双氢青蒿素人对急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的 探讨双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的作用和机制.方法 用二甲氧唑黄细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测双氢青蒿素对HL-60细胞生长的抑制作用,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位变化,分光光度法检测细胞Caspase-3活性变化.结果 双氢...     

蟾毒它灵通过线粒体途径诱导急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的实验研究

目的 研究蟾毒它灵对急性髓系白血病HL-60细胞的作用及其机制，为急性髓细胞白血病的治疗提供新的思路。 方法 用终浓度为0、40、80、160 μg/mL的蟾毒它灵作用于对数生长期的HL-60细胞24 h后，用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况，通过透射电子显微镜观察细胞内线粒体形态，蛋白免疫印迹法检测Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase-9基因表达情况，并用正常的外周血B淋巴细胞作为对照组观察该化合物对正常细胞的毒性作用。实验结果用SPSS 22.0统计学软件录入数据并进行检验，P＜0.05为差异有统计学意义。 结果 蟾毒它灵能够抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡，且对正常细胞毒性作用相较于癌细胞小，差异有统计学意义(P＜0.05)；随着药物浓度增加，细胞核异形，出现核膜分离，异染色质明显增多，线粒体伴有水肿扩张，部分线粒体脊消失模糊、空泡化，而对照组线粒体形态较好；随着药物浓度增加，Bax/Bcl-2比例增加，Cleaved-Caspase-9基因表达逐渐增加，差异有统计学意义(均P<0.01)。 结论 本实验结果表明蟾毒它灵对急性髓系白血病HL-60细胞这种非实体肿瘤细胞也有抑制作用，并且对正常细胞影响较小，其作用机制主要是通过线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡。      

伯舒替尼诱导急性髓系白血病细胞分化和细胞凋亡

目的 探讨伯舒替尼对人急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、THP-1和U937细胞分化和凋亡的影响及其作用机制.方法 伯舒替尼0～20 μmol/L处理HL-60、THP-l和U937细胞48 h,MTT法检测细胞增殖;伯舒替尼0～5 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,流式细胞仪检测细胞CDllb表达;伯舒替尼O～10 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,胱天蛋白酶(caspase)广谱抑制剂benzyloxy-carbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethyl-ketone (Z-VAD-FMK)预处理lh后加入伯舒替尼处理U937细胞48 h,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;不同浓度伯舒替尼(0～5 μmol/L)分别处理HL-60和U937细胞24 h后,Western印迹法检测细胞分化相关转录因子C/EBPβ、P21和c-Myc以及凋亡相关分子Mcl-1、Bax和Caspase 3蛋白表达的改变.结果 伯舒替尼剂量依赖性抑制AML细胞增殖.与空白对照组相比,不同浓度伯舒替尼处理AML细胞72 h后,细胞CDllb表达和细胞凋亡率均明显增加(P＜0.05或P＜0.01).伯舒替尼处理HL-60细胞有效上调C/EBPβ和P21的蛋白表达水平,引起U937细胞Mcl-1表达降低和Bax表达增强,并激活caspase 3,而Z-VAD-FMK预处理U937细胞显著抑制伯舒替尼诱导的细胞凋亡.结论 伯舒替尼可有效抑制AML细胞增殖,诱导细胞分化和促进其凋亡,可作为有效治疗AML的潜在药物.     

姜黄素诱导髓系白血病细胞凋亡的分子途径

目的研究姜黄素诱导白血病细胞系NB4、K562、THP1凋亡的分子途径。方法培养上述3种细胞系，用不同浓度的姜黄素（25，12．5，6．25，3．125，0μmol／L）作用24h和25umol／L姜黄素作用不同时间（0，12，24，48h），流式细胞仪测定细胞凋亡率及Fas抗原（CD95）表达，Western blot测定凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9的表达变化。结果①姜黄素以时间和浓度依赖的方式诱导白血病细胞系NB4、K562、THP-1凋亡，25μmol／L姜黄素作用48h凋亡细胞超过50％。②25μmol／L姜黄素作用24h后Fas抗原表达明显升高（P〈0．01）。③25μmol／L姜黄素作用24h后凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9的表达明显增高（P〈0．01）。结论姜黄素诱导白血病细胞凋亡涉及死亡受体参与的外源性途径和线粒体参与的内源性凋亡途径。     

急性髓系白血病化疗早期细胞凋亡率与预后关系的研究

目的 探讨急性髓系白血病患者化疗早期细胞凋亡率与疾病预后的关系.方法 (1)所有对象均来源于2011年7月至2012年10月在潍坊医学院附属医院血液科接受住院化疗的初发AML患者20例;(2)所有患者均采用DA或IDA或HA方案诱导缓解;(3)应用流式细胞术(FCM)及AnnexinV-FITC/PI染色法检测患者化疗前1d及化疗第2d白血病细胞凋亡率.结果 (1)经诱导治疗7d后,完全缓解(complete remission,CR) 14例,未缓解(not remission,NR)6例;(2)化疗第2d白血病细胞凋亡率(9.31±2.42)％明显高于化疗前1 d(4.41±2.13)％,(P＜0.05);(3)化疗后CR组患者细胞凋亡率(10.12±2.23)％明显高于NR组(7.43±2.74)％(P＜0.05).结论 化疗早期细胞凋亡率可作为预测急性髓系白血病疗效的指标之一.     

中药对人急性髓系白血病细胞株HL-60的作用机制

急性髓细胞性白血病(AML)是获得性造血祖细胞变异而引起的克隆性疾病,病死率高,中医药经过长期的实践形成了治疗急性髓系白血病的中医理论,作用机制复杂.随着实验及临床研究水平的提高,有关中药作用于血液肿瘤细胞的机制研究深入分子层次.从诱导凋亡、调控周期、诱导分化、抑制转移与耐药性5个方面总结中药单体及复方作用于HL-60...     

蛋白酶体抑制剂诱导t(8;21)急性髓系白血病细胞凋亡

目的:探讨蛋白酶体抑制剂(PSI)对t(8;21)急性髓系白血病治疗的分子生物学机制。方法:t(8;21)白血病细胞Kasumi-1经5,8,10,25,50 nmol/L PSI处理后,进行细胞计数和MTT检测,并且使用流式细胞分选和蛋白免疫印迹方法检测不同浓度的药物处理下细胞的调亡情况。结果:蛋白酶体抑制剂PSI诱导t(8;21)白血病细胞Kasumi-1在5~50 nmol/L时间浓度梯度的白血病细胞调亡,以及对患者细胞有抑制增长作用,并发现随着药物作用时间的延长,表征凋亡的caspase-3条带的切割随之愈加的显著。这些结果表明,PSI诱导的细胞凋亡是通过caspase-3激活凋亡途径。结论:PSI可能是一个潜在的治疗t(8;21)白血病,并通过靶向AML1-ETO蛋白和激活凋亡通路治疗白血病的有效药物。     

ADFMChR诱导人急性髓性白血病HL-60细胞分化

目的:研究5-烯丙基-7-二氟甲基白杨素(ADFMChR)诱导人急性髓性白血病HL-60细胞分化作用。方法:体外培养人急性髓性白血病HL-60细胞。瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞分化的形态学改变;细胞免疫组织化学法和间接免疫荧光显微镜观察细胞表面分化抗原CD11b表达。结果:瑞氏-吉姆萨染色结果显示,ADFMChR诱导HL-60细胞发生分化成熟的形态学变化;细胞免疫组织化学显示ADFMChR增加HL-60细胞粒细胞系的特异性表面分化抗原CD11b的表达;间接免疫荧光显示经ADFMChR处理的HL-60细胞表面分化抗原CD11b表达增强,阳性表达率呈剂量依赖性升高。结论:ADFMChR具有诱导HL-60细胞分化的作用。     

ABT-737对人急性髓细胞白血病细胞U937诱导凋亡作用及机制

目的探讨Bcl-2小分子抑制剂ABT-737对人急性髓细胞白血病细胞U937诱导凋亡作用及机制。方法以人急性髓细胞白血病细胞U937为研究对象,观察不同浓度梯度(0、0.625、1.25、2.5、5.0、10μmol/L)ABT-737对U937细胞增殖抑制及诱导凋亡作用,并检测ABT-737作用前后Bcl-2 mRNA水平和蛋白表达水平改变。CCK-8检测细胞生长抑制率,Annexiin-V/PI双染检测细胞凋亡率,RT-PCR方法检测Bcl-2 mRNA水平,Western blot检测Bcl-2蛋白表达。结果 ABT-737可显著抑制U937细胞生长,随着ABT-737浓度(0、0.625、1.25、2.5、5.0、10μmol/L)的增加,U937细胞数量逐渐减少。其中2.5μmol/L ABT-737即可使U937细胞出现明显增殖抑制,作用24 h后其存活率与对照组(0μmol/L)比较差异有统计学意义(P<0.05)。ABT-737可显著诱导U937细胞凋亡,随着ABT-737浓度(0、0.625、1.25、2.5、5.0、10μmol/L)的增加,凋亡率逐渐增加。其...     

DADS诱导人白血病细胞HL-60凋亡的流式细胞术检测

目的 运用流式细胞术检测二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的作用. 方法 实验分对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养,进行细胞形态学观察,应用流式细胞术检测凋亡率、早期凋亡细胞以及caspase-3活性. 结果 DADS诱导前后,HL-60细胞形态学发生明显改变,PI单染法检测结果 :随着不同浓度DADS作用HL-60细胞24 h,HL-60细胞出现明显亚二倍峰,细胞周期也发生了相应的改变;Annexin V/PI 双染法检测结果 :10 mg/L DADS作用HL-60细胞4、8、12和24 h后,早期凋亡细胞显著增加,具有明显的时间依赖性(P<0.05);间接免疫荧光流式细胞术结果 显示在DADS诱导HL-60细胞凋亡过程中有caspase-3的活化,且与作用时间呈依赖关系. 结论 流式细胞术检测结果 表明,DADS能有效诱导HL-60细胞凋亡.     

米托蒽醌对HL-60细胞生长的影响

目的：探索米托蒽醌（MTN）对HL－60细胞生长的影响。方法：取对数生长期HL－60细胞，不同浓度MTN作用不同时间后，利用MTT法观察MTN对HL－60细胞的抑制效应，透射电镜，DNA电泳观察MTN作用HL－60细胞后其形态学及DNA的变化。结果：（1）毫微克级的MTN对HL－60细胞有明显的抑制效应。且此效应具有时间，剂量依赖关系。（2）MTN作用后的HL－60细胞透射电镜观察胞膜完整，出现核碎裂，凋亡小体等形态学特征。DNA电泳出现200bp左右的梯形条带。结论：MTN对HP－60细胞有明显的抑制作用。小剂量的MTN对HL－60细胞以诱导细胞凋亡为主，大剂量的MTN对HL－60细胞以细胞毒作用为主。     

雷公藤红素对白血病HL-60和Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

探讨雷公藤红素对人急性髓性白血病HL-60细胞、急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。采用MTT法、AnnexinV-FITC/PI双染法、PI染色法、透射电镜观察不同浓度雷公藤红素作用于两种细胞后对其生长增殖、凋亡、周期及形态等方面的影响。结果表明雷公藤红素能显著抑制HL-60细胞、Jurkat细胞的增殖,降低其存活率。给药24 h后,半抑制浓度(IC₅₀)分别为(0.46±1.05)μmol/L和(0.88±1.13)μmol/L。以剂量依赖方式诱导两种细胞凋亡,细胞周期分布G₁期比例增加,S期比例降低(P<0.05),且伴有典型的细胞凋亡形态学改变。雷公藤红素能显著抑制HL-60细胞、Jurkat细胞的生长增殖,并诱导细胞凋亡。     

雷公藤甲素对白血病HL-60和Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨雷公藤甲素对人急性髓系白血病HL-60细胞、急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法、PI染色法、透射电镜观察不同浓度雷公藤甲素作用于两种细胞,对其生长增殖、凋亡、细胞周期及形态等方面的影响。结果:雷公藤甲素能显著抑制HL-60、Jurkat细胞的增殖,降低其存活率。给药24 h后,半数细胞抑制剂量(IC50)分别为(42.50±9.38)nmol/L和(60.91±9.77)nmol/L。能以剂量依赖方式诱导两种细胞凋亡,细胞周期分布G1期比例增加,S期比例降低(P<0.05),且伴有典型的细胞凋亡形态学改变。结论:雷公藤甲素能显著抑制HL-60、Jurkat细胞的生长增殖,并诱导细胞凋亡。     

水杨酸钠对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞的影响

目的：研究水杨酸钠对HL－60细胞的影响。方法，用MTT法检测水杨酸钠对HL－60细胞存活率的影响，光镜、电镜观察细胞形态学变化；流式细胞术分析DNA含量；Annexin-V结合分析检测靶细胞磷脂酰丝氨酸外化。结果：水杨酸钠明显抑制HL－60细胞生长，并呈时间，剂量信号性；5mmol.L^-1(IC50)的水杨酸钠作用后，HL－60细胞出现典型的凋亡形态特征，并检测到亚二倍体峰；同时，靶细胞磷脂酰丝氨酸外化率显著高于阴性对照组（0．24vs0.03)。结论：水杨酸钠能抑制HL－60细胞生长并促进其凋亡。     

补骨脂素加长波紫外线对HL-60细胞凋亡的影响

目的：探讨补骨脂素（psoralen,PSO）加长波紫外线（ultraviolet-A,UVA）的光化学疗法（PUVA）对人急性髓细胞白血病（FAB-M2）细胞株HL-60细胞凋亡的作用及部分作用途径。方法：以HL-60细胞株为研究对象,以0、10、20、40、80μg/ml PSO加波长为360nm的UVA,作用于HL-60细胞,通过流式细胞仪检测HL-60细胞在PUVA后的凋亡情况;电镜下观察细胞超微结构改变;荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chainreaction,PCR）及流式细胞技术检测Fas配体（Fasligand,FasL）在基因和蛋白水平的表达情况。结果：单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可诱导HL-60细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者。电镜下观察经PUVA处理后的HL-60细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。PSO、UVA照射及PUVA均可下调FasL在基因、蛋白水平的表达,PUVA的作用显著强于前两者。结论：PUVA可诱导白血病细胞HL-60发生凋亡,作用强于PSO及UVA照射。HL-60被PUVA诱导凋亡后FasL基因表达水平下调。     

醋酸棉酚对白血病HL-60细胞凋亡及分化的影响

目的:通过醋酸棉酚(GAA)对经典白血病细胞系HL-60的研究,探索GAA治疗白血病的可能性. 方法: 用细胞培养、四唑盐比色试验(MTT)、细胞形态学、DNA电泳及NBT还原试验等方法观察不同浓度GAA促进HL-60细胞凋亡及诱导分化的作用. 结果: GAA在浓度》6 μmol/L时可显著抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,并表现出剂量效应;在诱导分化浓度下(1, 4 μmol/L),GAA可促进HL-60细胞向成熟粒细胞分化(P《0.05). 结论: GAA对白血病细胞HL-60的选择性促凋亡作用表明其可能是一种理想的高效低毒抗白血病药物.     

柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。     

阿司匹林诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:研究非甾体类抗炎药阿司匹林(ASA)对体外诱导人急性白血病细胞的凋亡作用及其相关机制.方法:采用MTT法测定ASA对HL-60细胞的抑制率,通过光镜、流式细胞仪(FCM)、原位末端标记法(TUNEL)观测ASA诱导HL-60细胞凋亡,半定量RT-PCR检测基因表达.结果:浓度为2.5～10mmol/L的ASA能抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;ASA与阿糖胞苷(Ara-c)抗肿瘤作用具有相加效应;ASA可下调HL-60细胞c-myc mRNA水平表达.结论:一定浓度ASA在体外有抑制急性白血病细胞生长和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与c-myc基因下调有关.