CNE1、CNE2、C666-1和Hone-1细胞的放射生物学特性测定

目的:测定人鼻咽癌细胞CNE1、CNE2、Hone-1及C666-1的放射牛物学特征参数.方法:采用平板集落形成法测定CNE1、CNE2、Hone-1及C666-14种鼻咽癌细胞在0、1、2、3、 4、 6、8、10 Gy照射后的存活分数;通过单击-多靶模型和线性-二次模型分别拟合细胞存活曲线;并计算Do、Dq、N、α、β、α/β值及2 Gy照射时的存活分数(SF2)等放射生物学参数值.结果:4种细胞在2种数学模型拟合的细胞存活曲线差异均有统计学意义(P均<0.05);其参数Do、Dq、N、α、β、α/β和SF2分别在1.818～2.379、0.192～0.880、1.276～2.388、0.085～0.392、0.026～0.036、2.36～15.08和0.416～0.733.结论:较大的放射敏感性差异可能存在于不同甚至相同分化程度的鼻咽癌细胞之间,提示临床鼻咽癌放疗剂量的个体化需求.     

NFBD1在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的：研究NFBD1在鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）组织中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化检测40例NPC组织及20例慢性鼻咽炎组织中NFBD1蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测34例NPC组织和23例慢性鼻咽炎组织中NFBD1 mRNA的表达并分析其与患者性别、年龄、颈淋巴结转移和临床分期的相关性。结果：NPC组织中NFBD1在蛋白水平（ ?字2=9.600,P=0.002）和mRNA水平（t=3.206,P=0.002）表达均高于慢性鼻咽炎组织,NFBD1在mRNA水平的表达高低与患者的性别（t=0.937,P=0.356）、年龄（t=0.382,P=0.698）及是否伴有临床颈淋巴结转移（t=1.037,P=0.322）、临床分期（t=0.293,P=0.771）均没有相关性。结论：NFBD1可能参与了NPC的发生,但其与NPC的侵袭转移没有明显联系。     

干扰TCAB1基因表达对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的:探讨siRNA抑制TCAB1表达对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响及分子机制。方法:构建靶向抑制TCAB1的siRNA干扰质粒及阴性对照质粒,转染至CNE-2细胞,RT-PCR和Western-blot检测TCAB1表达;克隆形成实验检测细胞放射敏感性参数D0、SF2等;QPCR检测转染前后CNE-2细胞端粒的相对长度变化。结果:成功构建CNE-2/phTCAB1-siRNA干扰质粒,转染后RT-PCR和Western-blot分析表明TCAB1mRNA和蛋白表达均受到明显抑制,干扰组细胞D0和SF2值分别为2.490和0.460,明显低于空白对照组(D0和SF2值分别为3.186和0.607),P<0.01;QPCR检测端粒相对长度发现干扰组T/S值(0.19±0.01)均小于正常细胞(0.52±0.06)和转染阴性质粒细胞(0.42±0.01),P<0.05,而正常细胞组和转染阴性质粒细胞T/S值比较差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:抑制TCAB1表达可以通过影响端粒长度增加鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性,TCAB1有望成为一种新的肿瘤放射增敏靶点。     

鼻咽癌细胞株CNE1、HONE1、C666-1和CNE2的亚致死性损伤修复速度测定

目的 测定CNE1、HONE1、C666-1和CNE2的亚致死性损伤修复速度参数.半修复时间(repair half-time,T1/2).方法 设0s、15S、30s、1h、2h、4h及6h共7个间隔时间,将8Gy照射剂量分为平分为两个4Gy间断照射4株细胞.采用集落形成法得到4株细胞在不同间隔时间两个4Gy照射后的存活分数.拟合细胞存活分数随间隔时间延长的变化曲线,并测算出T1/2.结果 CNE1、HONE1、C666-1和CNE2的T1/2分别为18、22、29和27s.结论 鼻咽癌细胞的亚致死性损伤修复速度较快.提示调强放疗中被延长的分次照射时间(15～45s)可能导致鼻咽癌细胞的辐射死灭效应降低.     

转移抑素抑制人鼻咽癌高转移能力细胞株SUNE-1-5-8F转移侵袭能力的研究

目的 研究并探讨转移抑素(metastin)对人鼻咽癌高转移能力细胞株SUNE-1-5-8F转移侵袭能力的影响。 方法 ①采用Transwell体外侵袭趋化实验技术,在不同浓度(102 nM、103 nM、104 nM)转移抑素干预前后计数转移及侵袭细胞数,探究其对SUNE-1-5-8F细胞转移能力和侵袭能力的影响。②采用BALB/c-nu裸鼠肺转移模型,40只裸鼠随机平均分为转移抑素组及对照组,2组均右侧腋窝下注射2×106/ml SUNE-1-5-8F细胞悬液,其中转移抑素组于第2天按1.17 mg/kg腹腔注射转移抑素,研究其对裸鼠移植瘤的抑瘤率、转移抑制率和生命延长率的影响;采用免疫组化法研究肺转移灶kisspeptin指标表达情况。 结果 ①Transwell实验中转移抑素对于SUNE-1-5-8F细胞的转移能力及侵袭能力均具有抑制作用(P<0.05),且其抑制能力与转移抑素浓度呈正相关(P<0.05)。②裸鼠实验中转移抑素对抑瘤率无明显影响(P>0.05),但可以降低肺转移数,提升转移抑制率(P<0.05),且进一步提高了小鼠的生命延长率(P<0.05)。免疫组化示转移抑素组kisspeptin较对照组高表达。 结论 ①Transwel实验中转移抑素能够抑制人鼻咽癌高转移能力细胞株SUNE-1-5-8F的转移侵袭能力,且转移抑素浓度与其抑制能力呈正相关。②裸鼠实验中转移抑素能够降低肺转移率,延长裸鼠生命,但与腋下移植瘤的增殖无显著相关性。      

定量蛋白质组学分析SDF2L1过表达后鼻咽癌细胞中的差异蛋白

目的：分析基质细胞衍生因子2样1(SDF2L1)过表达对人鼻咽癌（NPC）细胞5-8F中蛋白表达谱的影响。方法：提取SDF2L1基因过表达细胞株（5-8Fg）及空载细胞株（5-8F1）的总蛋白,利用非标记定量（LFQ）蛋白组学技术和串联质谱分析技术筛选差异表达蛋白（DEPs）,应用R软件对DEPs进行GO和KEGG富集分析,Cytoscape软件筛选关键的DEPs,Oncomine数据库对关键DEPs进行验证,RT-qPCR和western blotting法对筛选出来的关键DEPs进行验证。结果：在5-8Fg细胞中共筛选出730个DEPs,其中296个DEPs上调,434个DEPs下调。富集分析结果显示,DEPs主要定位在核糖体中,参与核糖体合成和内质网蛋白加工等过程,发挥黏附蛋白和催化活性等功能。通过Cytoscape和Oncomine数据库验证出核糖体蛋白L14(RPL14)、RPS15A等9个关键DEPs。SDF2L1过表达后RPL14基因（P<0.05）表达下调。结论：SDF2L1过表达后显著改变了NPC细胞中的蛋白表达特征,RPL14可能是NPC的促癌因子。     

KAI1/CD82基因在不同转移习性人鼻咽癌细胞株中的表达

目的 体外培养5种不同组织学类型的人鼻咽癌细胞株,探讨不同转移潜能的人鼻咽癌细胞株中KAI1/CD82基因mRNA和蛋白表达水平的差异,为鼻咽癌的基因治疗提供理论和实验依据.方法 ①应用实时荧光定量PCR法检测5种人鼻咽癌细胞株中KAI1/CD82基因mRNA的表达水平;②Western blot法检测5种人鼻咽癌细胞株中KAI1/CD82蛋白表达水平.结果 ①不同转移习性的人鼻咽癌细胞均扩增出KAI1/CD82mRNA,且随着细胞转移习性增高,KAI1/CD82 mRNA表达水平逐渐降低(P<0.05);②KAI1/CD82在SUNE-1-6-10B和CNE-1中表达增高,其中在SUNE-1-6-10B中增高明显(P<0.05).结论 ①KAI1/CD82基因在mRNA水平和蛋白水平的表达具有一致性,随着KAI1/CD82基因在不同人鼻咽癌细胞株中mRNA水平表达的增高,在蛋白水平表达也呈增高趋势;②KAI1/CD82基因在低转移性细胞中高表达,而在高转移性细胞中低表达,提示了KAI1/CD82可能在鼻咽癌肿瘤细胞转移机制中发挥重要的抑制作用.     

miR-144和miR-502-3p在原发性肝细胞癌术后复发患者中的表达及临床意义

目的探讨miR-144和miR-502-3p在原发性肝细胞癌术后复发患者中的表达及临床意义。方法从我院肝癌数据标本库中挑选82例原发性肝癌深低温冻存组织标本。其中50例早期复发组(术后1年内肝内出现复发病灶);32例非早期复发组(术后超过2年未出现肝内复发病灶)。运用实时荧光定量PCR验证miR-144、miR-502-3p在两组肝癌组织中的表达水平。结果相对于非早期复发组,miR-144在肝癌早期复发组中表达上调[(43.893±107.890)vs(6.321±6.845),P=0.018];其在肝癌组织中的表达仅与肝癌术后早期复发有关(P<0.05)。而miR-502-3p在肝癌早期复发组中表达下调[(6.702±9.775)vs(26.467±39.613),P=0.009];其在肝癌组织中的表达与肿瘤直径、肝癌术后早期复发、脉管癌栓、肝硬化、Edmonson病理分级有关(P<0.05)。结论 miR-144、miR-502-3p与肝癌的早期复发转移密切相关,并且可能是肝癌早期复发的分子标记物以及未来肝癌靶向治疗的有效靶点。     

DUSP9真核表达载体的构建及其在Hepa1-6肝细胞中的表达

目的构建小鼠DUSP9基因真核表达载体,并在小鼠Hepa1-6肝细胞中表达DUSP9蛋白。方法采用RT-PCR方法,从小鼠肝组织获取DUSP9cDNA片断,经双酶切、连接重组至真核表达载体pEGFP-N1,构建pEGFP-DUSP9重组质粒,双酶切及DNA测序对该重组质粒进行鉴定。脂质体介导pEGFP-DUSP9转染Hepa1-6肝细胞,实时荧光定量PCR、Western blot检测DUSP9mRNA及蛋白表达水平的变化。结果 pEGFP-DUSP9重组质粒经双酶切及测序鉴定证明构建完全正确,成功转染Hepa1-6肝细胞并高效表达,检测到明显上调的DUSP9mRNA和蛋白表达水平。结论成功构建真核表达载体pEGFP-DUSP9,并在Hepa1-6肝细胞中表达了DUSP9蛋白,可为研究DUSP9的生理功能及了解其在糖、脂代谢、胰岛素抵抗进程中的作用奠定坚实的基础。     

蛋白激酶C对鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶活性的影响

为进一步探讨蛋白激酶C（PKC）调控入低分化鼻咽癌CNE－2Z细胞生长的机制，观察了PKC对CNE－2Z酶粒酶活性的影响。结果显示：CNE－2Z细胞有较高的端粒酶活性；PKC的抑制剂Staurosporine显著降低细胞端粒酶活性（P＜0．001）。提示抑制PKC可以抑制CNE－2Z细胞的端粒酶活性，PKC可通过调控端粒酶活性从而影响CNE－2Z细胞的生长。     

放射线对体外培养鼻咽癌细胞细胞周期阻滞、凋亡和抑癌基因p57kip2表达的影响

目的研究放射线对鼻咽癌CNE细胞细胞周期阻滞、凋亡和抑癌基因p57^kip2蛋白表达的影响。方法运用流式细胞术检测放射线诱导的细胞周期阻滞、凋亡；运用免疫组织化学法检测抑癌基因p57^kip2蛋白的表达。结果CNE细胞经照射后，G1期无明显阻滞，S期出现短暂堆积，G2／M期阻滞程度具剂量和时间依赖性，G2／M期阻滞在12h与24h时与照射剂量呈正相关（P〈0．01），随照射后时间延长而增强，峰值出现于12Gy24h；细胞凋亡发生率与照射剂量和照射后时间均呈正相关（P〈0．01）。照射后p57^kip2蛋白表达随照射剂量增加和照射后时间延长而上调（均P〈0．01）。结论G2／M期阻滞、细胞凋亡率和p57^kip2蛋白均能反映及预测鼻咽癌细胞的放射敏感性。     

鼻咽癌中碱性成纤维细胞生长因子的实验研究

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子在鼻咽癌中的表达,探讨它与鼻咽癌的增生、浸润及转移的关系。方法在26例鼻咽癌及相应癌旁组织和10例正常鼻咽部黏膜组织中,应用 RT-PCR和免疫组织化学方法检测碱性成纤维细胞生长因子mRNA和蛋白质的表达。结果碱性成纤维细胞生长因子在鼻咽癌组织中高表达,在正常鼻咽部黏膜中低表达,差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论碱性成纤维细胞生长因子与鼻咽癌的生长、浸润及转移有密切关系。     

ET-1通过上调CXCR4表达促进鼻咽癌低转移 细胞株6-10B的迁徙

 【目的】 探讨内皮素-1(ET-1)上调CXCR4表达促进鼻咽癌低转移细胞株6-10B迁徙的机制。【方法】 加入不同浓度的ET-1以及同时加入SDF-1α处理6-10B细胞,趋化实验检测ET-1对6-10B细胞迁徙能力的影响。分别采用Real-time PCR以及Western Blot方法检测ET-1上调后CXCR4在基因以及蛋白水平的变化。Western Blot方法检测用特异性的ETAR抑制剂或者PI3K/AKT/mTOR或MARK1/ERK1/2抑制剂预处理6-10细胞后,ET-1对CXCR4表达水平的变化;并探讨ET-1处理后,PI3K/AKT/mTOR以及MARK1/ERK1/2信号通路中蛋白磷酸化水平的改变。【结果】 趋化实验显示6-10B细胞丧失对SDF-1α的趋化能力,但不同浓度的ET-1刺激后6-10B细胞对SDF-1α的迁徙能力明显增强(P < 0.05),10 nmol/L ET-1的作用最明显。Real-time PCR以及Western Blot结果显示,不同浓度的ET-1处理6-10B细胞后,ET-1在基因以及蛋白的水平可以呈剂量依赖性及时间依赖性地上调CXCR4的表达。用特异性的内皮素受体A(ETAR)抑制剂或者PI3K/AKT/mTOR或MARK1/ERK1/2通路的抑制剂,能够明显抑制ET-1对CXCR4表达的上调。Western blot检测显示ET-1能激活PI3K/AKT/mTOR及MAPK1/ERK1/2信号通路。【结论】 ET-1能上调6-10B细胞功能性CXCR4的mRNA和蛋白表达,并能明显增强6-10B细胞对SDF-1α的迁徙能力。CXCR4的上调主要是通过ETAR介导,激活PI3K/AKT/mTOR和MAPK1/ERK1/2信号通路。     

鼻咽癌活检标本中VEGF和C-erb B-2的表达及其临床意义

目的 :探讨肿瘤组织中血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和原癌基因C erbB 2的表达作为判断鼻咽癌患者预后因素的意义。方法 :选择鼻咽癌患者 75例 ,通过免疫组化SP法检测其鼻咽癌活检标本中VEGF和C erbB 2的表达 ,分析它们与鼻咽癌患者的复发、转移及生存期的相关性 ,并用Cox回归模型进行多因素分析。结果 :鼻咽癌活检标本中VEGF和C erbB 2的阳性表达率分别为 5 4 .7%和 4 8%。VEGF阳性表达与鼻咽癌患者发生转移 (P =0 .0 181)和较短的生存期 (P =0 .0 136 )有相关性 ,未发现它们与鼻咽癌复发 (P =0 .176 3)有相关性 ;C erbB 2阳性表达与鼻咽癌患者较短的生存期 (P =0 .0 2 4 5 )有相关性 ,未发现它们与鼻咽癌复发 (P =0 .0 893)和转移 (P =0 .0 970 )有相关性。经Cox回归模型多因素分析 ,VEGF和C erbB 2的表达均可作为判断鼻咽癌预后的因素 (P =0 .0 132 ;P =0 .0 4 0 0 )。结论 :鼻咽癌活检标本中VEGF和C erbB 2的表达可作判断鼻咽癌预后的有实用价值的预测指标     

COX-2和VEGF-C在食管鳞癌淋巴结转移中的作用

目的 研究环氧合酶-2（COX-2）和血管内皮生长因子C（VEGF-C）在食管鳞癌组织中的表达及相关性.方法 采用免疫组化方法检测了66例食管鳞癌组织（10例癌旁组织作为对照）中COX-2和VEGF-C的表达.结果 66例食管癌组织中COX-2和VEGF-C表达阳性率分别为69.70%和56.06%,其表达均高于相应的癌旁组织（P＜0.05）,二者在癌组织中的高表达与淋巴结转移等密切相关（P＜0.05）,且COX-2和VEGF-C表达之间存在明显相关性（r=0.479P＜0.01）.结论 食管癌组织中有COX-2和VEGF-C的高表达,而COX-2可能参与VEGF-C淋巴管生成通路,它们的表达可能在食管癌淋巴道转移中发挥重要作用.     

Bcl—2蛋白在肺癌组织中的表达

探讨凋亡相关基因Bcl- 2在肺癌发生发展中的作用 .采用鼠抗人Bcl- 2蛋白单克隆抗体 ,应用免疫组化方法检测 113例肺癌组织中抗凋亡基因Bcl- 2的表达情况 .结果 :113例肺癌Bcl - 2阳性率为 2 4 8%( 2 8/113 ) ,其中鳞癌 2 4 5 % ( 12 /4 9) ,腺癌 2 4 4 % ( 11/4 5 ) ,腺鳞癌 16 7% ( 1/6) ,大细胞癌 14 3 % ( 1/7) ,小细胞癌 5 0 0 % ( 3 /6) .小细胞肺癌阳性率明显高于非小细胞肺癌 (P <0 0 5 ) ,而鳞癌及腺癌之间无显著性差异(P >0 0 5 ) .Bcl- 2表达与病人的年龄、性别、淋巴结转移及组织的分化程度无关 (P >0 0 5 ) .结论 :肺癌组织中存在Bcl- 2蛋白的过表达 ,它参与调控肺癌的发生、发展过程 .     

MMP-1和TFPI-2在鼻咽癌中的表达及意义

探讨鼻咽癌(NPC)组织中基质金属蛋白酶1(MMP-1)和组织因子途径抑制因子2(TFPI-2)的表达在NPC侵袭转移中的意义。方法应用免疫组织化学MaxVision法检测50例NPC组织(NPC组)和20例慢性鼻咽炎黏膜组织(对照组)中MMP-1和TFPI-2的表达,并分析其与患者临床参数的关系。结果 NPC组MMP-1的阳性表达率为78%,高于对照组的35%(P<0.05);而TFPI-2在NPC组的阳性表达率为20%,低于对照组的85%(P<0.05)。NPC组伴有淋巴结转移的癌组织MMP-1表达水平高于无淋巴结转移的癌组织(P<0.05),而伴有淋巴结转移的癌组织TFPI-2表达水平低于无淋巴结转移的癌组织(P<0.05),且MMP-1与TFPI-2的表达呈负相关(r=-0.490,P<0.05)。结论 MMP-1的高表达和TFPI-2的低表达与NPC颈淋巴结转移关系密切,两者表达平衡失调可能是NPC高转移的重要因素,可作为评估NPC转移的生物指标。     

miR-138在鼻咽癌患者中的预后价值及其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miR-138在鼻咽癌中的临床意义以及对癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法 采用实时荧光定量PCR检测鼻咽癌组织和癌细胞CNE1中miR-138的表达量。采用Kaplan-Meier生存分析和Cox回归分析评估miR-138的预后价值。构建体外调控miR-138表达量的鼻咽癌细胞体系,采用MTT法和Transwell实验法分析miR-138对癌细胞CNE1生命活动的影响。 结果 miR-138在鼻咽癌组织和细胞中的表达量均显著下调(P<0.001),且与癌症患者的淋巴结转移(P=0.007)及TNM分期(P=0.003)密切相关。生存曲线表明,低表达miR-138的鼻咽癌患者较高表达患者具有较差的总生存率(P=0.002),且可以作为一个独立的预后因子(HR=2.603,95%CI=1.245～5.441,P=0.011)应用在鼻咽癌的治疗中。体外细胞实验证明,高表达miR-138具有抑制鼻咽癌细胞CNE1增殖、迁移和侵袭的能力(P<0.05),而抑制miR-138的表达则显著促进癌细胞的各种生命活动(P<0.05)。 结论 miR-138与鼻咽癌的预后密切相关,且可以明显抑制鼻咽癌细胞CNE1的增殖、迁移和侵袭能力。     

细胞周期调节因子在原发和复发鼻咽癌的表达

【目的】探讨细胞周期调节因子在鼻咽癌复发中的作用。【方法】采用LsAB法同时检测69例患者原发和复发鼻咽癌组织中p53、MDM2、p21ras和p21WAF1蛋白的表达。【结果】复发癌与原发癌相比阳性表达率方面,p53蛋白(78%和80%)或MDM2蛋白(84%和83%)很相近,p21ras蛋白(73%和93%)或p21WAF1蛋白(52%和84%)明显下降;高表达率方面,p53蛋白(42%和51%)很相近,MDM2蛋白(57%和32%)明显升高,p21ras蛋白(16%和65%)或p21WAF1蛋白(17%和46%)明显下降。其中,MDM2蛋白表达水平在复发癌明显升高主要见于复发间期<34个月患者组（P<0.05),p21ras蛋白和p21WAF1蛋白表达水平在复发癌明显下降见于复发间期<34个月和≥34个月患者组（均<0.02以下)。【结论】原发鼻咽癌临床治愈后,p53蛋白和MDM2蛋白过度表达以及p21WAF1蛋白低表达或不表达可能仍然对鼻咽癌的复发起重要作用;MDM2蛋白表达水平显著升高和p21WAF1蛋白表达水平显著下降可能进一步加促鼻咽癌的复发过程。