯形条带.40μmol/L的API处理HepG2细胞12 h和24 h,PTEN蛋白表达分别上调达132.6%和158.9%;同时磷酸化Akt蛋白水平下降至86.3%和75.6%.磷酸化Bad蛋白水平降低到73.4%和69.3%.结论 API诱导HepG2细胞凋亡作用与上调PTEN蛋白表达、降低磷酸化Akt蛋白和磷酸化Bad蛋白水平相关.     

大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用的研究

目的研究大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖抑制、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法用不同浓度的大蒜素作用于体外培养的HepG2细胞,采用MTT法检测大蒜素对HepG2细胞增殖抑制能力,荧光显微镜观察HepG2细胞的形态学变化,流式细胞术检测大蒜素对HepG2细胞周期和凋亡率的影响。结果大蒜素可抑制人肝癌HepG2细胞增殖,且具有明显剂量和时间依赖性,24h、48h和72h大蒜素抑制HepG2细胞的IC50分别为(48.26±1.66)μg/mL、(31.89±1.51)μg/mL和(23.79±1.32)μg/mL。32μg/mL大蒜素作用HepG2细胞48h,可诱导其产生明显的细胞凋亡特征。流式细胞术检测表明大蒜素作用HepG2细胞后,可将细胞阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖具有抑制作用,可能与诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期有关。     

人参皂苷化学修饰物PM1诱导肝癌HepG2细胞凋亡

目的：探讨人参皂苷化学修饰物PM1体外诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法检测不同浓度的人参皂苷化学修饰物PM1对肝癌HepG2细胞增殖的作用;流式细胞仪分析肿瘤细胞凋亡周期及细胞凋亡率。结果：PM1抑制肝癌HepG2细胞生长,呈浓度依赖关系。用50和100mg/LPM1处理细胞24h后,PM1诱导了细胞凋亡和调节细胞周期,凋亡率与对照组比较明显升高（P〈0.01）。结论：PM1抑制肝癌HepG2细胞生长,其机制可能是通过诱导凋亡来发挥作用的。     

吴茱萸碱对HepG2细胞毒性及其机制

目的:研究吴茱萸碱(evodiamine,EVO)的肝细胞毒性及其机制。方法:将0.04~25 μmol/L EVO分别作用于HepG2细胞24、48和72 h,用细胞增殖及毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞存活率。0.2、1和5 μmol/L EVO处理HepG2细胞48 h,多功能酶标仪分别检测细胞培养上清液中谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,以及总胆红素(total bilirubin,TBIL)含量。用多功能酶标仪检测HepG2细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。用分子对接探究EVO与凋亡、自噬和铁死亡相关蛋白结合情况。用线粒体膜电位荧光探针(superior alternative to JC-1,JC-10)和异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白/碘化丙啶(annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide,Annexin V-FITC/PI)对HepG2细胞进行染色,流式细胞仪分别检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和细胞凋亡。用Western blot检测HepG2细胞凋亡相关蛋白caspase-9,caspase-3以及胆汁酸转运体胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)和多耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的表达水平。结果:0.04~25 μmol/L EVO可降低HepG2细胞存活率,具有时间和剂量依赖关系。EVO处理HepG2细胞24、48和72 h的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC₅₀)分别为85.3、6.6和4.7 μmol/L。0.2、1和5 μmol/L EVO作用HepG2细胞48 h,细胞培养上清液中ALT、AST、LDH、ALP活性升高,TBIL含量增加。EVO可降低细胞中SOD活性,增加MDA含量。分子对接结果显示EVO与凋亡相关蛋白结合情况较好,JC-10和Annexin V-FITC/PI染色发现EVO可降低MMP,增加细胞凋亡率。Western blot结果表明EVO可上调caspase-9剪切蛋白和caspase-3剪切蛋白表达,并下调caspase-3前体蛋白、BSEP和MRP2蛋白表达。结论:0.2、1和5 μmol/L的EVO具有肝细胞毒性,其毒性机制可能涉及脂质过氧化损伤、细胞凋亡和胆汁淤积。     

T-2毒素对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用

目的：探讨T-2毒素对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用。方法：选取对数生长期的人肝癌HepG2细胞,分为对照组（未给予T-2毒素）和实验组（给予0.25、2.50、25.00、250.00和2 500.00 μg·L^-1T-2毒素）。24 h后倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Hoechest 33258染色法观察HepG2细胞凋亡形态表现,检测各组HepG2细胞中caspase-3的活性。结果：T-2毒素作用HepG2细胞24 h后,倒置显微镜下观察,与对照组比较,实验组细胞数量明显减少,细胞皱缩变形。MTT法检测,与对照组比较,实验组细胞增殖抑制率升高（P<0.01）。流式细胞术检测,与对照组比较,实验组SubG₁期细胞比例明显升高,细胞凋亡率明显升高。Hoechest 33258染色法检测,实验组细胞出现染色质固缩,细胞核呈致密浓染色的凋亡形态。实验组细胞中caspase-3活性明显高于对照组（P<0.01）。结论：T-2毒素对人肝癌HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用,并能促进细胞凋亡。     

氯喹对体外培养人肝癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨氯喹对体外培养人肝癌细胞HepG2增殖和细胞周期的影响,为氯喹作为肝癌治疗药物的研究提供依据。方法： 对数生长期人肝癌HepG2细胞分为对照组、氯喹 (8.00、16.00、32.00、64.00和128.00 mmol•L^-1 )处理组,用MTT法检测不同培养时间（24、48和72 h）细胞增殖活性,用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率。结果：与对照组比较,32.00~128.00 mmol•L^-1氯喹处理HepG2细胞24 h和8.00~128.00　 mmol•L^-1氯喹处理HepG2细胞48 h~72 h,细胞增殖活性随着剂量和时间增加而逐渐下降( P< 0.01),以72 h、128.00 mmol•L^-1氯喹抑制作用最强( P< 0.01);与对照组比较,氯喹处理组（32.00~128.00 mmol•L^-1）G₂/M期细胞比率及细胞凋亡率随着剂量增加而上升( P< 0.01),以128.00 mmol•L^-1组最为明显。结论：氯喹具有抑制人肝癌HepG2细胞增殖作用,可诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡,并可使人肝癌HepG2细胞周期阻滞在G₂/M期而抑制细胞活性,可能作为肝细胞癌的治疗药物。     

HBV影响甲磺酸阿帕替尼治疗肝细胞癌效果的机制研究

目的 研究乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染对阿帕替尼干预下肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、凋亡的影响。 方法 体外培养阿帕替尼干预的人肝癌HepG2和HepG2.215细胞,细胞计数试剂（cell counting Kit-8,CCK-8）法检测细胞增殖抑制作用,细胞划痕实验检测细胞迁移力,流式细胞术检测细胞凋亡率。 结果 阿帕替尼干预后的HepG2细胞组划痕愈合率明显低于HepG2.215细胞,早期凋亡率、晚期细胞凋亡率及总凋亡率均高于HepG2.215细胞组,差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 HBV状态影响甲磺酸阿帕替尼抑制肝癌细胞迁移和诱导细胞凋亡的效果,阿帕替尼在HBV阴性HCC细胞中可能更好地发挥抗肿瘤作用。     

姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨姜黄素诱导HepG2细胞凋亡的作用机制。方法:应用形态学方法、AnnexinV荧光染色和流式细胞仪(FCM)检测HepG2细胞凋亡的发生,应用RT-PCR检测凋亡相关基因P53、bcl-2和Fas的变化。结果:姜黄素对HepG2细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩,核染色质碎裂;流式细胞仪检测凋亡率为11.7%,细胞停在G1和G2期。AnnexinV标记的方法检测凋亡时发现,坏死与凋亡共存。在姜黄素诱导HepG2细胞凋亡过程中,凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强。结论:凋亡为姜黄素抑癌的机制之一,姜黄素诱导HepG2细胞凋亡可能与P53、bcl-2和Fas基因表达有关。     

咖啡因联合电离辐射对沉默Chk-1肝癌干细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：利用咖啡因联合X射线照射处理沉默检查点激酶1（Chk-1）的肝癌干细胞,通过检测细胞增殖、周期和凋亡,探讨二者对肝癌干细胞的协同杀伤效应。方法：沉默Chk-1的慢病毒载体转染293T细胞,慢病毒感染肝癌HepG₂细胞后,Western blotting检测Chk-1蛋白表达,确定沉默效果,同时设非靶对照,分别命名为HepG₂-Chk-1和HepG₂-control。利用悬浮培养法获得CD133高表达的肝癌干细胞,命名为S-HepG₂-Chk-1和S-HepG₂-control,分为对照组、咖啡因组、4 Gy组和咖啡因+4 Gy组,咖啡因作用后给予4 Gy X射线照射,分别利用MTT法检测细胞增殖活性,利用PI单染和Annexin Ⅴ-FITC双染流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡率。结果：Western blotting法检测,慢病毒感染HepG₂细胞后Chk-1蛋白表达明显降低,而非靶对照组则无明显变化,表明成功获得沉默Chk-1的HepG₂细胞模型HepG₂-Chk-1和非靶对照模型HepG₂-control。将HepG₂-Chk-1和HepG₂-control细胞悬浮培养后,细胞内的CD133蛋白表达水平均升高,表明存在高比例的CD133⁺细胞,即肝癌干细胞。与对照组比较,咖啡因组和4 Gy组细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）,G₁/M期细胞百分率和凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）,且咖啡因组S期细胞百分率明显升高（P<0.05）,4 Gy组G₀/G₁期细胞百分率明显升高（P<0.05或P<0.01）,咖啡因+4 Gy组协同作用更强。与S-HepG₂-control细胞比较,咖啡因组和4 Gy组S-HepG₂-Chk-1细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）,且G₁/M期细胞百分率明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论：成功获得沉默Chk-1且CD133⁺的肝癌干细胞,咖啡因和X射线照射均能抑制细胞增殖和诱导凋亡,并增强G₂/M期阻滞,且二者具有协同增强作用。     

白藜芦醇诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及机制

目的:探讨白藜芦醇(RES)诱导人肝癌HepG2、人慢粒K562肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及机制. 方法: 应用形态学方法,Annexin V荧光染色检测HepG2,K562细胞凋亡的发生,应用流式细胞术(FCM)检测细胞周期,应用四唑蓝比色法(MTT)检测HepG2,K562肿瘤细胞对,RES的药物敏感性. 结果: RES对人肝癌HepG2细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡. 凋亡细胞表现为细胞固缩, 核染色质碎裂. Annexin V荧光染色检测HepG2细胞凋亡率为33.7%,用FCM检测细胞周期明显阻止于G1期,而K562细胞凋亡率为9.97%. MTT检测表明RES对人肝癌HepG2细胞有剂量-效应关系. 但RES对人K562细胞的生长无明显的抑制作用. 结论:RES通过诱导HepG2细胞凋亡抑制肿瘤的生长,并有剂量-效应关系. 同时RES对肿瘤细胞的抑制及诱导凋亡的作用有细胞选择性.     

p53在漆树黄酮诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的作用

目的:观察漆树黄酮诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的现象,研究p53在漆树黄酮诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的作用究。方法：用不同浓度的漆树黄酮（50μmol•L-1、100μmol•L-1、200μmol•L-1）处理HepG2细胞24h和100μmol•L-1漆树黄酮处理HepG2细胞不同时间（12h、24h、48h）,流式细胞术和免疫荧光法观察漆树黄酮作用HepG2细胞的凋亡情况; Westem blot法检测漆树黄酮对HepG2细胞p53、Caspase-3 和Caspase-8蛋白的表达情况。结果:漆树黄酮能诱导HepG2细胞凋亡,呈剂量一时间依赖性; 漆树黄酮可增加p53蛋白的表达,降解Caspase-3 、Caspase-8酶原,提高Caspase-3 、Caspase-8活性。p53蛋白的上调与凋亡的发生呈正相关,Caspase-3 、Caspase-8酶原的降解与与凋亡的发生呈负相关。结论:漆树黄酮可诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与上调p53表达,活化Caspase-3、 Caspase-8有关。     

木犀草素对人肝癌细胞HepG2的促凋亡作用

目的：研究木犀草素（Luteolin）对人肝癌细胞HepG2的生长抑制与促凋亡作用机制。 方法：用梯度浓度木犀草素作用于多种肿瘤细胞,以MTT法检测药物对细胞的生长抑制作用,以流式细胞术检测HepG2细胞内活性氧水平,以Annexin V-FITC/PI双染法利用流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况,以Western-blot检测HepG2细胞凋亡相关通路蛋白表达水平。 结果：木犀草素对多种肿瘤细胞的生长具有浓度和时间依赖的抑制作用（72 h最高抑制率超过60%）,并能有效降低HepG2细胞内活性氧水平（约降低41.11%）。木犀草素作用下HepG2细胞凋亡率可达14.43%左右。木犀草素能够降低HepG2细胞内iASPP蛋白表达水平并上调p53与ASPP2蛋白表达。 结论：木犀草素能够抑制肿瘤细胞生长,降低HepG2细胞内活性氧水平,并调节细胞内相关凋亡通路蛋白水平,从而诱导HepG2细胞凋亡。