Bcl-2基因与大鼠局灶性脑缺血再灌注后的细胞凋亡

细胞凋亡 ( apoptosis)是细胞死亡的一种形式 ,是由基因介导的主动的细胞自杀现象。以往人们认为坏死是脑缺血后神经细胞死亡的唯一方式。近年来随着生物技术进展 ,更多证据表明脑缺血后神经元死亡由凋亡和坏死共同引起 [1 ] ,此过程中有凋亡相关蛋白表达。目前认为 bcl- 2基因是一种重要的内源性抗凋亡因子 [2 ] ,对维持局灶性脑缺血再灌注后某些神经细胞的生存具有重要作用 ,但其作用机制仍不清楚。本文就脑缺血再灌注后 bcl- 2基因家族与细胞凋亡的关系作一综述。1　 Bcl- 2基因家族1.1　 Bcl- 2基因的定位和分子结构 :Bcl- 2基因是Tsu…     

法舒地尔可能通过PI3-K/Akt信号通路抑制大鼠脑缺血/再灌注区神经元的凋亡

目的探讨法舒地尔对大鼠脑缺血/再灌注损伤神经元是否具有抗凋亡作用并探讨其抗凋亡机制。方法大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型。运用TUNEL法检测大鼠脑缺血/再灌注区神经细胞的凋亡,免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,Western blot法检测Akt以及Rho激酶特异性底物蛋白MYPT的磷酸化表达。结果法舒地尔能明显减少TUNEL染色阳性细胞数,增加Bcl-2的表达,降低Bax、Caspase-3的表达,升高Akt的磷酸化水平以及降低MYPT的磷酸化水平。结论①法舒地尔能减少大鼠脑缺血/再灌注区神经细胞凋亡。②法舒地尔的抗凋亡机制可能与其抑制Rho激酶活性,进而激活PI3-K/Akt传导通路有关。     

法舒地尔可能通过P13-K／Akt信号通路抑制大鼠脑缺血／再灌注区神经元的凋亡

目的探讨法舒地尔对大鼠脑缺血／再灌注损伤神经元是否具有抗凋亡作用并探讨其抗凋亡机制。方法大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血／再灌注损伤模型。运用TUNEL法检测大鼠脑缺血／再灌注区神经细胞的凋亡，免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达，Western blot法检测Akt以及Rho激酶特异性底物蛋白MYPT的磷酸化表达。结果法舒地尔能明显减少TUNEL染色阳性细胞数，增加Bcl-2的表达，降低Bax、Caspase-3的表达，升高Akt的磷酸化水平以及降低MYPT的磷酸化水平。结论①法舒地尔能减少大鼠脑缺血／再灌注区神经细胞凋亡。②法舒地尔的抗凋亡机制可能与其抑制Rho激酶活性，进而激活P13-K／Akt传导通路有关。     

替勃龙对大鼠神经细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨雌激素对去势大鼠脑缺血再灌注后神经细胞Bcl-2、Bax表达的影响和替勃龙的神经保护作用。方法 30只雌性成年SD大鼠,随机分为假手术组,手术对照组,替勃龙组,每组10只;采用大鼠大脑中动脉闭塞制成局灶性脑缺血模型。在缺血2h、再灌注24h后立即断头取脑,应用TTC染色观察脑梗死体积,TUNEL法检测凋亡细胞,链酶菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)法检测抗凋亡基因Bcl-2、细胞凋亡诱导因子Bax的表达。结果替勃龙用药组较手术对照组脑梗死体积显著缩小(P<0.05),TUNEL阳性细胞数少(P<0.01),Bcl-2阳性细胞增多(P<0.01),Bax阳性细胞减少(P<0.01)。结论替勃龙可抑制去卵巢大鼠局灶性脑缺血再灌注时神经细胞凋亡,具有神经保护作用。     

高血压大鼠脑缺血再灌注后IGF-Ⅰ Bcl-2的表达与细胞凋亡

目的观察高血压大鼠脑缺血再灌注后胰岛素样生长因子(IGF)-Ⅰ、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2表达与细胞凋亡的关系。方法制备高血压大鼠脑缺血再灌注模型,用免疫组织化学染色法及流式细胞术分别观察脑组织中IGF-Ⅰ、Bcl-2的表达情况及细胞凋亡。结果同对照组相比缺血再灌注组神经细胞凋亡率增高(P<0.01);IGF-Ⅰ与Bcl-2的表达均升高(P<0.01),IGF-Ⅰ比Bcl-2升高显著(P<0.05)。结论IGF-Ⅰ、Bcl-2同时参与了脑缺血再灌注后的细胞凋亡;IGF-Ⅰ可能通过调控Bcl-2发挥抗凋亡作用。     

大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注（CIR）后早期凋亡相关基因Bcl-2和Bax在脑皮质神经元中的表达变化。方法将56只大鼠随机分为假手术组（对照组）及缺血再灌注组（观察组）,采用免疫组织化学法测定Bcl-2和Bax的表达。结果随着CIR时间的延长,凋亡细胞增多,缺血组Bcl-2、Bax表达增多,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．01）,Bcl-2的表达在12h达到最高,Bax的增加一直持续到48h。结论CIR后Bcl-2表达的增加早于Bax,CIR后神经细胞凋亡可能与Bcl-2／Bax失调有关。     

茅莓总皂苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后凋亡相关基因Bcl-2mRNA,BaxmRNA表达的影响

目的:探讨茅莓总皂苷对缺血性再灌注后凋亡相关基因Bcl-2mRNA,BaxmRNA表达的影响。方法:采用大鼠大脑中动脉阻塞造成局灶性脑缺血再灌注模型,以原位杂交技术观察脑缺血再灌注不同时间点茅莓总皂苷5,10,20 mg.kg-1对凋亡相关基因Bcl-2 mRNA,Bax mRNA的表达。结果:3个剂量的茅莓总皂苷治疗组增加Bcl-2 mRNA阳性细胞的表达,降低Bax mRNA阳性细胞的表达。结论:茅莓总皂苷有明显的抗凋亡作用可能与增加Bcl-2 mRNA阳性细胞的表达,降低BaxmRNA阳性细胞的表达有关。     

丹参抗脑缺血在神经细胞、分子及递质水平的作用机制研究进展

目的为丹参抗脑缺血的药理及临床研究提供理论依据。方法查阅1989-2006年清华同方数据库,回顾分析丹参在神经细胞、分子及递质水平的脑缺血保护作用机制的研究报道。结果丹参抗脑缺血在神经细胞、分子及递质水平的作用机制主要有:通过抑制缺血区小胶质细胞的活化、抑制ICAM-1的表达等降低神经细胞的损伤;通过下调ICE表达、上调bcl-2蛋白的表达等抑制神经细胞的凋亡;通过减少NO合成、抑制EAA释放等影响神经递质水平;通过抑制ET-1表达、调节TXA2-PGI2平衡等影响血管相关活性物质的表达。结论丹参可从降低神经细胞的损伤、抑制神经细胞的凋亡、影响神经递质及血管活性物质的表达等多个方面起到脑缺血保护作用。     

脑缺血诱导大鼠海马神经细胞凋亡及其相关蛋白Cpp32基因表达的初步研究

目的：探讨急性全缺脑血损伤后大鼠海马神经细胞凋亡及相关蛋白Cpp32的基因表达、分布。方法：运用DNA梯形电泳、免疫印迹，免疫组化分析了全脑缺血后海马神经细胞损伤、Cpp32蛋白含量变化及其分布，结果：15min急性全脑缺血复灌24h后，大鼠海马呈明显细胞凋亡特征，且天胱蛋白（Cpp32）基因被持续激活表达，尤其是锥体神经细胞表现最为明显。结论：急性全脑缺血能诱导海马神经细胞凋亡及Cpp32基因基因表达，其中锥体神经细胞表现最显。     

人参皂苷Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的:研究人参皂苷Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响。方法:采用大鼠右侧大脑中动脉阻断(middle cerebral artery occulusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,缺血前给予人参皂苷Rg1 25、501、00 mg.kg-1灌胃,7 d。末次给药1h后制备MCAO模型,缺血2 h,再灌注22 h后,分别用Longa’s法T、TC染色法评价大鼠的神经功能状态及脑梗死面积;用TUNEL法测定缺血再灌后神经细胞凋亡的程度;用Western blot法测定大脑缺血侧脑组织中与凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2的蛋白表达。结果:人参皂苷Rg1(50、100 mg.kg-1)可明显减少MCAO再灌注后脑梗死面积,改善神经功能症状,与模型组比较具有显着性差异(P<0.05或P<0.01);脑缺血2 h再灌22 h后,模型组大鼠缺血侧细胞凋亡程度、Caspase-3蛋白表达明显增加,同时Bcl-2的蛋白表达降低。给予人参皂苷Rg1(50,100mg.kg-1)后,缺血侧细胞凋亡程度、Caspase-3蛋白表达降低,而Bcl-2的蛋白表达增加,与模型组相比具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡具有明显的保护作用,其机理可能与人参皂苷Rg1影响Caspase-3、Bcl-2的表达有关。     

Bcl-2 expression alters the mitochondrial tri carboxyl Acid pathway in hepatic ischemic and reperfusion induced necrosis and apoptosis in rat liver

Ischemic and reperfusion injury leads to necrosis and apoptosis. Mitochondrial enzymes and antiapoptotic gene plays an important role in necrosis and apoptosis. The aim of this study was to investigate the role of Bcl-2 expression in alternations in mitochondrial energy regulation during hepatic ischemia and reperfusion and role in necrosis and apoptosis. Total 12 Wistar rats were divided into sham-operated control group (I) and ischemia and reperfusion group (II). Mitochondrial tri carboxylic acid cycles marker enzymes, respiratory marker enzymes, apoptotic cells, necrotic cells and Bcl-2 expression was measured. Number of necrotic and apoptotic cells were increased in ischemic and reperfusion group with reducing tri carboxylic acid cycles marker enzymes, respiratory marker enzymes and decreasing of Bcl-2 expression. On the basis of our findings it may be concluded that suppression of Bcl-2 gene, inhibition of tri carboxylic acid cycles and respiration rate, adenosine tri phosphate production in mitochondria is a pathophysiological consequences which provides a clue for necrosis and apoptosis in hepatic ischemic and reperfusion injury.     

Bcl-2 mediated inhibition of erucylphosphocholine-induced apoptosis depends on its subcellular localisation

The synthetic phospholipid derivative erucylphosphocholine (ErPC) is a potent inducer of apoptosis in human tumor cell lines. This membrane-targeted drug induces apoptosis independently from death receptor signaling through a mitochondrial pathway that is inhibited by over-expression of Bcl-2.Within the cell, Bcl-2 resides in membranes of mitochondria, endoplasmic reticulum (ER) and the nucleus. However, the importance of its subcellular localisation in distinct organelles for protection against apoptosis is not completely understood.To investigate the impact of Bcl-2 localised at defined subcellular compartments on its protective effects against ErPC-induced apoptosis, Bcl-2 expression was directed to the outer membrane of the mitochondria or the ER of Jurkat T Lymphoma cells, using Bcl-2 mutants with modified membrane anchors. The mitochondrial insertion sequence of ActA directed Bcl-2 to the mitochondria (Bcl-2/MT), the ER-specific sequence of cytochrome b5 to the ER (Bcl-2/ER). Additionally, Jurkat cells expressing wild-type Bcl-2 (Bcl-2/WT) or a transmembrane domain-lacking mutant (Bcl-2/ΔTM) were employed.While restricted expression of Bcl-2 either at membranes of the mitochondria or the ER strongly interfered with ErPC-induced mitochondrial damage and apoptosis, cytosolic Bcl-2/ΔTM exhibited only reduced protection. Thus, membrane localisation of Bcl-2 is a prerequisite for substantial protection against ErPC-induced apoptosis. For efficient long-term inhibition of ErPC-induced apoptosis Bcl-2 had to be present in the membranes of both compartments, the ER and the mitochondria.The finding that ER-targeted Bcl-2 interferes with ErPC-induced mitochondrial damage points to an involvement of the ER in apoptosis signaling upstream of the mitochondria and to a crosstalk between both compartments.     

鼠急性全脑缺血再灌注后葛根素对海马CA1区Bcl-2、Bax表达的影响

目的　观察全脑缺血再灌注后葛根素对神经细胞凋亡相关基因Bcl 2、Bax表达的影响。方法　采用免疫组织化学法、原位末端标记法检测大鼠全脑缺血再灌注不同时间内海马CA1区Bcl 2和Bax蛋白表达水平及凋亡细胞数的变化。结果　①脑缺血再灌注后 ,海马CA1区Bcl 2蛋白的表达随再灌注时间不同而变化 ,缺血 10min后再灌注 6h达高峰 ;葛根素治疗组Bcl 2蛋白的表达于相应的时间点明显增加 ;②Bax蛋白表达在再灌注 2 4h达高峰 ,葛根素治疗组Bax蛋白表达在相应时间点则下降 ;③神经细胞凋亡数随再灌注时间延长而增加 ,葛根素可减少神经细胞凋亡数。结论　在全脑缺血再灌注后细胞凋亡中 ,Bcl 2、Bax发挥重要作用 ;葛根素通过上调Bcl 2蛋白的表达 ,下调Bax蛋白的表达抑制细胞凋亡发挥神经保护作用     

替莫唑胺和Bcl-2 siRNA对人胶质瘤U251细胞生长的影响

目的 探讨联合应用Bcl-2 siRNA和替莫唑胺(TMZ)能否有效提高TMZ对人胶质瘤U251细胞生长的抑制作用.方法 应用转染试剂LipofectaminTm2000将Bcl-2 siRNA转入U251细胞,同时加入TMZ联合培养.24 h后验证Bcl-2基因沉默效应,并检测U251细胞增殖、凋亡、侵袭和细胞线粒体膜电位变化.结果 Bcl-2 siRNA明显抑制U251细胞Bcl-2基因的表达;联合应用TMZ和Bcl-2 siRNA有效抑制人胶质瘤U251细胞生长,诱导凋亡,同时降低U251细胞线粒体膜电位(P＜0.05).结论 联合TMZ和Bcl-2 siRNA可能通过改变神经胶质瘤细胞线粒体膜电化水平,有效提高U251细胞对TMZ敏感性.     

基于蛋白结构的Bcl-2抑制剂设计与开发

Bcl-2家族抗凋亡蛋白的过度表达通常与肿瘤的发生有着密切的关系,而细胞凋亡信号均要经Bcl-2蛋白家族传递。因此,针对Bcl-2家族蛋白的结构特征和功能,设计其特异性抑制剂,以诱导肿瘤细胞凋亡,已成为肿瘤治疗的新策略。综述Bcl-2家族蛋白的结构与功能及其活性位点的分布,介绍基于结构的若干Bcl-2抑制剂的设计与开发。     

Survivin和Bcl-2调节槲皮素诱导的A549细胞凋亡

目的研究槲皮素诱导肺腺癌细胞A549凋亡,探讨survivin和Bcl-2在槲皮素诱导A549细胞凋亡中的调节作用。方法分别采用MTT法、荧光染色、流式细胞仪和免疫细胞化学观察了槲皮素对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期和蛋白表达的影响。结果槲皮素抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用明显,且呈浓度和时间依赖性。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化,槲皮素能使肺腺癌A549细胞周期阻滞于G0/G1期,且A549细胞survivin和Bcl-2蛋白表达同时下降,而caspase-3活性升高。结论槲皮素能诱导A549细胞凋亡,其机制可能是使肺腺癌A549细胞周期阻滞于G0/G1期,并同时下调survivin和Bcl-2蛋白的表达,直接激活caspase-3而诱导A549细胞凋亡。     

小分子Bcl-2抑制剂的研究与开发

综述细胞凋亡的主要机制、Bcl-xL蛋白结构以及各类小分子Bcl-2抑制剂的研究与开发。高水平表达Bcl-2家族抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-xL等）可导致肿瘤细胞的凋亡过程受阻，并对传统放、化疗产生抵抗性，而下调过表达Bcl-2和Bcl-xL蛋白则可诱导肿瘤细胞凋亡，且逆转肿瘤细胞对治疗的抵抗性或耐药性。因此，作为潜在的癌症治疗策略，以Bcl-2家族蛋白为靶点的小分子抑制剂已成为当今研究热点，X-射线晶体衍射、核磁共振技术、小分子数据库和计算机辅助药物设计等技术也广泛应用于小分子Bcl-2抑制剂的开发。     

作用于Bcl-2家族抗凋亡亚族蛋白的小分子抑制剂的研究进展

细胞的凋亡是维持机体平衡的重要因素。细胞凋亡由一系列细胞因子调控。Bcl-2蛋白家族是细胞凋亡的关键性调节因子。Bcl-2家族分为抗凋亡和促凋亡两个亚族，他们的相互作用对细胞凋亡信号传导起调控作用。很多肿瘤细胞高表达Bcl-2抗凋亡亚族成员Bcl-2/Bcl-xL。近年来，随着Bcl-2家族各成员的晶体结构相继阐明，人们开始寻找作用于Bcl-2家族抗凋亡亚族蛋白的小分子抑制剂。本文从药物设计角度对该方面的进展作一综述。     

大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤细胞凋亡及Bcl——2分布情况的观察

目的：观察大鼠大脑中动脉缺血再灌注后脑组织的病理学变化、细胞凋亡及Bcl—2表达情况。方法：利用腔内线栓法制各大鼠大脑中动脉闭塞模型，采用HE染色、免度组化方法及TUNEL法观察缺血侧大脑半球神经细胞坏死、Bcl—2分布及细度凋亡分布情况。结果：(1)坏死的神经细胞出现在缺血侧大脑半球的基底节区、额顶叶皮质及海马区。(2)凋亡的神经细胞大量出现在坏死灶边缘区，坏死灶内部也有少量凋亡细胞。(3)Bcl—2 阳性神经细度分布于远离坏死灶的周边区域，其细胞形态正常．分布范围超出HE染色异常区。结论：(1)细度凋亡是总性赖缺血损伤细胞死亡的重要形式。(2）Bcl—2阳性表达区域可能是半暗带在光镜下可以定位到的部分区域。     

苦参碱诱导RPMI8226细胞凋亡及其对Bcl-2、增殖细胞核抗原蛋白表达的影响

目的：研究苦参碱是否具有诱导RPMI8226细胞凋亡的生物学活性,探讨苦参碱对RPMI8226细胞Bcl-2及增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的影响及其作用的分子机制。方法：CCK-8法检测一定浓度的苦参碱对RPMI8226细胞的体外增殖抑制作用;AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡;PI单染色法检测细胞周期改变;同时应用流式细胞术检测Bcl-2及PCNA蛋白表达的变化。结果：苦参碱对RPMI8226细胞生长具有明显的抑制作用,呈量效和时效关系;苦参碱能诱导RPMI8226细胞凋亡,呈量效关系;细胞周期分析,G0/G1期细胞相对增多、S期相对减少、G2/M期无明显变化。苦参碱处理组RPMI8226细胞中Bcl-2及PCNA蛋白的表达跟未加药组相比阳性表达率均降低。结论：苦参碱对RPMI8226细胞生长具有明显抑制作用,其作用主要通过诱导RPMI8226细胞产生细胞周期阻滞和凋亡,降低PCNA的表达。苦参碱诱导RPMI8226细胞凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达下调对调控细胞凋亡有重要作用。