乙型肝炎病毒基因分型荧光PCR检测及临床应用

目的:了解乙型肝炎病毒基因分型、分布及其与肝功能损害、病毒复制水平的关系.方法:采集69例乙肝患者血样,采用荧光聚合酶链反应(PCR)检测乙肝病毒基因分型,通过荧光探针识别基因型特异性序列,采集分析荧光信号确定病毒基因型,分别检测谷丙转氨酶(ALT)水平、乙肝病毒e抗原(HBeAg)和HBV DNA含量.结果:69例乙肝患者中B型26例,C型43例.B型和C型患者的ALT水平分别为(453.54±447.93)U/L和(330.23±306.90)U/L(P＞0.05);HBeAg阳性数分别为11例和23例(P＞0.05);HBV DNA含量分别为(38.74±36.49)×104拷贝/ml和(34.53±34.09)×104拷贝/ml(P＞0.05);不同临床类型乙肝患者中两种基因型的分布没有显著差异(P＞0.05).结论:本地区乙肝患者病毒基因型主要为B型和C型;二种基因型ALT水平、HBeAg表达水平、病毒复制水平以及肝炎病情均无显著性差异.     

乙型肝炎病毒基因分型方法的建立及应用

目的　扩增病毒S基因区,建立基因分型方法。方法　利用基因库软件及PCR和限制性片段长度多态性分析技术RFLP,用慢性无症状携带者的血清,扩增病毒S基因,建立新的分型方法。用此方法对我国部分地区慢性无症状携带者(AsC)及慢性乙型肝炎、肝硬化的HBVDNA进行了调查。对广州、重庆、北京、沈阳等地区慢性无症状携带者的HBVDNA进行分型。结果　广州,B型328%、C型427%、BC混合型230%、其他16%;重庆,B型350%、C型400%、BC混合型250%;北京,B型250%、C型500%、BC混合型250%;沈阳,B型111%、C型889%。结论　新的基因分型方法,简化了传统的基因序列分型法,结果可靠,操作相对简便。我国HBVDNA的基因型以C型和B型为主。广州地区慢性乙型肝炎和肝硬化患者的HBV基因型,肝硬化患者以C和B混合型为主,占500%,HBVDNA毒株的混合感染,有可能加重肝组织的损伤。     

乙型肝炎病毒基因分型及临床应用

目的:了解常州金坛地区乙型肝炎病毒基因分布特征,探讨基因型与肝功能损害、病毒复制水平的关系。方法:采用巢式聚合酶链反应(nest PCR),扩增乙型肝炎病毒S基因区,用末端标记方法对PCR产物标记并直接测序,测序结果和GenBank中登录的标准基因型序列相比较。结果:对该地区122例不同HBV感染者血清HBV DNA进行了基因分型,B型40例(占32.9%),C型82例(占67.1%),未发现B、C以外其他基因型;谷丙转氨酶(ALT)水平分别为(366.8±322.5)U/L和(354.3±315.2)U/L(t=0.339,P>0.05);HBV DNA含量(对数值)分别为(7.69±1.15)和(7.58±1.16)拷贝/m l(t=0.141,P>0.05);HBeAg阳性数分别为28/40和50/82(2χ=0.162,P>0.05);96例慢性乙型肝炎中B型为34例、C型为62例,18例肝硬化和肝癌患者检出B型3例、C型15例,二组比较2χ=7.72,P<0.01。结论:本地区HBV DNA基因型为B型和C型;二种基因型ALT水平、病毒复制水平和HBeAg表达水平均无显著性差异;C基因型与肝硬化和肝癌关系密切。     

乙型肝炎病毒基因型分型方法研究进展

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus,HBV）引起的危害严重的传染病。HBV基因型与其危害程度有一定的相关性。目前有多种HBV基因型分型方法,包括核酸测序、聚合酶联反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）、单克隆抗体ELISA法、型特异性引物-PCR法、PCR做板核酸杂交-ELISA法、线性探针分析（Line probe assay,LiPA）基因分型法、实时定量PCR解链曲线分析（Real- time PCR and mehing curve analysis）等。这些基因分型方法在HBV的临床诊断和流行病学调查应用中各有优缺点。     

乙型肝炎病毒基因型分型方法研究进展

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus,HBV)引起的危害严重的传染病,HBV基因型与其危害程度有一定的相关性。目前有多种HBV基因型分型方法,包括核酸测序、聚合酶联反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)、单克隆抗体ELISA法、型特异性引物PCR法、PCR微板核酸杂交ELISA法、线性探针分析(Lineprobeassay,LiPA)基因分型法、实时定量PCR解链曲线分析(RealtimePCRandmeltingcurveanalysis)等。这些基因分型方法在HBV的临床诊断和流行病学调查应用中各有优缺点。     

乙型肝炎病毒基因分型及临床应用研究

目的了解常州地区乙型肝炎病毒基因型分布特征,探讨其基因型与肝功能损伤、病毒复制水平及对拉米夫定疗效的关系. 方法采用巢式聚合酶链反应 (nest-PCR), 扩增乙型肝炎病毒S基因区, 用末端标记方法对PCR产物标记并直接测序, 测序结果和GenBank中登录的标准基因型序列相比较. 结果对该地区146份不同HBV感染者血清HBV DNA进行了基因分型,B型51份 (34.9%),C型95份(65.1%),未发现B、C以外其他基因型;丙氨酸转氨酶(ALT)水平分别为383.8±335.7IU和364.3±333.7 IU,(t=0.335,P>0.05)、HBV DNA含量分别为107.795±1.22和107.69±1.19拷贝/毫升(t=0.138,P>0.05)、HBeAg 阳性数分别为36/51和64/95,(χ2=0.159,P>0.05);104例慢性乙型肝炎中B型为43例、C型为61例,28例肝硬化和肝癌患者检出B型4例、C型24例,二组比较χ2=7.65,P<0.01;23例B基因型患者和45例C基因型患者接受48周以上拉米夫定治疗,48周后反跳者B型为18例,C型为14例,χ2=13.49,P<0.001.结论本地区HBV DNA基因型为B型和C型;二种基因型丙氨酸转氨酶水平、病毒复制水平和HBeAg表达水平差异均无显著性;C基因型与肝硬化和肝癌关系密切;拉米夫定对C基因型患者的疗效强于B型.     

基因芯片技术在乙型肝炎病毒基因分型检测中的应用探讨

目的：探讨利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断方法的可能性。方法：查阅国际上主要的乙型肝炎病毒(HBV)基因分型诊断标准和现行技术，通过将基因芯片技术与目前用于HBV基因分型的技术方法进行对比，探讨利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断方法的可能性。结果：HBV的基因分型，既可通过全基因序列比对，也可通过片段基因序列比对，片段基因序列比对是实际工作中HBV基因分型的主要方法，现有报道的技术主要为型特异引物(SSP)PCR扩增法和PCR扩增型特异探针(SSO)杂交法。基因芯片技术具有高敏感、高通量和能够平行检测DNA类型等特点，技术类型属于PCR扩增型特异探针(SSO)杂交法。尚未见有应用基因芯片技术进行HBV基因分型检测的报道。结论：借鉴现有的PCR扩增型特异探针（SSO)杂交法，如微板核酸杂交一ELISA显色技术，理论上利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断的方法是完全可能的，并且具有高效、快速和廉价等特点。     

特异性引物聚合酶链反应乙型肝炎病毒基因分型法的建立及应用

目的应用型特异性引物聚合酶链反应法（PCR）进行乙型肝炎病毒基因分型并分析该法的可靠性。方法应用型特异性引物PCR和INNO-LiPA分别对深圳、长春、北京152份HBV DNA阳性慢性乙型肝炎患者的血清标本进行了基因型分型，对该两种分型法不一致的血清标本再进行S区基因测序分型，以确定该两法的可靠性。结果型特异性引物PCR和INNO-LiPA的总符合率为86．8％（132／152），不一致率为13．2％（20／152）。型特异性引物PCR检测到81份（53．3％）B型；58份（38．2％）C型；13份（8．5％）B＋C型混合感染，未检出其他基因型或混合感染的基因型。INNO-LiPA检测到74份（48．7％）B型；61份（40．1％）C型；5份（3．3％）B＋C型混合感染；另检出3份（2．0％）A＋B型混合感染；1份（0．7％）B＋E型混合感染；1份（0．7％）C型与D型，1份（0．7％）D型感染，3份（2．0％）B／C／D型及3份未能分型。20份两法分型不一致的标本中，6份无剩余血清，对其余14份进行了S区基因测序分型，结果型特异性引物PCR与S区基因测序分型法的符合率为71．4％（10／14），而INNO-LiPA与S区测序法的符合率仅为7．1％（1／14），前者明显高于后者（P〈0．05）。结论型特异性引物PCR和INNO-LiPA均可鉴定HBV基因型，但前者较为简便和可靠，且费用较低，可用于临床标本的检测和流行病学调查。     

山西省乙型肝炎病毒基因型别的初步研究

目的 初步确定流行于山西地区的乙肝病毒的基因型的基本情况。方法 采集山西地区乙型肝炎表面抗原阳性的血清，利用PCR扩增得到HBV的S基因和C基因；用MEGA3软件对其进行核苷酸序列分析，构建系统发生树，分析基因型。结果 约93％样本的HBVS基因和C基因序列均位于HBV系统发生树的基因型C，近7％的样本其S基因和C基因序列位于系统发生树的基因型B。结论 流行于山西地区的乙肝病毒多数为基因型C，少数为基因型B，未发现基因重组现象。     

沈阳地区乙型肝炎病毒基因型分子流行病学研究

目的 研究沈阳地区乙型肝炎病毒基因型分布和特点。方法 应用半巢式聚合酶链反应（PCR）扩增乙型肝炎病毒P基因，将PCR产物应用ABI377自动测序仪直接做核苷酸序列分析，并用DNA STAR软件进行种系发生分析及基因型鉴定。结果 HBV DNA标准株P基因片段可进行基因分型。在沈阳地区慢性HBV感染者中可检出基因型B、C和D，检出率分别为22％、50％和28％，基因型C分布与基因型B、D的差异有统计学意义，在慢性乙型肝炎患者和慢性HBV携带者间各基因型间分布比较中差异无统计学意义。结论 通过测定HBV DNAP基因序列片段可进行HBV DNA基因分型。沈阳地区乙型肝炎病毒基因型有基因型B、C和D型，其中基因型C为优势基因型。     

HBV基因分型检测试剂性能评估研究要点

依据《体外诊断试剂注册管理办法》和乙型肝炎病毒核酸分型试剂自身特点,提出对HBV基因分型检测试剂性能研究的特殊要求.对该类试剂的参考品和质控品研制、阳性/阴性参考品符合率、最低检测限、分析特异性、精密度、基因混合型研究、携带污染率等方面进行了详细解析.阐述了乙型肝炎病毒基因分型类体外诊断试剂的性能研究要点.为从事该类产品注册申报前性能研究的行业人员提供参考.     

乙型肝炎病毒表面抗原定量检测及临床意义分析

乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）定量检测是临床治疗乙型肝炎的一个非常重要的指标,它不仅能区分乙型肝炎病程的各种分期,而且对药物治疗效果及预后有良好的预测作用.本文从乙型肝炎病毒表面抗原的结构、定量检测的方法学以及在临床中的应用等方面做一综述分析.     

化学发光免疫分析法检测乙肝病毒感染性标志物的临床应用

目的 探讨化学发光免疫分析法检测乙肝病毒感染性标志物的临床应用效果.方法 抽取我院2013年1月至2014年1月接收的疑似乙型肝炎病人800例,采用化学发光免疫分析法(CLIA)和酶联免疫吸附试验法(ELISA)分别检测患者的乙肝病毒血清标志物.结果 HBsAg、HBeAg、HBeAb的检出率CLIA高于ELISA(P＜0.01),两种方法HBsAb、HBcAb的检出率无明显差异(P＞0.05);低水平HBsAg检测ELISA敏感性低于CLIA;ELISA检出的最低浓度为0.128IU/mL,CLIA法检出的最低浓度为0.0311U/mL.结论 采用CLIA检测乙肝病毒感染性标志物相比ELISA更准确,可有效应用于乙肝临床诊断和病情动态监测.     

Antibodies against Hepatitis A and Hepatitis B Virus in Intravenous Immunoglobulin Products

The worldwide seroprevalence of hepatitis A virus (HAV) and hepatitis B virus (HBV) has changed over the last two decades, indicating a declining incidence of HAV and HBV infections. Therefore, vaccinations against HAV and HBV are recommended for unimmunized people before traveling to an endemic area. Unfortunately, primary antibody deficiency (PAD) patients can only obtain humoral immunity through intravenous immunoglobulin G (IVIG) replacement and not from vaccination because of a defect in antibody production. However, few studies have analyzed the titers of antibodies against HAV or HBV in IVIG products. In this study, the titers of anti-HAV and anti-HBs antibodies were measured in nineteen lots of IVIG products from five manufacturers from three countries (A, B from Korea; C, D from Japan; and E from the USA), and trough titers in plasma were estimated. Concentrations of anti-HAV antibody ranged from 1,888–8,927 mIU/mL and estimated trough titers exceeded the minimal protective value in all evaluated IVIG products. Concentrations of anti-HBs antibody ranged from 438–965 mIU/mL in products A and B and were 157, 123, and 1,945 mIU/mL in products C, D, and E, respectively. Estimated trough titers in products A, B, and E exceeded the minimal protective value but those in products C and D did not reach this threshold. These data demonstrated that available IVIG products generally provide sufficient antibodies against HAV and HBV to protect patients with PAD, although the trough concentrations of anti-HBs antibody in two IVIG products did not reach the minimum protective value.     

Detection of Occult Hepatitis C and Hepatitis B Virus Infections from Peripheral Blood Mononuclear Cells

Purpose: To investigate the problem of occult HCV & HBV infections in patients with persistently longstanding abnormal liver function test results of unknown etiology and to investigate occult HCV in patients with sustained virological response (SVR). Methods: The study included two groups; first group included 40 patients with persistently longstanding abnormal liver function test, in addition to 62 patients with history of hepatitis C who developed SVR. HCV RNA status was tested in serum by conventional RT-PCR and by real-time PCR in Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMCs). HBV DNA in PBMCs was done in first group only. Results: In first group, PCR in PBMCs was positive for HCV RNA in 4 patients with elevated liver enzymes and HBV DNA was positive in PBMCs in 3 patients. In patients with SVR, 7 patients were positive for HCV RNA in PBMCs. Conclusions: Patients with long-standing abnormal results of liver-function tests with unknown etiology may have HCV RNA or HBV DNA in their PBMCs in the absence of anti-HCV antibodies, HBV markers, serum HBV DNA and serum HCV RNA.In Patients with SVR, HCV RNA in PBMCs is recommended to detect residual infection especially in those with high serum HCV RNA levels before treatment.     

慢性乙型肝炎重叠HGV感染对HBV复制的影响

目的观察慢性乙型肝炎重叠ＨＧＶ感染对ＨＢＶ复制的影响．方法采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ．ＨＢＶ－ＤＮＡ定量采用荧光信号引物能量转换法．以单纯慢性乙型肝炎患者作对照研究．结果２３例ＨＧＶ重叠感染的慢性乙型肝炎患者 ＨＢＶ－ＤＮＡ、ＨＢｅＡｇ和抗－ＨＢｅ的阳性率分别为５６．５％、１７．４％和６０．９％而３４例单纯慢性乙型肝炎患者三项指标的阳性率分别为９１．２％、８５．３％和１１．８％．定量分析显示,前组ＨＢＶ－ＤＮＡ量为２．０２、后组为４．１２．经统计学处理,两组各项指标均有显著性差异．结论慢性乙型肝炎重叠ＨＧＶ感染可能会抑制ＨＢＶ的复制．     

广州地区小儿乙肝无症状携带者及其父母的HBV DNA基因型研究

目的扩增HBV DNA S基因,建立 HBV DNA的分型方法,研究家庭中小儿乙肝无症状携带者与其父母的基因型.方法利用PCR-RFLP基因分型方法,扩增HBV DNA S基因,以限制性内切酶AvaⅡ,MboⅠ酶切分型;结果 12个家庭共27例乙肝无症状携带者血清,其中两个家庭儿童与父母的基因型相同,均为B型;9个家庭儿童与母亲的基因型相同(7个B型,2个C型),父亲HBV DNA阴性;1个家庭儿童与母亲为B型,父亲为C型,结论本文利用的分型方法经济实用,分型率高,广州地区的基因型以B型,HBV DNA的传播具有家庭聚集性特点及母婴传播的特点.     

慢性乙肝病毒感染者基因分型及其临床意义

目的探讨江苏南通地区慢性乙肝病毒（HBV）感染者基因型分布状况及其临床相关性。方法采用多对型特异性引物巢式PCR法对220例南通地区血清HBV标志物和HBV-DNA阳性者,包括乙肝表面抗原携带者（ASC）30例,慢性乙型肝炎（CHB）97例,重型肝炎（CSH）29例,肝炎后肝硬化（LC）34例,肝细胞癌（HCC）30例,进行HBV基因型检测。结果220例中B型59例（26.8%）,C型150例（68.2%）,BC混合型11例（5.0%）;C基因型在CSH组、LC组、HCC组中的比例显著高于ASC组（P〈0.05）。B型、C型、BC混合型HBeAg阳性率分别为49.2%、54.0%和36.4%,差异无统计学意义（P〉0.05）。C型和BC混合型HBV-DNA载量显著高于B型,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论南通地区HBV基因型以B、C型为主,C型为优势基因型,并与重型肝炎、肝硬化、肝癌的发生及血清HBV-DNA高载量相关。     

从银屑病皮损处鳞屑和组织中检出乙型肝炎病毒成份

应用免疫学及核酸杂交技术和VECTOR、ENZO两公司生产之试剂,从银屑病皮损处鳞屑和组织中检出了乙型肝炎病毒成份。鳞屑中HBsAg和HBV-DNA阳性例数为74/288,占25.6％;组织中HBsAg、HBeAg、HBeAg和HBV-DNA阳性例数为15/75,占20％;有6例在组织中存在两种以上成份。上述成份分布在表皮各层和真皮中,血清HBV感染标志检测结果表明,鳞屑和组织中检出的HBV成份,不是全身感染所致,而是局部存在的。本文首次提出具体病毒和确切定位,并认为乙型肝炎病毒在银屑病发病中可能起主要作用或者是部分病人的发病原因。     

前S1抗原与抗-HBc IgM检测结果探讨

检测患者乙型肝炎病毒前S1抗原（Pre-S1Ag）与抗-HBc IgM的水平,探讨两者与HBV急性感染的相关性,为乙型肝炎的早期诊治提供必要的理论依据。对90份临床标本分别采用PCR技术检测HBV-DNA载量阳性标本,采用固相R IA（SPR IA）检测HBeAg、抗-HBc IgM,采用胶体金免疫层析法检测Pre-S1Ag,并对结果进行分析。结果表明90份HBV-DNAPCR阳性标本中Pre-S1Ag阳性71份,HBeAg阳性60份,抗-HBc IgM阳性14份,其检测结果有显著性差异（P〈0.05）。血清Pre-S1Ag、抗-HBc IgM及HBeAg与HBV复制紧密相关。Pre-S1Ag明显优于抗-HBc IgM及HBeAg。因此,Pre-S1Ag的检测对乙型肝炎临床早期诊断、抗病毒治疗方案的选择和预后判断具有重要意义。