电针治疗对大鼠慢性压迫性脊髓损伤胰岛素样生长因子Ⅰ表达的影响

目的:探讨电针治疗对大鼠慢性压迫性脊髓损伤胰岛素样生长因子Ⅰ的表达变化及对脊髓功能的影响。方法:实验于2004-10在汕头大学医学院第二附属医院中心实验室完成。40只2月龄SD大鼠,体质量(200±50) g,随机分为对照组(n=10)和模型组(n=30);模型组造成中度压迫(30％-60％)的慢性脊髓损伤大鼠模型后,随机分为持续压迫组(保留压迫装置)、减压组(取出压迫装置做捆绑对照)、减压加电针组(在减压的基础上进行电针治疗),每组10只。电针治疗频率0．5 ms,刺激强度为10 mA,30 min/d,6 d为1个疗程,间隔1 d, 进行第2个疗程,共3个疗程。观察各组大鼠联合行为评分、脊髓常规病理检查及免疫组织化学方法染色检测胰岛素样生长因子Ⅰ水平的变化。结果:4组大鼠．每组10只,均进入结果分析。①各组大鼠联合行为评分:减压加电针组(10．44±0．09)优于压迫组(39．92±0．59)和减压组 (12．97±1．11),差异有显著性意义(t=49．07,P<0．01;t=2．28,P<0．05)。②各组大鼠脊髓苏木素-伊红染色光镜下的观察结果:减压组和减压加电针组较压迫组大鼠脊髓扁平化减轻。③各组大鼠脊髓苏木素-伊红染色光镜下的观察结果:减压组和减压加电针组脊髓损伤较压迫组减轻。④压迫节段脊髓胰岛素样生长因子Ⅰ阳性神经元计数(6个视野作阳性神经元计数):减压加电钟组(107．7±3．22)明显高于压迫组(62．9±1．8)和减压组(88．4±1．66),差异均有显著性意义(t=11.48,4．99,P均<0．01)。结论:电针治疗能促进慢性脊髓损伤大鼠的行为功能恢复,胰岛素样生长因子Ⅰ介导电针的治疗过程,与促进行为功能恢复有关。     

电针对大鼠慢性脊髓损伤热休克蛋白70及诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的：研究电针对大鼠慢性脊髓损伤热休克蛋白70(heat shock protein 70，HSP70)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)表达的变化及对脊髓功能的影响，探讨针刺治疗慢性脊髓损伤的作用机制。方法：40只2个月龄SD大鼠，随机分为对照组10只，实验组30只。实验组随机分为3组：持续压迫组，减压组，电针组(n=10)，采用大鼠后路渐进性脊髓压迫动物模型，然后手术减压，并进行电针治疗。观察联合行为评分(combined behavioral score，CBS)和HSP70及iNOS的免疫组织化学变化。结果：脊髓损伤后HSP70和iNOS在神经元表达均增强，经过电针治疗后，HSP70在神经元的表达进一步增强，电针组[(130．35&;#177;18．98)个]与减压组[(42．76&;#177;13．45)个]比较，差异有非常显著性意义(t=11．907，P&;lt;0．01)，iNOS在神经元的表达下降。电针组[(8．21&;#177;3．76)个]与减压组[(13．24&;#177;2．71)个)比较，差异有非常显著性意义(t=3．432，P&;lt;0．01)。CBS值显示，电针组明显优于减压组，电针组[(12．29&;#177;6．05)分]与减压组[(20．24&;#177;8．88)分]比较，差异具有显著性意义(t=2．34,P&;lt;0．05)。结论：电针治疗可以促进脊髓损伤大鼠的行为功能恢复，HSP70介导了电针的治疗过程，保护了脊髓神经细胞并减轻继发性脊髓损伤，与促进行为功能恢复有关。     

慢性压迫性脊髓损伤后神经前体细胞的增殖

背景：关于成年哺乳类动物脊髓损伤后神经前体细胞的增殖特征和来源以及星形胶质细胞在其中的作用尚无肯定性结论。目的：通过分析成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后巢蛋白和胶质纤维酸性蛋白表达的变化，探讨神经前体细胞的增殖特征和来源以及星形胶质细胞在其中的作用。设计：完全随机对照实验。单位：兰州大学第二医院骨科研究所。材料：实验于2003-03／10在兰州大学第二医院骨科研究所完成，选择成年健康Wistar大鼠50只。随机分为正常对照组、慢性压迫性脊髓损伤中度组（压迫物占椎管矢状径的40％）、重度组（压迫物占椎管矢状径的60％）及重度压迫损伤24h后减压3d、10d组，每组10只。主要观察指标：①各组大鼠压迫临近段（距压迫边缘至5mm）脊髓灰质和白质内nestin的阳性表达并测量其灰度值。②各组大鼠脊髓内胶质纤维酸性蛋白的表达。结果：50只大鼠均进入实验分析。①中度压迫组（白质235.33&;#177;6.48，灰质196．28&;#177;6．55）、重度压迫组（白质190．45&;#177;4．91，灰质173．15&;#177;5．98）及重度压迫损伤减压后3d组（白质198．39&;#177;3．24，灰质180．38&;#177;4．51）和减压后10d组白质（202．55&;#177;3．54）中巢蛋白均有明显表达（P〈0．05），以重度压迫组最为显著（P〈0．01）。减压10d组的灰质和脊髓中央管室管膜细胞的巢蛋白表达与正常对照组相比，差异无显著性意义（P〉0．05）。②与正常对照组相比，各损伤组脊髓内胶质纤维酸性蛋白表达增强，胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数目增多、胞体肥大，突起增粗、增长。结论：成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后早期存在神经前体细胞的增殖。星形胶质细胞参与神经前体细胞的增殖与迁移，对脊髓具有重要的营养修复作用。     

生长激素和细胞因子对兔关节软骨细胞增殖和基质分泌的影响

目的：探索生长激素对体外培养的关节软骨细胞的影响及其与细胞因子的关系，为生长激素在软骨组织工程中的应用提供依据。 方法：实验于2003-11／2004-03在南京医科大学分子生物研究所完成。消化获取3个月龄新西兰兔关节软骨细胞，随机分为胰岛素样生长因子Ⅰ、转化生长因子β1、生长激素、生长激素＋胰岛素样生长因子Ⅰ、无因子对照组进行培养，每组16孔细胞。以噻唑蓝法检测各组细胞增殖率、阿新蓝染色法检测各组细胞聚胺多糖分泌量。 结果：①各处理组细胞增殖率均高于对照组（P〈0．05），生长激素和细胞因子均能促进软骨细胞增殖，其中胰岛素样生长因子Ⅰ＋生长激素组细胞增殖最显著，是对照组的2．17倍[噻唑蓝法检测不同组吸光度：无因子对照组为0．199&;#177;20．05，转化生长因子β1组为0．317&;#177;20．067，胰岛素样生长因子I组为0．384&;#177;0．084，生长激素组为0．252&;#177;20．056，生长激素＋胰岛素样生长因子Ⅰ组为0．433&;#177;20．080]。②各处理组培养上清聚胺多糖含量均高于对照组（P〈0．05），生长激素和细胞因子均能促进软骨细胞基质分泌．其中胰岛素样生长因子Ⅰ＋生长激素组聚胺多糖含量最高，是对照组的2．10倍[阿新兰染色法检测不同因子组上清聚胺多糖含量：无因子对照组为（49．69&;#177;1．37）mg／L，转化生长因子131组为（80．10&;#177;1．42）mg／L，胰岛素样生长因子Ⅰ组为（88．44&;#177;1．68）mg/L，生长激素组为（67．73&;#177;1．56）mg／L，生长激素＋胰岛素样生长因子Ⅰ组为（104．47&;#177;1．86）mg／L]。 结论：生长激素也有促进体外培养的关节软骨细胞增殖和基质合成作用，胰岛素样生长因子Ⅰ与生长激素联用有协同作用。     

鼻腔给予外源性胰岛素样生长因子后成年大鼠脑梗死体积及Bcl-2蛋白表达的变化

目的：观察经鼻腔给予外源性胰岛素样生长因子对成年大鼠局灶性脑缺血后脑梗死体积及凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达的影响。方法：实验于2003-12／2004-05在中国医科大学动物实验室进行，取70只雄性SD大鼠随机分为4组：①正常组（n=5）：不干预。②假手术组（n=5）：只分离颈总动脉及颈外动脉，不插入尼龙线。③缺血组（n=30）：采用线栓法制备大鼠持续性局灶性脑缺血模型，缺血后0．5h经鼻腔给予生理盐水5μL，间隔2min后再次给药，共10次50μL。缺血后24，48，72，96，120h，7d麻醉状态下处死动物。④胰岛素样生长因子组（n=30）：造模同模型组，缺血后0．5h经鼻腔滴注胰岛素样生长因子50μL，给药方法和处死时间同模型组。计算各组不同时间点脑梗死灶体积、Bcl-2阳性细胞数用免疫组化方法测定。结果：经补充后70只大鼠进入结果分析。①脑梗死灶体积：缺血组24，72h最大，120h变小，7d更小[（283．72&;#177;40．58），（288．74&;#177;42．03），（141．97&;#177;28．34），（101．28&;#177;19．42）mm^3]，胰岛素样生长因子组以上各个时间点均小于缺血组[（202&;#177;32．66），（200．83&;#177;36．80），（98．97&;#177;32．76），（78．92&;#177;23．24）mm^3，P〈0．01]。②Bcl-2阳性细胞数：正常组及假手术组未见，缺血组24h少量出现，72h达高峰，120h减少，7d更少[（9&;#177;3），（28&;#177;3），（17&;#177;2），（3&;#177;3）个／视野]，胰岛素样生长因子组以上各个时间点均多于缺血组[（22&;#177;3），（37&;#177;6），（26&;#177;4），（8&;#177;3）个／视野，P〈0．01]。结论：脑缺血后经鼻腔给予胰岛素样生长因子能减少模型大鼠脑梗死灶体积，上调Bcl-2蛋白表达，抑制细胞凋亡，起到脑保护作用。     

转基因同种异体组织工程软骨修复兔膝关节全层缺损

目的：观察转人胰岛素样生长因子Ⅰ基因同种异体组织工程软骨对兔膝关节软骨全层缺损的修复作用。 方法：实验于2004～08／2005—08在军事兽医研究所病毒室及长春生物制品研究所实验室完成。①取出生28d新西兰白兔的关节软骨，采用机械分离及Ⅱ型胶原酶消化法获得分离的兔软骨细胞，用单层培养扩增。②用脂质体法使胰岛素样生长因子Ⅰ基因转染兔关节软骨细胞。③以经过转染的兔关节软骨细胞作为种子细胞，牛Ⅰ型胶原作为支架，体外构建转基因同种异体组织工程软骨。④5个月龄的新西兰白兔80只制备关节软骨缺损模型，分别移植入不同组别的移植物：空白对照组、单纯支架组、单纯软骨细胞附和支架组、经过转染的软骨细胞附和支架组、自体软骨移植组，分别于术后4，8，16，24周处死各组动物4只取材，观察兔膝关节软骨全层缺损的修复情况。结果：①G418培养液筛选结果：通过G-418对于兔关节软骨细胞的最小致死剂量的测定得出，G418对软骨细胞的最小致死剂量为0．4g／L。转染后软骨细胞经0．4g／L G418筛选，2周后得到抗G418的阳性细胞克隆，而未转染细胞在含G418的培养液中逐渐全部死亡，初步证明人胰岛素样生长因子Ⅰ基因的转染成功。②原位杂交检测结果：转染软骨细胞胞浆中有氯化镍紫蓝色颗粒阳性杂交信号说明有人胰岛素样生长因子1mRNA的表达；未转染细胞则未见阳性信号。③免疫组织化学检测结果：在转染的软骨细胞胞浆中有棕黄色颗粒样阳性信号，说明有Ⅱ型胶原蛋白表达，证明稳定表达人胰岛素样生长因子Ⅰ的转染软骨细胞保持Ⅱ型胶原的表达。④软骨缺损修复后的组织学评价结果：在试验所观察的24周内，软骨基本稳定，而且转胰岛素样生长因子Ⅰ基因组织工程软骨显示出强烈的软骨基质分泌能力。转胰岛素样生长因子Ⅰ基因的同种异体组织工程软骨对软骨缺损的修复效果明显优于空白对照组和单纯软骨细胞附和支架组[空白对照组、单纯支架组、单纯软骨细胞附和支架组、经过转染的软骨细胞附和支架组、自体软骨移植组修复软骨的组织学评分：术后4周为（12．00&;#177;0．79），（11．00&;#177;0．81），（8．10&;#177;0．90），（5．80&;#177;1．03），（5．20&;#177;0．46）分；术后8周为（10．20&;#177;0．96），（10．10&;#177;1．19），（7．10&;#177;1．34），（4．90&;#177;1．15），（4．00&;#177;0．58）分；术后16周为（8．00&;#177;1．24），（8．50&;#177;1．79），（5．20&;#177;1．88），（4．00&;#177;1．82），（2．00&;#177;1．96）分；术后24周为（7．00&;#177;0．90），（6．50&;#177;2．13），（4．30&;#177;2．00），（3．00&;#177;2．13），（1．20&;#177;0．78）分，P〈0．05]. 结论：人胰岛素样生长因子Ⅰ基因转染兔关节软骨细胞后可以在细胞中表达，而且转胰岛素样生长因子Ⅰ基因的同种异体组织工程软骨对兔关节软骨全层缺损的修复效果明显。为进一步转基因组织工程软骨实验提供了依据。     

大鼠股骨骨折合并脑损伤骨折愈合过程中胰岛素样生长因子Ⅰ在血清和骨痂中的表达

目的：观察胰岛素样生长因子Ⅰ在大鼠血清和骨痂中的表达，及其对骨折合并脑损伤骨折愈合的作用。 方法：实验于2005—01／09在华北煤炭医学院附属医院骨科实验室完成。12周雄性Sprague—Dawley大鼠64只，随机数字法分成4组，正常对照组、脑损伤组、单纯骨折组、骨折合并脑损伤组。建立大鼠脑损伤和股骨骨折模型。分别于2周和3周取材，每个时间点每组8只，拍骨折股骨X射线片，采用酶联免疫吸附法测血清中胰岛素样生长因子Ⅰ的浓度，取骨折端上下5mm组织作组织形态学染色（苏木精-伊红染色）和SP法免疫组织化学染色，观测骨折愈合情况和胰岛素样生长因子Ⅰ的表达。 结果：①血清中胰岛素样生长因子Ⅰ浓度：同一时间点单纯脑损伤组和骨折合并脑损伤组均高于正常对照组和单纯骨折组，单纯脑损伤组和骨折合并脑损伤组相似，正常对照组和单纯骨折组相似；脑损伤组和骨折合并脑损伤组2周时高于3周时，正常对照组在2周和3周时比较差异无统计学意义，单纯骨折组在2周和3周时比较差异无统计学意义[2周正常对照组、脑损伤组、单纯骨折组、骨折合并脑损伤组、3周正常对照组、脑损伤组、单纯骨折组、骨折合并脑损伤组分别为（414．74&;#177;81．32），（579．98&;#177;73．30），（397．37&;#177;70．68），（569．95&;#177;65．13），（350．07&;#177;41．10），（433．37&;#177;53．78），（328．13&;#177;49．27），（454．26&;#177;93．26）μg／L]。②免疫组织化学分析骨折端组织平均阳性细胞百分数：骨折合并脑损伤组均高于单纯骨折组，单纯骨折组2周与3周时比较差异无统计学意义，骨折合并脑损伤组2周与3周时比较差异无统计学意义[2周单纯骨折组、骨折合并脑损伤组、3周单纯骨折组、骨折合并脑损伤组分别为（0．776&;#177;0．057），（0．853&;#177;0．044），（0．780&;#177;0．051），（0．851&;#177;0．039）]。 结论：脑损伤对骨折愈合有促进作用，胰岛素样生长因子Ⅰ可能是脑损伤促进骨折愈合的原因。     

后肢固定大鼠股骨内生长激素及胰岛素样生长因子Ⅰ和生长抑素水平的改变

背景：骨组织内，骨形成和吸收之间的平衡主要与全身和局部的激素和生长因子活性有关，肢体固定能导致骨吸收增加及骨形成减少，从而诱发骨质疏松，但生长因子与骨质疏松之间的关系有待进一步认识。目的：通过大鼠后肢固定模型，观察大鼠股骨组织内的生长激素、胰岛素样生长因子Ⅰ和生长抑素的浓度变化。设计：随机对照观察实验。材料：6月龄清洁级健康雄性SD大鼠50只，体质量290-320g，随机分为固定组40只和对照组10只。方法：实验于2002-02／2003-Ol在青岛大学医学院附属医院创伤外科完成。固定组大鼠右后肢用胶布固定于腹部，随机分为4组，每组10只，分别于1，2，4和8周腹腔内麻醉后处死大鼠。对照组大鼠于8周处死，除未进行固定外，其他处理方法与固定组一致。主要观察指标：对照组大鼠和固定l，2，4和8周大鼠股骨组织提取液中生长激素、胰岛素样生长因子Ⅰ和生长抑素的浓度。结果：50只大鼠均进入结果分析。生长激素水平在固定第8周组比对照组明显升高[（41．80&;#177;8．39），（19．86&;#177;4．21）μg／g，P〈0．05]；而股骨内的胰岛素样生长因子Ⅰ在第2周出现最高峰，明显高于对照组[（758．23&;#177;23．12），（499．60&;#177;18．76）μg／g，P〈0．05]，但在第4周恢复到对照组水平，在第8周明显减少[（258．65&;#177;5．76）μg／g，P〈0．05]。生长抑素在固定的第8周明显高于对照组[（51．69&;#177;2．36），（34．63&;#177;8．85）μg／g，P〈0．05]。结论：生长激素和胰岛素样生长因子Ⅰ不仅和骨形成有关，且在固定增加骨吸收的情况下，可以引起这些肽类的浓度升高，可能与骨吸收有关。     

电针刺激干预脊髓损伤大鼠c-fos基因和脑源性神经营养因子mRNA的表达

目的：通过对参与脊髓损伤过程的c-fos基因及脑源件神经营养因子不同时间点mRNA阳性细胞数的结果观察，探讨电针对脊髓损伤的影响，并以地塞米松做标准对照。方法：实验于2003-12／2004-06在哈尔滨医科大学实验中心完成。以72只Wistar大鼠为观察对象，将其分为4组，模型对照组（12只）、电针组（24只）、地塞米松组（24只）及假手术组（12只）。假手术组仅切除椎板，不损伤脊髓。其余3组用改良的Allen’s撞击法致大鼠T10脊髓损伤。电针组将大鼠置于特制治疗台上，建立四肢固定状态下的大鼠电针模型。在距损伤处上下端两个椎体的棘突间隙距中线旁开3．0～4．0mm处取穴，用30号1寸毫针垂直刺入4．0～5.0mm，使针尖触及椎板，正、负极导线分别夹在头、尾两侧的毫针针柄上（正极在上，负极在下）。电针组于造模成功后30min进行夹脊电针连续脉冲电流，频率1Hz，电压0．5V，输出强度是以背部肌肉出现轻微抽动为度。6h后进行第2次治疗，以后1次/d，20min／次。地塞米松组于造模成功后5min开始皮下给予地塞米松5mg／kg治疗。模型对照组不给予治疗。应用原位杂交方法及Motic Imnages Advanced 3．0图像定最分析法观察脊髓损伤后1，3，7，14d时各组c-fos基因mRNA和脑源性神经营养因子mRNA的表达变化。结果：72只Wistar大鼠均进入结果分析。①c-fos基因mRNA的表达：在脊髓损伤后1d时地塞米松组和电针组均明显低于模型对照组（57．8&;#177;6．4，65．4&;#177;59，81．6&;#177;4．2，P〈0．05）；14d时地塞米松组和电针组均明显高于模型对照组（68.2&;#177;4．5，73.3&;#177;7．0，61．4&;#177;5．4，P〈0．05），而电针组的表达又明显高于地塞米松组（P〈0．05）。②脑源性神经营养冈子mRNA的表达：有逐渐增高趋势，电针组、地塞米松组明显高于模型对照组（P〈0．05），且在7d和14d时电针组表达明显高于地塞米松组（141.1&;#177;10．3，107．4&;#177;8．3；103．0&;#177;9．3，782&;#177;7．9，P〈0．05）。结论：大鼠脊髓损伤后早期c-fos基因mRNA表达增强，后期表达减弱。腑源性神经营养因子mRNA的表达不断增加。说明电针组干预早期能抑制c-fos基因mRNA表达，后期町升高其表达，减少脊髓的继发性损伤，并能上调腩源性神经营养因子mRNA表达，促进脊髓神经的再生及修复，电针组丁预后1周和2周时表现出的效果优于地塞米松组。     

大鼠脊髓损伤后转化生长因子β1 mRNA表达变化及甲基强的松龙的干预作用

目的：观察大鼠脊髓损伤后转化生长因子β1 mRNA表达的变化，及甲基强的松龙对其影响。方法：实验于2003-06／2004—03在上海市药物工业研究院与解放军第二军医大学长海医院病理实验室完成。选择雄性SD大鼠45只，随机分为空白对照组5只、损伤对照组（6，24h，3，7d）、甲基强的松龙组（6，24h，3，7d），每时间点5只。制作脊髓损伤模型后，损伤对照组及空白对照组给予等渗盐水，甲基强的松龙组给予甲基强的松龙（30mg／kg），分别于伤后6，24h，3，7d切取损伤及临近部位脊髓组织，运用原位杂交技术，二氨基联苯胺显色，苏木精轻度复染。采用光学显微镜进行观察，高倍镜下（200倍），随机选择5个高表达视野，记数每个高倍镜视野下阳性细胞的百分比（阳性细胞数／细胞总数）。细胞胞浆内呈棕黄色为转化生长因子β1 mRNA。观察甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤转化生长因子β1 mRNA表达的影响。结果：纳入动物45只，均进入结果分析。①脊髓损伤后甲基强的松龙组转化生长因子β1 mRNA的表达阳性细胞数与损伤对照组相比明显降低[损伤对照组伤后6，24h，3，7d分别为（8．91&;#177;0．82）％，（28．27&;#177;1．10）％，（42．09&;#177;0．93）％，（45．24&;#177;0．85）％，甲基强的松龙组伤后6，24h，3，7d分别为（7．93&;#177;0．40）％，（20．36&;#177;1．10）％，（31．34&;#177;0．62）％，（16．62&;#177;0．97）％]。②阴性对照未见转化生长因子β1 mRNA阳性表达。甲基强的松龙组和损伤对照组均有转化生长因子β1 mRNA阳性表达，甲基强的松龙组同损伤对照组相比，各时段转化生长因子β1 mRNA表达均有减少，且差异明显。结论：甲基强的松龙能抑制大鼠脊髓损伤后转化生长因子β1 mRNA的表达，说明甲基强的松龙对脊髓损伤的治疗作用不是通过转化生长因子β1来实现的。     

β-七叶皂甙钠对大鼠脊髓损伤后肢体运动功能的影响

目的：观察β-七叶皂甙钠治疗大鼠急性脊髓损伤后肢体运动功能的变化，探讨β-七叶皂甙钠对大鼠急性脊髓损伤的保护和促进修复作用。方法：实验于2003—12／2004—03在解放军第二军医大学长海医院骨科实验室完成。45只SD大鼠随机分为正常对照组11只，模型对照组12只，10mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组11只，20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组11只。按Allen改良法制备脊髓损伤动物模型，10mg／（kg&;#183;d）和20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组分别在术后腹腔注射β-七叶皂甙钠注射液10mg／（kg&;#183;d）和20mg／（kg&;#183;d）&;#176;模型对照组和正常对照组在术后注射等量生理盐水，共持续10d。用斜板试验法和BBB评分法观察大鼠脊髓损伤后运动功能的变化。结果：1只10mg／kg β-七叶皂甙钠治疗组大鼠在术后第2天和1只正常对照组大鼠在术后第1天由于饲养不当死亡，其余43只大鼠均进入结果分析。①各组大鼠斜板试验临界角度：在术后第7，14，21天时10mg／（kg&;#183;d）和20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组明显高于模型对照组[第7天：（37．88&;#177;1．76）&;#176;，（38．94&;#177;2、15）&;#176;，（35、48&;#177;1、23）&;#176;；第14天：（44、39&;#177;1．87）&;#176;．（45、96&;#177;1．81）&;#176;，（39．48&;#177;1．23）&;#176;；第21天：f44．75&;#177;2．11）&;#176;，（46．66&;#177;1-46）&;#176;，（41、42&;#177;0．98）&;#176;，t=2.27～4．67，P〈0．05～001]。20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组与10mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组基本一致。②各组大鼠BBB评分结果：在术后第7，14，21天时10mg／（kg&;#183;d）和20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组明显高于模型对照组[第7天：（7．20&;#177;0．98），（7．51&;#177;0．85），（4．46&;#177;0．90）分；第14天：（10．43&;#177;0．90），（10．98&;#177;0．59），（6．54&;#177;0．73）分；第21天：（10．78&;#177;0．96），（11．67&;#177;0．49），（7．90&;#177;0．54）分，t=2．54～8．6，P〈0．05～0．011。20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组与10mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组基本一致。结论：β-七叶皂甙钠可以增加大鼠实验性急性脊髓损伤后运动功能的恢复谏度及最终恢复稃唐．     

曲马多对慢性压迫性坐骨神经损伤模型大鼠脊髓突触重塑的影响

目的：探讨曲马多对大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤脊髓星形胶质细胞突触重塑的影响。 方法：实验于2004-09／2005-02在广州军区武汉总医院中心实验室完成。选择雌性SD大鼠24只，随机分为4组，各组6只，慢性压迫性损伤组、假手术组、慢性压迫性损伤＋曲马多5mg／kg组、慢性压迫性损伤＋曲马多10mg／kg组。制作坐骨神经慢性压迫性损伤模型，大鼠麻醉后，暴露右侧坐骨神经，在最靠近坐骨神经分叉处，把神经从附着的组织中游离出来，套上4根4—0铬制羊肠线，将神经松弛地结扎，直到神经的外膜稍稍受压为止，每个结相距1．0mm。慢性压迫性损伤后4d开始每天腹腔注射曲马多，早晚各1次，剂量5或10mg／kg，持续10d。于慢性压迫性损伤前、损伤后4，7，14d观察大鼠机械痛阈的变化。所有大鼠在损伤后14d行组织灌注固定，应用免疫组织化学双重标记法同时显示胶质纤维酸性蛋白和突触体素在脊髓组织的表达。 结果：纳入动物24只，均进入结果分析。①慢性压迫性损伤组在损伤后4d痛阈与假手术组相比明显降低，此后痛阈一直稳定在较低水平即痛敏状态，慢性压迫性损伤＋曲马多5mg／kg组痛阈变化与慢性压迫性损伤组差别不大，而慢性压迫性损伤＋曲马多10mg／kg组痛阈变化与假手术组基本一致。②胶质纤维酸性蛋白和突触体素免疫阳性产物主要定位于脊髓患侧背角浅层，慢性压迫性损伤组、慢性压迫性损伤＋曲马多5mg／kg组突触体素和胶质纤维酸性蛋白免疫阳性产物与假手术组相比明显增多。③慢性压迫性损伤组损伤侧脊髓突触体素免疫阳性产物A值与假手术组手术侧相比高66％（分别为21．1&;#177;0.9，12．7&;#177;1．2，P〈0．01）；慢性压迫性损伤＋曲马多10mg／kg组损伤侧与慢性压迫性损伤组相比低38％，差异有显著性意义（分别为13.1&;#177;0．9，21．1&;#177;0．9，P〈0．01），而慢性压迫性损伤＋曲马多5mg／kg组损伤侧（19．2＋1．3）与慢性压迫性损伤组相比差异无显著性意义（P〉0．05）。④脊髓胶质纤维酸性蛋白免疫阳性产物A值慢性压迫性损伤组损伤侧与假手术组手术侧相比高43％（分别为5．7&;#177;0．4，4．0&;#177;0．5，P〈0．01）；慢性压迫性损伤＋曲马多10mg／kg组损伤侧与慢性压迫性损伤组相比低32％，差异有显著性意义（分别为3．9&;#177;0．4，5．7&;#177;0．4，P〈0．01），而慢性压迫性损伤＋曲马多5mg／kg组损伤侧（5．4&;#177;0．6）与慢性压迫性损伤组相比差异无显著性意义（P〉0．05）。 结论：慢性压迫性坐骨神经损伤后脊髓背角突触体素和胶质纤维酸性蛋白的表达均明显增多，曲马多10mg／kg对其有抑制作用。     

电针抗脊髓损伤的实验研究

背景：现有的研究结果证实神经生长因子在脊髓损伤后神经再生修复过程中发挥着重要作用，神经再生能力低下与损伤局部缺少支持神经元生长的微环境有关。针刺对脊髓损伤后的神经保护是否通过促进担损伤脊髓组织中神经生长因子水平的提高而起作用，目前尚缺少大量分子水平的实验证实数据。 目的：采用形态学、原位杂交等技术观察电针对实验性脊髓损伤大鼠运动功能、脊髓组织形态及其神经生长因子mRNA表达的影响。 设计：随机对照动物实验。 单位：同济大学附属第十人民医院针灸科，上海市针灸经络研究所。 材料：实验于1999-01／2002-02在上海市针灸经络研究所完成。选取雄性SD大鼠15只，体质量（260&;#177;9．52）g，随机分成假手术组、损伤对照组和电针组，各5只。 方法：损伤对照组和电针治疗组制备脊髓损伤模型，假手术组仅作椎切除。术后2h，对电针治疗组给予电针治疗，取大椎、命门和L2夹脊、环跳，两组穴位交替使用。针刺后接G6805型电针仪，疏波，0．8Hz0．3-0．6mA，以肌肉有轻微的抖动为宜。1次／d，每次30min，连续治疗30d。损伤对照组和假手术组不作任何处理。采用自行改良的Tarlow评分标准和Rivlin方法分别于术后2h，30d进行运动功能测定。①改良的Tarlov评分标准：以完全瘫痪，针刺时下肢无反应到正常行走记作0-6分。②改良的Rivlin方法：斜板由两块矩形的合金板通过铰链于一端相连而成，板从水平位置（0&;#176;）起绕轴旋转，斜面角度可以测出。将大鼠头朝前，身体纵轴与斜板纵轴垂直放置，逐渐增大板与水平间的角度，直至大鼠不能保持原有位置5s时，记录这一临界角。原位杂交检测，光镜下明视野记录神经生长因子阳性细胞数并摄片。 主要观察指标：脊髓损伤大鼠运动功能评分（改良的Tailov评分）、脊髓损伤大鼠斜面测试临界角度（改良的Rivlin方法）、各组脊髓组织神经生长因子mRNA阳性细胞数的变化。 结果：实验大鼠15只，全部进入结果分析。①大鼠脊髓损伤2h后，损伤对照组和电针治疗组运动功能评分和改良的Rivlin方法斜面临界角均明显下降；30d后，两组的改良的Tarlow评分运动功能评分和斜面临界角均有不同程度的恢复，但以电针组的恢复较明显，与损伤对照组比较，差异有显著性意义[35．40&;#177;6．62，27．80&;#177;1．10；（35．40&;#177;6．62）.（27．80&;#177;1．10）。P〈0．05]。②伤后30d，电针治疗组大鼠病理损害程度，较损伤对照组轻，脊髓组织形态的损伤，神经生长因子mRNA阳性细胞，数的增加较损伤对照组明显（28．13&;#177;1．64，12．63&;#177;1．41．P〈0．01）。 结论：电针可促进脊髓组织中神经生长因子mRNA的表达，可能减轻脊髓组织形态的损伤，促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复，因其神经生长因子mRNA的表达而起到神经保护作用。     

术前心理干预对脊髓减压术围手术期患者心肌耗氧量的影响

目的：观察术前心理干预对脊髓损伤后行脊髓减压患者围手术期心肌耗氧量的影响。方法：选择1999-12／2002—06解放军第四六三医院急诊室收治的行脊髓减压手术的脊髓损伤患者32例，男19例，女13例。随机分2组，心理干预组（n=18）和对照组（n=14）。心理干预组给予术前心理干预，对照组未给予心理干预。记录患者进入手术室后、诱导期（指患者接受全身麻醉药后，由清醒状态到神志消失，并进入全麻状态后进行气管插管的这一阶段）及术后12，24，48h心率=收缩压乘积和心率，以明确围手术期患者的心肌耗氧量。结果：按意向处理分析，进入结果分析脊髓损伤患者32例。①心率=收缩压乘积：心理干预组患者在进入手术室，麻醉诱导期，术后12，24，48h明显低于对照组（9321&;#177;2003，11342&;#177;2478，9232&;#177;2132，9442&;#177;2134，9121&;#177;2056；10500&;#177;2121，14456&;#177;3214。10987&;#177;3214，10234&;#177;2123。10453&;#177;2134，P〈0．05）。②心率：心理干预组患者在进入手术室，麻醉诱导期，术后12，24，48h明显低于对照组（P〈0．05～0．01）。结论：术前心理干预可减少脊髓损伤后行脊髓减压患者围手术期心肌耗氧量。     

电针对脑纹状体缺血性神经元细胞凋亡及基因表达的调整

目的：观察电针对脑纹状体缺血性神经元损伤细胞凋亡形态学及基因表达的影响，探索电针对其抗氧应激保护作用可能的分子生物学机制。方法：实验于2003／2004在南京中医药大学针药实验室进行。纳入雄性健康10-12月龄清洁级SD大鼠47只，随机分为6组，即假手术组8只，模型组8只。电针Ⅰ组8只，电针Ⅱ组7只，药物组8只，针药组8只。采用LONGA氏血管线栓法改良，制成脑纹状体缺血性神经元细胞损伤模型。①假手术组：仅作手术血管分离。②模型组：仅右脑动脉丝线栓塞60min。③电针Ⅰ组：造模后。分别电针“百会”、“大椎”穴位。④电针Ⅱ组：造模后，分别电针“百会”、“人中”穴位。⑤药物组：制模手术前30min，用褪黑紊溶解于950mL／L乙醇，再以生理盐水配制，按3．2mg／kg腹腔注射。⑥针药组：处理同电针组及药物组。电针治疗中，使用30号0．5寸毫针，接上海G6805电针仪，连续波、频率3Hz，强度2—4mA，时间30min；以针柄轻微颤动、大鼠不嘶叫为宜。全部模型经处理、再灌注24h后处死。各组模型脑纹状体片（包括尾状核、豆状核等）相同部位。连续切取厚5μm组织片5套，分别做苏木精-伊红染色、神经元尼氏体染色、形态学分析、Bax及Bcl-2基因蛋白、Tunnel细胞凋亡数等项目研究，并用各组均值分析、比较。结果：大鼠47只进入实验分析。①电针“百会”、“大椎”穴位30h后形态学观察，梗死灶明显缩小；各病变轻重形态表现较一致，水肿显著减低、纹状体缺血神经元损伤形态学改善显著。②与模型组比较，电针Ⅰ组。电针Ⅱ组，褪黑素组，电针Ⅰ＋褪黑素组等治疗组大鼠脑纹状体缺血神经元阳性凋亡细胞数均显著性降低[（7．93&;#177;1．97），（12．8&;#177;1．44），（9．46&;#177;1．69），（11．78&;#177;1．44），（15．94&;#177;1．81）个／0．5min&;#215;0．5mm，P〈0．001-0．01]；电针Ⅰ组及褪黑素药物组作用相当，效果显著优于电针Ⅱ组及电针Ⅰ＋褪黑紊组（P〈0．001—0．05）。③电针Ⅰ组、褪黑素药物组、电针Ⅰ＋褪黑素组促凋亡基因Bax蛋白表达细胞数和Bax／Bel-2基因蛋白表达细胞数之比显著低于模型组[（5．63&;#177;2．77），（3．5&;#177;2．93），（2．25&;#177;1.58），（25．75&;#177;4．51）个／0．5mm&;#215;0．5mm：（0．26&;#177;2．35）．（0．13&;#177;2．91），（0．08&;#177;4．13），（4．22&;#177;1．95）个／0．5mm&;#215;0.5mm：P〈0．001—0．051；各组抑凋亡基因Bcl-2蛋白表达细胞数显著高于模型组[（21．75&;#177;6．05），（25．77&;#177;7．68）。（27．04&;#177;11．58），（9．37&;#177;1．13）个／0．5mm&;#215;0．5mm；P〈0．001]。结论：电针对纹状体缺血性神经元细胞损伤具有良好保护作用，并与强抗氧化药物-褪黑素效应相同．抗氧应激可能是临床针灸治疗缺血性脑病获效的主要机制。     

重组人促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后脂质过氧化的影响

目的：观察重组人促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后脂质过氧化和超微结构改变的影响。 方法：实验于2004-05／08在吉林大学第二医院中心实验室完成。选择健康成年SD大鼠27只，采用改良Allen’s法制作脊髓损伤模型。27只SD大鼠随机数字表法分为3组：治疗组（H=9）：造模后立刻给予重组人促红细胞生成素腹腔内注射（5000U／kg）1次；生理盐水对照组（n=9）：造模后立刻给予等量生理盐水腹腔内注射1次。正常组（n=9）：不作任何处置。采用硫代巴比妥酸法检测脊髓损伤后2，24，48h丙二醛含量变化，使用透射电镜技术评估脊髓损伤后各时相点的超微结构评分。 结果：纳入大鼠27只，均进入结果分析。①生理盐水对照组和治疗组伤区丙二醛含量随伤后时间的增加呈不断升高的趋势，生理盐水对照组伤后2，24，48h伤区丙二醛含量较正常组明显增加，差异有显著性意义[分别为（92．45&;#177;6．22），（65．62&;#177;2．22）nmol／g；（112．56&;#177;6．68），（68．20&;#177;1．84）nmol／g；（142，38&;#177;7．24），（66．40&;#177;2．04）nmol／g，P〈0．05]。治疗组伤后2，24，48h丙二醛含量较生理盐水对照组明显降低[分别为（68．54&;#177;5．88），（92．45&;#177;6．22）nmol／g；（75．24&;#177;6．28），（112．56&;#177;6．68）nmol／g．P〈0．05；（88．34&;#177;8．52）．（142．38&;#177;7．24）nmol／g，P〈0．01]。②生理盐水对照组的超微结构评分随伤后时间的增加呈不断升高的趋势，而治疗组的超微结构评分随伤后时间的增加则变化不大，相对稳定。治疗组伤后2，24，48h的超微结构评分均较生理盐水对照组明显降低，差异有显著性意义[分别为（1.28&;#177;0．45），（3．84&;#177;0．25）分；（1．38&;#177;0．28），（4．24&;#177;0，38）分；（1．42&;#177;0．36），（4．98&;#177;0．52）分，P〈0．05]。 结论：重组人促红细胞生成素能够明显降低脊髓损伤后丙二醛含量，减轻脊髓损伤后的脂质过氧化，显著降低脊髓损伤后的超微结构评分，明显减轻脊髓损伤后的超微结构改变，有效地保护脊髓组织，具有明显的神经保护作用.     

电针治疗对慢性渐进性压迫性脊髓损伤大鼠行为功能改变的影响

目的：探讨慢性渐进性压迫性脊髓损伤过程中电针对脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)表达的影响及其与行为功能改变的关系。方法：50只Wistar大鼠，体质量(200&;#177;50)g，采用大鼠后路渐进性脊髓压迫动物模型，在大鼠实验性脊髓损伤后，分别用电针刺激强度为1，10，20mA的电针进行治疗。观察联合行为评分(combined behavioral score。CBS)。常规病理及免疫组化检测BDNF的变化。结果：脊髓损伤后BDNF在神经元及胶质细胞中表达增强，经过电针治疗后，治疗组B(10mA)神经元和胶质细胞中BDNF表达下降，CBS值显示，治疗组B优于压迫组，治疗组B与压迫组比较统计学差异具有显著性(P&;lt;0．05)。而治疗组A(1mA)和C(20mA)与压迫组比较统计学无差异。结论：电针能促进损伤脊髓的修复，电针疗法可能具有电流特异性。     

大鼠孤束核微量注射L-精氨酸对电针抗应激性胃黏膜的损伤

目的：L-精氨酸在一氧化氮合酶的催化作用下生成内源性一氧化氮，观察孤束核内一氧化氮对电针抗应激性胃黏膜损伤的影响。方法：实验于2005—05／12在咸宁学院医学院生理教研室完成。84只健康SD大鼠随机分为正常对照组、单纯应激组、电针＋应激组、生理盐水＋电针＋应激组、L-精氨酸＋电针＋应激组、L-硝基精氨酸甲酯＋电针＋应激组，每组14只，7只用于溃疡指数检测，7只用于胃黏膜血流量、胃液酸度和胃黏液量的测定。孤束核微量注射：动物麻醉后固定在脑立体定位仪上，参照paxinos和watson图谱进行定位。注射溶液体积为0．2μL/L-硝基精氨酸甲酯2μg，L-精氨酸5μg），20s内注射完毕。注射完毕后30min再电针。用生理盐水作参照注射。电针方法：将大鼠放置大小适当的特制有机玻璃笼中，双后肢充分暴露。选取双侧足三里穴，1寸毫针刺入。以电针仪给予电刺激，频率为20Hz，强度以大鼠下肢轻微抖动为度，连续电针30min再应激造模。采用冷束缚法制备大鼠应激性溃疡模型，测定各组大鼠胃黏膜的溃疡指数、胃黏膜血流量、胃壁结合黏液量、胃液酸度。组间比较采用t检验。结果：84只大鼠均进入结果分析。与正常对照组比较，单纯应激组胃黏膜溃疡指数、胃液酸度增高，胃黏膜血流量和胃黏液量减少[0分，（41．32&;#177;7．20）mmol／L，（323．10&;#177;32．40）mV，（1．56&;#177;0．30）mg；（37．50&;#177;4．20）分，（60．15&;#177;9．40）mmol/L，（179．40&;#177;41．20）mV，（1．13&;#177;0．40）mg，P〈0．05～0．001]。与单纯应激组比较，电针＋应激组胃黏膜溃疡指数和胃液酸度明显降低，胃黏膜血流量和胃黏液量明显升高[（37；50&;#177;4．20）分，（60．15&;#177;9．40）mmol／L，（179．40&;#177;41．20）mV，（1．13&;#177;0．40）mg；（25．40&;#177;3．10）分，（49．25&;#177;6．50）mmol／L，（234．30&;#177;39．10）mV，（1．65&;#177;0．30）mg，P〈0．05—0．0011。与生理盐水＋电针＋应激组比较，L-精氨酸＋电针＋应激组大鼠胃黏膜溃疡指数、胃液酸度增高，胃黏膜血流量和胃黏液量减少[（26．30&;#177;3．50）分，（48．63&;#177;6．30）mmol／L，（233．20&;#177;35A0）mV，（1．61&;#177;0．20）mg：；（33．20&;#177;3．90）分，（58．36&;#177;6．90）mmol／L，（191．30&;#177;32．30）mV，（1．21&;#177;0．30）mg，P〈0．05，P〈0．01]，L-硝基精氨酸甲酯电针＋应激组胃黏膜溃疡指数、胃液酸度明显降低，胃黏膜血流量和胃黏液量明显增加[（26．30&;#177;3．50）分，（48．63&;#177;6．30）mmol／L，（9233．20&;#177;35．40）mV．（1．61&;#177;0．20）mg；（21．10&;#177;3．20）分，（41．45&;#177;6．00）mmol／L，（284．50&;#177;36．30）mV，（2．01&;#177;0．40）mg，P〈0．05，P〈0．01]。结论：孤束核内一氧化氮参与了电针抗应激性胃黏膜损伤的病理生理过程。     

新生大鼠缺氧缺血模型脑组织中肾上腺髓质素含量变化及其对脑细胞凋亡的影响

目的：观察新生大鼠缺氧缺血后脑内肾上腺髓质素含量变化，以及给予外源性肾上腺髓质素对缺氧缺血大鼠脑细胞凋亡的影响。 方法：实验于2003-11-01／30在延边大学附属医院儿科疾病研究室进行。①脑组织肾上腺髓质素测定：选用7日龄Wistar大鼠29只单纯随机分为正常组9只、模型组及肾上腺髓质素组各10只，正常组不干预，另外2组大鼠结扎左侧颈总动脉。并吸人含体积分数为0．08氧气制备缺氧缺血性脑病模型，造模后肾上腺髓质素组即刻腹腔注射肾上腺髓质素2．0nmol／kg（浓度为82μmol／L），48h后将大鼠断头处死。取左侧脑组织测肾上腺髓质素含量。②细胞凋亡测试：7日龄Wistar大鼠39只分4组，正常组9只，模型组、肾上腺髓质素组和胰岛素样生长因子1组各10只，正常组不干预，另外3组同前造模。造模后即刻后2组分别腹腔注射肾上腺髓质素2．0nmol／kg、胰岛素样生长因子11．5μg／kg。48h后心脏灌注处死，取脑组织，行TUNEL法及苏木精-伊红染色，测定细胞凋亡数，凋亡百分率，凋亡面密度及数密度。 结果：68只大鼠全部进入结果分析。①脑组织肾上腺髓质素含量：肾上腺髓质素组高于正常组和模型组[（1．81&;#177;0．43），（0．41&;#177;0．02），（1．07&;#177;0．27）ng／g，F=34．82，P〈0．01]，模型组高于正常组（P〈0．01）。②凋亡细胞数：正常组显著低于其他3组（P〈0．001），肾上腺髓质素组显著低于模型组[（9．20&;#177;0．53），（23．43&;#177;5．11）个／视野，P〈0．001]。③凋亡细胞数密度和面密度：模型组高于正常组（P〈0．001），肾上腺髓质素组低于模型组（数密度：0．0016&;#177;0．0007比0．0049&;#177;0．0009；面密度：0．043&;#177;0．018比0．131&;#177;0．044，P〈0．001），胰岛素样生长因子1组与肾上腺髓质素组差异不显著（P〉0．05）。④凋亡细胞百分率：模型组明显高于正常组[（55．5&;#177;5．1）％，（7．6&;#177;3．6）％，P〈0．01]，肾上腺髓质素组明显低于模型组[（21．8&;#177;1．8）％，P〈0．01]。 结论：④肾上腺髓质素在缺氧缺血后脑组织内含量明显升高。②肾上腺髓质素可降低缺氧缺血后的脑细胞凋亡，对脑细胞有保护作用，其效果与胰岛素样生长因子1相似。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的抑制

目的：探讨大鼠脊髓损伤后应用碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor bFGF)对脊髓损伤区细胞凋亡的影响。方法：利用Allen氏WD(Weight drop，WD)技术，以10g&;#215;2．5cm致伤力造成SD大白鼠Ts脊髓损伤模型，并于损伤平面以下蛛网膜下腔置细塑料导管。bFGF治疗组(A组)分别于术后即刻，1，2，4，8，12，24，及48h经导管注入bFGF溶液20μL(含bFGF100u），以后每周经导管注，20μL bFGF：对照组(B组)则在同时间注入等量生理盐水：损伤后1，3．7，14，28d对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测(TuNEL)，采用计算机图像分析技术进行定量分析并计算凋亡指数(AI)，AI=凋亡细胞核数，总细胞核数计算：结果：A，B两组中均发现凋亡细胞，A组损伤后不同时间段神经细胞凋亡指数分别为(4.57&;#177;0．43)，15．38&;#177;1.16)，(3．43&;#177;0．65)．(3.38&;#177;058)．(2．63&;#177;0．43)；B组分别为(7.36&;#177;0．68)，(13.96&;#177;2．74),(9．26&;#177;1．03)，(7．25&;#177;0．73)，(5．79&;#177;0．57).B组细胞凋亡率大于A组结论：bFGF能抑制脊髓损伤后脊髓损伤区的细胞凋亡。