重组痘苗病毒诱导小鼠产生IgG抗体的动态观察

检测血清中HIV抗原或其相应的抗体是判断HIV感染的间接指标。HIV感染后 ,随着血清的阳转 ,首先出现抗HIV 1gag抗体 ,然后才是抗HIV 1env蛋白及其它蛋白的抗体 ,根据病程的进展HIV 1gag大量产生 ,HIV 1gag抗体被结合 ,抗体滴度逐渐下降。因此 ,血清中gag抗体和抗env编码蛋白的抗体检测仍然是目前最常用的诊断HIV感染的标志 ,它比单纯的CD4 + 细胞计数可提前 3～ 4年预测AIDS的发生。它不仅对HIV感染的诊断 ,而且对病情的发展和预后的判断也有一定的实际意义。本文研究含有HIV 1env、HIV 1gag的重组病毒诱导小鼠产生HIV 1env…     

调节HIV基因表达的两个重要蛋白质-Tat及Rev

Tat及Rev都是HIV复制所必不可缺的病毒调节蛋白。它们主要通过与各自的靶序列及细胞内的蛋白因子相互作用来发挥调节功能。Tat可以增加HIV所有基因的表达;而Rev则有选择性地促进编码病毒结构蛋白的基因表达,促使病毒从感染的早期阶段进入晚期阶段,起到控制病毒基因表达转换开关的作用。Tat可以在转录及转录后水平上发挥其反式激活作用,Rev主要在转录后水平起作用。     

人免疫缺陷病毒LTR转录调控机制的研究进展

人免疫缺陷病毒(HIV)的长末端重复序列(LTR)含有SPl区,增强子区,TATA区,NRE区和TAR区等5个调控序列,这些调控序列通过与病毒调控蛋白及细胞因子之间的相互作用,共同完成对HIV基因转录的调控。人免疫缺陷病毒(HIV)的复制受LTR的调控。HIV基因组的5′和3′末端各有一个LTR,HIV的转录受5′LTR调     

胞外高迁移率组蛋白1对HTLV-1感染的T细胞中病毒复制的影响

目的 探讨胞外的高迁移率组蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)对人T淋巴细胞白血病病毒1型(human T-cell leuk HTLV-1)感染的T细胞中病毒复制的影响.方法 ELISA检测HTLV-1病毒阴性T细胞系Jurkat、MOLT4细胞及HTLV-1病毒阳性的T细胞系MT2、MT4细胞培养上清中的HMGB1水平;将HTLV-1的长末端重复序列荧光素酶报告基因pHTLV-1-LTR-luc转染病毒阳性细胞MT2,随后加入终浓度为0.25、0.50、0.75 μg/ml的HMGB1多克隆抗体(PcAb)及其同型对照抗体,30、100、300 ng/ml的重组人HMGB1蛋白(rhHMGB1)及其对照PBS,48 h后检测荧光素酶活性;在病毒阳性细胞MT2中加入终浓度为0.25μg/ml的HMGB1 PcAb及同型对照抗体,300ng/ml的rhHMGB1及对照PBS,real-time PCR检测病毒编码基因tax、pol1、pol2、p19、gag、env.结果 HTLV-1病毒阴性T细胞系和HTLV-1病毒阳性细胞系培养上清中的HMGB1水平无明显差异;0.25μg/ml的HMGB1 PcAb可明显抑制HTLV-1-LTR的转录活性,而300 ng/ml的rhHMGB1可明显促进HTLV-1-LTR的转录活性;real-time PCR检测显示0.25 μg/ml的HMGB1 PcAb可明显抑制病毒编码基因pol1、pol2、gag、env的表达,300 ng/ml的rhHMGB1可明显促进pol1、pol2、gag、env的表达.结论 胞外的HMGB1可促进HTLV-1病毒感染T细胞的病毒复制.     

HIV—1整合酶：艾滋病治疗的新靶点

目前，抗逆转录病毒的治疗虽然已经有了显著进展，但寻找价格低廉, 活性更强的抗HIV药物仍在继续，以HIV pol基因的两个产物逆转录酶和蛋白酶为靶点，美国食品与药品管理局（FDA）批准了9种逆转录酶抑制剂和5种蛋白酶抑制剂作为临床抗艾滋病药物，目前对HIV的防要是采取转录酶抑制剂和蛋白酶抑制合用的联合疗法，但此种方法不能完全清除病毒，停药后产生反跳，病情反复，HIV复制过程中还有另一个重要的酶一整合酶，使病毒基因组整合于宿主细胞染色体，病毒在体内长期潜伏，整合酶是HIV自身特有的酶，也是一个抗HIV药物设计的理想靶点，本文主要介绍HIV－1整合酶的结构，在病毒复制过程中的功能，以及整合酶抑制剂为抗HIV药物设计靶点的研究进展。     

Tat蛋白结构与功能的研究进展

人类免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)是获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的病原体。HIV 1基因组除编码结构蛋白外, 还编码 6个调控蛋白, Tat蛋白是其中一个很重要的调控蛋白 [1]。Tat蛋白不仅为HIV转录和复制所必须, 还有旁分泌、促细胞生长、免疫抑制及内化等多方面的效用。Tat蛋白对多种细胞表现出来的这些生物学效应, 直接或间接地导致了各种艾滋病的并发症, 如Kaposi’s肉瘤、爱滋病痴呆 (AIDSdementia)以及增加艾滋病患者患癌的可能性等。本文中, 我们主要综述了Tat蛋白结构和功能研究的新进展。1　Tat的结构Tat为病毒有效转录和复…     

乙型肝炎病毒X基因的转录激活作用及其机理的研究进展

乙型肝炎病毒X基因的翻译产物可在多种细胞中反式激活乙型肝炎病毒和其他数种病毒以及一些细胞基因的调控序列,促进基因转录。X蛋白的作用与病毒增强子的某些序列有关,可能通过细胞内转录调控因子桥接直接作用于转录起始复合物,或X蛋白本身具有蛋白磷酸激酶活性,共价修饰细胞转录调控因子,进而影响转录起始。X蛋白的反式激活作用有利于病毒基因的大量表达,促进病毒复制,并且可干扰细胞基因的转录表达,影响细胞分化增殖,是导致病毒大量复制和细胞肿瘤转化的重要因素之一。     

SARS冠状病毒全基因组cDNA芯片的研制以及人重组干扰素α2b抑制SARS病毒复制分子机制的初步研究

目的 在细胞水平上，利用研制的SARS病毒全基因组芯片技术探讨人重组干扰素α2b抑制SARS病毒复制的分子机制。方法 根据已经发表的SARS病毒基因组全序列和生物信息学软件分析，设计包括SABS病毒全基因组的各个可能编码区的PCR引物；将所有PCR产物用来制备SABS病毒的全基因组cDNA芯片。利用该芯片来探讨人重组干扰素α2b抑制SARS病毒复制的分子基础。结果 通过：PCR方法研制了SARS病毒全基因组的cDNA芯片，并说明cDNA芯片可以准确地检测SARS病毒各个基因的RNA水平。利用这一技术研究了于扰素抗SARS病毒的分子机制。结果表明，人重组干扰素α2b可以明显抑制SARS病毒复制过程中几乎所有病毒RNAs的转录，并呈现一定的剂量关系；并发现一个目前还没有确定功能的SARS病毒新基因，命名为U基因，转录最早，转录水平最高，对干扰素的抑制作用也很敏感；它可能在病毒的转录复制过程中发挥重要作用。结论 SARS冠状病毒cDNA芯片可以用来研究病毒复制的分子机制以及相关抗病毒药物包括干扰素的研究。本文在分子水平上研究了人于扰素α2b抑制SARS病毒复制的基因转录动态，并就干扰素α2b抑制SARS病毒的可能分子机制及其潜在的应用价值进行了讨论。     

HIV-2 gp105-gag截短体在毕赤酵母中重组表达研究

目的　实现HIV 2 RODgp10 5 gag截短体重组蛋白tgp10 5 gag的高效分泌表达 ,对其表达条件进行研究。方法　用PCR方法获得HIV 2 RODtgp10 5截短基因 ,将其与HIV 2 RODgag构建HIV 2 RODtgp10 5 gag嵌合基因并克隆到毕赤酵母 (Pichiapastoris)分泌型表达载体pPIC9中 ,转化GS115酵母菌 ,经MD/MM表型筛选、PCR扩增筛选阳性克隆 ,以甲醇诱导表达后进行SDS PAGE分析及Westernblot证实。结果　HIV 2 RODtgp10 5 gag嵌合截短基因在Pichiapastoris酵母系统中获得了有效分泌表达 ,相对分子质量 (Mr)约为 14 0× 10 3 ,表达量约为 16 % ,表达产物可被HIV 2阳性血清识别。最佳表达条件是大于 85 %的溶解氧 ,摇瓶转速 2 4 0r/min ,1.0 %～ 1.5 %甲醇诱导 ,培养时间 3d。结论　在Pichiapas toris表达系统中实现了HIV 2 RODtgp10 5 gag蛋白的有效分泌性表达 ,表达产物具有良好的抗原特异性。     

HIV抗体不确定结果的特征与鉴别方法研究

目的 分析HIV抗体不确定的血清学特征及预示HIV感染的意义,评价3种实验方法鉴别HIV抗体不确定的效果.方法 收集394例HIV抗体不确定标本,分析免疫印迹确认的条带类型.2对97例HIV抗体不确定病例进行随访,观察HIV抗体的发展和变化.3对67例随访病例的首次标本进行病毒载量、条带免疫印迹和HIV-1 p24抗原检测,以随访的结果为金标准,判断3种方法鉴别不确定的效果.结果 394例不确定标本共有38种带型,env类不确定的构成比例是37.54%;pol不确定占4.04%;gag类不确定占的比例最大,为58.37%.97例接受随访的HIV抗体不确定病例中,5例发生HIV抗体阳转,均为env类不确定.阳转病例的HIV抗体发展很快,约2周就可以看出变化.病毒载量检测鉴别HIV抗体不确定的敏感性最好.结论 针对gag蛋白的不确定反应最为常见,但基本上都是非特异反应.env类不确定预示HIV感染的意义较大,特别是gp160p24和gp160.HIV抗体不确定如为早期HIV感染,血清抗体发展的速度很快,大约2周抗体就有发展.病毒载量检测可有效鉴别不确定结果.     

HIV1膜蛋白PND编码基因自然变异株的发现

目的 对1例来自华东地区HIV1分离株（WWBH7）的前病毒env基因C2-V3区进行序列分析。方法 以HIV1感染者外周血单个核细胞基因组为模板进行套式PCR扩增HIV1env基因C2-V3区片段,将此扩增产物插入T-Vector,酶切鉴定重组质粒,使用AB1737自动DNA序列测定仪测定序列并用DNASIS软件进行分析。结果 DNA序列资料显示该毒株属于HIV1B亚型衍生株,但与HIV1B亚型的标准株如SF2株相比,该HIV1毒株的env基因V3区下游有192bp的重复插入突变,使得该毒株的膜蛋白PND编码基因呈现双V3区的变异该段DNA序列已登录于GenBank(AF220245)。结论 该分离株是1个在膜蛋白PND编码基因有大片段插入突变的HIV1变异株。     

负链RNA病毒反向遗传学技术的建立及发展应用

负链RNA病毒基因组由单负链RNA构成。其基因组RNA需要被转录为mRNA才能引导病毒蛋白在细胞内合成。使用传统的DNA重组技术对负链RNA病毒进行基因操作已经难以奏效。反向遗传学方法是通过反转录病毒RNA为cDNA,从而构建成含有病毒基因组cDNA的质粒并转染相应细胞产生病毒。通过中间的DNA环节在DNA相对负链RNA病毒基因组进行人工操作,这使得研究者可以自定义产生需要的病毒。因而研究反向遗传学技术的建立、发展过程以及它在相关病毒基因片段结构功能、疫苗研制、外源基因表达、基因治疗等方面的应用很有意义。     

HSVI立即早期基因研究进展

相对于其它病毒而言,单纯疱疹病毒的基因组巨人,基因数日繁多,根据其基因转录的先后顺序,分为立即早期、早期利晚期基因二类.作为病毒首先表达的立即早期基因,它们的表达产物都为非结构蛋白,可对病毒的复制进行调控,决定了病毒进入细胞后的命运.因此对单纯疱疹病毒的立即早期基因的定位、命名、翻译后修饰以及对其产物功能的分析对该病毒的分子生物学的病理学研究具有重要的意义.     

gp120对体内免疫细胞的作用

gp12 0是HIV病毒的衣壳蛋白 ,由基因env编码 ,其分子量为 12 0KD。在病毒侵入人体T细胞的过程中发挥重要的作用 ,同时它还存在游离态的形式 ,通过一种类似于超抗原作用的途径 ,在体内非特异性地激活一些主要的免疫细胞 ,从而大大增强了HIV对人体的危害作用。本文拟就HIV病毒危害人体免疫功能的最新研究作一综述     

HSVI立即早期基因研究进展

相对于其它病毒而言，单纯疱疹病毒的基因组巨人，基因数日繁多，根据其基因转录的先后顺序，分为立即早期、早期利晚期基因二类。作为病毒首先表达的立即早期基因，它们的表达产物都为非结构蛋白，可对病毒的复制进行调控，决定了病毒进入细胞后的命运。因此对单纯疱疹病毒的立即早期基因的定位、命名、翻译后修饰以及对其产物功能的分析对该病毒的分子生物学的病理学研究具有重要的意义     

030 gp120对体内免疫细胞的作用

gp120是HIV病毒的衣壳蛋白,由基因env编码,其分子量为120KD.在病毒侵入人体T细胞的过程中发挥重要的作用,同时它还存在游离态的形式,通过一种类似于超抗原作用的途径,在体内非特异性地激活一些主要的免疫细胞,从而大大增强了HIV对人体的危害作用.本文拟就HIV病毒危害人体免疫功能的最新研究作一综述.     

腺病毒E1B55K与E4orf6蛋白功能研究进展

腺病毒是普遍存在的双链DNA病毒,感染人的腺病毒分为A-G 7个种,包括50多个型别,引起咽炎,肺炎,胃肠炎,出血性膀胱炎,角结膜炎等疾病[1].通过对人腺病毒的研究发现,其基因组携带5个早期转录单位(E1A,E1B,E2,E3,E4),2个延迟早期转录单位(ⅨX,Ⅳa2)及一个主要晚期转录单位.E1与E4区蛋白参与调控细胞功能,为病毒复制营造适宜细胞内环境;E2区编码DNA复制酶等与腺病毒基因组复制相关蛋白;E3区蛋白参与免疫调节,帮助病毒躲避宿主的免疫应答;晚期转录单位主要编码结构蛋白以及与病毒包装相关的蛋白质.本文重点对E1区E1B55K蛋白和E4区E4orf6蛋白的功能作一综述.     

gp120对体内免疫细胞的作用

gp120是HIV病毒的衣壳蛋白，由基因env编码，其分子量为120KD，在病毒侵入人体T细胞的过程中发挥重要的作用。同时它还存在游离态的形式，通过一种类似于超抗原作用的途径。在体内非特异性地激活一些主要的免疫细胞。从而大大增强了HIV对人体的危害作用。本文拟就HIV病毒危害人体免疫功能的最新研究作一综述。     

表达HPV 16型结构蛋白的非复制型重组痘苗病毒的构建与鉴定

目的 构建表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)结构蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。方法 采用聚合酶链反应技术(PCR)扩增并克隆HPV16主要结构蛋白L1和次要结构蛋白L2基因;将经过结构修饰的L1和L2基因插入痘苗病毒表达载体,通过与痘苗病毒在宿主细胞中同源重组后,筛选共表达L1／L2蛋白的重组痘苗病毒并对其进行鉴定。结果 DNA序列分析证实PCR扩增所获L1和L2克隆基因是正确的;斑点杂交结果表明重组病毒基因组中有L1和L2基因插入;该重组病毒在人源细胞中不复制或低水平复制,但可稳定表达相对分子质量为57000的L1蛋白和相对分子质量为90000的L2蛋白。结论 获得1株稳定表达HPV16 L1／L2蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。