冬虫夏草对大鼠实验性肝纤维化的防治作用及其机理研究

冬虫夏草对大鼠实验性肝纤维化的防治作用及其机理研究王要军,孙自勤,权启镇,戴益民,张志坚(济南军区总医院消化科济南250031)肝纤维化是各种慢性肝病发展为肝硬变的必经病理过程,有资料表明这一病理过程是可以逆转的。然而对肝纤维化的治疗,目前国内外尚无有效药物。冬虫夏草(下称虫草)有一定的抗纤维化作用,但确切疗效和机理尚不清楚[1]。本文观察虫草对CCl4诱发的大鼠肝纤维化的疗效,并对其机理进行研究,以期为临床治疗提供?...     

冬虫夏草多糖抑制肝纤维化作用机制的研究进展

肝纤维化是肝脏对各种慢性损伤的一种修复反应过程,主要是由于肝脏中纤维组织增生和分解不平衡,导致肝脏纤维结缔组织过度沉积,是多种慢性肝脏疾病的共同中间环节,在这一病理过程中,细胞与细胞因子之间相互作用,使肝脏细胞外基质代谢紊乱,造成纤维组织在肝脏内沉积过多,最后导致肝纤维化,其持续恶化会逐步发展成肝硬化,甚至肝癌。由于肝纤维化及肝硬化早期可以逆转,因此控制肝纤维化这一可逆过程,对于肝硬化和肝癌的预防及治疗至关重要。冬虫夏草作为我国特有的名贵药用真菌之一,受到科学工作者的普遍关注与研究,其药理作用广泛。冬虫夏草中含量最高的生物活性物质冬虫夏草多糖,近年来研究发现其具有抗肝纤维化的作用,随着分子生物学技术的应用,国内外对于中药抗肝纤维化机制的研究逐渐向细胞分子水平深入。本文将分别从与肝纤维化发生有关的细胞基础、细胞因子、胶原酶以及脂质过氧化层面,探讨冬虫夏草多糖对肝纤维化形成的抑制作用,以阐明其具体作用机制,为抗肝纤维化药物的研制提供参考。     

冬虫夏草多糖脂质体抗肝纤维化的实验研究

目的探讨冬虫夏草多糖脂质体（ＣＰＬ）抗肝纤维化的作用及机制。方法动物分为肝纤维化模型组、ＣＰＬ治疗组和正常对照组,采用免疫组化和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因的表达。结果ＣＰＬ治疗组大鼠肝脏中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白较模型对照组明显减少（Ｐ值分别＜０．０１）;ＣＰＬ治疗组大鼠肝脏组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达量明显下降,与模型组大鼠比较差异有显著性（Ｐ值分别＜０．０５）。结论冬虫夏草多糖脂质体能明显减少肝脏的胶原沉积,并能抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因的表达。     

桃仁提取物合虫草菌丝抗肝纤维化的实验研究

本研究旨在证实合用桃仁提取物和虫草菌丝的抗肝纤维化作用，对二者合用对由ＣＣｌ４引起的实验性肝纤维化的防治作用进行实验观察，以生理盐水作同期对照。结果表明：ＨＥ染色观察全用预防组肝细胞变性较对照组有减轻趋势，治疗组肝细胞仅见少数变性，部分症例恢复正常结构；且纤维组织增生较对照组有减轻趋势，组纤维间隔少而薄，与对照组比较；电镜观察预防组肝细胞变性较对照组轻，细胞间隙正常，治疗组少量肝细胞变性，肝窦充盈     

冬虫夏草对肝纤维化小鼠Smad3蛋白表达的影响

目的探讨冬虫夏草对四氯化碳致小鼠肝纤维化的作用及肝脏Smad3蛋白表达的影响。方法四氯化碳皮下注射复制BALB/c小鼠肝纤维化模型,虫草组在造模同时予以虫草煎剂,直至造模结束。HE染色观察肝组织炎症,天狼猩红染色观察肝脏胶原沉积,生化法测定肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量,免疫组化测定Smad3在肝脏内的表达。结果与正常小鼠比较,肝纤维化小鼠肝脏肝静脉与汇管区周围肝细胞明显脂肪变性,肝脏胶原沉积,可见纤维间隔形成,肝脏Hyp含量、Smad3蛋白表达量均显著增加。与模型组比较,虫草组肝脏炎症与胶原沉积减轻,Smad3蛋白表达量明显降低。结论肝纤维化BALB/c小鼠的肝脏Smad3蛋白表达明显上升,虫草制剂有良好的抗肝纤维化作用,其作用机制与下调Smad3蛋白表达有关。     

绿原酸抗肝纤维化作用的研究

目的:研究绿原酸对四氯化碳(CCl4)导致的肝纤维化大鼠的保护作用,为其进一步开发和研究提供科学依据。方法:大鼠随机分为6组,即正常组,模型组,秋水仙碱(0.2 mg.kg-1)组,绿原酸高,中,低剂量(140,70,35 mg.kg-1)组。各组每天ig给药,给药容量为20 mL.kg-1.d-1,连续8周。正常组和模型组给予蒸馏水。给药和造模同时进行。采用CCl4导致大鼠肝纤维化模型,除正常组外,其余各组每只大鼠首次于背部sc纯CCl4 5 mL.kg-1,以后sc 40%CCl4花生油3 mL.kg-1,共8周。第8周经股动脉取血,计算大鼠的肝脾指数,检测大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的活性及其总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)的含量,计算ALB与球蛋白(GLOB)的比值;检测血清中透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)的含量;检测肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性、羟脯氨酸(Hyp)的含量、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平。取肝组织,做病理切片,HE和Masson染色。结果:模型组大鼠血清中的ALT,AST,TP,ALB,A/G,肝纤维化4项指标(即PCⅢ,CⅣ,HA,LN)均具有显著的肝纤维化的特征(P<0.01)。绿原酸能明显对抗CCl4所致的肝纤维化大鼠肝脾系数的升高(P<0.01);显著对抗血清中ALT,AST活性的升高(P<0.01),降低血清中HA,LN,PCⅢ,CⅣ,GLOB的含量(P<0.01),升高血清中的TP,ALB含量和A/G(P<0.01);降低肝组织中MDA和Hyp的含量(P<0.01),升高肝组织中SOD和GSH-Px的活性(P<0.01)。绿原酸各剂量组中绿原酸高剂量组抗肝纤维化的效果最好,并呈现明显的剂量依赖性。病理结果亦显示绿原酸具有良好的抗肝纤维化的作用。结论:绿原酸具有显著的抗肝纤维化的作用。     

小柴胡汤对肝纤维化大鼠的抗肝纤维化作用

目的:探讨小柴胡汤对四氯化碳(CCl4)诱导的实验性肝纤维化大鼠的抗肝纤维作用。方法:用CCl4诱导大鼠肝实质损伤性纤维化模型,65只SD大鼠被随机分为模型组、对照组及治疗组(高、中、低剂量组)5组,每组13只。除对照组外所有大鼠皮下注射40%CCl42.5ml/kg首次剂量加倍,每3日1次,共8周,对照组注射等体积精制的橄榄油。治疗组分别给予高、中、低剂量3.58克/kg、1.79克/kg、0.358克/kg小柴胡汤灌胃,每日2次,共8周。实验结束用2%戊巴比妥钠45mg/kg腹腔注射麻醉大鼠,收集血清标本并取肝左叶。利用伊红(HE)染色对肝脏胶原表达及纤维化程度进行评价。血清学检查包括肝功能,层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)及Ⅳ型胶原(IV-C),白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)及转化生长因子β1(TGFβ1)。结果:肝纤维化模型组与高剂量组及中剂量组比较,转氨酶、总胆红素及谷氨酰转移酶等明显升高,治疗组肝功能明显改善;白蛋白(ALB)高剂量组高于模型组。高、中剂量比较;透明质酸、III型前胶原及IV型胶原等均低于模型组;血清层粘连蛋白高于模型组,模型组大鼠IL-2低于高剂量组、中剂量组,IL-6高于高剂量组、中剂量组;TGFβ1模型组高于高剂量组;肝脏组织病理检查显示治疗组肝纤维化程度明显下降。结论:小柴胡汤对CCl4诱导的肝纤维化有明显的防治作用。     

溶纤肝泰胶囊抗肝纤维化作用的实验研究

1实验材料动物:清洁级Wistar大鼠48只,雄性,体重(300±20) g,由内蒙古大学动物中心提供。药物:溶纤肝泰胶囊,由包头医学院第一附属医院中蒙药剂型制剂中心提供。秋水仙碱,市售(云南版纳药业有限责任公司生产)。主要仪器:OLYMPUS CX31生物显微镜,日本OLYMPUS。捷达801图像分析系统,江苏捷达科技公司。XH- 6020α免疫计数器,国营二六二厂。全自动生化分析仪,日本。2实验方法     

姜黄素抗肝纤维化作用研究概况

从抗炎抗氧化、抗肝纤维化、抑制肝星状细胞(HSC)增殖、促HSC凋亡和干预细胞因子信号转导等方面综述了姜黄素抗肝纤维化作用的进展。     

基于网络药理学和细胞实验探讨参苓白术散对肝纤维化中TGF-β通路的作用机制

目的：基于网络药理学预测参苓白术散抗肝纤维化（HF）的潜在作用靶点及可能相关的信号通路，同时通过体外细胞实验验证其潜在的分子机制。方法：运用TCMSP和BATMAN-TCM数据库初步获取参苓白术散的活性成分和作用靶点，借助Gene Card和OMIM数据库收集疾病相关的靶点，两者取交集绘制韦恩图，采用Cytoscape 3.7.2软件建立“药物-活性成分-靶点”网络图，并通过STRING数据库获得PPI网络，通过GO及KEGG富集分析筛选出主要作用通路和靶点蛋白。根据预测情况通过细胞实验对生物学分析进行验证。建立大鼠肝星状细胞（HSC-T6）模型，设置空白组，低、中、高剂量组分别给予100、200、400μg/mL参苓白术散处理，阳性对照组给予200μg/mL秋水仙碱处理。MTT法检测不同组别细胞增殖的抑制率，划痕实验检测用药后HSC-T6的迁移能力，ELISA法检测给药后各组细胞内α-SMA蛋白含量，Western blot法检测各组细胞中TGF-β1、Smad2和Smad7蛋白的表达水平。结果：经筛选最终获得参苓白术散潜在靶点970个，疾病靶点513个，药物与疾病交集靶点117个，...     

康定冬虫夏草与人工虫草的RAPD指纹图谱比较研究

目的用RAPD方法对康定虫夏、人工虫草及虫草发酵菌丝体进行指纹图谱的研究,为不同虫草的品质和药效差异提供分子依据。方法从65个随机引物中筛选出7个引物,以这7个引物进行PCR扩增,电泳得到其指纹图谱。结果没有发现任何两个样本拥有完全相同的RAPD标记,康定冬虫夏草和人工虫草具有较高的遗传多态性,而与虫草发酵菌丝体相比差异较大。结论来自不同产地冬虫夏草群体均表现出其独特的RAPD标记,其差异可能系虫体的不同所致。随机扩增的DNA片段的差异是否预示其药效的不同,有待进一步研究。     

冬虫夏草及其混淆品HPLC指纹图谱研究及共有成分鉴定

目的建立冬虫夏草水溶性成分的HPLC指纹图谱方法,为冬虫夏草的真伪鉴别及质量评价提供依据。方法采用HPLC法建立冬虫夏草及其主要混淆品(凉山虫草、古尼虫草、蛹虫草)水溶性成分的指纹图谱,标记了16个共有峰,并通过超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF-MS)技术对指纹图谱中16个共有峰进行鉴定。结果建立了冬虫夏草水溶性成分的HPLC指纹图谱方法,该方法能区分冬虫夏草及其混淆品,鉴定出其中12个共有峰,分别为胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤+鸟嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷和虫草素。结论该方法简便易行,为冬虫夏草的真伪鉴别提供了科学依据。     

虫草菌丝中3种活性成分对血管新生与内皮细胞功能的影响

目的探讨虫草菌丝中的3种活性成分(虫草素、腺苷、麦角甾醇)对血管新生和肝内皮细胞功能的影响。方法采用鸡胚绒毛尿囊膜实验和转基因斑马鱼实验分别观察虫草素、腺苷、麦角甾醇对新生血管面积、功能血管数量及碱性磷酸酶变化的影响;MTT法测定3个化合物对人肝癌SK-HEP-1细胞的细胞毒活性;采用血管内皮生长因子(VEGF)诱导SK-HEP-1细胞增殖为模型,以索拉非尼为阳性对照药,MTT法测定3个化合物对细胞增殖的影响,Transwell法观察细胞迁移,Matrigel管腔形成实验观察细胞管腔形成情况,荧光探针法检测胞内一氧化氮(NO)的量和一氧化氮合酶(NOS)活性。结果虫草菌丝中腺苷、麦角甾醇能够显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生、减少转基因斑马鱼功能血管数量,而虫草素能够促进鸡胚绒毛尿囊膜血管新生;与对照组相比,VEGF可诱导SK-HEP-1细胞增殖,促进细胞迁移和管腔形成,并可使其胞内NO水平和NOS活性显著升高;与模型组相比,虫草素、腺苷、麦角甾醇呈剂量依赖性地抑制SK-HEP-1细胞增殖,腺苷、麦角甾醇能抑制SK-HEP-1细胞迁移,3者均可不同程度地抑制SK-HEP-1细胞管腔形成,且剂量依赖性地降低胞内NO水平和NOS活性。结论虫草菌丝中的虫草素、腺苷、麦角甾醇对SK-HEP-1细胞增殖、迁移、管腔形成有不同程度的抑制作用,其中腺苷的作用尤为明显;其机制与抑制细胞内NO水平和NOS活性有关。     

冬虫夏草中砷及其安全性评价研究进展

传统名贵中药冬虫夏草Cordyceps sinensis中砷超标及其安全性问题近年来备受关注,针对冬虫夏草中砷的研究逐渐增加并不断深入。在文献查阅的基础上,从冬虫夏草砷及砷形态的分析方法,砷的含量、分布、存在形态,安全性评价,以及野生和人工仿生繁育冬虫夏草中砷含量等方面进行归纳总结,并对冬虫夏草中砷的认知及研究进行展望,以期为冬虫夏草安全性评价的深入研究提供参考。     

冬虫夏草化学成分研究进展

冬虫夏草是我国的名贵中药材,是冬虫夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫的子座及幼虫尸体的复合体.含有氨基酸、核苷、多糖、甾醇及甘露醇等多种活性成分,另外还含有脂肪酸、挥发油以及无机元素等多种成分.对近年来国内外关于冬虫夏草化学成分的研究进行综述.     

虫草类产品中5种核苷类成分的测定及蛹虫草质量分析

目的建立HPLC法对4种常见虫草类样本[蛹虫草、发酵虫草菌粉(Cs-4)、中华被毛孢和冬虫夏草]中尿苷、鸟苷、腺苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷5种核苷类成分进行含量测定,比较成分差异,确定蛹虫草的特征成分,为控制蛹虫草及其提取物的质量提供科学依据。方法采用岛津ODS-3 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水进行梯度洗脱,体积流量为0.8 mL/min,检测波长为260 nm,柱温为30℃。结果蛹虫草样品均含有尿苷、鸟苷、腺苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷,而CS-4、中华被毛孢和冬虫夏草中未检测到虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷。供试品制备方法对核苷类成分的影响较大,蛹虫草粉采用6种方法制备供试品溶液,发现用水超声提取180 min获得的尿苷、鸟苷和腺苷的含量最高,且在24 h内稳定。虫草素性质稳定,而N6-(2-羟乙基)-腺苷对热和酸都不太稳定;其中4种制备方法测得的虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷含量一致。结论为蛹虫草及其提取物的质量分析提供了依据,以特征成分虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷为指标可更好地对蛹虫草及其提取物的质量进行控制。     

冬虫夏草菌的动态产孢量及抗异能力

目的：研究冬虫夏草菌的生长速度和动态产孢量，揭示产孢规律和条件，探索人工繁殖的可能及评估其在对虫害生物防治中的应用潜力；测定它的抗异活性和抗菌谱，为对其活性产物的性质研究打下基础。方法：测量虫草菌株在真菌培养基生长时的菌落直径变化，用孢子计数法跟踪测定普通培养基和水琼脂上单菌落的动态产孢量并与相近虫草菌进行对比分析，用琼脂块法测定培养菌丝对致敏菌的抗异活性，测量比较抗菌圈大小和总结抗菌谱。结果：在PDA等3种常规真菌培养基上，CY－8202的菌落扩展与进时间呈线性关系。动态产孢量的测定表明，该菌株在适宜培养基上的单菌落产孢量可达10^7以上，并随着时间的延长而增长，大约200h后增长趋于平缓。对22个致敏菌株的抗菌实验显示，CY－8202培养菌丝对革兰氏阳性的枯草杆菌、四联球菌、白色葡萄球菌以及革兰氏阴性的普通变形杆菌、伤寒杆菌、产气杆菌和沙门氏菌等7株细菌有较强的抑制能力，对3株霉菌和1株放线菌有轻微抑制，对酵母菌未见抑制影响。结论：虫草菌丝的生长和产孢力是有效侵染寄主的两个重要因素，但菌丝生长速度不宜作为生长力强弱的唯一判断指标，菌丝的穿透力更加重要；具有超量产孢能力是虫草菌株强侵染力的一个重要标志。抗异活性表明冬虫夏草菌具有分泌比虫草菌素更广谱的抗生素的能力。     

冬虫夏草和头孢霉新种菌丝的某些药理作用的比较

冬虫夏草与头孢霉新种菌丝比较,二药毒性很低,均有镇静、耐缺氧、平喘、祛痰、抗炎等作用,且作用强度相近。冬虫夏草尚有雄激素样作用,对醋酸氢化可的松所致“类阳虚”小鼠有防治作用。     

冬虫夏草促繁地土壤真菌种群结构的变性梯度凝胶电泳技术分析

目的 采用变性梯度凝胶电泳（DGGE）技术对冬虫夏草促繁地土壤真菌多样性进行初步研究。方法 利用PCR方法选择特异性引物ITS3-GC和ITS4扩增ITS rDNA基因的ITS2片段,结合DGGE分离技术,并借助生物信息学软件进行分析。结果 所测的土壤样品中真菌ITS2基因序列与GenBank已报道的丝盖伞属Inocybe (Fr.) Fr.、口蘑属Tricholoma (Fr.) Staude、根肿黑粉菌属Entorrhiza C.A. Weber及未确定的子囊菌Ascomycota、土壤真菌等的序列相似性较高,土壤真菌种群结构相似性仅有19.4%～50.1%。结论 冬虫夏草促繁地土壤真菌多样性丰富。     

基于多元统计学方法的亚香棒虫草与冬虫夏草化学差异研究

目的采用高分辨质谱分析鉴定亚香棒虫草Cordycepshawkesii与冬虫夏草Cordycepssinensis间差异性成分。方法结合PeakView、SIMCA-P等软件、在线数据库(Human Metabolome Database、Pub Chem、Metlin)及二级碎片裂解规律分析鉴定区分2种虫草的显著差异性成分。结果通过正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)发现区分亚香棒虫草与冬虫夏草的显著差异性成分共12个,其中11个为氨基酸及其衍生物以及1个磷脂酰胆碱。结论通过差异分析并未鉴定出如虫草素、腺苷等特征成分,从化学层面证明了亚香棒虫草或可作为冬虫夏草的补充资源,为亚香棒虫草深入开发应用提供科学支撑。