Impact of PCI-neo-HGF on the expression of TGF-β1 and proliferation of glomerular mesangial cells in rats

肾小球系膜细胞(GMC)的过度增生是导致肾小球硬化及肾间质纤维化的重要机制之一[1].肝细胞生长因子(HGF)是一种多效性的细胞因子,其可通过加速细胞外基质降解,阻断小管上皮细胞转分化等实现对肾脏的保护[2-4].目前HGF对正常及增生的GMC是否有抑制作用尚不明确.本研究采用可在体内持续平稳表达的PCI-neo-HGF质粒进行研究[5],主要探讨HGF是否能抑制正常及脂多糖(LPS)刺激后的大鼠GMC的增生,以及这种作用是否与抑制转化生长因子β1(TGF-β1)的表达相关.     

Impact of PCI-neo-HGF on the expression of TGF-β1 and proliferation of glomerular mesangial cells in rats

肾小球系膜细胞(GMC)的过度增生是导致肾小球硬化及肾间质纤维化的重要机制之一[1].肝细胞生长因子(HGF)是一种多效性的细胞因子,其可通过加速细胞外基质降解,阻断小管上皮细胞转分化等实现对肾脏的保护[2-4].目前HGF对正常及增生的GMC是否有抑制作用尚不明确.本研究采用可在体内持续平稳表达的PCI-neo-HGF质粒进行研究[5],主要探讨HGF是否能抑制正常及脂多糖(LPS)刺激后的大鼠GMC的增生,以及这种作用是否与抑制转化生长因子β1(TGF-β1)的表达相关.     

全反式维甲酸对转化生长因子β诱导的肾小球系膜细胞Sp1及c-met表达的影响

肝细胞生长因子(HGF)是一种多效性的细胞因子,c-met是HGF现已知的唯一的受体,HGF与c-met结合后,发挥相应的生物学效应[1].Sp1蛋白是众多基因的基本转录因子,能与c-met基因启动子区域的多重GC盒结合,是调节肾脏细胞表达c-met的重要转录因子[2].全反式维甲酸(ATRA)能抑制肾脏纤维化,保护肾功能.本研究探讨ATRA对肾小球系膜细胞Sp1、c-met表达的影响,以进一步了解ATRA对肾脏的保护机制.     

肾安Ⅰ号对大鼠GMC增殖及TGF-β1、HGF表达的影响

目的:观察肾安Ⅰ号对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及TGF-β1和HGF表达的影响.方法:应用细胞培养技术进行大鼠GMC传代培养,分别用台盼蓝染色计数法和四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察肾安Ⅰ号对大鼠GMC的毒性作用及增殖水平,并用免疫细胞化学技术法观察大鼠GMC表达TGF-β1和HGF情况.结果:(1)台盼蓝染色排斥试验显示:肾安Ⅰ号25%、12.5%和6.25%浓度组各时段细胞活力均达90%以上,经x2检验,与空白组比较无统计学差异(P＞0.05).(2)MTT法测OD值显示:肾安Ⅰ号对大鼠GMC的抑制作用与浓度呈显著的正相关关系(r=0.992和0.976,P＜0.05);LPS组大鼠GMC增生水平明显高于GMC组(P＜0.05或P＜0.01);肾安Ⅰ号各浓度组大鼠GMC增生水平明显低于LPS组(P＜0.05或P＜0.01).(3)免疫细胞化学染色结果显示:LPS组TGF-β1表达明显高于GMC组(P＜0.05),而HGF表达与GMC组无统计学差异(P＞0.05);肾安组TGF-β1表达与GMC组无统计学差异(P＞0.05),而HGF表达明显高于GMC组(P＜0.01);肾安组TGF-β1表达明显低于LPS组(P＜0.01),而HGF表达明显高于LPS组(P＜0.01).结论:肾安Ⅰ号能明显抑制LPS刺激培养条件下的大鼠GMC增殖,下调TGF-β1的表达,上调HGF的表达,具有阻缓肾纤维化作用.     

肝细胞生长因子下调Smurf2拮抗肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化

目的 通过观察肝细胞生长因子( HGF)对正常大鼠肾上皮细胞(NRK-52E)转化生长因子β1( TGF-β1)诱导的Smad泛素化调节因子2(Smurf2)表达的影响,探讨HGF拮抗肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)的分子机制.方法 以NRK-52E细胞为研究对象,给予TGF-β1(5μg/L)处理0～24 h;或部分细胞经HGF(20 μg/L)预处理30 min后,再予TGF-β1(5μg/L)处理1h或48 h;另外部分细胞予以Smurf2质粒表达载体或Smurf2 siRNA 转染24 h后,再予HGF处理24 h.应用Western印迹及间接免疫荧光染色方法检测Smurf2、SnoN、E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白(FN)的表达.结果 与对照组相比,TGF-β1处理后迅速上调NRK-52E细胞中Smurf2蛋白表达(P＜0.01);同时显著诱导FN和α-SMA蛋白表达,并下调E-cadherin表达.而予HGF预处理细胞后,可快速抑制TGF-β1诱导的Smurf2表达上调(P＜0.01);并逆转TGF-β1介导的SnoN(P＜0.01)、E-cadherin(P＜0.05)、α-SMA(P＜0.01)和FN(P＜0.01)表达变化.此外,在NRK-52E细胞中过表达Smurf2蛋白可部分抑制HGF诱导的SnoN蛋白上调;而抑制Smurf2表达则可进一步促进HGF诱导的SnoN蛋白表达.结论 在肾小管上皮细胞中,HGF可能通过下调Smurf2表达抑制SnoN蛋白发生泛素-蛋白酶体依赖性降解,进而拮抗TGF-β1介导EMT形成.     

Effect of all-trans retinoic acid on the expression of Sp1 and c-met in glomerular mesangial cells induced by TGF-β

肝细胞生长因子(HGF)是一种多效性的细胞因子,c-met是HGF现已知的唯一的受体,HGF与c-met结合后,发挥相应的生物学效应[1].Sp1蛋白是众多基因的基本转录因子,能与c-met基因启动子区域的多重GC盒结合,是调节肾脏细胞表达c-met的重要转录因子[2].全反式维甲酸(ATRA)能抑制肾脏纤维化,保护肾功能.本研究探讨ATRA对肾小球系膜细胞Sp1、c-met表达的影响,以进一步了解ATRA对肾脏的保护机制.     

Effect of all-trans retinoic acid on the expression of Sp1 and c-met in glomerular mesangial cells induced by TGF-β

肝细胞生长因子(HGF)是一种多效性的细胞因子,c-met是HGF现已知的唯一的受体,HGF与c-met结合后,发挥相应的生物学效应[1].Sp1蛋白是众多基因的基本转录因子,能与c-met基因启动子区域的多重GC盒结合,是调节肾脏细胞表达c-met的重要转录因子[2].全反式维甲酸(ATRA)能抑制肾脏纤维化,保护肾功能.本研究探讨ATRA对肾小球系膜细胞Sp1、c-met表达的影响,以进一步了解ATRA对肾脏的保护机制.     

肝细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的影响

目的:采用携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞(NFB)和增生性瘢痕成纤维细胞(HFB)后,观察HGF对这两种细胞作用的差异,为HGF基因治疗病理性瘢痕提供理论基础。方法:分离培养HFB和NFB,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染细胞,用流式细胞仪检测转染效率;以MOI为100携带HGF基因的腺病毒(Ad-HGF)转染HFB和NFB48h后,酶联免疫吸附法检测细胞上清中HGF、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;应用免疫组织化学方法检测正常皮肤和增生性瘢痕组织中MMP-1和TGF-β1的分布。结果:NFB和HFB在腺病毒转染效率和HGF表达方面差异无显著性,但HGF能明显促进HFB分泌MMP-1,抑制HFB表达TGF-β1。结论:促进HFB分泌MMP-1和抑制HFB表达TGF-β1可能是HGF治疗病理性瘢痕的细胞和分子生物学基础。     

全反式维甲酸对转化生长因子β1诱导肾小球系膜细胞环氧化酶2表达及Smad信号通路的影响

转化生长因子β1(TGF-β1)可能是致组织纤维化的核心因子,其经典信号通路为Smad通路.环氧化酶2(COX-2)是一种膜结合蛋白,在炎性反应中起重要作用.局部浸润的炎性细胞、肾小球的巨噬细胞、系膜细胞都是COX-2的来源[1].维甲酸能抑制肾脏纤维化,保护肾功能[2],其主要包括全反式维甲酸(atRA),92顺式维甲酸和132顺式维甲酸.本研究探讨atRA对肾小球系膜细胞TGF-β-Smad信号通路中COX-2表达的影响.     

高糖状态下JAK2-STAT3通路的活化对系膜细胞转化生长因子β1、纤连蛋白表达的影响

JAK-STAT通路是近年发现的一组信号转导通路,能介导多种细胞因子和生长因子的细胞内信号转导过程.有研究提示JAK2-STAT3通路可能与系膜细胞的增殖、肥大及细胞外基质分泌有关[1].本研究旨在探讨高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞JAK2-STAT3信号转导通路的活性变化及用AG-490(tyrphostin B42,JAK-STAT通路特异性阻断剂)抑制此通路活化对大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、纤连蛋白(FN)表达的影响,为进一步探讨JAK-STAT信号转导通路与糖尿病肾病发病机制的关系提供新的思路.     

肝细胞生长因子与肾间质纤维化

肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）是一种对多种器官具多效性的多肽细胞因子,它不仅在肝脏再生、肝硬化、肺纤维化、肿瘤等发生中起重要作用,对于肾损伤后肾小管的修复与再生至关重要。研究表明,HGF能够阻止慢性肾衰竭的发生发展及抑制转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF—β1）的表达。体外试验中,HGF通过抑制不同肾脏细胞中TGF-β1的表达,从而达到抑制肾小管上皮细胞一肌成纤维细胞转分化（tubular epithelial to mesenchymal transition,EMT）的目的。近期还有研究表明HGF还可通过多种不同机制阻断＆md信号转导通路以对抗TGF-β1的致纤维化作用。     

Gremlin对高糖环境下系膜细胞转化生长因子β1及胞外调节蛋白激酶表达的影响

Gremlin是骨形态发生蛋白(BMP)的一种内源性拮抗剂,对胚胎发育、生长和细胞分化起重要的调节作用[1].近年来的研究发现Gremlin与糖尿病肾病(DN)的发生发展密切相关,但我们对Gremlin在糖尿病肾损害过程中所扮演的角色尚知之甚少.TGF-β1及细胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)在DN的发病中起重要作用,TGF-β1及其下游结缔组织生长因子(CTGF)可导致肾组织纤维化[2-3].我们的前期研究发现体外高糖环境下小鼠系膜细胞ERK1/2通路可被激活[4].本研究通过转染Gremlin基因,观察其对高糖环境下小鼠肾小球系膜细胞(MMCs) TGF-β1、CTGF及磷酸化ERK1/2 (p-ERK1/2)表达的影响,为进一步揭示DN发病的分子学机制及寻找早期防治方法提供理论依据.     

Impact of all-trans retinoic acid on COX-2 expression and Smad pathway in rat glomerular mesangial cells induced by TGF-β1

转化生长因子β1(TGF-β1)可能是致组织纤维化的核心因子,其经典信号通路为Smad通路.环氧化酶2(COX-2)是一种膜结合蛋白,在炎性反应中起重要作用.局部浸润的炎性细胞、肾小球的巨噬细胞、系膜细胞都是COX-2的来源[1].维甲酸能抑制肾脏纤维化,保护肾功能[2],其主要包括全反式维甲酸(atRA),92顺式维甲酸和132顺式维甲酸.本研究探讨atRA对肾小球系膜细胞TGF-β-Smad信号通路中COX-2表达的影响.     

Impact of all-trans retinoic acid on COX-2 expression and Smad pathway in rat glomerular mesangial cells induced by TGF-β1

转化生长因子β1(TGF-β1)可能是致组织纤维化的核心因子,其经典信号通路为Smad通路.环氧化酶2(COX-2)是一种膜结合蛋白,在炎性反应中起重要作用.局部浸润的炎性细胞、肾小球的巨噬细胞、系膜细胞都是COX-2的来源[1].维甲酸能抑制肾脏纤维化,保护肾功能[2],其主要包括全反式维甲酸(atRA),92顺式维甲酸和132顺式维甲酸.本研究探讨atRA对肾小球系膜细胞TGF-β-Smad信号通路中COX-2表达的影响.     

转化生长因子β1对系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物1表达的影响

目的观察转化生长因子(TGF)β1对肾小球系膜细胞(GMC)纤溶酶原激活物抑制物(PAI)-1表达的影响,并探讨反应性氧基(ROS)在TGF-β1诱导的PAI-1表达中的作用。方法体外培养大鼠GMC,分别用TGF-β1(2ng/ml)和葡萄糖氧化酶(GO)(10mU/ml)刺激,并用BSO和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)进行干预处理。采用Western印迹检测PAI-1蛋白表达;RT-PCR和Northern杂交检测PAI-1mRNA表达;合成的荧光素纤溶酶底物测定纤溶酶活性。结果外源性TGF-β1和GO可显著上调大鼠系膜细胞PAI-1蛋白和mRNA的表达并降低纤溶酶活性。BSO可显著增强TGF-β1和GO诱导的系膜细胞PAI-1mRNA的表达;而NAC可显著地逆转由TGF-β1和GO诱导的PAI-1mRNA表达的上调作用。结论TGF-β1可显著上调系膜细胞PAI-1的表达并抑制纤溶酶活性。ROS在TGF-β1诱导的系膜细胞PAI-1表达上调的信号传递途径中可能起了信号传递分子的作用。     

HB-EGF对系膜细胞增殖及转化生长因子-β1表达的影响

目的：观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）对肾小球系膜细胞（GMC）增殖及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的作用。方法：以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,采用MTT、ELISA、RT-PCR等方法观察外源性HB-EGF对系膜细胞增殖及TGF-β1表达的影响。结果：（1）不同浓度HB-EGF对系膜细胞增殖有不同影响,10ng/ml时无刺激GMC增殖作用（P〉0.05）,100、1000ng/ml均能刺激GMC增殖（P〈0.01）,100ng/ml作用最明显。（2）HB-EGF（10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）能刺激系膜细胞TGF-β1的表达（P〈0.01）,100ng/ml时作用最强。（3）100ng/mlHB-EGF刺激GMC24h、36h、48h,系膜细胞TGF-β1的表达均增加,随作用时间而变化,刺激36h和48h比24h作用更明显（P〈0.05）。结论：一定浓度范围内HB-EGF刺激GMC增殖,促进系膜细胞TGF-β1的表达,且具有一定的时间及浓度依赖性。     

转化生长因子-β1对肾小球系膜细胞TRPC6表达的影响

目的：观察转化生长因子-β1（TGF-β1）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）瞬时受体势C6（TRPC6）表达的影响,并探讨糖尿病肾病（DN）的发病机制。方法：GMC予TGF—β1 10ng／ml刺激24h后,间接免疫荧光法检测GMC TRPC6的表达;免疫印迹法观察TRPC6的表达。结果：GMC存在TRPC6的表达,以细胞膜表达为主;TGF-β1刺激GMC可有TRPC6表达下调（P〈0．05）。结论：肾小球系膜细胞存在TRPC6的表达,TGF-β1刺激后TRPC6表达下调;TGF-β1可能通过下调TRPC6参与了DN的发病。     

重组人肝细胞生长因子在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

肝细胞生长因子(HGF)具有促进肝细胞再生、抑制肝纤维化及肝细胞凋亡、溶解硬变肝脏纤维组织、减轻肝损害等功能[1].其活性结构为α链与β链通过二硫键连接而形成的异二聚体.     

氯沙坦通过ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶途径抑制高糖诱导的小鼠系膜细胞结缔组织生长因子表达

糖尿病肾病(DN)是糖尿病严重的慢性并发症之一,其主要病理特征是由细胞外基质(ECM)增多引起的肾小球硬化.血管紧张素(Ang)受体拮抗剂氯沙坦可有效地延缓肾小球硬化,被用于DN的治疗.高糖可诱导肾脏系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)的表达,从而促进ECM积聚和组织器官的纤维化.丝裂原活化蛋门激酶(MAPK)作为真核细胞胞质内的信号转导终末通路,与DN的发病密切相关[1].本研究观察高糖是否通过ERK1/2 MAPK途径调节小鼠系膜细胞CTGF的表达,以及氯沙坦对CTGF的作用是否也与ERK1/2 MAPK通路相关.     

普罗布考对结缔组织生长因子在系膜细胞中表达的调节

结缔组织生长因子(CTGF)是一种相对分子质量为36 000～38 000的分泌多肽,在包括肾脏在内的多种不同器官中可致纤维化病变[1].CTGF可诱导人肾小球系膜细胞产生与糖尿病.肾病相关的病理变化,如增加细胞外基质积聚及诱导细胞周期停滞在G1晚期[1].CTGF在糖尿病肾病中的作用及如何调控CTGF表达为当前研究热点.普罗布考是一种降脂药物,并具有抗增殖活性,已初步应用于糖尿病的治疗[2].本研究旨在明确CTGF在高糖状态下系膜细胞中的表达变化以及普罗布考对CTGF表达的调控,并进一步探讨其分子机制.