胰岛与Fas配体阳性睾丸细胞共同移植产生免疫豁免

目的通过胰岛与睾丸细胞共同移植诱导胰岛移植物长期生存。方法胶原酶、胰蛋白酶、Ｄｎａｓ酶消化制备睾丸ｓｅｒｔｏｌｉ细胞培养４８小时;纯化的供体（Ｗｉｓｔａｒ大鼠）胰岛５００个培养后的睾丸ｓｅｒｔｏｌｉ细胞共同移植,移植前后不用全身性免疫抑制剂,ＴＵＮＥＬ法标记胰岛移植物周围凋亡的淋巴细胞,ＳＡＢＣ法测定共同移植物ＦａｓＬ稳定表达情况。结果胰岛与１×１０７个睾丸ｓｅｒｔｏｌｉ细胞共同移植可以纠正链脲酶素所至的糖尿病高血糖状态达６０天（有效率达１００％,６／６）,单纯的胰岛移植或与１×１０５个睾丸ｓｅｒｔｏｌｉ细胞共同移植,移植物仅能存活５～６天。移植物周围可见明显的凋亡的淋巴细胞存在。结论胰岛与Ｆａｓ配体阳性睾丸细胞共同移植可以诱导局部免疫豁免,使移植物长时间存活。     

Fas配体阳性睾丸细胞对共移植的胰岛细胞存活起全身和/或局部的免疫豁免作用

目的探讨Fas配体阳性睾丸细胞对共移植的胰岛细胞存活起全身和/或局部的免疫豁免作用。方法将同种大鼠胰岛细胞与不同数量的睾丸细胞同侧或两侧共移植于糖尿病受体肾包膜下,观察移植物功能和存活情况,以及移植物内淋巴细胞凋亡。结果单纯移植胰岛组(对照组)平均存活期为(4.6±1.1)天。睾丸细胞和胰岛细胞同侧共移植时,当睾丸细胞数为1×106(A组)时,胰岛细胞平均存活期为(23.8±4.6)天;睾丸细胞数增至1×107时(B组),胰岛细胞存活期大于(57.5±4.0)天,均较对照组明显延长(P<0.01)。两侧共移植时,当睾丸细胞数为1×105(C组),胰岛细胞平均存活期为(6.0±1.4)天,与对照组相似(P>0.05);睾丸细胞数增至1×106(D组),胰岛细胞存活期(11.5±3.1)天较对照组或C组延长(P<0.01);睾丸细胞数增至1×107(E组)时,胰岛细胞存活期(31.2±15.9)天延长更加明显(P<0.01)。相同剂量的睾丸细胞与胰岛细胞分别同侧和两侧共移植时发生移植排斥反应各自的病理表现是不同的,前者移植物内有淋巴细胞浸润,部分胰岛玻璃样变,抗胰岛素抗体染色仅见少量阳性细胞,而后者胰岛细胞移植物内有大量的淋巴细胞和少量的中性粒细胞浸润,抗胰岛素抗体阳性细胞较少,未见胰岛玻璃样变。原位细胞凋亡检测发现同侧共移植后的移植物与肾实质交界处有淋巴细胞凋亡。电镜检查发现胰岛移植物存活超过60d的标本可见大量存活的胰岛细胞团和睾丸Sertoli细胞,有散在的凋亡淋巴细胞。结论睾丸细胞与同种胰岛细胞移植后不仅可诱导局部免疫豁免,而且也具有一定的全身免疫保护作用,但较局部免疫豁免作用弱;这些作用可延长移植物的存活期,并具有剂量依赖性。     

Fas配体表达对同种胰岛移植的影响

目的探究睾丸细胞FasL表达能否对共移植的胰岛移植物提供免疫豁免作用以及胰岛细胞FasL基因转染对同种胰岛移植的影响.方法将同种大鼠胰岛及睾丸细胞同时移植于糖尿病受体,重组腺病毒AdV-FasL感染胰岛细胞后移植,观察移植物存活情况、胰岛功能,并检测移植物内浸润淋巴细胞以及基因转染胰岛细胞凋亡情况.结果单纯移植胰岛组平均存活期为(6.3±0.56)?d.与胰岛细胞同时移植的睾丸细胞数增加至1×107时,存活期大于50?d(P＜0.05).表达FasL的睾丸细胞在移植物内诱导浸润淋巴细胞凋亡.FasL基因转染组出现排斥加速,存活期缩短至(3.4±0.24)?d.FasL转染的胰岛细胞在移植后24h见FasL表达,48h表达增强,移植后FasL转染胰岛细胞凋亡.结论表达FasL的睾丸细胞与胰岛同时移植可诱导活化的淋巴细胞凋亡,使胰岛移植物获得免疫豁免、存活期延长,但通过FasL基因转染使胰岛细胞直接表达FasL引起胰岛细胞凋亡和粒细胞浸润,导致排斥加速.     

抗Fas配体抗体和CTLA4 Ig诱导同种胰岛移植耐受

我们通过应用抗ＦａｓＬ抗体及ＣＴ ＬＡ4Ｉｇ ,探讨其在同种胰岛移植耐受中的作用 ,现将结果报道如下。一、材料和方法采用Ｗｉｓｔａｒ大鼠作为供体 ,ＳＤ大鼠为受体。抗ＦａｓＬ抗体及ＣＴＬＡ4Ｉｇ剂量相同 ,移植前给药 1次 ,剂量 2 0 0μｇ/ｋｇ体重 ,移植次日起持续 7ｄ给药 ,阴茎背静脉或尾静脉注入 ,剂量 10 0μｇ/ｋｇ体重。受体ＳＤ大鼠随机分为 4组 :(1)无任何处理组 (ｎ=6 ) ,即移植前后未给予特殊处理 ;(2 )抗ＦａｓＬ抗体(ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司 )处理组(ｎ =5 ) ;(3)ＣＴＬＡ4Ｉｇ处理组(ｎ =6 )…     

小鼠单侧睾丸损伤后环孢素A对Fas系统的影响

目的 :研究昆明小鼠 (KM小鼠 )单侧注射冰乙酸致睾丸损伤后环孢素A(CsA)对对侧睾丸生精功能和Fas系统表达的影响。　方法 :6 0只KM小鼠随机分为 4组 :A组为对照组 ,B组为单侧睾丸损伤组 ,C组为单侧睾丸损伤后 6h切除损伤睾丸组 ,D组为单侧睾丸损伤后 6h内开始腹腔注射CsA组。 4周后取对侧附睾尾 ,计数精子及其活率 ,对侧睾丸作石蜡切片苏木精 伊红染色和免疫组化链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶连结 (SP)法检测Fas和FasL的表达。　结果 :D组附睾尾精子和活率计数显著高于B组 (P <0 .0 5 ) ,D组的FasL和Fas较B组显著降低 (2 4 .3± 7.0vs37.8± 5 .8和 17.8± 4 .3vs32 .4± 3.6 ,P <0 .0 5 )。　结论 :KM小鼠单侧睾丸损伤后CsA可以通过抑制Fas和FasL的表达 ,降低生精细胞凋亡 ,维持生精功能的稳定     

咪唑和丹参对环孢素A所致胰岛B细胞毒性防护作用的实验研究

本实验用咪唑和丹参注射液作为胰岛Ｂ细胞的防护剂，以观察其对环孢素Ａ（ＣｓＡ）处理后的大鼠胰岛Ｂ细胞的防护作用。实验结果提示：口服治疗剂量的ＣｓＡ可引起雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠胰岛Ｂ细胞的损害，表现为葡萄糖耐量减低，葡萄糖刺激的胰岛素分泌水平降低和胰岛Ｂ细胞空泡变性、脱颗粒、胰岛体积缩小等形态学改变。腹腔注射咪唑或丹参，对用ＣｓＡ的大鼠胰岛Ｂ细胞具有保护作用。     

胰腺腺泡细胞凋亡和Fas/Fas配体表达在大鼠胰腺移植急性排斥反应中的作用

目的探讨大鼠胰腺移植后细胞凋亡的变化、Fas/Fas配体(FasL)的表达及其与急性排斥反应的关系。方法实验分为同基因移植组和异基因移植组。分别于术后第3、5、7天处死受体,取移植胰腺,应用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,计算凋亡指数(AI),应用免疫组织化学及Westernblot检测Fas/FasL的表达。结果细胞凋亡主要发生在胰腺腺泡细胞,同基因移植组有散在的腺泡细胞凋亡,AI在术后无明显变化,Fas/FasL表达阴性;异基因移植组在术后第3、5、7天胰腺腺泡细胞凋亡发生率逐渐增加(28.40±3.75,39.40±5.59,57.30±8.53,P<0.01),Fas/FasL表达逐渐增强,AI与急性排斥反应程度呈显著正相关(rs=0.932,P<0.01)。结论胰腺腺泡细胞凋亡和Fas/FasL表达在胰腺移植急性排斥反应中发挥重要作用,凋亡指数对胰腺移植急性排斥反应的诊断有一定的参考价值。     

促性腺激素释放激素拮抗剂对大鼠睾丸支持细胞雄激素受体和Fas配 …

本实验利用注射促性腺激素释放激素拮抗体剂（ＧｎＲＨ－Ａ）引起睾丸生精细胞程序化死亡的大鼠模型，用地高辛标记的大鼠雄激素受体和Ｆａｓ配体的ＲＮＡ探针对大鼠睾丸石蜡发片进行原位杂交，观察雄激素受体和Ｆａｓ配本基因在生精细胞凋亡中的变化。结果显示，ＧｎＲＨ－Ａ处理后曲细精管有退行性变，原位杂交表明此时Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞的雄激素受体表达明显减低，而Ｆｓａ配体表达显著升高。提示Ｆａｓ配体的表达可能与生精上皮     

Fas配体表达诱导同种胰岛移植免疫豁免

目的　探究睾丸细胞FasL表达能否对同时移植的胰岛移植物提供免疫豁免作用。方法　将不同数量的同种大鼠睾丸细胞与1500个胰岛同时移植于糖尿病受体,观察移植物功能、存活情况,以及移植物内淋巴细胞凋亡情况,并体外检测睾丸Sertoli细胞对活化淋巴细胞的抑制作用。结果　单纯移植胰岛组平均存活期为(5.0±0.5)d。睾丸细胞和胰岛细胞同时移植,当睾丸细胞数为5×106个,平均存活期为(10.0±0.6)d;增加移植睾丸细胞数至1×107个时,存活期大于50d（P＜0.05）。表达FasL的睾丸细胞在移植物内诱导浸润淋巴细胞凋亡,体外抑制淋巴细胞活性。结论　表达FasL的睾丸细胞可诱导浸润的活化淋巴细胞凋亡,使同时移植胰岛移植物获得局部免疫豁免、存活期延长。     

Sertoli细胞诱导大鼠肝内胰岛移植物免疫豁免的实验研究

目的 探究睾丸Sertoli细胞能否对肝内共移植的胰岛移植物提供免疫豁免作用以及共移植的睾丸Sertoli细胞最佳数量。方法将同种大鼠胰岛及不同数量的睾丸Sertoli细胞同时移植于糖尿病受体的肝内,观察移植物存活情况、胰岛功能、并检测移植物内胰岛素和Fas配体(FasL)表达以及浸润淋巴细胞凋亡情况。结果单纯胰岛移植组平均存活期为(5.6±0.8)d,同时与胰岛细胞在肝内共移植的睾丸细胞数增加至1×107个时,平均存活期为(41.4±4.61)d,明显延长(P<0.05),胰岛移植物中有大量表达FasL的睾丸细胞和表达胰岛素的胰岛细胞.在移植物周围有大量浸润的淋巴细胞凋亡。结论睾丸Sertoli细胞与胰岛细胞同时在肝内共移植,通过诱导局部豁免而延长胰岛移植物的存活时间,且同时共移植1×107个Sertoli细胞时效果最好。     

胰岛FasL基因转染对大鼠胰岛移植的影响

目的 探究胰岛细胞FasL基因转染对同种大鼠胰岛移植的影响。方法 通过磷酸钙沉淀法构建含目的基因FasL的重组腺病毒AdV-FasL,感染胰岛细胞后移植于糖尿病受者大鼠,通过RT-PCR和免疫组织化学检测移植物FasL表达,观察移植物存活情况及基因转染胰岛细胞凋亡情况。结果 单纯移植胰岛组平均存活期为（6.3±0.56）d,FasL基因转染组并未出现排斥延迟,反而排斥加速,存活期缩短至（3.4±0.24）d。FasL转染的胰岛细胞在移植后24h见FasL表达,在 48 h表达增强,AdV-5感染组及未转染组未见FasL表达。TUNEL标记见移植后FasL转染胰岛细胞凋亡。结论 尽管表达FasL的睾丸细胞与胰岛共移植可诱导活化的淋巴细胞凋亡,使胰岛移植物获得免疫豁免、存活期延长,但通过FasL基因转染使胰岛细胞直接表达FasL,引起胰岛细胞凋亡和粒细胞浸润,导致排斥加速。     

雷公藤多甙及环孢素A在大鼠心脏移植中的协同作用

目的探讨心脏移植术后单用雷公藤多甙(TWHF)及与环孢素A(GsA)合用对大鼠心脏移植物生存期的影响.方法供体为雄性PVG(RT1C)大鼠,受体为雄性Lewis(LEW;RT11)大鼠.采用改良的Ono和Lindsey方法实施腹部异位心脏移植.根据术后处理不同将实验动物分为4组第1组(5只)对照组(非治疗组);第2组(7只)TWHF 60 mg·kg-1·d-1;第3组(6只)CsA 15 mg·kg-1·d-1;第4组(5只)TWHF 40 mg·kg-1·d-1+CsA1 mg·kg-1·d-1.用吐温80及蒸馏水将TWHF配制成1%悬液;CsA使用前以注射用水配成5g/L.术后当天即给药,TWHF为灌服,CsA为肌肉注射.直至发生排斥反应或最多给药14 d.每天通过触摸监测移植心脏的功能.结果4组移植大鼠心脏平均存活8.8、12.0、17.0、34.6 d.结论心脏移植术后给予雷公藤多甙及CsA联合治疗,能明显延长移植心脏的功能存活时间.     

1O-羟基喜树碱和环孢素A诱导异基因大鼠心脏移植受者免疫耐受的实验研究

目的以中药制剂10-羟基喜树碱(HCPT)和环孢素A(CsA)诱导异基因大鼠心脏移植受者免疫耐受,并探讨免疫耐受的特异性和形成机制.方法以纯系SD大鼠为供者,纯系Wis-tar大鼠为受者行异体颈部心脏移植.将移植后50只受者大鼠随机分成5组,分别接受不同剂量HCPT、CsA或二者联合应用.A组接受安慰剂.B组接受HCPT 1.0mg·kg-1·d-1,腹腔注射.C组接受HCPT 2.0 mg·kg-1·d-1,腹腔注射.E组接受CsA10.0 mg·kg·d-1,导管灌胃.F组联合应用HCPT和CsA,方法剂量同B组和E组.心脏移植物长期存活受者术后60 d停用免疫抑制剂,120 d同时行供者来源(SD)大鼠和无关供者(SHR)大鼠皮肤移植.结果3只C组大鼠和5只F组大鼠心脏移植术后停用免疫抑制剂长期存活超过730 d.8块SD大鼠皮肤移植物长期存活超过610 d,而8块SHR大鼠皮肤均被排斥,平均存活时间(4.50±1.25)d.结论大剂量HCPT或小剂量HCPT与CsA联合应用可诱导异基因大鼠心脏移植受者免疫耐受,且形成的免疫耐受具有明确的抗原特异性.     

CTLA4-Ig-modified dendritic cells inhibit lymphocyte-mediated alloimmune responses and prolong the islet graft survival in mice

The induction of antigen specific tolerance is critical for prevention and treatment of allograft rejection. In this study, we transfected CTLA4-Ig gene into dendritic cells (DCs), and investigated their effect on inhibition of lymphocyte activity in vitro and induction of immune tolerance on pancreatic islet allograft in mice. An IDDM C57BL/6 murine model induced by streptozotocin is as model mouse. The model mice were transplanted of the islet cells isolated from the BALB/c mice to their kidney capsules, and injected of CTLA4-Ig modified DCs (mDCs). The results showed that mDCs could significantly inhibit T lymphocyte proliferation and induce its apoptosis; whereas, unmodified DCs (umDCs) promoted the murine lymphocyte proliferation. Compared with injection of umDCs and IgG1 modified DCs, the injection of mDCs prolonged IDDM mice's allograft survival, and normalized their plasma glucose (PG) levels within 3 days and maintained over 2 weeks. The level of IFN-gamma was lower and the level of IL-4 was higher in mDCs treated recipient mice than that in control mice, it indicated that mDCs led to Th1/Th2 deviation. After 7 days of islet transplantation, HE stain of the renal specimens showed that the islets and kidneys were intact in structure, and islet cells numbers are increased in mDCs treated mice. Our studies suggest that DCs expressing CTLA4-Ig fusion protein can induce the immune tolerance to islet graft and prolong the allograft survival through the inhibition of T cell proliferation in allogeneic mice.