大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)基因探针检测霍乱弧菌(Vc)的实验研究

本文报告了大肠杆菌不耐热肠毒素(ETEC-LT)基因探针检测霍乱弧菌肠毒素(Vc-ET)基因的分子杂交条件(Vc-ET杂交法),证实LT探针在实验条件下可以检测Vc-ET,最低检测菌量为4个活菌,比国内其它检菌法敏感十几倍至几千倍。探针的有效期为45～60天,待检标本经简单处理(DNA变性)后冰箱存放1～2个月仍不影响检测结果。对1986年某边境地区病人和环境中搜集分离到的50株O-Ⅰ群EI-Tor菌株作初步研究,证实全部为有毒性的0-Ⅰ群霍乱弧菌,未发现在自然条件下因基因突变而产生的无毒性O-Ⅰ群霍乱弧菌存在。     

LT多克隆抗体平板免疫溶血试验与LT基因探针检测ETEC中LT的比较研究

检测产毒性大肠杆菌(ETEC)热敏感肠毒素(LT)有多种方法。国内学者根据Evans的被动免疫溶血试验原理,创建了PIHT法,取得了较好的效果。但该法需要高质量的特异性抗体。我们以特异性、敏感性较高的LT基因探针检测法为“黄金标准”,用LT-PcAb作PIHT,检测了156株致泻性大肠杆菌中的LT,以对该试验作初步评价。     

分子信标探针技术检测沙门菌invA基因

目的 研究沙门菌的分子信标基因检测方法。方法 在PCR反应体系中加入分子信标探针,探针的5’端标记6-fluorescine(6-FAM),3’端标记4-(dimethylaminophenylazo)benzoic acid (DABCYL),对沙门菌invA基因PCR产物进行荧光检测。结果 肠炎沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、伤寒沙门菌“H”、伤寒沙门菌和肠侵袭型大肠杆菌的荧光值分别为161.6、104.5、85.9、83.1、94.8、46.1,Ax值(样本荧光值-空白对照荧光值)分别为121.3、64.2、45.6、42.8、54.5、5.8,沙门菌的Ax值均大于21,结果阳性,与琼脂糖电泳分析结果一致。结论 分子信标探针技术可以准确、快速、简便进行沙门菌invA基因检测。     

分子信标探针技术检测沙门菌invA基因

目的 研究沙门菌的分子信标基因检测方法。方法 在PCR反应体系中加入分子信标探针，探针的5’端标记6-fluorescine(6-FAM)，3，端标记4-(dimethylaminophenylazo)benzoicacid(DABCYL)，对沙门菌invA基因PCR产物进行荧光检测。结果 肠炎沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、伤寒沙门菌“H”、伤寒沙门菌和肠侵袋型大肠杆菌的荧光值分别为161.6、104．5、85．9、83．1、94．8、46，1，Ax值(样本荧光值-空白对照荧光值)分别为121．3、64．2、45.6、42．8、54．5、5.8,沙门菌的Ax值均大于21，结果阳性，与琼脂糖电泳分析结果一致。结论 分子信标探针技术可以准确、快速、简便进行沙门菌invA基因检测。     

基因探针技术与平板免疫溶血试验检测ETEC—LT的比较

本文报告从腹泻患者检出237株大肠艾希氏菌,用PIHT法与LT—DNA探针技术进行ETEC—LT检测比较。结果LT—DNA探针技术检出率(13.5％)明显高于PIHT法(4.7%),未发现PIHT法检出阳性而LT—DNA探针阴性者。认为LT—DNA探针特异性强,敏感度高,标本又可直接点膜检测,不需作系统培养鉴定,适用流行病学调查大批量的标本检测等优点。     

几种快速检测传染性肠道疾病方法的应用

随着经济的飞速发展，人们在饮食结构多样化的同时相互之间的交往也日益频繁，这些都对当前的传染病控制提出了挑战．我们的疾病控制措施必须适应时代的发展，为人民提供更加准确、快速、价廉且实用性较广的诊断方法，才能更快、更好的控制疾病．切实保障人民群众的健康。目前医学检测技术飞速发展．快速检测也日益广泛的应用于各种疾病的诊断中，为患者赢得了宝贵的治疗时间。当前比较常用且准确率较高的有聚合酶链式反应(PCR)，免疫层析法以及单克隆抗体法。尤其是在传染性肠道疾病(如霍乱、伤寒)的快速诊断中发挥了重要的作用．越来越广泛的被应用于疫情的处理，在传染病控制中占有重要的地位。     

金纳米颗粒基因探针同步检测HBV和HCV的初步研究

目的 建立一种简单、快速同时检测HBV DNA和HCV RNA的诊断方法.方法 利用PCR方法扩增HBsAg阳性合并抗HCV阳性的患者血清中HBV DNA和HCV cDNA并提取.制备Au纳米颗粒HBV DNA、HCV cDNA基因探针.在含有Au纳米颗粒HBV DNA、HCV cDNA基因探针的液相检测体系中加入HBV DNA和(或)HCV cDNA,透射电镜下观察.结果 PCR(可扩增HBV DNA和HCV cDNA.出现预期的431bp和323bp特异性条带.使用Au纳米颗粒基因探针通过透射电镜可同步检出乙、丙型肝炎合并感染患者血清中提取的HBV DNA和HCV RNA.结论 通过透射电镜,使用Au纳米颗粒基因探针可同步检出乙、丙型肝炎合并感染患者血清中的HBV DNA和HCV cDNA,甚至可达到无需PCR水平,此方法具有敏感性高、特异性好的特点.     

应用促菌生治疗仔猪肠道大肠杆菌病的效果

长期实验证明,中药西药及针灸都有控制仔猪黄、白痢的一定效果。但也有不少问题,自从大连医学院康白等制成“促菌生”后,应用“促菌生”治疗仔猪黄、白痢疾,结果如下。 1.药品:用促菌生,土霉素、复方大蒜酊三种药物对仔猪痢疾作对照治疗。促菌生来自成都生物制品研究所制成的片剂,每片含活菌量1亿个,土霉素每片含量0.25g。复方大蒜酊,系我们自制,成份是75％酒精100m1,大蒜30g,胡椒、冰片各3g组成。     

应用核酸探针检测痢疾杆菌侵袭力的初步报告

采用菌落原位杂交法,用福氏5型痢疾杆菌大质粒上17Kb 基因片段,以32p 标记制备成探针,对80例痢疾志贺氏菌的侵袭力进行检测,结果带菌者菌株中侵袭力的阳性率92.8%,90.9%,病人菌株中袭力的阳性率侵P>0.05,两组菌的侵袭力差异无显著性。通过不同菌群侵袭力的分析,福氏痢疾杆菌侵袭力的阳性率似高于其他菌群,该探针特异、敏感、快速、经济,为硷测痢疾菌侵袭力的理想方法。     

肠道致病性大肠杆菌致病机理的初步探讨

作者使用传统的肠道致病性大肠杆菌株进行了肠毒素、肠侵袭性及幼兔实验性腹泻等试验。实验结果表明,肠道致病性大肠杆菌是大肠杆菌性腹泻的重要病原,其致病机理既不同于产肠毒素性大肠杆菌,也不同于肠道侵袭性大肠杆菌。因此,临床实验室在检查婴幼儿腹泻的病原时,常规作传统的肠道致病性大肠杆菌血清分型仍属必要。     

基因探针在大肠杆菌中的扩增及其提纯

本文报道了基因探针在大肠杆菌中的扩增与提纯方法。含基因探针的质粒用氯化钙方法转染大肠杆菌,被转染的细菌与质粒在培养液中同步扩增,然后用碱裂解法抽提扩增后的质粒。结果表明:(1)质粒的转化效率与其浓度有关;(2)经转染、扩增与抽提后,获得了大量的纯化质粒DNA;(3)纯化后的基因探针能满意地用于DNA 标记及分子杂交。     

PCR检测产毒性大肠杆菌及初步应用

本文应用聚合酶链反应(PCR)检测产毒性大肠杆菌(ETEC).在ETEC的肠毒素基因内设计合成3对引物,扩增出LT(627bp)和ST(STa;24bp,STb:169bP)基因片段,一次性分型检测各种ETEC,对标准菌株、模拟标本及临床标本进行检测,结果表明PCR有较好的特异性和敏感性,在临床有较好的应用价值.     

几种检测淋病奈瑟菌方法的比较研究

目的通过比较几种检测淋病奈瑟菌的方法,评价其在临床诊断中的应用价值。方法收集我院2009年10月～2010年12月431例疑似淋病奈瑟菌感染患者标本,分别做直接涂片染色、培养鉴定、聚合酶链反应（PCR）、斑点金免疫渗滤（dot immunogold filtration assay,DIGFA）4种检测,以培养鉴定为对照评价各方法的临床应用价值。结果直接涂片染色法阳性检出率低于其他三种方法（P〈0.05）,斑点金免疫渗滤法与培养鉴定两种检测方法阳性检出率比较差异无统计学意义（P〉0.05）。PCR检测法阳性检出率高于其他三种方法（P〈0.05）。结论在临床微生物诊断工作中建议选择至少两种检测方法同时检测淋病奈瑟菌以提高阳性检出率。     

肺炎克雷伯菌16种β内酰胺酶基因检测研究

目的了解20株仅对亚胺培南敏感的肺炎克雷伯菌（KPN）β-内酰胺酶产生状况。方法对20株KPN菌用PCR法进行16种13内酰胺酶基因（TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT-1）检测。结果20株KPN菌检出TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为85％、25％、25％、20％、25％、70％。20株KPN菌中有19株至少检出1种β-内酰胺酶基因,最多同时检出6种β-内酰胺酶基因。结论该20株KPN菌β内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关。     

DNA抽提与基因探针标记的几种方法比较

比较了苯酚—氯仿、NP—40和盐酸胍3种不同的 DNA 抽提方法,并对基因探针标记同位素掺入法(缺口平移法和随机引物法)和非同位素掺入法在单拷贝基因检测中的应用进行了探讨。     

Taqman探针检测VEGF基因多态性的实验研究

目的 确定Taqman探针等位基因鉴别技术检测VEGF基因C-634G多态性的最适实验条件.方法 对影响VEGF基因C-634G多态性Taqman探针检测的反应体系及探针、引物浓度等主要因素进行了系统研究.结果 最适反应体系为12.5μL,最适探针、引物浓度为:0.3/12.5μL.结论 建立了Taqman探针检测VEGF基因多态性的稳定实验方法 .     

淋球菌隐蔽性质粒cppB基因探针=制备及初步应用的研究

应用碱变性法从淋球菌Ｄ参考菌株获得４．２ｋｂ隐蔽性质粒ＤＮＡ，通过ＰＣＲ方法扩增该质粒６２３ｂｐｃｐｐＢ基因，采用ＤＮＡ直接酶标－化学发光自显影技术标记ｃｐｐＢ基因探针，通过斑点及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交加以鉴定并初步应用于临床标本检测。旨在为临床淋病实验室诊断提供一个简便，快速方法。